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第二天早晨,大火还没扑灭,切已传来了噩耗——已经有三女一男丧生在这次的火海中,她便是其中的一个,亲人们通过辨认手上家传的手镯找出了她,用床单和木棍做成简易担架,把她抬了回来,当我看到她的时候,她已面目全非,全身上下没有看到一处完好的皮肤……
她,只不过时一名普普通通的农村妇女,每天过着日出而做、日落而息的日子——过着在普通不过的生活。但是,她却用她的血肉之躯撑起半边天空,她用她对家乡的热爱诠释了她的一生,尽管她只用三十四岁。
三十四岁啊!对于一个人来说,这只是刚过而立之年,上有年近古稀的老母亲,下有懵懵懂懂的孩子,身边还有一个相爱相伴的丈夫……可是她义无反顾,把自己年轻的生命献给了那座大山。不只是她,在大火中丧生的人,最大的不过三十五岁,所有人都一样,有着自己的家庭。但在灾难面前,所有人都没有退缩,所有人都站了起来,无论是男是女、或老或小,都挺起自己的脊梁,和大火做殊死搏斗。那一刻,所有人都忘记了恩恩怨怨,紧紧的团结在一起,忘我的奉献自己的一切。
这就是生生不息的救灾精神。
在平日,人们或多或少有些不愉快、有些矛盾、有些冲突……有的人生性胆小、懦弱……在灾难来临之际,所有人都被洗礼,成为了一群百折不挠的英雄。是灾难让所有人明白:什么是让中华五千年文化璀璨夺目的东西。是的,那就是不向任何灾难屈服的灵魂!
迷上折纸
一次意外,秦坤迷上了折纸。那段时间,他把国内外的折纸杂志都翻了个遍,一有空就对着杂志上的折纸作品偷偷地学。最痴迷的时候,他甚至创下了37个小时不吃不喝连续折一件作品的记录。因为太喜欢折纸,秦坤甚至中断了自己的学习,打算把所有时间都投入进去。特别是专心投入到折纸研究后,秦坤发现,折纸这门古老的艺术虽然发源于中国,但在现在的中国却并没有太多人在从事。相反,与我国有一邻之隔的日本,反而把从中国传来的折纸艺术发挥得淋漓尽致。日本的折纸艺术不仅在世界上赫赫有名,日本的折纸大师折出来的房子,动物,甚至雕像等作品在参加国际类的折纸大赛时,往往包揽了所有的重要奖项。
读到这样的消息时,秦坤的内心很不服气。他打心眼里不认为自己作为一名中国人,在折纸方面的天分就会比日本人差。他在心里暗暗发誓,总有一天要折出像样的作品,让中国的折纸艺术扬名全世界。
家人反对
但秦坤的家人却很反对秦坤的做法。在他们看来,折纸当成兴趣爱好可以,但以折纸为业,甚至为人生目标,根本就是不务正业。为了让秦坤掌握一门手艺,秦坤的家人把他送进了兽医学校,希望以此来斩断他对折纸的痴迷。
刚到兽医学校的时候,秦坤的内心一片灰暗。面对那些动物解剖图和骨架图,他一点兴趣也没有。一想到从此就要和动物打交道,他就伤心不已。秦坤把课余的所有时间都花在了折纸学习上,他用有限的零花钱,买来折纸教学的书,一有空就自学。
一次在网上,秦坤发现了一个外国网友制作的动物折纸。那是一只可爱的小蜜蜂。从翅膀到根须,甚至小到眼睛,那件折纸作品都堪称逼真和栩栩如生。秦坤从来没有想过,动物也可以用折纸完全还原。被这件小蜜蜂折纸所启发,秦坤找到了在兽医学校继续学习的动力,他相信,只要认真观察每一样动物,分析研究透彻每一样动物的特点,就一定能做出生动的动物折纸。
入室弟子
从那以后,秦坤一改之前随意敷衍的态度,开始认真上好每一节课。而身边的同学以及所见的一草一木都成了他最好的学习对象。他买来大量的折纸,要求自己在一定时间内把所见的东西用折纸完全还原出来。他还从网上找来大量的折纸视频自学,在这样的努力下,秦坤的进步非常快。
在一个国际折纸交流论坛里,秦坤偶尔也会上传一些自己的原创作品。像《大圣归来》热映时,秦坤就根据电影里大圣的形象创作了一个形象的折纸版大圣。就是这个折纸大圣,不仅吸引了600万网友的欣赏,更让法国当代折纸大师埃里克・乔赛尔发现了秦坤的折纸天分,欣然收秦坤为入室弟子。
在大的指点下,秦坤进步更快了。经他手折出来的作品,不再是简单的还原,像是一些人物折纸,秦坤还能细微地还原人物的每一样形态,表情,给每一样折纸作品注入灵魂,让人一见难忘。
引发惊叹
熟人搭伙好开饭
