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外面霓虹闪烁,喜欢夜生活的人们三三两两地漫步或者走进酒吧、咖啡馆、舞厅,而我对这些都没有兴致,我想去郊外看月亮,我想坐在油菜花间感受岁月回溯。陆凡去车库倒车,我说你喝酒了,还是别自己开车,他说往郊外去的话,应该没事。
四月的夜晚,有淡淡的月光,有暖暖的风,还有若隐若现的花香。我摇下车窗,让风吹进来,我被酒精灼烧的脸感受着微风的抚慰,甚是惬意。路边的白杨已经枝繁叶茂,投下斑驳的影子。陆凡并不多话,虽然我们认识近十五年了,我们从没有肆无忌惮地说过话,都是非常谨慎地交往,非常有礼节性地吃饭和喝酒。因为他是我的闺中密友小雪的丈夫,而小雪和我的感情非常深厚,她曾经对我说过一句话:我们什么都可以共享,除了陆凡。她是一个聪明的女子,她这句看似玩笑的话界定了我和陆凡相处时的分寸,同时也表明了她对我的情谊。而陆凡对小雪也是深爱的,就算我穿着镂花的睡衣在他面前走动,他也不会动心。可这个春天开始,我们交往多了起来,因为他和小雪的感情出现了问题,已经闹到准备离婚的地步,我作为小雪的密友,当然有义务来调解和劝说。今天我从外地赶过来,是为了参加明天的同学聚会。小雪并不知道我来这个城市,我只是发了短信给陆凡,让他去车站接我。晚上,他为我接风洗尘,而且为我把宾馆开好,现在又带着我来郊外兜风。
我问陆凡现在和小雪是否和好了,他淡淡地说:就那样。我说,什么叫就那样啊?你们那时候感情真的很好,让人羡慕。他就笑说:估计是我太宠她了,所以……可你如果继续宠她的话,日子不是很美好?他轻轻叹息一声说:她不该背着我和旧情人约会。再说,她的旧情人也是我的同学,大家可以一起聚聚,为何要撇开我?我说,那是因为她怕你生气。呵呵,她要是怕我生气,就更不应该去见他。我反问他:那我们现在不也隐瞒了小雪而单独在一起吗?他说:这个不一样。我说,有什么不一样?他就不说话了。
很快,我们就来到了一片开阔的田野,完全离开了城市的视线。月光有些朦胧,这和子夜的雾气有关。淡淡的雾气轻纱一般罩在油菜花上,时而浓稠时而疏淡,我伸手抚摸油菜花蕊,一种湿漉漉的气息浸入我的手心。
陆凡见我欣喜地抚摸着这些花朵,就说:和小雪比起来,你更喜欢浪漫,对吧?我说,是啊,女人都这样。不过小雪是一个很现实的女人,她是一个理智型的人,适合做妻子。陆凡不说话,他就掐着腰,站在我身边。月光下,他给我的感觉不太真实,好像他不是陆凡,而是我曾经的一个恋人,他和小雪应该没有关系。我边走边胡思乱想起来,他就默默跟着我,像一个贴身保镖。田坎里有蚕豆花,像是星星的眼睛,我蹲下身子盯着它们看,我想知道它们在想什么。
你想什么呢?累不累?不如我们坐下歇一会儿。陆凡见我沉默着,就关切地问我。我说,想一些过去的事情。你累的话,我们就坐会儿,然后回去。我看看地面很潮湿,陆凡已经从口袋里掏出一张报纸铺垫在田坎上,我们相挨着坐下。他突然拿起我的手,问我冷不冷。其实他已经知道我的手冰凉如水。我没有抽回自己的手,他就用双手把我的手攥在掌心。接着又腾出一只手在我手上摩挲。他说:你的手好软,你的皮肤很细。见我没有抗拒的意思,他就试图把手滑向我的胸,我推开了他。我说:不要这样,我感觉小雪在看着我们。他说:你别老是想着她!他再次把手伸进来,我再次把它们拿开。虽然我的内心已经翻卷着热浪,我的呼吸也变得急促,但我还是无法忽视小雪的偷窥,是的,她好像就站在不远处看我。陆凡稍微停顿一下,他把我揽进他的怀里,轻轻地拍着我的肩膀,无限爱怜地说:你一个人真不容易!一个女人是需要男人来爱的。我的心里竟然涌起了感动,同时也有了感伤。陆凡能够这样理解我,我的内心柔软起来,我渴望他能爱我一次。可是……他不是一般的男人啊,他是我密友的丈夫!我的内心挣扎起来,他也知道我矛盾的心理,就说:要是你感觉内疚,那就算了。其实,这并不影响谁,你总是把问题想得那么严重。他说着就站起身,我既安慰又失落。我拽着他的手也站起来,可他一下子又把我抱紧,然后疯狂地亲吻我。我已经无力抗拒,我边流泪边迎合他,我们交缠在一起……我发现一朵灰色的云遮住了月亮!天,瞬时黯淡下来。一只虫子惊飞着逃开,远处还有隐约的蛙声。风,徐徐吹来,我打了个冷战。我的脸上有汗水有泪水也有雾珠,我坐起身,狠劲地擦着自己的脸,而眼泪更加汹涌地落下。陆凡穿好衣服,拉我起来,再次把我搂在怀里。而我抑制不住地哭出了声,我说:我对不起小雪!我混蛋,我不是人!陆凡就叹气。然后他又劝我:你想开点可好?你干嘛这样折磨自己?可我怎么能够想开?小雪一直对我很好,对我的任何决定她都理解和支持,在我困难的时候,她会第一个给我帮助,而且是偷偷地把钱塞进我的包里。每次来这个城市,她的家就是我的旅馆,或者就是我的家。她为我买我爱吃的菜,她知道我喜欢喝酒,她自己不喝,也会买了酒让我喝,要是陆凡在家,她就让陆凡陪我一起喝。她比亲姐妹还亲。可我竟然做出如此龌龊的事情,我怎么对得起她?以后我如何面对她?我边哭边说。陆凡说:好了,别想太多,你无心伤害谁。以后,你还正常去我们家,就当什么也没有发生过。
可是你和小雪都准备离婚了,我以后来了又去哪里住?从内心里,我不希望他们离婚,这样我或许还有补偿小雪的机会。其实,他们并没有多么深的矛盾,小雪就算去见了旧情人,也只会是单纯的见面倾诉,她不会做任何对不起陆凡的事情,这点我敢确定。
没有想到的是,陆凡竟然说了一句让我意外的话:我答应你不和小雪离婚了。我会继续宠她!不计较她见不见旧情人。我停止了哭诉,和他拉勾,让他保证自己说话算话,而我也答应以后会去他们家,就当今天是一场梦。
拍拍身上的泥土,我们离开了这片油菜田,沿着原路返回。我带着负疚的心情离开。自此和小雪以及陆凡几乎断了联系。
深秋的一天,我意外接到小雪的电话。她在电话里邀请我去参加她的婚礼,并且安排我当她伴娘。原来她和旧情人严青将在十一举行婚礼。这是我始料不及的。我责怪陆凡说话不算话,说过不离婚的,现在不但离了,而且小雪又要再婚了。陆凡语气平淡地说:是她坚决要离的,这次主动权不在我。他也去参加婚礼。这让我心里很忐忑。
婚礼结束后,小雪拉着我的手说:小安,你和我是无话不说的朋友,但陆凡对我更是无话不说,所以你们的事情我早已知道。我曾经说过,老公不能分享,可现在我改变了主意,我认为缘分不能勉强。我一直感觉你们才是最适合的。我流着泪说:小雪,对不起!我……她笑盈盈地说:没有谁对不起谁,真的。就算你和陆凡没有什么,我也会和他离婚,这个和你无关。我只是想回到严青身边,我内心一直是爱他的。这些年我对陆凡仅仅是尽着一个妻子的义务而已,这对他也不公平。
这时候陆凡走过来问:你们聊什么呢?
小雪说:陆凡,我把小安交给你了啊,我不管了。
陆凡打趣说:你当然不管了,你现在巴不得把我们都甩了!
小雪故作很萌地问:你讲的话神马意思?
