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【关键词】 白藜芦醇;微小RNA-146a;肺泡巨噬细胞;肿瘤坏死因子-α
Effect of ResveRatRol on expRession of lipopolysacchaRide-induced micRoRNA-146a in alveolaR macRophages Zeng Zhenguo,Shao Qiang,Li Yong,Ding Chengzhi, Qing Cheng, Liu Fen, Zhan Yian, Nie Cheng, Jie Kemin, Gong Honghan, Qian Kejian. DepaRtment of CRitical CaRe Medicine, FiRst Affiliated Hospital, Medical College of Nanchang UniveRsity, Nanchang 330006, China
CoRResponding authoR: Qian Kejian,Email:qkj0607@sohu,com
【AbstRact】Objective To obseRve the effect of ResveRatRol on expRession of lipopolysacchaRide (LPS) -induced micRoRNA-146a (miR-146a) in alveolaR macRophages. Methods Rat alveolaR macRophages(NR8383)weRe seeded at 2×106cell/poRe in 6 well plates in vitRo and incubated foR 90 min. NR8383 weRe Randomly divided into fouR gRoups: contRol gRoup, NR8383 stimulated with phosphate buffeR solution (PBS); LPS-stimulated gRoup, NR8383 stimulated with 1μg/mL of LPS; ResveRatRol-tReated gRoup, NR8383 tReated with diffeRent concentRations of ResveRatRol (1 μg/mL oR 10 μg/mL) foR 30 min, then stimulated with 1 μg/mL of LPS. AfteR incubation foR 6 h, the cells weRe haRvested and the supeRnatant of cell cultuRe medium was collected. The expRession of miR-146a of cells was detected by using fluoRoilluminance Real-time quantitative PCR device, and the levels of TNF-α pRotein in the supeRnatant weRe assayed by using enzyme-linked immunosoRbent assay (ELISA).Results CompaRed with contRol gRoup, the expRession of miR-146a and the level of TNF-α weRe significantly incReased in LPS stimulated gRoup (miR-146a’ s expRession folds: 5,92±1,57 vs 1,03±0,58,P
【Key woRds】ResveRatRol; MicRoRNA-146a; AlveolaR macRophages; TumoR necRosis factoR-α