很多创业者在选择“合伙人”时,总喜欢在熟悉的“圈子”里找。由于彼此熟悉了解,因此在创业初期常凭感情做事,对于企业中出现的经营方向、用人问题、财务问题等也大都以忍让、和解的方式处理,而忽视了必备的契约签定和严格的约束制度。随着企业的成长,这种工作关系引发的矛盾和问题会逐渐显露,不仅不利于企业的快速发展,有时甚至导致企业步入破产境地。当年爱多公司股东陈天南在媒体上发表的律师声明,就是“爱多危机”的导火索。陈天南是爱多公司总裁胡志标的儿时伙伴,当年出资参股,为“爱多”的发展立下汗马功劳。但“成也萧何,败也萧何”,最后他却给了“爱多”致命的一击。
哪儿热闹奔哪儿
有些创业者在确定经营方向时爱盲目跟风,哪行赚钱就做哪行,总觉得这样能减少投资风险,而且少走弯路。然而,市场运作有其自然周期,当市场过于饱和时,利润空间就会缩小,“一窝蜂”热潮有时正意味着“恶性竞争”即将来临。任何投资都是有风险的,一旦跟错了,就会掉进投资的陷阱。因此,创业前周密的市场调查和理性的分析尤为重要。这如同股票投资一样,风险与利益共存,哪种股票适合做长线,哪种适合做短线,何时跟进,何时退出,都需要冷静对待。
短视老板短命店
因为中国曾经缺乏创业的环境,所以我们的企业家就像个被带进烧饼店的饿鬼,抓到什么吃什么,哪还顾得上去隔壁味道更美的饺子店尝尝。很多企业家彼此的区别就是有的被带进了烧饼店,有的被带进了饺子店,不远处全聚德的招牌却没人看见。没有长远战略规划的企业是短命的,富不过一代,更不要说三代了。
贪大求全死得快
企业在创建以后,成长是一个必经的过程。如果过份追求成长的速度,无异于拔苗助长。其实,企业经营好比一场马拉松比赛,不是看谁现在跑得快,而是看谁能在关键时刻跑到别人前面去。在创业过程中,当企业效益逐渐凸现后,创业者不能一味地扩大营运规模,而应关注并妥善处理资金预算、市场预测,以及材料、人员相关要素的协调等管理问题。如果对这些问题没做好充分准备,那么高速的增长只能带来巨大的风险。舒马赫1973年就说“小即是美”,虽然这个提法被认为太理想主义,但企业大了难免官僚、迟钝,小所代表的灵活与敏锐的确令许多大老板心向往之。
盲目做大不可取,一味求全也会使创业者一败涂地。人在江湖,除非你能号令天下,否则学不会结盟是很悲惨的一件事。岳不群也得先推行五岳并派,然后才敢跟任我行较量。中国这个市场没有谁能一口吃下去,饭菜可以免费,肚子可是自己的。不但可以和你所处的产业的上、下游厂商联手,适当的时候和竞争对手联手也未尝不可,只要记住自己的目的就行了。
你办事我不放心
无论作为老板的你有多能干,都不可能一个人做完所有工作。在不同专业范围内雇用有关的专才,给予他们发挥的空间,才能使各人尽展所长,令公司得到最大的利益。自己要的人找来了,可是“你办事,我不放心”;很多大老板就是学不会信任下属。这也难怪,不能埋怨诸葛亮没替刘备培养出干部,实在是小材难支大厦。商战的现实已经证明,一头狮子领导的绵羊是很难“走出非洲”的。疑人不用,用人不疑;实际上能做到像柳传志信任杨元庆那样的真是不多,所以中国的联想也只有一家。
跑得又快又省料
该如何审视越来越快速迭代的一个个热点?
星瀚资本创始合伙人杨歌被业内赞誉为最懂技术的投资人之一。从清华大学物理系毕业的杨歌经历了7次创业,在创业中磨练了多方能力,会写代码的同时又懂金融,善于从基础理论上推演商业发展规律。
转型投资人后,星瀚资本的成绩单上有了鲲云科技这样明星级的人工智能芯片企业、国内领先的农业规划种植平台企业甲加由,以及不久前与豆瓣音乐完成合并的流媒体原创音乐平台V.Fine等明星项目。
面对市场热点不断地快速切换,杨歌认为要从底层逻辑来冷静审视,方能不错失真正的价值,不盲目追逐资本泡沫。
一、AI大浪潮是一条上扬价值线
“AI是个大浪潮,跟互联网是一个级别的大趋势。虚拟现实、智能硬件、机器人属于其二级子行业。这个大赛道的发展一定会是长期可持续发展的。”
杨歌认为,不能把AI简单的等同于区块链、小程序或是共享单车这样的行业热点来放在一起看待。相对于其他热点,AI是真正意义上继互联网之后的一个大趋势,其影响的领域将层层渗透,就如互联网对信息、游戏、购物、出行等领域的改造一样,这是一个长期昂扬向上的价值增长趋势。