陆凡拉起我手说:走,我带你去看烟火。今晚DJ广场有大型烟火晚会。
风中已经弥漫着节日浓浓的气息。我们轻盈地奔跑起来,闪烁变幻的烟火映照着我们已经不太年轻的面庞,但我们的内心却洋溢着如初的爱情梦想。
责编/彭艺珂
徐峥在这部电影里演起了帅男人的样子,刘义伟成了给予别人爱情机遇的天使,他有很多手机,有一部手机只要按上面的一个键就会有一次艳遇,一共十次,这对于爱情疲劳的徐峥来说,无疑具有强大的吸引力,尽管他不想去接受,但还是尝试了。当他与妻子离婚后,在这个神奇的手机帮助下,他获得了十次与不同类型女子艳遇的经历,后来呢,我从一开始就猜测到他是不会成功的,结果如此,那些女子尽管性格各异,尽管各有魅力,但对于徐峥来说却没有一次能够真正成功,能够真正成为他的另一半,当他想回到原来的那位天天喜欢做炸酱面吃、在家时常穿紫色衣服的妻子身边时,却已发现人家早已获得了快乐的家庭。还是在影片最后,富于戏剧性地出现了他以前的一个同学,那个同样为爱情苦恼,寻觅多次后将那部神奇手机抛置一边的双博士,两人倒真是情投意合了,他们的合也是互相经历挫折后的理解。
还是影片中的一句话说的好:“世界上本来就没有哪一个人是为你准备好的”,合适不合适,也不可能是随意的,也不可能是不知足的,抱怨生活的捉弄、自己的过失,都不是正确的方法,生活中很多人都在幻想如果从头来过的故事,女人们说如果从头来过、如果能跟另一个人过,生活肯定不会是这样单调无味或是贫穷,继而想像出另一种幸福图景,男人们也在后悔跟这样的女人生活,为什么自己就没发现她的缺点呢?当人们都厌弃了现在的婚姻,都烦腻了现在的生活,便生出很多的想法,有如果回到从前的念头,有假如不这样结合的猜测,有要是那样过的话,甚至有未来如何变的冲动。
人与人的结合是一种缘,爱情婚姻是一种神奇的力量,它让人迷失自己,却又永远不可能找到一个真正合适的,总是留有或多或少的遗憾。人与人的磨合只能是在后来的生活中互相理解和帮助,共同渡过岁月,无论贫穷富贵,无论欢乐忧愁,无论疾病健康,迎上去,走过去。那些不满于现实的人或许是怀抱一种更高的理想,或许是生活惬意、温饱思欲的冲动,社会的变革也让一些人的观念发生着越来越大的变化,世俗的新看法、时代的新概念,也是对爱情的冲击。
人是容易疲劳的,爱情同样如此。新鲜感、快乐感、幸福感,在日常琐屑的世事打磨中变得黯淡无光,一样的面庞、一样的声音、一样的动作,也让感觉麻木迟钝起来。现代生活的感情危机越来越重,大城市的离婚率逐年上升,单身者也越来越多,人们的婚姻观念也越来越“先进”,工作忙、生活节奏快是一个原因,感情疲劳也是一个原因,追逐享受又是一个原因,令人不能再燃起岁月的激情。
每一个易拉罐只能有一个拉环,他们总是亲密无间
拉环一直喜欢易拉罐,但是,易拉罐的心里只有可乐
对于拉环,她无法拒绝,可是又不能接受,只因为,她的心里已经有了可乐
拉环无语,只是,他真的放不下易拉罐
所以,他决定默默的用自己的一生守护着易拉罐和可乐的爱情
就这样,日复一日,平静的生活继续
终于有一天,拉环被拉开,离开的拉环的易拉罐再也不能维系她和可乐的爱
空空的易拉罐被无情的踩扁,被抛弃
失去了可乐的她再也没有了往日的圆润和美丽
她挣扎,她无助,她感叹生命的不公
只是,她可曾听到,拉环被开启那一瞬,他心底无声的哭泣
在离去的时候,拉环在心里默默的许了一个愿望
就是当可乐被喝光之后,可以把他扔进易拉罐里
所在位置:分手几个月
断线原因:相隔两地
在参加快男之前,苏醒曾经有过一段飘散在风中的感情经历。两人在经历了甜蜜之后,爱情却因为距离归于平淡,他们于几个月前分手,在和平状态下做回好朋友。很多人猜测这段情的无疾而终是否和参加快乐男声比赛有关,苏醒却表示无论参加快男还是出名,都不会影响他对爱情的态度,更何况分手也是在比赛前几个月的事了,和比赛完全没有关系。
来电密码:漂亮、有内涵的完美女孩
明知会让许多“醒目”心碎,但当面对“你喜欢什么样的女孩子”这样的问题时,苏醒仍然毫不犹豫地选择了――漂亮女孩。要当苏醒的女朋友首要条件就是“漂亮”!当然在拥有外表的同时,内涵也是不可缺少的!苏醒坦白说,以前在国外的时候遇到过心动的女孩子,但后来不了了之,希望以后还能碰到。
吉杰
所在位置:分手一年
断线原因:不适合
吉杰之前谈过三段刻骨铭心的感情,曾有传闻说他将最后的感情留在了北京,但吉杰却说最后一个女朋友是在上海交往的。为什么答案有出入?原来,吉杰与北京的女孩分手后来到了上海,一度为情所伤的他认识了另外一个女孩,后者才是他目前为止的最后一个女朋友,虽然两个人在一起时间也并不长。
来电密码:漂亮、聪明,最好还性感
三段感情,每一段都认真投入,却又都如风般飘逝,这却并没有让吉杰失去寻找爱情的信心。35岁,是吉杰心目中可以谈婚论嫁的年龄,因此他希望从35岁开始谈一场好的恋爱。这段感情必须是最浪漫,最稳定,有建设性的。网上一度流传吉杰是gay,言辞凿凿,让人半信半疑,但是吉杰已经郑重声明,他是百分百正常的男人。
陈楚生
所在位置:女友?不说
断线原因:缘分不到
陈楚生的绯闻大概是“快男”里最精彩的一个,有人说陈楚生的前女友是孙俪,也有人说陈楚生为参加快男抛妻弃子当了不折不扣的“陈世美”……对于外界的种种猜测,陈楚生并不解释,更显得神秘莫测。陈楚生曾经创作过一首名为《她们》的歌,许多粉丝都猜测这是他为一个女孩所作。其实,陈楚生确实为一个女孩写过一首歌,那是一个很漂亮很贤惠的女生,可惜缘分有的时候真的说不清楚,他们最后还是没有走到一起。
来电密码:小鸟依人、孝顺父母
很多陈楚生的粉丝,希望陈楚生的女朋友能像他歌词所唱的那样:“只要我轻轻呼唤你,你就不顾一切来到我身边,我的姑娘!”不过,像陈楚生这样酷酷的男人,身边只能待个“小鸟依人”的女人,因为他已经透露了以后挑选女友的标准,“最重要是善解人意,懂得孝敬父母。”
王栎鑫
所在位置:分手不久
断线原因:参加快男
只有18岁的王栎鑫,其恋情也是正宗的校园纯情故事,羞涩的他甚至一直不肯用“女朋友”三个字来定义曾经身边的女孩,只是说,有一个女孩,和她在一起的感觉比较快乐,两个人挺玩得来。但是,那似乎比爱情还少了一点热度。参加快男后,这份感情就与王栎鑫渐行渐远了。
来电密码:因密码太长,忽略
性格文静或者和他本人一样活泼一点,有大大的眼睛,小小的嘴巴,身高160公分。虽然对以前的恋情还不好意思承认,但说起理想中的女朋友,王栎鑫给出的条件还是非常具体滴。看来,情窦初开的他正以兴奋的心情期待着一份无比甜蜜的爱情。
魏晨
所在位置:江湖有他的传言
“快男”中,魏晨是内向的代表,不少粉丝也正因为他青涩腼腆的笑容而被他迷倒,可是在绯闻方面,“师生恋”、“断臂恋”却无一例外地找上这个清纯小男生。其实,人家魏晨早已公开承认过自己的恋情,那是在上高中时的一段纯纯初恋。现在,初恋的故事已经成为过去,但是魏晨特别憧憬将来能有个幸福温馨的家庭,他认为最温馨的事就是,能和心爱的她一起去看电影,在黑暗中互相拉着手。回到家里,能为心爱的她亲手做晚饭。乖巧羞涩的男孩魏晨,很有新好老公的潜质哦!