大量临床及实验研究表明,白藜芦醇对脓毒症肺损伤具有保护作用[1-5]。微小RNA-146a(miR-146a)是TLRs/NF-κB炎症通路中重要的负反馈调控介质,能够抑制炎症反应[6]。本课题组前期研究发现,miR-146a参与了肺泡巨噬细胞炎症反应,有望成为抑制肺泡巨噬细胞炎症反应的新途径[7-8]。研究发现,白藜芦醇与miRNA关系密切,有可能通过miRNA发挥其抗炎作用[9-11]。然而,在肺泡巨噬细胞炎症反应模型中,白藜芦醇是否影响miR-146a的表达以及是否通过上调miR-146a的表达来抑制炎症介质释放均未见报道。
1 材料与方法
1,1 实验材料
大鼠肺泡巨噬细胞株NR8383(中国科学院细胞库),胎牛血清(美国HyClone),Ham’ s F-12K培养基(美国Sigma-AldRich),LPS(E,coli 0111∶ B4,美国Sigma-AldRich),白藜芦醇(美国Enzo life sciences),TRIzol Reagent(美国InvitRogen),四甲基偶氮唑盐(MTT,北京索来宝科技有限公司),TaqMan UniveRsal 聚合酶链反应(PCR)检测试剂盒、TaqMan MicRoRNA 逆转录试剂盒、TaqMan MicRoRNA 检测试剂盒(美国ABI),十二烷基硫酸钠(SDS,美国Sigma-AldRich),大鼠TNF-α ELISA试剂盒(上海明睿生物),氯仿、异丙醇、无水乙醇等均为国产分析纯。
1,2 细胞培养
R8383细胞培养于含15%FBS、1,5 g/L碳酸氢钠、2 mmol L-谷氨酰胺的Ham’ s F-12K完全培养基中,置于大气压下37 ℃、含5%体积分数CO2的温湿培养箱中培养,2~3 d更换培养液,3~4 d传代1次。
1,3 MTT比色法检测白藜芦醇对细胞活性的影响
取指数生长期NR8383细胞,按每孔细胞0,5×104个接种至96孔板。细胞贴壁90 min后,分别加入0,1、1、10、50、100 μg/mL终质量浓度的白藜芦醇,每组设5个复孔,同时设阴性对照组(等体积PBS替代白藜芦醇)和阳性对照组(等体积10%二甲亚砜替代白藜芦醇)。加药后细胞再培养48 h,加入5 g/L MTT 溶液20 μL/孔,继续培养4 h,加入三联溶解液100 μL/孔,于培养箱内继续孵育8 h,用酶标仪(波长570 nm)测定各孔的吸光度(OD 570 nm)值。
1,4 细胞处理及分组
取指数生长期NR8383细胞,按每孔细胞2×106个接种至6孔板。细胞培养90 min后,分为以下四组:(1) LPS处理组:培养板中加入LPS溶液(终质量浓度1 μg/mL);(2) PBS对照组:培养板中加入等体积PBS溶液;(3) 白藜芦醇+LPS组:培养板中加入不同浓度白藜芦醇溶液(终质量浓度1 μg/mL、10 μg/mL)预处理30 min后,加入LPS溶液(终质量浓度1 μg/mL)。细胞培养6 h后,离心收集细胞上清液和细胞团块,保存于-80 ℃冰箱,分别用于ELISA检测和细胞总RNA提取。
1,5 检测指标及方法
1,5,1 TNF-α蛋白测定 收集各组细胞培养上清液,检测按照ELISA试剂盒使用说明书进行检测。
1,5,2 miR-146a表达测定 采用TRIzol法提取细胞中的总RNA,通过琼脂糖凝胶电泳检测总RNA完整性及纯度,紫外分光光度计测定总RNA浓度。采用TaqMan MicRoRNA逆转录试剂盒进行反转录,反应条件:16 ℃ 30 min,42 ℃ 30 min,85 ℃ 5 min。采用TaqMan UniveRsal 聚合酶链反应(PCR)检测试剂盒进行PCR扩增,反应条件:95 ℃ 10 Rain;95 ℃ 15 s,60 ℃ 60 s,40个扩增循环,在ABI 7500定量PCR仪上扩增和检测。操作均按说明书进行,所有操作均在冰上完成。选取U6 snRNA作为内参照,miR-146a的相对表达量采用2-Ct计算。
1,6 统计学方法
采用SPSS 13,0统计软件进行分析,数据以均数±标准差(x±s)表示,组间比较采用单因素方差分析,组间两两比较采用SNK-q检验,以P
2 结果
2,1 MTT比色法检测白藜芦醇对NR8383
细胞活性的影响
白藜芦醇在0,1~100 μg/mL的质量浓度范围内对NR8383细胞无毒性作用。见图1。
2,2 TNF-α蛋白含量及细胞内miR-146a的表达变化
表1显示,与PBS对照组相比,LPS处理组TNF-α蛋白含量及miR-146a表达均明显升高(P
3 讨论