而去年的图像识别、语音识别,包括自动驾驶等等都是围绕AI价值增长曲线波动的一个个热点。自动驾驶虽然很火,但还需要在数据、场景上完成优化并找到更优解决方案,才能在市场中应用,图像识别、语音识别则在商业化应用的初级阶段,还并未找到真正突破的应用爆发场景。
今年,AI似乎被区块链、小程序等热点抢了风头,主要源自于大众对AI的认知还需进一步深化,在AI方向有所布局的企业预期AI的话题性和功能性能为其产生价值。结果实际应用落地并没有市场期待的那么快。
“AI是你拿任何一个既成的模块都没法直接用的,需要根据场景一个个算法去运算,CNN、遗传算法、LSTM、优化算法等你可能都要试一遍,再进行算法简化、调优,才能有一点点效果。这个周期非常长,不像互联网网站的建设,无论是旅游的还是卖东西的,都是前端、后端的框架搭建起来就能看到效果。”
二、不要盲目低估AI的复杂性
杨歌认为,目前市场对AI的认知相对简单化了,好像自动驾驶的实现指日可待,期待指数过高。而实际上AI的算法变化、搭建框架、落地方向等都是非常难的。
“我认为人工智能目前所需要解决的难点有以下几点:第一点是算法的变化特别快,组合越来越复杂。神经网络之后有对抗神经网络,基于神经元的卷积神经网络之后又提出了最新的胶囊神经网络(CapsNets),不断有新的算法产生,有些算法甚至连TensorFlow(谷歌第二代AI学习系统)都不支持。
第二个问题是人工智能与商业需要强耦合性。即必须要非常深度地了解关于算法的特性,同时还要了解商业场景,只有把对商业场景的理解转成算法语言,才能实现。而这并不是找到一个算法工程师就可以实现的简单过程。
例如,用CNN来做人脸识别、图像识别有效,但对自然语义理解就未必,实际自然语言理解中有很多上下文远距离相关的信息,需要LSTM来训练就更有效。”
三、AI距离C端应用还很远,TO B的商业化才刚刚开始
鉴于AI本身的复杂性,杨歌认为AI正在处在摸索成长期,底层技术基本上已经成熟,但是商业化过程还不是非常明确。
“五年之内,我认为AI的爆发点是在To B的应用上,就是基础层结构化数据的优化处理。”
杨歌将AI分层三层结构:底层是算法、芯片等;中间层是图像识别、语音识别、自然语义的识别、运动机能识别等;最上面的应用层则涵盖了自动驾驶、机器人、智能音箱、量化金融、AI教育等等。
目前,应用最广泛的图像识别、语音识别公司如科大讯飞、商汤科技、旷视科技、思必驰等业内领先企业,杨歌认为这些公司研发的中间层模块,很难独立形成商业场景,必须和应用层结合才可以。
据了解,目前这些公司在车载、音箱、安防、翻译机等方面进行了初步的商业化落地尝试。例如,智能音箱大多只能实现简单的对话和语音识别调用,远未达到无障碍的人机交互程度。
“这些场景的入口模块都需要完整的、完全标准的算法模块层,中间模块层,就是说语音识别、语义识别都需要非常精准,无论是器械,还是一个机器人,都需要中间算法模块层要非常成熟,同时需要底层芯片层也需要很成熟。
我预计大概五年之内,中间的模块层就能基本上成熟,在这个层面上一旦技术成熟,就会促成应用层的大爆发。应用层首先爆发的就是机器人,工业机器人会形成大范围的改造,家用机器人会高度的智能机械化。”
杨歌认为,AI的使用最重要的在于两点,一方面是要有成熟的海量数据,另一方面是要对场景问题进行精准的模型化设计。
智能驾驶虽然具备明确的使用场景,但场景模型化的算法方案却很复杂,另外也不具备已成型的可供训练数据集,需要模拟真实场景长期积累数据,目前在上述的两个必要方面都不具备优势。
“在未来的几年中,AI势必会爆发在量化金融、物流仓储大数据、有数据积累和标准的传统产业升级、以及机器人运动行为学习等方向中。”杨歌称,对于数据积累成熟,模型化场景清晰明确的行业,人工智能将会带来更多创新性的颠覆,这也是星瀚资本投资的主要方向之一。
“量化金融方向已经在爆发前夕,就差临门一脚。但这个行业大型公司主要在国外,中国在做量化金融的公司还有待壮大。”
四、如何正确看待小程序热点?