来电密码:没有心机,不拒绝姐弟恋
魏晨喜欢的女生是温柔、大方型的,一颗善良感恩的心也很重要,最反感的是有心计的女孩。“乐橙”中不乏大量姐姐级歌迷,而魏晨对“姐弟恋”的看法也一定能让她们“龙心大悦”,“年龄并不是问题,可以照顾我,只要感觉对了就好。”
张杰
所在位置:正在恋爱中
古灵精怪的娜娜和可爱的弟弟张杰,这段恋情虽然不久前才曝光,但其实早已有了充分的根据。娜娜和张杰都是川师大的校友,两人都是四川老乡,所谓他乡遇故知,也是人之常情。在“舞林大会”期间张杰对娜娜照顾有加,“暗恋桃花源”二人更是形影不离,陪伴左右。当看到平时鬼马调皮的谢娜在张杰面前流露恋爱中女人的羞涩与柔情时,已经可以肯定他们之间的情感远远越过朋友。但是,干嘛不祝福呢?毕竟,选秀场上能生发出如此美丽的恋情,还是很不容易的。
关键词:亲情干预;年轻人;乳腺肿瘤;情绪;预后乳腺癌是妇女最常见的恶性肿瘤之一,严重影响其身心健康。随着生活水平的提高和生活方式的改变,乳腺癌的发病率逐年增加,发病年龄也不断提前[1]。研究指出,乳腺癌病例数每年以3%~6%的速度递增,发病年龄比西方国家平均提前 10~15年[2]。我国发病年龄<45岁的乳腺癌占乳腺癌总人数的27.3%,远高于美国的年轻乳腺癌患者比例[3]。由于乳腺癌的主要治疗方法是手术切除,给患者带来极大的负性心理情绪,如紧张、焦虑、悲观抑郁等。这些负性情绪会影响手术效果和患者的身心康复[4]。本研究通过对个案患者施行充分的亲情干预,使其得到比其他患者更多的关注和关心,通过观察该患者亲情干预后焦虑情况、对疾病认识以及几个客观指标的变化情况,阐述亲情干预对年轻乳腺癌患者情绪和预后的影响。
1资料与方法
1.1一般资料 患者女,33岁。2009年12月无意间发现左乳肿块,此后逐渐增大并出现疼痛及内陷。2010年2月8日行彩超检查,显示肿物位于左侧乳腺外侧象限,实际占位4.0 cm×3.2cm,左侧腋下可见低回声肿大淋巴结,1.4cm×1.0cm。2月9日行左侧腋窝淋巴结穿刺,细胞学示(左侧淋巴结)可见癌细胞。2月11日行双乳增强MR示:左乳肿物,符合乳腺癌,BI-RADS6级,多中心型。2月12日在北京肿瘤医院行4周期 CBP+PTX(卡铂+紫杉醇)方案术前新辅助化疗。2010年5月14日于该院乳腺外科接受左侧保留皮肤根治性乳腺全切除+左侧腋窝淋巴结清扫+左侧扩张器植入术。5月21日起行4周期CEF方案后辅助化疗,此后于2010年10月25日~11月26日行放疗。结束放疗后继续他莫昔芬片10mg、2次/d口服内分泌治疗。
1.2亲情干预方案参照CNP[5]制定亲情干预方案,从术前、术中和术后各个环节落实亲情式医疗。本着“以患者为中心”的理念,强调“我能为患者做什么”、“如何使患者放松”的思想内涵,与患者交流、给患者提供优质医疗服务。允许和鼓励患者家属全程陪护,给予患者更多的亲情关怀和温暖。患者及其家属通过病房电视屏幕播放的乳腺癌的知识了解和乳腺癌得病的可能原因,以及治疗和预后情况,对疾病的了解是战胜疾病的重要武器。在患者手术过程中,患者家属也穿上手术衣,全程陪护。手术住院期间,患者家属每天下午均陪伴在病床旁。放化疗时,患者丈夫每次都抽时间陪同。
2结果
见表1。
3讨论
随着乳腺癌的发病年龄提前,越来越多的年轻女性罹患乳腺癌,这对家庭来说是一个沉重的打击。由于乳腺癌本身会给患者带来不适和疼痛,疾病本身会引起患者焦虑和抑郁的负性心理情绪。加之,当前乳腺癌治疗的主要方法是手术和术后的放化疗,对女性的生理和心理都是极大的挑战。绝大多数年轻乳腺癌患者在得知罹患乳腺癌和手术治疗是首选治疗方法后都会出现哭泣、无助的表现,这些负性情绪可能会对患者预后有负面的影响。通过对比该患者与其他未实行亲情干预或亲情干预实施不充分的患者相比,发现该患者充满了自信和生活的信心,焦虑得分比其他同期住院的年轻乳癌患者低,多项可测量的客观指标,如睡眠时间长、血压和心率低等也优于其他同期住院的年轻乳癌患者。
总之,亲情干预充分考虑了年轻的乳腺癌患者易焦虑、抑郁的负性情绪,在此基础上通过增加医生、护士、麻醉师,尤其是患者家属对患者的鼓励和关心,耐心解答患者的所有问题,使患者无时无刻不感受到温暖。这些积极的正能量一定程度上利于患者自身免疫力的调动,对于控制肿瘤的自身发展和恶化、提高化疗效果有重要意义。
参考文献:
[1]范金虎,王建炳,姜勇,等.北京市社区妇女干预前后乳腺癌认知情况调查及评价[J].中国健康教育,2011,27(2):114-116.
[2]阎成美,王艳华,黄丽婷.乳癌住院患者的疾病不确定感及其相关因素分析[J].中国实用护理杂志,2008,24(10):19-20.
[3]王宁,王斌,王雅杰.乳腺癌患者发病年龄和临床病理学参数的相关性研究[J].临床肿瘤学杂志,2011,16(2):134-138.