脓毒症并发急性肺损伤是脓毒症高病死率的主要原因[12,13],如果发生脓毒症时避免或减轻肺损伤的发生,将有助于提高脓毒症患者的成功救治率。肺组织中最多的非实质性细胞是肺泡巨噬细胞[14],脓毒症发生时,肺泡巨噬细胞内TLRs/NF-κB炎症通路活化,导致大量炎症基因的转录活化,失控性释放大量炎症因子,形成肺内炎症“瀑布”反应,导致ALI的发生。LPS是革兰阴性菌细胞壁的主要致病成分,是导致TLRs/NF-κB活化的常见因子。本研究结果显示,LPS刺激肺泡巨噬细胞后,导致TNF-α分泌显著增加。
白藜芦醇是一种多酚类化合物,是天然的植物抗菌素。它能够抑制肺泡巨噬细胞的活化,减少细胞内炎症因子的释放,避免或减轻脓毒症时肺损伤,提高脓毒症时肺损伤的治疗效果[1-5,15]。本实验研究也证实,白藜芦醇预处理大鼠肺泡巨噬细胞后,能明显抑制LPS诱导的炎症因子TNF-α 的产生,并且其抑制作用呈剂量依赖性。
miRNAs是一类小的内源性非编码RNA,通过识别靶基因mRNA的3’ 端非编码区来抑制靶蛋白的翻译或促进靶基因的降解[16-17]。miRNAs通过抑制炎症相关靶基因的转录表达,在炎症反应调控中具有重要作用。miR-146a在TLRs/NF-κB通路中具有重要调控作用。它的靶基因是TLRs/NF-κB通路中的两个重要接头蛋白编码基因IRAK-1和TRAF-6。miR-146a上调后将负性调控TLRs/NF-κB通路,能够抑制炎症介质的升高[6,18]。并且已证实miR-146a参与调节了LPS诱导的肺泡巨噬细胞炎症反应[7-8]。在本实验中,用LPS刺激肺泡巨噬细胞后,也诱导了miR-146a的表达上调,与前者报道结果相似。
研究发现,白藜芦醇通过影响miRNA前体的转录和miRNA的加工成熟,能特异性地引起一些miRNAs改变,包括miR-21、miR-146a、miR-663等,这些miRNAs都参与炎症反应的调控[9-11]。本研究发现,白藜芦醇预处理大鼠肺泡巨噬细胞后,能明显促进miR-146a的表达上调,并且相比于较低质量浓度白藜芦醇组(1 μg/mL组),较高质量浓度白藜芦醇组(10 μg/mL)更能诱导miR-146a的表达。
综上所述,在LPS诱导的肺泡巨噬细胞炎症反应中,白藜芦醇能够抑制炎症因子TNF-α的产生,并上调miR-146a的表达,由此笔者可以推测,白藜芦醇调控炎症的机制之一可能是通过升高细胞内miR-146a的表达水平来发挥其抗炎作用。
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(收稿日期:2013-05-07)
DOI:10,3760/cma,j,issn,1671-0282,2014,01,009
基金项目:国家自然科学基金(81060152);江西省自然科学基金(2009GZY0215)
作者单位:330006 南昌,南昌大学第一附属医院重症医学科(曾振国、邵强、丁成志、卿城、刘芬、詹以安、聂成、钱克俭),肿瘤科(李勇),影像科(龚洪翰);南昌大学医学院生物化学与分子生物学教研室(揭克敏)
更惊奇的发现是,我在翻阅这本字典时,找到一张已经变了颜色的“白雪公主泡泡糖”的包装纸,那是一张长条的鲜黄色纸,上面用细线印了一个白雪公主的面相,于今看起来,公主的图样已经有一点粗糙简陋了。至于如何会将白雪公主泡泡糖的包装纸夹在字典里,更是无从回忆。
到底是在上国语课时偷偷吃泡泡糖夹进去的?是夜晚在家里温书吃泡泡糖夹进去的?还是有意保存了这张包装纸呢?翻遍国语字典也找不到答案。记忆仿佛自时空遁去,渺无痕迹了。
唯一记得的倒是那一种旧时乡间十分流行的泡泡糖,是粉红色长方形十分粗大的一块,一块五毛钱。对于长在乡间的小孩子,那时的五毛钱非常昂贵,是两天的零用钱,常常要咬紧牙根才买来一块,一嚼就是一整天,吃饭的时候把它吐在玻璃纸上包起,等吃过饭再放到口里嚼。
父亲看到我们那么不舍得一块泡泡糖,常生气地说:“那泡泡糖是用脚踏车坏掉的轮胎做成的,还嚼得那么带劲!”记得我还傻气地问过父亲:“是用脚踏车轮做的?怪不得那么贵!”惹得全家人笑得喷饭。
说是“白雪公主泡泡糖”,应该是可以吹出很大气泡的,却不尽然。吃那泡泡糖多少靠运气,记得能吹出气泡的大概五块里才有一块,许多是硬到吹弹不动,更多的是嚼起来不能结成固体,弄得一嘴糖沫,赶紧吐掉,坐着伤心半天。我手里的这一张可能是一块能吹出大气泡的包装纸,否则怎么会小心翼翼地来做纪念呢?