随着腾讯对小程序的开放进程加快,小程序近期形成了一个市场热点,多家依托小程序生态的创业公司都先后拿到了融资。
但杨歌认为,小程序只是微信生态的一个小模块,很难像互联网一样孕育百亿级别的商业模式,也很难形成一个大风口。
“小程序是微信缩短流量分发步骤的尝试。从PC互联网到移动互联网的经验都是,只要缩短了流量分发的中间步骤,就会带来流量的红利爆发。典型是微信支付对支付宝的超越,微信支付之所以后进入,但快速爆发超越支付宝,就在于微信支付无需跳出微信就可以直接使用,缩短了用户使用的路径,省去了切换的步骤。
但实际上,用户对这种通过缩短使用路径获取流量的逻辑已经有些疲劳了。今天很难说在微信中下拉菜单找到一个小程序定外卖与直接打开外卖软件,哪个让用户觉得更方便。”
杨歌认为,旧日那套通过缩减用户使用步骤就能获取流量红利赢得商业变现的逻辑已经达到顶峰,互联网已在一个潮流褪去的通道里,区块链可能是互联网后半程最后的一次小浪潮。但目前市场上运用区块链的投机行为过多,真正的商业价值还未展现。区块链也将成为AI爆发前的基础,承前启后。
五、无人店的商业形态需要打造合理的成本模型
无人货架、无人便利店风风火火热闹了一年,但随着行业内得到资本助力的几家企业相继爆出裁员、业务缩水等负面消息,市场似乎对无人零售这种商业形态陷入了一种迷茫,很难看清其真实价值。
杨歌观察了一年则明确表示无人店的商业形态需要打造更为合理的成本模型,其逻辑有两点:
第一, 杨歌认为末端最后一公里的配送和分拣成本太高,太复杂,还是完全依赖人力。目前市场上几乎很难看到在这一块做到成本可以覆盖的团队。
【摘要】 目的 探讨各级前列腺癌组织中血小板反应素1(TSP1)的表达及与微血管密度(MVD)的关系。方法 采用免疫组织化学(SP)法检测30例前列腺增生组织及26例前列腺癌癌组织中TSP1的表达情况及MVD。结果 前列腺增生组织及低分化前列腺癌癌组织中TSP1表达强度及MVD计数分别为(3.7±1.5)、(1.7±1.0)及(6.8±1.9)、(31.0±5.3)。TSP1主要在前列腺增生组织基底细胞层高表达,在前列腺癌组织中低表达并且明显低于前列腺增生组织(P
【关键词】 血小板反应素1;微血管密度;前列腺癌
肿瘤血管生成受促血管生成因子和抑制因子的双重调节。血小板反应素1(thrombospondin1,TSP1)是一种细胞外基质糖蛋白,是血管生成抑制因子之一,与多种肿瘤血管生成关系密切。TSP1在前列腺癌(PCa)中的表达及其与PCa血管生成的相关性研究国内外未见报道。本研究采用免疫组化方法检测TSP1在前列腺增生、PCa中的表达及与微血管密度(MVD)的关系,探讨TSP1与PCa血管生成的关系。
1 材料与方法
1.1 组织标本
26例PCa手术切除标本和前列腺穿刺活检标本作为研究对象,年龄59~90岁,平均(69.2±6.6)岁。病理类型全部为腺癌。分化程度:高分化6例,中分化12例,低分化8例。临床分期:A期4例,B期6例,C期9例,D期7例。同时选取30例经病理切片证实的良性前列腺增生手术切除标本作为对照,年龄60~86岁,平均(62.7±8.9)岁。
1.2 主要试剂
鼠抗人TSP1单克隆抗体购于美国Neomarker公司;鼠抗人CD34单克隆抗体、生物素标记的羊抗鼠免疫球蛋白IgG及SP试剂盒均购自北京中山生物技术公司。
1.3 实验方法
TSP1及CD34采用SP法染色,严格按产品说明书进行操作。主要试剂:浓缩型鼠抗人TSP1 Ab4单克隆抗体购于美国Neomarker公司,工作浓度为1∶100;即用型鼠抗人CD34单克隆抗体、生物素标记的羊抗鼠免疫球蛋白IgG及SP试剂盒、DAB显色试剂盒均购自北京中山生物技术公司。
1.4 结果判定
(1)TSP1表达:细胞质呈现棕黄色染色,明显高于背景(或背景不着色而细胞着色)为阳性细胞。TSP1表达的判定以染色强度和阳性细胞百分率的得分之和进行评估,测定采用双盲法,2人阅片。每张切片高倍镜下随机观察4个高倍视野,阳性细胞百分数(0、~25%、~50%、>50%)及显色强度(未着色、弱、中、强)分别计为0、1、2、3分,取4次的平均值为最终判断结果。两项得分相加:0~2分定为阴性“-”,3~6 分定为阳性“ + ”。(2)MVD的测定:在低倍视野(100倍)下选取肿瘤微血管数量(CD34阳性)最丰富区域,然后在200倍视野范围下计数微血管数,取3个不同视野的均值。
1.5 统计学分析
采用SPSS12.0统计软件,组间差异采用单向方差分析检验,相关性分析采用Spearman检验。
2 结 果
2.1 PCa癌组织的MVD测定
以CD34 单抗作为特异性血管内皮细胞抗体检测MVD。CD34 染色阳性的微血管主要分布于上皮基底层下缘,靠近肿瘤边缘,并向肿瘤内生长。随PCa病变级别升高,MVD 逐渐增加,在低分化PCa升高明显。MVD值在前列腺增生组织、高分化、中分化及低分化癌组织中分别为(6.8±1.9)、(13.0±3.6)、(22.7±4.4)、(31.0±5.3),各组之间比较差异有统计学意义(P