【关键词】师爱 信任 平等 心灵 快乐成长
【中图分类号】G635 【文献标识码】A 【文章编号】2095-3089(2013)11-0195-01
人的生活中充满了爱:慈爱、恩爱、友爱、喜爱、恋爱等等,但任何一种爱都不能和教师的爱相比拟。师爱生是人类复杂情感中最高尚的情感,人们把它喻为“点燃照亮人们心灵的火焰”,开启心扉的钥匙,开发学生心智的能源。爱学生,这是教师教育学生的起点和基础,爱学生也是所有忠诚人民教育事业的教师的共同情感,爱学生是热爱教育事业的具体表现,是做教师的天职。
德国教育家第斯多惠说:“教育的艺术 在于传授的本领,而在于鼓励、唤醒、鼓舞。”即教育是感染、潜移默化,是心与心之间的渗透,我认为,这就是班主任的工作艺术。在课程改革的今天,我们面对的是一群活泼可爱、富有朝气且有个性的活生生的人,这就对班主任的工作提出了更高的要求,做好班主任工作,单凭说服教育是不够的,还要进一步研究出一些切实可行且行之有效的新办法、新路子。
教师的工作对象是学生,学生是学校里的“上帝”,没有学生就没有教师施展才华的沃土,把学生比作上帝,并不意味着宠学生、惯学生,让学生放任自流,或者说老师不敢管学生,而是要与学生建立融洽、平等的师生关系。俗话说:“一个好汉三个帮”,若要取得学生的信任和在工作上的支持,你必须与学生建立和谐平等的师生关系。捷尔斯基说过这么一句话:“谁爱孩子,孩子就爱他,只有爱孩子的人才可以教育孩子”。所以在工作中,我总是真心实意地去爱护他们。
一、老师,请给学生多一点爱。
古人云:“感人心者,莫先乎情。”教师只有像对待自己的孩子、朋友那样,怀有真诚、理解、尊重、信任和爱护学生,才能使学生亲近、信任教师和盘托出心底的秘密,心悦诚服地接受教师的批评和指点。
对那些惰性心理、依赖心理较强的学生,他们的行为往往未得到别人的肯定,犯错误后又易受老师的训斥。长此以往,他们总觉得不被理解而产生一种惰性和逆反心理,有时甚至与老师对抗。碰到这样的学生,老师在教育批评时应加强情感投入,并在平时对他们的学习、生活多关心,做好心灵疏通,晓之以理,动之以情,满含期待的批评,往往会收到奇效。
我班学生张宇般,经常不写作业,上课在座位上说话,搞小动作,下课常欺侮人,上课做操故意捣乱,对老师的批评一副不以为然的样子,还常与老师“讲理”,在班上造成不良影响。这样的学生如果靠训斥只能越训越皮,越训越没有自尊心。为了转化他,我首先从沟通师生情感入手,他犯错误时,我总是心平气和地单独与他谈话,帮他分析危害。他看到我对他不讨厌,不嫌弃。而是对他很平等,很真诚,就对老师慢慢亲近了,我用情感的缰绳套住了这匹不驯服的“小马”。在日常生活中,我慢慢诱导他走上道德规范的正轨,在学习生活多方面关心他,把他推选为本班的纪律委员,给他为集体做事的机会,使他把老师的关心变为自己的道德情感。现在,这匹“小马”懂事多了,做事能顾及到别人的感受,做到心中有他人了,在行为上能用《小学生守则》来约束自己。所以,班主任要搞好班级工作,就要爱自己的学生,把自己所带的班当作自己的家,学生当作自己的孩子,让他们感到集体的温暖,老师对他们的爱,学生会信任老师,这样才能互相理解,互相进行心灵的沟通,从而唤起师生感情的共鸣,产生心理相融的效应,让学生觉得老师理解他们、爱他们了,他们才能勇敢面对困难,勇往直前,班主任才能顺利搞好班级工作。
二、老师,请给学生一个平等的机会。
前些天,看到这样一则故事:一个犯人外出修路时拾到1000元钱,马上交给警察,警察却说:“你别来这一套,想贿赂我换取减刑的资本吗?”囚犯万念俱灭,当晚就越狱了,在逃亡的路上,他正好站在厕所旁,这时,一个漂亮姑娘要上厕所,发现门扣坏了,她轻声对这个逃犯说:“先生,你能为我把门吗?”逃犯一愣,看着姑娘纯洁无暇的眼神,他点点头。姑娘红着脸进了厕所,他像忠诚的卫士一样守着门,一刹那间,他突然改变了主意,下一站,他下车来到站点派出所,投案自首了。
有人说这是信任的力量,警察对犯人的不信任,使得犯人自暴自弃,越狱逃跑,那位姑娘对犯人的信任,却让也顿然醒悟,决心认罪。其实,最大的区别在于:警察知道囚犯的历史,而姑娘不知,如果姑娘知道为她把门的是一位囚犯,很难说故事还会有这么美丽的结局。
我由此想到了教育中的一种情形。每到开学,接手的新班的老师总习惯去了解学生的过去,犯过什么错误没有?有什么坏毛病?对于学生的错误,一些老师可能在头脑 “回收站”里留下“案底”以便哪天再度犯错时拿来作“参考”,知道了学生的过去,往往就会用“有色眼睛去看人,原谅一个人的过错不难,忘记一个人的过错却很难”。
我认为,接手新班的老师对学生要一视同仁,给予同样的关怀、信任和理解。老师不知学生的过去,用一样的眼光看学生,给予学生积极的关注和良好的期待,可以使那些有过失的学生重新树立自信。
我班学生韩振生通过初步接触,我发现该生能说会道组织能力很强,很有魄力,可学习成绩却一般,我一直没有去了解他的过去,而是经常表扬他的一些优点。前一段时间,他被大家选为小队长,在当天的作业中他夹了一个纸条写道:“老师,你难道不知道,我以前经常不做作业吗?李老师不喜欢我,谢谢您给我的信任和鼓励!”这几天,他还帮我训练集体舞,并指出谁不守纪律,谁动作不到位”。
的确,我不想去了解学生的过去,只想以欣赏的目光去寻找他们的闪光点,“你的过去,我一概不知,我只看你现在的表现。”我对每一位同学说:“我想给学生一个平等的机会,也给自己一个宁静的心境。”
【关键词】青年结直肠癌;微转移;淋巴结;聚合酶链反应
【中图分类号】R56 【文献标识码】A 【文章编号】1004-7484(2013)03-0189-02
结直肠癌是世界上胃肠道恶性肿瘤的重要死因,在美国位居第一位【1】。,随着人们生活方式和饮食习惯的改变,在我国近20年来尤其在大城发病率明显上升,且有明显的年轻化趋势;临床工作发现,青年结直肠癌患者,发现晚、恶性程度高、预后差,对家庭、社会危害影响更大。因此对青年结直肠癌患者更应特别关注。目前外科手术治疗依旧结直肠癌患者首选方法,由于临床ⅠⅡ期病例尚缺乏全身辅助化疗对延长生存期有力证据,临床上多数不进行化疗。然而临床上有20%~30%的局限于肠壁、“无转移”的早期病例,虽然施行标准根治术,但术后易复发,影响了术后5年生存率。究其原因,最可能解释是微转移(micrometastasis,MM)将临床期Ⅲ的漏诊,而未行化疗。随着对于结直肠癌诊治的研究提高。逐渐认识到淋巴结转移是影响结直肠癌患者预后的最重要因素之一,近几年来,不少学者通过研究结直肠癌淋巴结的微转移来提高结直肠癌治疗效果以期改善预后,提高5年生存率。细胞角蛋白(cytokeratin,CK)是细胞骨架系统中间丝组成成分之一。广泛存在于上皮组织细胞中,而间叶组织中缺乏表达,故成为上皮肿瘤细胞较为敏感和特异的指标,由于它在正常淋巴结中不表达,因而最常用来检测微转移的标记物【2】。RT-PCR被认为是检测隐匿性癌转移的高度敏感的方法,本文探讨RT-PCR检测CK19mRNA在诊断青年(40岁以下)结直肠癌患者区域淋巴结微转移的价值及其临床应用。
1 材料与方法
1.1 病历选择 收集2007年9月至2011年9g0OOS+i+S4tOW6iuinguWvn2QCCQ9kFgJmDxUEAA16Z2JzMjAxMzAzNTIxFeW4g+mygeawj+iPjOeXhemYsuayuxXluIPpsoHmsI/oj4znl4XpmLLmsrtkAgoPZBYCZg8VBAANemdiczIwMTMwMzUyMjI1M+S+i+iEkeWHuuihgOeXheS6uuW5tuWPkeiCuumDqOaEn+afk+S4tOW6iuWIhuaekDI1M+S+i+iEkeWHuuihgOeXheS6uuW5tuWPkeiCuumDqOaEn+afk+S4tOW6iuWIhuaekGQCCw9kFgJmDxUEAA16Z2JzMjAxMzAzNTIzS+iFueiFlOmVnOS4i+Wkp+W+hOe6v+WtkOWuq+iCjOWjgemXtOiCjOeYpOWJlOmZpOacr+eahOWPr+ihjOaAp+S4juWuieWFqOaAp0vohbnohZTplZzkuIvlpKflvoTnur/lrZDlrqvogozlo4Hpl7TogoznmKTliZTpmaTmnK/nmoTlj6/ooYzmgKfkuI7lronlhajmgKdkAgwPZBYCZg8VBAANemdiczIwMTMwMzUyNDPnu4/mo5rplYfppJDppa7lhbflpKfogqDoj4znvqTmsaHmn5PnirblhrXnmoTosIPmn6Uz57uP5qOa6ZWH6aSQ6aWu5YW35aSn6IKg6I+M576k5rGh5p+T54q25Ya155qE6LCD5p+lZAIND2QWAmYPFQQADXpnYnMyMDEzMDM1MjUjTWFsbG9yeeKAlFdlaXNzMzDkvovliIbmnpDlj4rmsrvnlpcjTWFsbG9yeeKAlFdlaXNzMzDkvovliIbmnpDlj4rmsrvnlpdkAg4PZBYCZg8VBAANemdiczIwMTMwMzUyNkXmtYXosIjnpL7ljLrlrZXkuqflpofkv53lgaXmnI3liqHlu7rorr7kuI7pooTpmLLkuqflkI7lrZDnl6vnmoTlhbPns7tF5rWF6LCI56S+5Yy65a2V5Lqn5aaH5L+d5YGl5pyN5Yqh5bu66K6+5LiO6aKE6Ziy5Lqn5ZCO5a2Q55er55qE5YWz57O7ZAIPD2QWAmYPFQQADXpnYnMyMDEzMDM1Mjcu5be05bee5Yy6MjIwNuS+i+aJi+i2s+WPo+eXhea1geihjOeJueW+geWIhuaekC7lt7Tlt57ljLoyMjA25L6L5omL6Laz5Y+j55eF5rWB6KGM54m55b6B5YiG5p6QZAIQD2QWAmYPFQQADXpnYnMyMDEzMDM1Mjgq5LiN6KeE5YiZ5oqX5L2T562b5p+l5LiO6L6T6KGA5YWz57O75o6i6K6oKuS4jeinhOWImeaKl+S9k+etm+afpeS4jui+k+ihgOWFs+ezu+aOouiuqGQCEQ9kFgJmDxUEAA16Z2JzMjAxMzAzNTI5LuiEkeail+atu+S6muaApeaAp+acn1QxV0npq5jkv6Hlj7fnl4Xlm6DliIbmnpAu6ISR5qKX5q275Lqa5oCl5oCn5pyfVDFXSemrmOS/oeWPt+eXheWboOWIhuaekGQCEg9kFgJmDxUEAA16Z2JzMjAxMzAzNTMwT+WMlueWl+aCo+iAhVBJQ0Pnva7nrqHmnK/lkI7kvb/nlKjkuK3lpK7pnZnohInnva7nrqHmnK/mjaLoja/ljIXnmoTkuLTluormjqLorqhP5YyW55aX5oKj6ICFUElDQ+e9rueuoeacr+WQjuS9v+eUqOS4reWkrumdmeiEiee9rueuoeacr+aNouiNr+WMheeahOS4tOW6iuaOouiuqGQCEw9kFgJmDxUEAA16Z2JzMjAxMzAzNTMxKueUt+aAp+WMu+eUn+WcqOWmh+S6p+enkemXqOiviuaJgOmBh+mXrumimCrnlLfmgKfljLvnlJ/lnKjlpofkuqfnp5Hpl6jor4rmiYDpgYfpl67pophkAhQPZBYCZg8VBAANemdiczIwMTMwMzUzMjnigJznlJjnsr7og7DlspvntKDigJ3msrvnlpfliJ3lj5Ey5Z6L57OW5bC/55eFNDDkvovop4Llr5854oCc55SY57K+6IOw5bKb57Sg4oCd5rK755aX5Yid5Y+RMuWei+ezluWwv+eXhTQw5L6L6KeC5a+fZAIVD2QWAmYPFQQADXpnYnMyMDEzMDM1MzM6MuWei+ezluWwv+eXheaCo+iAheacjeiNr+S+neS7juaAp+WvueihgOezluaOp+WItueahOW9seWTjToy5Z6L57OW5bC/55eF5oKj6ICF5pyN6I2v5L6d5LuO5oCn5a+56KGA57OW5o6n5Yi255qE5b2x5ZONZAIWD2QWAmYPFQQADXpnYnMyMDEzMDM1MzRJ6YeN57uE5Lq65bmy5omw57SgyZExYuWcqOWptOW5vOWEv+i9rueKtueXheavkuaAp+iCoOeCjuS4reeahOeWl+aViOinguWvn0nph43nu4TkurrlubLmibDntKDJkTFi5Zyo5am05bm85YS/6L2u54q255eF5q+S5oCn6IKg54KO5Lit55qE55aX5pWI6KeC5a+fZAIXD2QWAmYPFQQADXpnYnMyMDEzMDM1MzUw5Lqn56iL5Zu+5Zyo5Yid5Lqn5aaH5aS05L2N5YmW5a6r5Lqn5LiK55qE5YiG5p6QMOS6p+eoi+WbvuWcqOWIneS6p+Wmh+WktOS9jeWJluWuq+S6p+S4iueahOWIhuaekGQCGA9kFgJmDxUEAA16Z2JzMjAxMzAzNTM2MOWuieWIqeaQj+ayu+eWl+WFheihgOaAp+W/g+WKm+ihsOerreeWl+aViOinguWvnzDlronliKnmkI/msrvnlpflhYXooYDmgKflv4PlipvoobDnq63nlpfmlYjop4Llr59kAhkPZBYCZg8VBAANemdiczIwMTMwMzUzNy3kuI3lkIzlv4Plip/og73mgqPogIVQQ0nmnK/lkI7lr7nmr5TliYLogr7nl4Ut5LiN5ZCM5b+D5Yqf6IO95oKj6ICFUENJ5pyv5ZCO5a+55q+U5YmC6IK+55eFZAIaD2QWAmYPFQQADXpnYnMyMDEzMDM1Mzg9MjAxMeW5tOaIkemZoumXqOiviuWkhOaWueaKl+iPjOiNr+eJqeS9v+eUqOaDheWGteiwg+afpeWIhuaekD0yMDEx5bm05oiR6Zmi6Zeo6K+K5aSE5pa55oqX6I+M6I2v54mp5L2/55So5oOF5Ya16LCD5p+l5YiG5p6QZAIbD2QWAmYPFQQADXpnYnMyMDEzMDM1MzlO5rOw5bCU6IyC5Yqo6ISJ6YeH6KGA6ZKI5LiO5Lyg57uf5rOo5bCE5Zmo5Zyo6IKh5Yqo6ISJ6YeH6KGA5Lit55qE5bqU55So5q+U6L6DTuazsOWwlOiMguWKqOiEiemHh+ihgOmSiOS4juS8oOe7n+azqOWwhOWZqOWcqOiCoeWKqOiEiemHh+ihgOS4reeahOW6lOeUqOavlOi+g2QCHA9kFgJmDxUEAA16Z2JzMjAxMzAzNTQwSOWmiuWooOWQiOW5tuWtkOWuq+iCjOeYpOihjOWJluWuq+S6p+acr+S4reWJlOmZpOS4tOW6iuayu+eWl+aViOaenOinguWvn0jlporlqKDlkIjlubblrZDlrqvogoznmKTooYzliZblrqvkuqfmnK/kuK3liZTpmaTkuLTluormsrvnlpfmlYjmnpzop4Llr59kAh0PZBYCZg8VBAANemdiczIwMTMwMzU0MSgyMDEx5bm05ryz5bee5biC5rWB5oSf55uR5rWL57uT5p6c5YiG5p6QKDIwMTHlubTmvLPlt57luILmtYHmhJ/nm5HmtYvnu5PmnpzliIbmnpBkAh4PZBYCZg8VBAANemdiczIwMTMwMzU0MjPohILogqrogp3ov5DliqjooYzkuLrlj4rppa7po5/lubLpooTnmoTnlpfmlYjop4Llr58z6ISC6IKq6IKd6L+Q5Yqo6KGM5Li65Y+K6aWu6aOf5bmy6aKE55qE55aX5pWI6KeC5a+fZAIfD2QWAmYPFQQADXpnYnMyMDEzMDM1NDMn5bC66aqo5Yag54q256qB6aqo5oqY55qE6K+K5pat5Y+K5rK755aXJ+WwuumqqOWGoOeKtueqgemqqOaKmOeahOiviuaWreWPiuayu+eWl2QCIA9kFgJmDxUEAA16Z2JzMjAxMzAzNTQ0KuWNleS+p+WKqOecvOelnue7j+m6u+eXueS4tOW6iuiviuayu+WIhuaekCrljZXkvqfliqjnnLznpZ7nu4/purvnl7nkuLTluoror4rmsrvliIbmnpBkAiEPZBYCZg8VBAANemdiczIwMTMwMzU0NTznu7TmjIHmgKfooYDmtrLpgI/mnpDmgqPogIXmipHpg4HnirbmgIHlj4rnm7jlhbPlm6DntKDliIbmnpA857u05oyB5oCn6KGA5ray6YCP5p6Q5oKj6ICF5oqR6YOB54q25oCB5Y+K55u45YWz5Zug57Sg5YiG5p6QZAIiD2QWAmYPFQQADXpnYnMyMDEzMDM1NDYz5ZG85ZC45YaF56eR5bqU55So5oqX6I+M6I2v54mp5bmy6aKE55qE55aX5pWI5YiG5p6QM+WRvOWQuOWGheenkeW6lOeUqOaKl+iPjOiNr+eJqeW5sumihOeahOeWl+aViOWIhuaekGQCIw9kFgJmDxUEAA16Z2JzMjAxMzAzNTQ3aeeUsuedvumFrueJh+iBlOWQiOS4ueiOquWmh+W6t+eFjuiGj+ayu+eWl+WtkOWuq+WGheiGnOW8guS9jeeXh+WSjOWtkOWuq+iFuuiCjOeXhTIyMOS+i+S4tOW6iuaViOaenOWIhuaekGnnlLLnnb7pha7niYfogZTlkIjkuLnojqrlpoflurfnhY7oho/msrvnlpflrZDlrqvlhoXohpzlvILkvY3nl4flkozlrZDlrqvohbrogoznl4UyMjDkvovkuLTluormlYjmnpzliI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淋巴结分类Ⅰ期5例,Ⅱ期13例,Ⅲ期7例,Ⅳ期5例;共采集肿瘤标本的30例;淋巴结108个。另取同期因良性疾病结直肠(结直肠息肉、憩室等)手术的20例患者的正常肠周淋巴结20枚作为对照组。每个新鲜淋巴结标本平均分为两块(每次切开淋巴结之前,用生理盐水冲洗刀片,以免造成污染),一块用福尔马林固定,石蜡包埋后切片行常规病理检查(HE染色),另一块经液氮速冻后-
80℃ 保存用于提取RNA。对于常规病理检查无淋巴结转移患者的淋巴结标本提取RNA。
1.2 引物设计 引物由上海生工公司合成。CK19引物的序列设计见表1
1.3 总RNA抽提及鉴定 30例结直肠癌组织,108枚淋巴结和20例正常组织分别加入提起试剂(Invitrogen)1ml,电动匀浆1~2min,匀浆液室温放置5min后加氯仿200?l,震荡15s,12000r/min4℃离心15min;上层水相移人另一Eppendorf管中,加入异丙醇500?l混匀室温放置10 min。4℃12000 r/min离心15 min,弃掉上清,加1ml75%乙醇洗涤RNA沉淀,7500 r/min, 4℃离心5min,弃掉上清。
1.4 依据RT―PCR试剂盒说明书 在美国产MJ―Research扩增仪上,将反应体系混匀后进行扩增,逆转录体积为50?l。扩增步骤如下:(1)42℃孵育30min;(2)95℃孵育3min;(3)95℃预变性10s;(4)55℃预变性30s;(5)72℃ 1min ;(6)重复3~5步骤4次;(7)95℃预变性5s;(8)60℃预变性30s;(9)读取;(10)重复7~9步骤35次;(11);40℃预变性1s。用紫外分光光度仪定量观察并照相记录结果。
2 结果
患者常规病理组织学方法检查确诊为结直肠癌患者,RT-PCR法同时检测30例结直肠癌患者大体标本均有CK19mRNA表达;108个淋巴结中有47个存在CK19mRNA阳性表达,阳性率 43.5%;常规病理检查有25枚有癌转移,阳性率23.2 % RT-PCR方法和常规病理方法比较差异有统计学意义;20例良性病变患者30枚淋巴结中CK19mRNA表达为阴性。CK19mRNA在结直肠癌组织及淋巴结中表达(图-1)
3 讨论
1980年由Sloane首先提出微转移细胞概念以来,大量的研究工作集中到各种上皮源性肿瘤患者的淋巴结,骨髓和血液微转移状况对预后的影响,目前微转移已逐渐被接受为一项有用的指标,用来确定癌症患者的肿瘤分期。结直肠癌是我国常见的恶性肿瘤之一,在我国近20年来尤其在大城发病率明显上升,且有年轻化趋势。目前结直肠癌治疗疗效较过去已经明显提高,但转移和远处复发依旧是治疗失败的主要原因。探求高特异性的肿瘤转移潜力和临床预后的预测指标,并探讨高敏感的检测手段以指导临床综合治疗已成为临床肿瘤研究的特点。常规病理未发现淋巴结转移,术后复发率高达近一半【3】。最可能解释是微转移(micrometastasis,MM)将临床期Ⅲ的漏诊,而未行化疗。微转移是指在非血液系统恶性肿瘤的发展过程中,播散并存活于淋巴系统、骨髓、肝等组织器官中的微小瘤灶,常无临床表现,而这正是造成肿瘤转移或复发重要原因之一,也是目前肿瘤防治中被关注热点之一。目前研究认为可能是淋巴系统、骨髓、肝等组织器官中的微小瘤灶导致结直肠癌临床无法及时和正确治疗。故淋巴结转移是影响结直肠癌预后的最主要因素之一。传统病理学检查是通过对其具有代表性的一个切面经HE染色作普通光镜检查得知的,但阳性率较低,漏诊率较高。文献报道漏诊率高达10~30%【4】因此,寻求高特异性、高敏感性的及时准确判断淋巴结有无早期转移具有重要临床意义。随着分子生物技术发展,利用分子生物技术可以发现常规HE染色不能发现的单个癌细胞,由于这些微转移可能发展为致命显性,故微转移的检测目前为人们重视并成为肿瘤研究热点。
细胞角蛋白(cytokeratin CK)是上皮细胞骨架的组成成分,表达在正常的上皮及上皮源性肿瘤及其转移肿瘤细胞,CK家族由分子量为40×.103~68×103U不等的20个成员组成,CK19常见的角蛋白之一,其表达范围严格,它非常局限在胃肠上皮细胞,几乎所有结直肠癌都明显的表达,CK19是上皮细胞细胞的标志性基因,已有研究表CK19在结直肠癌细胞株的表达达100%;且在侵袭、转移、扩散到其它组织器官始终保持稳定。可作为结直肠在淋巴结、骨骼和外周血等间叶组织转移的标记物。正常骨髓、血液、淋巴组织中不表达,因其具有较高的敏感性和特异性而被应用于肿瘤微转移的检测,结直肠癌区域淋巴结阳性表达表示存在转移,通过检测CK19的表达可监测结直肠癌淋巴转移。
许多文献报道,通过免疫组织化学,检测某种上皮源性抗原,其淋巴结转移癌检出率比HE染色高,但这种方法多采用连续切片,既耗费时间又不切实际,临床病理常规检查难以实现,而且,免疫组织化学是对一个淋巴切面的检测。RT-PCR技术 具有敏感性高、特异性强,能够万倍的扩增特异性的DN段,具有简单快速的优点。可在106~107个正常细胞中检测出1个癌细胞【5,6】。通过这种方法,我们可以了解整个淋巴结的转移情况。其检测结果直观,易于判断,避免常规病理学检测时带有的主观性。结直肠癌是常见的来源于上皮组织的恶性肿瘤之一,本研究利用RT-PCR方法检测结直肠癌区域淋CK19的表达,应用RT-PCR检测CK19mRNA,对30例结直肠癌患者的癌组织标本和108个肠旁、系膜及系膜旁淋巴结转移情况进行检测,检测良性疾病结直肠(结直肠息肉、憩室等)手术的20例患者的正常肠周淋巴结20枚作为对照组。结果表明30例结直肠癌患者均有CK19mRNA表达, 108个淋巴结中有47个存在CK19mRNA阳性表达,阳性率 43.5%;常规病理检查有25枚有癌转移,阳性率23.2 %;20例良性病变患者30枚淋巴结CK19mRNA表达为阴性。提示RT-PCR方法对检测CK19mRNA具有很高特异性,应尽可能在临床上推广应用这一方法。本研究显示K19 mRNA在癌组织、有转移的淋巴结中有表达,而在非肿瘤的正常淋巴结不表达,说明K19mRNA特异性高,验证CK19可作为结直肠癌区域淋巴结微转移特异性。表明该技术对结直肠癌淋巴结微转移检测具有高敏感性,因结直肠癌淋巴结转移直接影响结直肠癌预后,提示手术中应规范行淋巴结切除,术后对高危患者要采取即时、适当的综合治疗,如对结直肠癌行新辅助放化疗及辅助化疗,规范化疗、联用靶向治疗药物。许多研究表明,微转移的患者预后明显差于无转移者,无淋巴转移结直肠癌患者,五年生存率高达90%,反之则减半【7】本研究通过RT―PCR法扩增检测K19 mRNA来判断结直肠癌淋巴结微转移比常规病理组织学检查敏感且特异性高,可测出低水平表达的K19 mRNA,及时发现常规病理无法发现的淋巴结隐匿转移即微转移,筛选出高度复发危险的患者,提高了淋巴结转移诊断率,有助于对淋巴结转移灶作出早期诊断,提高肿瘤分期准确性从而更好地制定术后个体性化疗方案。早期结直肠癌患者,只要淋巴结发现有微转移,则预后差,术后需要行化疗等综合治疗,而不存在淋巴结转移,术后可不化疗,从而可以节省社会医保资源,减轻病人痛苦。