我小时候并不是很乖巧的那种孩子,常常为着要不到两毛钱的零用就赖在地上打滚,然后一边打滚一边偷看母亲的脸色,直到母亲被我搞烦了,拿到零用钱,我才欢天喜地地跑到街上去,或者就这样跑去买了一个白雪公主,然后就嚼到天黑。
长大以后,再也没有在店里看过“白雪公主泡泡糖”,都是细致而包装精美的一片一片的“口香糖”;每一片都能嚼成形,每一片都能吹出气泡,反而没有像幼年一样能体会到买泡泡糖靠运气的心情。偶尔看到口香糖,还会想起童年,想起嚼白雪公主的滋味,但也总是一闪即逝,了无踪迹。直到看到国语字典中的包装纸,才坐下来顶认真地想起白雪公主泡泡糖的种种。
如果现在还有那样的工厂,恐怕不再是用脚踏车轮制造,可能是用飞机轮子了――我这样游戏地想着。
那一本母亲珍藏十几年的国语字典,薄薄的一本,里面缺页的缺页、涂抹的涂抹,对我已经毫无用处,只剩下纪念的价值。那一张泡泡糖的包装纸,整整齐齐,毫无毁损,却宝藏了一段十分快乐的记忆;使我想起真如白雪一样无瑕的少年岁月,因为它那样白,那样纯净,几乎所有的事物都可以涵容。
那些岁月虽在我们的流年中消逝,但借着非常微小的事物,往往一勾就是一大片,仿佛是草原里的小红花,先是看到了那朵红花,然后发现了一整片大草原,红花可能凋落,而草原却成为一个大的背景,我们就在那背景里成长起来。
那朵红花不只是白雪公主泡泡糖,可能是深夜里巷底按摩人的幽长的笛声,可能是收破铜烂铁老人沙哑的叫声,也可能是夏天里卖冰淇淋小贩的喇叭声……有一回我重读小学时看过的《少年维持的烦恼》,书里就曾夹着用歪扭字体写成的纸片,只有七个字:“多么可怜的维特!”其实当时我哪里知道歌德,只是那七个字,让我童年伏案的身影整个显露出来,那身影可能和维特是一样纯情的。
鸿雁外语学校四年级李松石
诚实的味道真好!那么美妙,那么开心!你品尝过吗!
记得有一回,我去楼下的小卖店买东西,偶然发现那里有很多种可以做游戏的卡片,同学之间可以用来比赛输赢的,于是我就花一元钱买了两个,顺手放进了裤兜里,然后又买了一些别的东西。当我去算账的时候,给了店主十元钱,他看了我买的东西之后,又找回一元钱。哦,他不知道我还买了两张卡片。我就告诉他卡片的事,并掏出来给他看,然后把那一元钱又还给了他。店主赞许地向我点点头,我感受到了诚实的美好,那是让人快乐的味道啊!
都有其潜在市场
关键是 如何让消费者去接触到它
并认知它
由于厂子不景气,还由于其它一些原因,我竟然下岗了。想我堂堂七尺男儿,满腹经纶,谁比谁差多少呢?可找了几个工作,都不满意。于是,便想到热闹的商海里一试身手。
可妻子根本不同意,理由是你没有资本,又没有经商经验,你去做买卖,全家还不得喝西北风?