2.2 TSP1在PCa中的表达
TSP1 主要表达于前列腺增生组织基底细胞层细胞质,呈强或中等程度棕黄色着色,围绕腺泡形成一个棕色条带。在PCa组织中,随着病变级别升高TSP1阳性表达逐渐减少,尤其是高分化PCa细胞的胞质着色明显减弱或无着色,TSP1低表达或不表达,TSP1阳性细胞条带缺失(见图1)。TSP1在前列腺增生组织、高分化、中分化和低分化PCa中表达强度分别为(3.7±1.5)、(3.0±1.4)、(1.9±1.2)、(1.7±1.0),各组之间差异均有统计学意义(均P
2.3 TSP1与MVD的关系
Spearman 等级相关分析显示,PCa病变中TSP1的表达与MVD呈显著负相关(rs=-0.603,P
3 讨 论
若肿瘤早期血管不能形成,肿瘤则只能停留在几毫米直径的萌芽状态〔1〕。本研究结果表明,与前列腺增生组织相比,PCa中的确存在活跃的血管生成,且随着病理分期的增高,血管增生活跃,MVD值逐渐增高,说明MVD可以较好地反映PCa患者的病期进展。此结论与国内外文献报道一致〔2〕。提示MVD与PCa的临床分期和侵袭转移密切相关。
TSP1是一种细胞外基质糖蛋白〔3〕,是一种内源性的血管生成抑制因子,具有调节血小板聚集、细胞黏附、运动、生长的功能,能抑制血管内皮生长和运动,减少内皮细胞黏附和形成管状结构的能力,从而抑制血管生成及抑制肿瘤发生发展。TSP1 的抗血管生成活性已被许多体内外实验所证实〔4〕。目前认为TSP1可能通过以下途径抑制血管形成:①抑制内皮细胞增殖、迁移及管状结构形成;②诱导内皮细胞凋亡;③干扰血管生长因子bFGF和VEGF释放及与内皮细胞结合等。在生理条件下,TSP1对维持血管生成处于稳定状态至关重要。在肿瘤组织中,TSP1的表达分泌下降,促血管生成因子表达增高,因而肿瘤组织呈现显著的血管生成,使肿瘤的生长、发展加快,也使肿瘤发生血行转移的机会随之增加。研究表明在结肠癌、乳腺癌、肺癌、宫颈癌等多种肿瘤中,TSP1的表达降低或不表达〔5〕。本研究发现TSP1主要表达于前列腺增生组织基底细胞和间质中,而在PCa组织中表达降低或缺失。从前列腺增生高分化PCa中分化PCa低分化PCa的演变过程中,TSP1的表达率逐渐减少。MVD随病变级别升高而增加,在PCa病变各组之间均有显著差异。TSP1的表达与MVD 呈明显负相关。笔者认为TSP1表达减少及新生血管生成在PCa发生早期已出现,已具有诱导新生血管形成的能力,TSP1在新生血管生成调节中起抑制血管生成的作用。因此TSP1的表达及MVD的测定可作为PCa病变发生发展程度的指标,为PCa抗新生血管生成治疗提供重要的理论依据。联合检测TSP1及MVD有利于PCa的早期诊断及早期治疗。
参考文献
1 陈春球.血小板反应素与消化道肿瘤〔J〕.同济大学学报(医学版),2003;24(4):2924.
2 董济民,白加宁,和 平,等.非小细胞肺癌中血小板反应素1的表达和微血管密度的测定〔J〕.中华肿瘤杂志,2003;25(4):3801.
3 塔 拉,濮德敏,汪 晖,等.宫颈病变组织中血小板反应素1的表达及其与血管生成的关系〔J〕.华中科技大学学报(医学版),2007;36(1):1179.
用免疫组织化学的方法检测CK19、Cx43在口腔黏膜癌变过程中各阶段的动态变化。结果 在大鼠正常舌黏膜组织中,CK19阳性染色的细胞散在分布于黏膜基底层;随着大鼠舌黏膜上皮异常增生程度的增加,CK19表达于黏膜基底上层;在口腔鳞状细胞癌(OSCC)组织中,CK19阳性染色细胞分布在黏膜各层。CK19在正常舌黏膜、轻度上皮异常增生、中度上皮异常增生、重度上皮异常增生、OSCC组织中阳性表达率分别为30.00%、50.00%、58.33%、80.00%、91.67%,差异有统计学意义(P
的基底层、棘层和颗粒层呈阳性染色。随着大鼠舌黏膜上皮异常增生程度的增加,Cx43的表达明显下降。Cx43在正常舌黏膜、轻度上皮异常增生、中度上皮异常增生、重度上皮异常增生、OSCC组织中阳性表达率分别为100.00%、85.71%、66.67%、40.00%、33.33%,差异有统计学意义(P
[关键词] 口腔鳞状细胞癌; 细胞角蛋白19; 间隙连接蛋白43; 免疫组织化学
[中图分类号] R 739.8 [文献标识码] A [doi] 10.7518/hxkq.2013.03.006
口腔癌发病率居头颈部恶性肿瘤的第二位,其中90%以上为鳞状细胞癌,5年生存率为50%[1]。早发现、早诊断和早治疗是目前提高口腔鳞状细胞癌(oral squamous cell carcinoma,OSCC)患者生活质
量和生存率的关键所在。细胞角蛋白19(cytokeratin 19,CK19)为Ⅰ型角蛋白,主要表达于单层上皮的上皮细胞,也散在表达于复层鳞状上皮的基底层细胞[2-3]。其在口腔颌面部多种病变中均有表达,但是
口腔中的研究多局限于检测不同分化程度鳞癌组织中CK19的表达变化,缺乏对其在口腔黏膜癌前病变的动态研究。该蛋白能否作为早期诊断OSCC的指标未进行深入研究,也未得出一致结论。