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[关键词] 乳腺癌;CA15-3;放射免疫分析;全身骨扫描
[中图分类号]R737.9 [文献标识码]B [文章编号]1673-7210(2008)08(b)-093-02
乳腺癌是妇女常见的恶性肿瘤之一,其发病率近年来有上升趋势。乳腺癌具有趋骨性,患者术后极易发生骨转移,发生率为28%~73%[1]。因此,早期诊断乳癌骨转移对制定治疗方案、判断预后具有十分重要的价值。本文通过对52例乳腺癌患者的血清糖类抗原15-3(CA15-3)水平进行测定,并结合放射性核素全身骨显像结果进行对照分析,评价其在乳腺癌骨转移诊断中的临床价值。
1 对象与方法
1.1对象
52例乳腺癌患者均经手术病理证实。均为女性,年龄26~69岁,平均45.3岁,按核素骨显像结果分为两组:骨显像阳性组34例;骨显像阴性组18例;对照组20例,女性,年龄20~66岁, 平均42.7岁,为正常体检者,无心、肝、肺、肾等重要器官疾患,肝肾功能试验正常,无乳腺良性疾病史。
1.2血清CA15-3测定
乳腺癌患者和健康体检者均于早晨空腹采血,分离血清,保存于-20℃冰箱待测,血样采集距骨显像检查时间不超过10 d。CA15-3(正常值
1.3核素全身骨显像
乳腺癌患者静脉注射99mTc-MDP( 锝亚锡亚甲基二膦酸盐)(740~925)MBq,于3 h后行全身骨显像检查,显像前嘱患者排空小便并取出身上携带的金属配件。检查仪器用德国SIMENS Diacam SPECT,采集条件为低能高分辨准直器,矩阵128×512,扫描速度为20 cm/min,常规行前后、后前位全身显像,必要时行局部静态显像。
1.4评定标准
结果评定由固定的两位专科医师阅片审核,病变部位放射性高于健侧或邻近的正常骨组织且排除假阳性因素,出现多个异常放射性浓聚,伴全身或局部骨痛及叩痛,可考虑为骨转移。
1.5统计学分析
数据以x±s表示,两组间均数比较用t检验。
2 结果
2.1骨显像阳性组、骨显像阴性组及对照组的CA15-3检测结果
52例乳腺癌患者骨显像中,34例诊断为骨转移, 骨显像阳性组患者血清CA15-3显著高于骨显像阴性组和正常对照组(P
与其他两组相比较,*P0.05
2.2 52例乳腺癌骨转移区域数与CA15-3含量关系
乳腺癌骨转移病灶数量多则患者血清CA15-3水平明显升高,见表2。
3讨论
核素全身骨显像对转移性骨肿瘤有很高的灵敏度,能够较早地发现骨转移病灶,一般认为能比X射线早3~6个月发现骨转移病灶[2]。乳腺癌常发生骨转移,核素全身骨显像可以作为临床判断乳腺癌有无骨转移病灶的一个“金标准”,为临床诊断和治疗提供可靠依据。为此,根据核素全身骨显像将乳腺癌病例分为骨显像阳性和骨显像阴性两组,并检测血清CA15-3水平,以评价血清CA15-3对乳腺癌骨转移患者的临床应用价值。
CA15-3是一种相对分子量为(300~400)×103的大分子糖蛋白,主要存在于正常乳腺上皮管腔面,细胞恶变时含量明显增多,是一种特异性较强的标志物。Wojtacki等[3]研究发现乳腺癌骨转移的患者中CA15-3的敏感率为91.4%,而且CA15-3对于1处和2处以上骨转移的敏感率分别为50%和100%。本研究表明,骨显像阳性组患者血清CA15-3显著高于骨显像阴性组和正常对照组(P
核素全身骨显像对转移性骨肿瘤有很高的灵敏度,但特异性较差。我们认为,在行全身骨显像的同时,检测CA15-3水平能提高其特异性,减少误诊,有助于乳腺癌骨转移的诊断、治疗和疗效观察。
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关键词:参芪抑瘤方;胃癌;MKN-45细胞;细胞周期;COX-2蛋白;PTEN蛋白;大鼠
DOI:10.3969/j.issn.1005-5304.2016.04.017
中图分类号:R285.5 文献标识码:A 文章编号:1005-5304(2016)04-0064-04
Effects of Shenqi Yiliu Decoction Medicated Serum on Blocking Cell Cycle and Inhibiting Invasion and Metastasis of Gastric Cancer Cell Lines MKN-45 MA Chun-lin1, WU Hong-yan1,2,3, LI Hai-long1,2, CHEN Jie1, ZHANG Xuan1 (1. Gansu University of Traditional Chinese Medicine, Lanzhou 730000, China; 2. Key Laboratory of Traditional Chinese Medicine Excavation Innovation and Transformation of Gansu Province, Lanzhou 730000, China; 3. Laboratory for TCM New Products Development Engineering of Gansu Province, Lanzhou 730000, China)
Abstract: Objective To investigate the relevant mechanism of different concentrations of Shenqi Yiliu Decoction medicated serum on blocking cell cycle and inhibiting invasion and metastasis of gastric cancer cell lines MKN-45. Methods Sixty SPF Wistar rats were randomized into Shenqi Yiliu Decoction low-, medium-, and high-dose groups and control group, with 15 rats in each group. Low-, medium- and high-dose groups were fed with different concentrations of TCM liquid from which containing crude medicine (0.25, 0.50, 1.00 g/mL) separately for gavage. Rats in the blank group were given the same amount of drinking water for gavage, twice a day, for 7 days. 2 h after the last gavage, rat blood was taken and serum was separated. After MKN-45 cells were dealt with different concentrations of medicinal serum, FCM was used to detect cell cycle and immunohistochemistry technology was used to detect the expressions of COX-2 and PTEM proteins. Results FCM analysis showed that medicated serum could increase G0-G1 phase and shorten S phase of cells; medicated serum could reduce the positive expression rate of COX-2 of the MKN-45 cells and increase positive expression rate of PTEN proteins (P