得不到支持,不敢贸然行动。可心里始终没放下这个想法,平日里开始留心有关信息,琢磨着选择怎样的项目,开个好头,试试自己的能力,也让妻子信服。
机会终于来了。一种北京生产的拼音模板引起了我的兴趣。这种模板专为儿童学习汉语拼音而设计,经过试用,产品效果显著,并且已经得到了国家教育委员会的推荐。不是说女人和孩子的钱最好赚吗,就选它了。
向厂家询问,得知本地经销商已经批量进货。利用星期天到了经销公司,老板说零售每个十几元,300个以上批发。仔细看了看产品实物、说明,并写了几个拼音字母试了试,感觉不错。
回去的路上,心里便开始盘算:300个起批发,最低要1000多元,小试一下,未尝不可;产品也不错,关键是怎样销出去。找关系,通过教育系统层层往小学校摊派?国家明文规定严禁;到学校教室里推销?影响不好,学校不让;挨家挨户推销?又不知谁家有儿童刚上学,满天撒网,一个人势单力薄,收益不大。
这样琢磨着,眼看快开学了。一天,听同事说起在接孩子时,看到学校门口附近宣传推销一种高效补钙产品的,便买了一盒。真是说者无心,听者有意,一下启发了我。对,就在学校门口设摊推销。一来小学校是使用这种拼音模板的小小消费者最集中的地方,上学、放学,至少要接触两次,保证有足够的产品刺激;二来现在都是独生子女,家家都望子成龙,盼女成凤,为了学习不落伍,花10多块钱,简直小意思;况且去接送孩子的都是父亲、母亲、爷爷、奶奶、外公、外婆,手中有钱,可以当场购买。
主意一定,便三番五次地游说,妻子终于批准了2000元资金,准许小试一回。
300个拼音模板搬回了家,要了些广告资料,到旧货市场上买了一张小课桌,新涂了漆,又制作了一条横幅,上书:
之后,对本市的小学校作了一番调查,初选了10多个声誉较好、交通便利的小学校,将其中一家有4个一年级班、150多名新生的铁路小学校作为了重点。
暑假过去了,开学的日子到了。我提前请了假,早上7点钟,便来到铁路小学校门口,放下小课桌,摆好拼音模板,挂起横幅,耐心地等待小客户光临。
过了7点钟,小学生们在爷爷、奶奶、爸爸、妈妈的护送下,陆陆续续地入校了。使我感到不解的是,直到8点钟上课,竟然很少有人光顾我的拼音模板,更不用说买下。产品质量差?价格高?不实用?可这是连国家教委都发文推荐的教学用具啊,就算是质量差,价格高,不实用,你也应该凑凑热闹,问一问,看一看嘛!
等到了晚上,我才猛然意识到,虽然选择了一个正确的地点。但选择的时机是错误的,小学生们的精力是有限的,都被新入学、新学期开学等新事物所吸引,家长们也都为孩子新学期第一天上学所牵制,又有谁会给我的拼音模板一些关注呢!这样一想,便安慰自己,虽然今天出师未捷,但相信随着开学日久,我的拼音模板会引起注意的。
果然,以后的几天里,随着一年级新生拼音课的开始,关注拼音模板的家长和学生逐渐增多起来,在我的介绍和演示下,部分家长抱着试一试的态度买了下来。遗憾的是,一个星期过去了,300个拼音模板,只卖出了8个。这样下去,如何了得?
双休日,闭门思过。拼音模板是一年级小学生学习拼音用的,他们才是最终消费者,必须引起他们的注意。怎样才能引起他们的注意呢?联想到当今流行的商家赠送礼品的做法,我决定,向每一个询问拼音模板的小学生赠送一样小礼品。送什么呢?不能太贵,太贵送不起;又不能太差,太差不吸引人。最后决定,每人送一块电视广告常见的“大大”泡泡糠,2角钱,还可以承受,足以引起小学生的注意了。
考虑到儿童消费还有一个特点,就是家长要把关。如何让家长认识到拼音模板的优越性,也就是认识到拼音模板的确可以让孩子学习拼音更快、更好呢?成人购物,主要是担心产品没有宣传的效果那样好,怕花了冤枉钱。既然这样,何不免费试用一天呢?