在肿瘤细胞以及转化细胞普遍存在细胞间隙连接通讯(gap junctional intercellular communication,
GJIC)的缺陷[4],在细胞间隙连接蛋白(connexin,Cx)家族中Cx43分布最为广泛,受到了广泛关注和深入研究。近年来的研究发现,Cx43蛋白在多种正常组织中高表达,但在相应的癌组织中出现表达下调、异位表达或表达缺失[5-8]。GJIC缺陷与肿瘤的发生发展密切相关,但与口腔黏膜癌变的相关性的研究资料较少。
本文通过观察CK19和Cx43在SD大鼠口腔黏膜癌变过程中的表达,从而探寻CK19和Cx43与口腔黏膜癌变的关系及意义。
1 材料和方法
1.1 标本
随机选取58只雄性SD大鼠,3~4只一笼同室饲养,均用常规饲料喂养。分为实验组(48只)和对照组(10只)。实验组大鼠饮用水中加入4-亚基硝氧喹啉(4-nitroquinoline-1-oxide,4NQO)(40×10-6 mg·L-1)诱癌,分批处死,取舌体组织;对照组饮自来水,与最后一批实验组动物同时处死,取舌体组织。切取的组织包埋切片,苏木精-伊红(hematoxylin-eosin,HE)染色,由2位有经验的病理医师进行病理诊断。本实验根据病理诊断结果,对58例标本进行分组:正常黏膜组10例;轻度上皮异常增生组14例;中度上皮异常增生组12例;重度上皮异常增生组10例;OSCC组12例。
1.2 方法
采用免疫组织化学SP法来观察CK19和Cx43在SD大鼠口腔黏膜癌变过程中表达的变化,染色过程中设阳性和阴性对照。CK19用已知阳性切片作为阳性对照,Cx43用已知阳性切片作为阳性对照,PBS缓冲液代替一抗作为阴性对照。兔抗大鼠CK19(M259)多克隆抗体和兔抗大鼠Cx43(S369)多克隆抗体、免疫组化试剂盒SP-9000 HistostainTM-Plus Kits和显色试剂盒(即用型DAB显色试剂盒)均购自北京中杉金桥生物技术有限公司。
1.3 观察方法和结果判定
观察由本研究者在有经验的病理医生指导下完成。CK19阳性染色部位为细胞浆和细胞膜,以细胞浆和细胞膜中出现黄色或棕黄色着色为阳性染色;Cx43蛋白以细胞膜或细胞浆出现棕黄色颗粒为阳性。随机选择5个高倍视野(400倍)计数阳性细胞数,以确定每个视野的阳性率;取其平均值作为该例的阳性率,并判定细胞染色强度。综合染色强度和阳性率进行分析处理。染色强度评分标准:无着色为0,淡黄色为1,棕黄色为2,棕褐色为3;阳性细胞比例评定标准:75%为4。2项结果相加记为标记指数(labeling index,LI),并通过LI判断表达强度和表达阳性率。
1.4 统计学方法
采用SPSS 16.0软件对数据进行分析,组间比较采用多个样本比较的秩和检验、多个样本间两两比较的秩和检验及2趋势检验,P
2 结果
2.1 CK19在大鼠舌黏膜癌变各阶段组织中的表达
在大鼠正常舌黏膜组织中,CK19阳性染色的细胞散在分布于黏膜基底层,基底上层不表达;随着大鼠舌黏膜上皮异常增生程度的增加,CK19表达于黏膜基底上层;在OSCC组织中,CK19阳性染色细胞分布在黏膜各层,浸润到黏膜下组织的癌细胞也呈阳性染色(图1)。
CK19在大鼠正常舌黏膜、上皮异常增生、鳞状细胞癌组织中的表达情况见表1。由表1可见,在正常舌黏膜、轻度上皮异常增生、中度上皮异常增生、重度上皮异常增生、OSCC组织中CK19阳性表达率分别为30.00%(3/10)、50.00%(7/14)、58.33%(7/12)、80.00%(8/10)、91.67%(11/12)。正常舌黏膜与重度上皮异常增生和OSCC,轻度上皮异常增生与重度上皮异常增生和OSCC,中度上皮异常增生与OSCC,两两组相比较,差异有统计学意义(P=0.001),说明正常舌黏膜、上皮异常增生和OSCC表达CK19差异有统计学意义。随着病变程度加重,CK19表达强度增强,阳性率增加(2趋势=10.771,P
2.2 Cx43在大鼠舌黏膜癌变各阶段组织中的表达
在正常舌黏膜中Cx43蛋白主要表达于大鼠舌黏膜上皮细胞的细胞膜上,上皮的基底层、棘层和颗粒层呈阳性染色,在角质层中未见其表达。随着大鼠舌黏膜上皮异常增生程度的增加,Cx43蛋白的表达明显下降;在OSCC组织中,Cx43阳性染色分布于癌细胞细胞浆以及鳞状细胞癌组织中的角化珠内(图2)。
Cx43在大鼠正常舌黏膜、上皮异常增生、鳞癌组织中的表达情况见表2。由表2可见,在正常舌黏膜、轻度上皮异常增生、中度上皮异常增生、重度上皮异常增生、OSCC组织中的阳性表达率分别为100.00%(10/10)、85.71%(12/14)、66.67%(8/12)、
40.00%(4/10)、33.33%(4/12)。正常舌黏膜与中度上皮异常增生、重度上皮异常增生、OSCC,轻度上皮异常增生与重度上皮异常增生、OSCC,中度上皮异常增生与OSCC,两两组相比较,差异有统计学意义(P
2.3 大鼠舌黏膜癌变过程中CK19和Cx43的相关性