Key words: Shenqi Yiliu Decoction; gastric cancer; MKN-45 cell; cell cycle; COX-2; PTEN; rats
优势,并越来越受到关注。当归贝母苦参丸出自《金匮要略》,原用于治疗妊娠小便困难。现代研究显示,其对肝癌、胃癌细胞等有明显的抑制作用[1-3]。参芪抑瘤方为临床经验方,用于多种肿瘤疾病的治疗,由当归贝母苦参丸加黄芪、全蝎、山慈菇等组成,契合了肿瘤正气不足,痰(湿)浊、癌毒、瘀血内阻的发病机制[4]。方中药材所含有效成分黄芪多糖、当归多糖、贝母碱、苦参碱等对多种癌细胞有明显的抑制作用[5-8]。本实验在前期研究基础上,进一步探索其抗肿瘤的相关作用机制,为抗肿瘤中药研发提供一定的实验依据。
1 实验材料
1.1 动物
60只SPF级Wistar大鼠,雌雄各半,6~8周龄,体质量(200±20)g,甘肃中医药大学科研中心动物实验室,合格证号SYXK(甘)2001-0001。室温20~25 ℃、湿度45%~55%分笼饲养,喂标准饲料(甘肃中医药大学科研中心动物实验室提供),自由饮水。
1.2 药物和细胞
参芪抑瘤方由苦参、黄芪、山慈菇、全蝎、当归、浙贝母等组成,所有饮片购自甘肃中医药大学附属医院中药房,经甘肃中医药大学中药鉴定教研室杨扶德教授鉴定符合《中华人民共和国药典》规定。胃癌MKN-45细胞,中国医学科学院肿瘤医院肿瘤研究所提供。
1.3 主要试剂与仪器
DMEM高糖培养基(Gibco公司),四季青胎牛血清(杭州四季青公司),胰蛋白酶(Gibco公司),二抗(中杉金桥生物技术有限公司),RNAisoTMPlus(D9810A),the PrimeScript RT reagent、kit(DRRO37A),SYBR Premix Ex TaqTM(DRR081A,TakarBio),国产分析纯试剂(北京化学试剂公司)。细胞培养箱(上海申力,HF212),高速冷冻离心机(德国Eppendorf公司,5804R),倒置显微镜(日本OLYMPUS公司,CKX41+DP21),流式细胞仪(美国COULTER EPICS XL)。
2 实验方法
2.1 分组、给药及药物血清制备
将60只SPF级Wistar大鼠随机分为对照组和参芪抑瘤方低、中、高剂量组,每组15只。参芪抑瘤方低、中、高剂量组予0.25、0.50、1.00 g原药材/mL药液灌胃,对照组予等量饮用水灌胃。给药体积均为1.5 mL/100 g,每日2次,连续7 d。末次灌胃2 h后取血,3000 r/min低温离心15 min,分离血清,0.22 μm微孔滤膜过滤,56 ℃、30 min灭活,-80 ℃保存。
2.2 细胞培养
MKN-45细胞经常规传代培养,采用含10%灭火胎牛血清及青链霉素(100 U/mL)的DMEM培养基,于37 ℃、5%CO2饱和湿度恒温培养箱中贴壁生长,每2~3 d换液1次。倒置显微镜下观察细胞情况,当生长状态良好且铺满瓶底时,采用25%胰酶消化、传代,并取处于对数生长期细胞进行实验。
2.3 流式细胞术检测MKN-45细胞周期
取对数生长期的MKN-45细胞接种于6孔板中,增殖为80%时,加入20%药物血清处理48 h,检测前用胰酶消化,1500 r/min离心5 min,弃上清液,PBS洗2次,70%乙醇固定,4 ℃固定过夜。用PBS配制成单细胞悬液,50 μg/mL碘化丙啶染色液室温染色30 min后,流式细胞仪分析细胞周期。
2.4 免疫组化检测MKN-45细胞COX-2、PTEN蛋白表达
将无菌10 mm×10 mm的24片盖玻片置入24孔培养板中,取对数生长期的MKN-45细胞消化后,制成单细胞悬液,以500 μL/孔接种于24孔培养板中。待细胞贴壁后,对照组加50 μL完全培养基,余孔依次加空白血清和高、中、低剂量药物血清各50 μL,每组设3个复孔。细胞爬满盖玻片后,取爬片浸入4%多聚甲醛中过夜。用PBS洗3次,5 min/次,加50 μL 0.1%Triton X-100室温下孵育15 min后,再用PBS洗5 min×3次,加3%H2O2室温下孵育30 min,继续用PBS洗5 min×3次,滴加50 μL 5%BSA封闭液。室温封闭20 min后,甩去多余液体,滴加50 μL稀释过的Rabbit Anti-collagen TypeⅡ(1∶100),置湿盒中4 ℃孵育过夜。并以PBS代替一抗,作为阴性对照,PBS洗3次,2 min/次,加生物素化山羊抗兔IgG,37 ℃孵育20 min,再用PBS洗2 min×3次。然后加SABC,37 ℃继续孵育20 min,PBS洗5 min×4次。DAB显色,自来水冲洗1 min。苏木素复染5 min,0.5%盐酸乙醇分化10 s,氨水返蓝10 s。梯度乙醇脱水干燥,每一梯度5 min,二甲苯透明10 s,甘油封片。倒置相差显微镜观察爬片,每组选6张爬片,每张爬片选择3个高倍视野照相,用Leica Qwin病理图像分析系统对所拍照片进行分析,测定相对灰度值。
3 统计学方法
采用SPSS16.0统计软件进行分析。计量资料以―x±s表示,根据方差齐性检验结果,多组间比较采用方差分析。检验水准α=0.05。
4 结果
4.1 参芪抑瘤方药物血清对MKN-45细胞周期的影响
10%浓度药物血清处理后MKN-45细胞较对照组细胞G0/G1期比例升高,S期低于对照组,见表1、图1。表明药物血清可有效抑制细胞进入增殖周期,降低细胞S期,阻滞细胞于G0~G1期。
4.2 参芪抑瘤方药物血清对MKN-45细胞COX-2、PTEN蛋白表达的影响
对照组细胞COX-2以强阳性和阳性表达为主,而药物血清干预组细胞着色逐渐变浅,COX-2呈弱阳性或阴性表达;对照组细胞着色较浅,PTEN呈弱阳性或阴性表达,药物血清干预组细胞着色逐渐变深,PTEN表达逐渐增强,呈强阳性或阳性表达,差异有统计学意义(P
5 讨论
胃癌的发生、发展是一个多因素、多步骤、多基因参与的复杂病理过程。正常情况下,胃黏膜上皮细胞的增殖和凋亡之间保持动态平衡。这种平衡的维持有赖于癌基因、抑癌基因及一些细胞因子等共同调控。多种因素会影响上述调控体系,共同参与胃癌的发生。
中医认为,胃癌是牵涉整体的全身性疾病的局部表现,多由先天禀赋不足、邪毒侵袭、痰凝血瘀等因素,引起机体阴阳失衡,脏腑经络功能失调,进而导致局部癌变。其主要病机为本虚标实,本虚为素体虚弱或先天禀赋因素,标实不外乎气滞、血瘀、痰凝、毒聚。中医药治疗在个体化、多层次、多靶点控制肿瘤生长、抗转移、减少复发等方面具有独到的优势,是胃癌的重要辅助治疗方法。胃癌早期采用中西医结合治疗,可有效逆转病情的恶化。利用中医药的整体调节作用,胃癌术后放化疗过程中,使患者对放化疗药物的耐受性增强,免疫功能得到提高,抑瘤效果得以强化,痛苦明显缓解,生存期延长,生活质量提高。
COX-2是前列腺素合成关键限速酶环氧合酶的一种亚型,近年来研究发现,COX-2高表达与肿瘤发生发展密切相关,在肿瘤细胞增殖、凋亡过程中起重要作用,其表达可延长癌细胞的生存期,促进肿瘤细胞侵袭转移。在正常胃黏膜COX-2几乎不表达,而在胃癌变时则过表达,对胃癌细胞的异常增殖、细胞凋亡、抑制血管形成及转移复发有重要生物学作用。COX-2过表达可上调黏附因子、基质金属蛋白酶等促进肿瘤细胞发生浸润与转移;上调肿瘤细胞周围血管生成因子,促进肿瘤血管生成。研究表明,其在正常胃黏膜、浅表性胃炎、萎缩性胃炎伴肠化、不典型增生及胃癌组织中的表达呈逐渐递增趋势[9]。
作为抑癌基因的PTEN低表达会激活PPI3K-Ark 信号通路,从而缩短细胞的分裂周期,促进细胞增殖,与肿瘤细胞浸润、转移密切相关[10]。PTEN的表达过低、受到抑制或缺失都会诱导肿瘤细胞的无限增殖,从而促进肿瘤的发生[11-13]。PTEN蛋白的表达与淋巴结转移、侵袭程度密切相关。胃癌组织中PTEN蛋白的检测可了解与判断肿瘤增生、侵袭及转移的能力和程度。
综上,参芪抑瘤方药物血清能明显阻滞胃癌细胞于G0/G1期,减少S期细胞数量,有效抑制细胞进入增殖周期,诱导胃癌细胞周期阻滞。参芪抑瘤方药物血清可能通过抑制COX-2的表达从而抑制血管内皮生长因子的活性,降低细胞间E-钙黏蛋白活性,减弱肿瘤细胞的侵袭能力,也可能通过升高PTEN的表达量,使其去磷酸化作用增强,进而抑制细胞周期,诱导细胞凋亡和分化,抑制肿瘤细胞转移等,从而发挥抗胃癌细胞侵袭转移的作用。
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