免费试用倒是可以,可是如何担保呢?预收押金?流动摊点,无论你收多少押金,家长们总是对你不信任,怀疑这里有圈套;可总不能什么物证都没有、完全靠小学生和家长们的自觉。“人之初,性本善”、想到绝大多数人是诚实的,又想到小学生最听老师的话,都努力作个诚实的好孩子,便有了主意。综合起来,“游戏”规则是:
每一个对拼音模板感兴趣的小朋友,均可免费试用一天,并获赠一块“大大”泡糖,唯一的条件是,由小朋友在记录本上亲手签名。想你小小儿郎,断不会因要贪我一个拼音模板而把自己的名字张三写作李四。
于是又忙着为新游戏准备道具。批发了两大盒“大大”牌泡泡糖,又买了几个五颜六色的气球,新做了一块一平方米的宣传告示牌。上书: 并画了几个儿童吹泡泡糖的彩色画。
两天的休息日很快过去了。星期一,我又早早地来到小学校门口,放下小桌子,挂好气球,摆好样品,拿出泡泡糖,将宣传牌放在醒目的位置上,开始等待我的小顾客光临。
过了7点钟,上学的小学生逐渐多起来了,都被彩色大气球和宣传画吸引住了,纷纷围拢上来;而家长们在经过对孩子一个星期的辅导体验之后,则对这种学习拼音的模板给予了更多的关注。我则不失时机一遍又一遍地向他们说明“游戏”规则:
“一、二年级的小朋友和家长们,大家今天可以将这种拼音模板拿回家,按照说明书的介绍,教自己的孩子练习写拼音,看一看真正的效果如何;对领取拼音模板的小朋友,免费赠送一块大大泡泡糖。明天早晨这个时间,如果您决定买,再交钱给我;如果您不买,请把拼音模板还给我,分文不收;我们这样做,唯一的条件是:由您的孩子在这本记录本上亲笔签名,作为证明就可以了。”
经过两、三轮如此这般的解说,本来小朋友们对泡泡糖就感兴趣,家长对拼音模板感兴趣,现在居然免费品尝、免费试用,这等好事,何乐而不取!便纷纷挤上来,签名登记,领取拼音模板和泡泡糖,我则一再强调:大家都是诚实的人,明天早晨,一定前来,或是交钱买下,或是退还拼音模板。
这样忙了有半个多小时,等小学生们都进了教室,周围清净的时候,我数了数,带去的100个拼音模板,还剩下42个,也就是说,今天一早发出58个模板。我不禁心花怒放起来,如果明天这些模板全部被买下,我就可以净赚3O0多元。难道做生意,就这么简单?
晚上,向妻子汇报工作,妻子说:冷静点,小心人家赖账,让你赔上300多元。我看,有一半人买就不错了。
星期二,我又带了lO0个模板,比往常更早地来到学校门口,摆好阵势,恭候家长和小学生们的到来。没想到的是,今天比昨天更忙碌,有经试用后决定买了拼音模板,前来交钱并要求划掉签名记录的;有听了小伙伴或是家长们的鼓动,前来索取拼音模板试用并要泡泡糖的;也有认为效果不理想,归还拼音模板的。搞得我手忙脚乱,满头大汗。
再一次清静下来的时候,我仔细地进行盘点、第一天的有7个交还,实际成交51个,手中尚余63个拼音模板,扣除了第一天的7个,今天一共发出44个。如此一算。心中实实在在高兴起来,第一天已经净赚了300多元,按第一天的成交率计算,再赚2O0元没问题。
再回家向妻子汇报工作的时候,妻子也喜不自禁,帮着算账,并提醒说,要不要再进些货?泡泡糖还够不够?
考虑到“早发早收”占用时间太长,当天下午4点钟,携带东西又去了铁路小学,并将“早发早收”的游戏改为“晚发早收”,即晚上发放,次日早回收(钱或模板)的办法。星期三上午,看看已售出120多个,差不多了,便不再发放,结清了账目,结束了在铁路小学的游戏,转移到另外一所小学校,重开战场。
相信大家都喜欢粗(吃)泡泡糖吧。但我不喜欢吃。。。。。。因为,泡泡是我班男生拉,难道要吃了他吗?