鼠舌黏膜癌变过程中CK19和Cx43的相关性见表3。Spearman相关分析发现:在大鼠舌黏膜癌变各阶段中CK19和Cx43的表达具有相关性,呈负相关(相
关系数r=-0.889,P=0.000),随病变程度加重,Cx43表达下降,而CK19表达增强。
3 讨论
OSCC是最常见的口腔恶性肿瘤,近年来OSCC的发病率有增多趋势,而且发病年龄有减小趋势,严重危害人类的健康与生命。口腔黏膜上皮异常增生约有4%~16%的癌变率,所以对其发生演变的病因学研究尤为重要[9]。本实验结果显示大鼠正常舌黏膜组
织中,CK19阳性染色的细胞散在分布于黏膜基底层,基底上层不表达;随着大鼠舌黏膜上皮异常增生程度的增加,CK19表达于黏膜基底上层;在OSCC组织中,CK19阳性染色细胞分布在黏膜各层,浸润到黏膜下组织的癌细胞也呈阳性染色。与其他研究[10-12]结
果相似。此外本实验结果显示:在正常舌黏膜、轻度上皮异常增生、中度上皮异常增生、重度上皮异常增生、OSCC组织中CK19阳性表达率差异有统计学意义(P
在Cx家族中Cx43分布最为广泛,受到了广泛关注和深入研究。本实验发现Cx43蛋白主要表达在大鼠舌黏膜上皮角质形成细胞的细胞膜,在正常舌黏膜上皮的基底层呈弱阳性染色,棘层和颗粒层呈强阳性染色,角质层阴性染色,这种表达规律与其他研究[5-8]结果相似。由此推断Cx43的表达分布情况可能与细胞的分化程度相关;Cx43可能是口腔黏膜早期癌变的一种生物标志物。
本实验还发现随着大鼠舌黏膜上皮异常增生程度的增加,Cx43蛋白表达明显下降;在OSCC组织中Cx43异位表达,分布在鳞癌细胞的胞浆及鳞癌组织中的角化珠。笔者推断Cx43的分布状态可能与细胞所处周期相关。在DNA合成期,Cx43既位于胞浆又分布在胞质囊泡和其他胞内间隔;在分裂期,Cx43几乎全部位于胞浆,并呈分散的点状积聚[7],而舌癌
组织中的癌细胞正好处于快速分裂增殖期。许多免疫组织化学研究已证实Cx43蛋白表达的量与GJIC的能力密切相关,Cx43表达的下降意味着GJIC功能的下降。本研究动态观察了Cx43在4NQO诱导的SD大鼠舌黏膜从正常-轻度上皮异常增生-中度上皮异常增生-重度上皮异常增生-鳞状细胞癌这一动态癌变过程中的表达变化,Cx43表达强度的变化在正常舌黏膜与轻度上皮异常增生组织的比较中无明显差异;但随着癌变程度增加而显著降低,差异有显著性。证实了Cx43表达异常可以发生在癌变的各个阶段,提示在大鼠舌黏膜癌变早期发生了Cx43表达下调。因此笔者推断Cx43表达下调可能是口腔黏膜癌变过程的早期事件,与口腔黏膜癌变的发生密切相关。
细胞角蛋白是细胞骨架体系中性质最为稳定的组分,在细胞质中起支架作用,对维持上皮细胞的形态和连续性起重要作用,与细胞分化、信号转导、迁移、转化、凋亡、基因调控等生命活动相关;而GJIC是相邻细胞间直接交换信息、物质和能量的唯一通道,是维持多细胞组织稳定必不可少的调节机制。GJIC是通过细胞间隙连接(gap junction,GJ)实现的,其基本组成单位是跨膜的Cx,Cx43是一种主
要的细胞间隙连接蛋白,Cx43组成的连接子在质膜上常成簇出现形成间隙连接斑,同样作为维持细胞稳定的成分,两者的表达是否有相关性呢?本研究发现:在大鼠舌黏膜癌变发展中CK19、Cx43蛋白表达呈负相关。随着病变程度加重Cx43表达下降,而CK19表达增强,推测鳞状细胞癌组织中Cx43下降使得Cx表达减少,肿瘤细胞的转移和种植增加,因而使得检测上皮细胞及上皮起源肿瘤微转移的标志物CK19表达增多,为鳞状细胞癌早期诊断及预后判断提供依据。CK19和Cx43的联合检测对OSCC的早期诊断有重要的指导作用,有利于提高OSCC早期诊断的灵敏度和特异性。
[参考文献]
[1] Hu S, Arellano M, Boontheung P, et al. Salivary proteomics for
oral cancer biomarker discovery[J]. Clin Cancer Res, 2008, 14(19):
6246-6252.
[2] Murakami S, Koike Y, Matsuzaka K, et al. A case of calcifying
odontogenic cyst with numerous calcifications: Immunohistochemi-
cal analysis[J]. Bull Tokyo Dent Coll, 2003, 44(2):61-66.
[3] Matsuda J, Kitagawa Y, Fujii H, et al. Significance of metastasis
detected by molecular techniques in sentinel nodes of patients with
gastrointestinal cancer[J]. Ann Surg Oncol, 2004, 11(3 Suppl):
250S-254S.