他很瘦小、也很黑,好象一阵风就可以把他吹倒,也像一个不强壮的非洲人。唯一让我崇拜的是他叫泡泡(可爱滴名字),听说,我的朋友暗恋他。是的,真的很奇怪他那么丑,真是值得议论的话题拉~~
而糖——是一个很酷的男生,每天只穿着一件令人讨厌的黑衣服,头发碎碎烂烂,看起来就像黑社会的老大。。。。。。但他很“斯文”,其实是一个经常捣蛋的家伙。
说起上次春游(奸笑ING。。。)一下车,我和淡紫(淡紫女生)就觉得好象有人在跟踪,谁知糖总在我们面前“凑巧”出现了几次,以JP一族的我们当然神机妙算拉原来是他(糖)在我们玩别的游戏之前,就隐约看到他(糖)的身影,是那么孤单,是那么朦胧,是那么偷偷摸摸。。。。。。后来,我玩翻滚飞船的时候,就看到他(糖)在那排队。旁边还有2班的男生——举,他也很酷的,但在我眼里不是那么酷。我下来了,他们上去时,眼神很恐怖。转时,糖快不行了,但勉强挺过去。举很强,这么紧张的时刻,他还是冲着浪风在酷中翱翔,很引人注目。恩,我抬头望着,糖也不时望了望然后继续顶着风给他的刺激。当时,我说了一句超感人的话,可能他忍不住流泪了,下来时,只见他冲向上车的方向,头也不回。而2班的举,只是在羡慕中碰到了另一位女生——虫虫(她好洋衰的),是我以前的好朋友,虫虫不停地缠着他不放说要送他一份礼物(我们看到都偷笑)狠心的举拒绝了,直奔上车站。当然拉,虫虫不肯放过良机(真是出了名的死缠烂打)直跟着他走就向跟屁虫(当之不愧的虫虫)。。。。。。
[未完待续]
“铅笔盒,5块钱1个,赠小铅笔袋1个,买一赠一!实惠,快来买哟!”在这么热闹的地方,你问我在干什么?告诉你,我们学校搞了个义卖会,我正参加义卖呢。同学们从家里拿来了许多看过的书、没用过的笔记本、玩具、模型和一些学习用具,真是琳琅满目。我们组的成员带来的东西更为特别,许多同学围着我们的摊位挑来挑去,看来看去,可忙倒了我们这几位摊主。当中,有两个男同学同时看中了一本叫《电脑游戏大全》的书,发生了争执。有人在旁边说,你们俩开个价,谁价高谁把书拿走!“3块”,一个男孩立刻说了个价,“6块”,另一个男孩道,“7块!”“停!”我朝他们喊了一声,“对不起,我们这儿售出的最高价是6块,所以这本书归他了!”报价6块的男生听了赶紧掏出了“大票”递过来,兴高采烈地把书拿走了。
我们组的另一个摊位前已经排起了一条“长龙”。这儿是个抽奖活动,抽奖规则非常有趣,凡到此参加抽奖活动的人都要交1块钱的参与费,每人限抽两次,若抽中偶数元的东西会降一半的钱卖出,而抽中奇数元的东西会涨一倍卖出。“哎,我抽了个8块钱的贮钱罐!”“4块,给你!”“我抽了个3块钱的卡通签字笔!”“6块,给你!”“哎呀,我运气怎么这么不好?只抽到两块不要钱的泡泡糖。”其实大多数人都是抽到了泡泡糖。不管是抽到奖的还是没有抽到奖的,大家脸上都挂着兴奋和快乐。
“钉呤呤”,“翠微小学义卖活动到此结束。”随着张校长的话语,我们开始收拾自己的东西。老师让我统计一下本班的收入情况,236块,收入还不少呢。
第二天,我和其他班的几位同学,代表各自的班级,随着大队部老师,把义卖的钱全部捐给了爱心基金会,那里的叔叔阿姨还跟我们合了影呢!