[4] Mesnil M, Crespin S, Avanzo JL, et al. Defective gap junctional
intercellular communication in the carcinogenic process[J]. Biochim
Biophys Acta, 2005, 1719(1/2):125-145.
[5] Mathias RT, White TW, Gong X. Lens gap junctions in growth,
differentiation, and homeostasis[J]. Physiol Rev, 2010, 90(1):179-
206.
[6] 王安训, 黄洪章. 间隙连接蛋白43在舌鳞状细胞癌中的表达及
意义[J]. 癌症, 2001, 20(9):948-951.
Wang Anxun, Huang Hongzhang. Expression and significance of
connexin 43 in tongue squamous cell carcinoma[J]. Chin J Cancer,
2001, 20(9):948-951.
[7] 宋娟, 陈建钊, 康博, 等. 口腔鳞癌中间隙连接蛋白43和E-钙黏
素表达及相关性研究[J]. 临床口腔医学杂志, 2008, 24(6):326-
330.
Song Juan, Chen Jianzhao, Kang Bo, et al. Study of the correla-
tion and expression of the Cx43 and E-Cad in the oral squamous
cell carcinoma[J]. J Clin Stomatol, 2008, 24(6):326-330.
[8] Xia J, Liu X, Tao X, et al. Expression of gap junctional protein
connexin43 during 4-nitroquinoline-1-oxide-induced rat tongue
carcinogenesis[J]. J Mol Histol, 2009, 40(3):183-188.
[9] Pitiyage G, Tilakaratne WM, Tavassoli M, et al. Molecular markers
in oral epithelial dysplasia: Review[J]. J Oral Pathol Med, 2009,
38(10):737-752.
[10] Ogden GR, Lane EB, Hopwood DV, et al. Evidence for field change
in oral cancer based on cytokeratin expression[J]. Br J Cancer, 1993,
67(6):1324-1330.
[11] 聂敏海, 钟利, 曾光明, 等. 细胞角蛋白CK19在口腔黏膜癌变
过程中的变化[J]. 中华口腔医学杂志, 2002, 37(3):187-189.
Nie Minhai, Zhong Li, Zeng Guangming, et al. The changes cyto-
keratin 19 during oral carcinogenesis[J]. Chin J Stomatol, 2002,
37(3):187-189.
[12] Gasparoni A, Fonzi L, Schneider GB, et al. Comparison of diffe-
琅琊社区在四川省,达州市,渠县,琅琊镇。琅琊社区空气清新,水光山色,天蓝水清,主要农产品:葱、蕹菜、水果、山药、角瓜、桑椹、大葱。村里单位:琅琊社区超市、琅琊社区服务中心、琅琊社区快递站。
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关起满室,不足的氧气;点着烟蒂,回味你的呼吸。沾沾自喜,拒绝的魅力,不着痕迹,享受着与你的距离。
喜欢家里凉爽的风,与武汉枯燥闷热甚至让人窒息的天气来比,家里的阳光总是那么透彻、干净、不拖泥带水;
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右半边脸,有道疤,快被家乡的风抚平了。
2008年5月12日,一个悲惨的日子,一个令人心碎的日子。母亲节的鲜花仍散发着清香,但其中的温馨已不复存在,取而代之的是无尽的悲哀和伟大的爱!
8.0级,在平常的日子里是个被人遗忘的数字,可现在我却要用全部的力气去读,因为它代表着69226条生命的消逝。
生命是如此脆弱,天摇地动之时,你们甚至没有发出一声呼喊,便永别了那天府之国。留下的只有心碎的哭声,感天动地,天也为之哭泣。你们的灵魂渐渐飞远,没有一丝怨恨,有的只是为活着的人的祈祷。一具具尸体,充斥了整个操场,一声声哭喊,震撼着人的心灵:“我的孩子,我的孩子啊!”用白布盖住的担架,又如何盖得住那恐惧的心,一时间,天府之国再没有生气。
生命又是如此顽强,天摇地动之时,你们用自己的生命,筑起死亡的屏障,保护住那更多的生机。107小时的深埋,怎能摧毁人的意志,顽强的人们,重燃了生命之火。《生死不离》给人们以鼓励:“不论你在哪里,我们都要找到你!找到你!”在网上,不计其数的网民为你们祈福,真诚之心,感天动地!
一个个感人的故事,摧毁了心中的冰冷。谭千秋,一个让亿万中国人铭记的名字。他像一位天使,张开双臂,化作双翼庇护住那四点生机。而他的后脑却被楼板砸的深深的凹下去,这是天使的印记!他不过是一名51岁的普通教师,但死亡成就了他的辉煌,他注定被我们永远铭记。
一双双颤动的手掌 ;一对对无助的眼神;一场场绝望的生死离别;一条条奄奄一息的生命。爱的真谛让我们联系在一起“一方有难,八方支援”,刹那间无数爱心飞向四川。心灵的呼唤是我们感受到对生命的无限渴望,救援的声音传入山城。
心已经忘记了痛苦,泪不知被风干了多少回。感人的场景在那个遍洒关爱的小城一次又一次上演。那份沉淀的爱,令人叹为观止,大爱无痕,多少英雄在默默付出。陌生的面孔,一次又一次的出现在镜头前;磨破的双手,一双有一双得伸向那废墟中;疾驰的汽车,一批又一批的往返于那山城!