学校:福建晋江永和重华中心小学王铮
联系电话:88083004
指导老师:王建国
食指运动会,大家听了可能摸不着头脑——食指运动会是什么呢?今天,我就与同学玩了这个游戏,所谓的食指运动会就是“推河比赛”。
游戏规则很简单:老师先把我们分成4个小组,三人一小组,再折断牙签的一半当中线,每个人只能用食指来较量,要在十秒钟之内将尺子推向对方,从4组中选出冠军。到底“小组比赛的冠军”花落谁家,我们拭目以待。
我有一个糖果屋,我的糖果屋有五颜六色的糖果,有许许多多的功能,还有有趣又精彩的游戏,屋子的形状也很好看。
有红色、黄色、粉红色、绿色、蓝色、棕色、橙色、白色、灰色、黑色、紫色、金色和银色的糖果。红色是和草莓味的。黄色是橘子味。粉红色是水蜜桃的。绿色是石榴味的。蓝色是泡泡糖。棕色是奇异果的味道。橙色是橙子味的。白色的是棉花糖。灰色和黑色是可乐糖。紫色是火龙果味的糖。金色的是玉米味的,银色的是棒棒糖。
功能一:有一台画画机。它是正方形的,它身上有一张白纸。只要你拿起它手上的笔,在白纸上画画,画好了,把笔拿给它,就会对你画好的画进行改分。如果你得到了九十分以上,就可以得到每一种颜色的糖各一个。
功能二:有一个高高的身高器。它高三米,宽一米。只要你站到指定的位置,它就会在一秒之内,知道你的身高,它还会说出你有多高。如果你有130厘米,它就给你30糖。想要多秒少味,就拿什么味。
功能三:有一个三人探答机,只要三个人到了,就可以玩抢答游戏了。谁答对的题最多,就可以得到三个棒棒糖。
功能四:我的助手还发明了一个小东西,它叫卖糖机,你给他一元钱,他就会给你十颗糖。你给他两元钱,它就会给你二十颗糖
我的糖果屋有两个游戏,第一个是谜语游戏,他会问你一个谜语。如果你答对了,就会得到2元钱。第二个游戏是足球游戏,踢中一个门得到两颗棉花糖。我还记得有一次,有人在踢球,他边踢边说:“看我飞毛腿!”后来,他果然踢中了,他甜甜地笑了,高高兴兴带着2颗棉花糖回家了。
我的糖果屋是小猫的形状。小猫屋是七种颜色的,有红、橙、黄、绿、青、蓝、紫色。小猫嘴里有一条鱼。这个糖果屋有三层楼。我给这个猫屋取了一个名字。就叫“妙妙屋”!
欢迎大家能来我的糖果屋。
2、孩子是一颗勃发的种子,正在奋力长大;孩子是一朵娇艳的花蕾,正在含苞待放。儿童节,在这个孩子的节日中,为你送上一份孩子般的祝福,祝你节日快乐。
3、一儿童节,祝你脸上挂满童真的笑脸,生活如童年般无忧,事事如童年般简单,遇上数不尽的童心。愿你天天过六一,天天好心情。
4、你是否还记得儿时的歌谣;是否还记得母亲的怀抱;是否还记得清脆的口哨;是否还记得游戏的墙角。今天是儿童节,愿你重拾童年记忆,青春永葆!
5、送你开心棒棒糖,甜甜你;送你欢乐泡泡糖,逗逗你;送你一块小手绢,擦鼻涕;听说你总是很淘气,以后要改改这个坏脾气,儿童节到了,祝你开心!
6、日子把风霜刻在了脸上,岁月把回忆印在心头;但童心是一种心态,即使岁月蹉跎,时光消逝,珍惜它,爱惜它,你将年轻永驻,六一儿童节,记得保持童心!
7、一快到了,我忙栽下童话的树苗,浇上童趣的清水,绽开天真的花朵,结出快乐的果实,用幸福的短信传递给你,提前祝你六一儿童节开心!
8、孩子我有块神奇的橡皮泥,我把它捏成幸福陪你一生,捏成快乐陪你一生,捏成健康陪你一生,今天是六一儿童节,我要用它捏出时间陪你度过快乐的儿童节!
9、童心烂漫,将快乐连线;童心纯洁,让好运不绝;童心荡漾,使身体健康;童心可爱,把日子描彩。六一儿童节,愿你永葆无瑕童心,欣赏一路风景!