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光色素种类
叶绿体是光合作用的场所类囊体中含两类色素:叶绿素和橙黄色的类胡萝卜素(胡萝卜素和叶黄素),通常叶绿素和类胡萝卜素的比例约为3:1,chla与chlb也约为3:1,在许多藻类中除叶绿素a、b外,还有叶绿素c、d和藻胆素,如藻红素和藻蓝素;在光合细菌中是细菌叶绿素等。
叶绿素a、b和细菌叶绿素都由一个与镁络合的卟啉环和一个长链醇组成,它们之间仅有很小的差别。类胡萝卜素是由异戊烯单元组成的四萜,藻胆素是一类色素蛋白,其生色团是由吡咯环组成的链,不含金属,而类色素都具有较多的共轭双键。
关键词:栀子(Gardenia jasminoides Ellis);种子;生理;萌发机制
中图分类号:S567.7+9.1 文献标识码:A 文章编号:0439-8114(2016)18-4726-04
DOI:10.14088/ki.issn0439-8114.2016.18.025
中药栀子来源于茜草科(Rubiaceae)栀子属(Gardenia Ellis)植物栀子(Gardenia jasminoides Ellis)的干燥成熟果实,其性寒味苦,归心肺三焦经;具有泄火除烦、清热利尿、凉血解毒之功效;用于黄疸尿赤、血淋涩痛、尿血崩漏等病征[1]。栀子属植物广泛分布于热带及亚热带地区。中国主要分布在长江以南各地,主产于江西、四川、湖北、福建、湖南、广西、广东等省(自治区)。现代药理研究证明,栀子的主要活性成分为黄酮类栀子素、三萜类化合物藏红花素、藏红花酸及α-藏红花甙元、环烯醚萜甙类栀子甙、异栀子甙、去羟栀子甙、山栀子甙等[2]。现在国内外市场对于栀子的需求量很大,且不断上升,具有很好的市场前景[3],所以栀子的栽培面积在不断扩大[4]。但栽培栀子的药材品质不稳定,而且品种混杂,田间管理粗放,从而使药材的质量存在隐患。种子萌发是植物源药材生长的开始,是控制药材质量的关键环节,只有培育出良好的种苗才能获得优质的药材。栀子种子的发芽期为20 d左右,由于发芽缓慢,容易导致出苗不齐、出现缺苗现象,严重制约了栀子的生产,因此栀子优良种苗的培育问题亟待解决。试验以不同萌发阶段的栀子种子为材料,探讨了栀子种子萌发过程中可溶性糖、粗脂肪、游离氨基酸、可溶性蛋白、淀粉含量的变化,从植物生理的角度分析栀子种子对生长环境的适应性,以期为弄清栀子种子萌发的生理适应机制提供依据。
1 材料与方法
1.1 材料
1.1.1 植物材料及处理 2014年11月在江西省樟树市采集成熟的栀子种子,除去外果皮和果肉后,将种子漂洗干净,晾干后选取健康饱满的种子,放入密封袋内带回实验室。在实验室里将栀子种子于25 ℃恒温环境里浸种1 d;采用滤纸作为发芽床,30 ℃恒温无光照环境进行发芽试验。从置床开始,分别取出不同萌发阶段(干种子、吸胀、露白、伸长、变绿、长根、长叶)的适量种子样品用于各项生理指标(可溶性糖、粗脂肪、游离氨基酸、可溶性蛋白、淀粉含量)的测定。
1.1.2 试剂和仪器 试剂主要有蒽酮、抗坏血酸、苯胼戊三酮、L-亮氨酸、氢氧化钠、高氯酸、葡萄糖、无水乙醇、无水乙醚;仪器主要是BP211D电子天平(德国赛多利斯集团公司,感量0.000 1)、KQ3200超声波清洗器(昆山超声仪器厂)、YF-111B高速中药粉碎机(瑞安市永历制药机械有限公司)、GZX-9146MBE型数显鼓风干燥箱(上海博讯实业有限公司)、HH-2数显恒温水浴锅(国华电器有限公司)、UV-1800紫外可见分光光度计(日本岛津公司)、LRH-250-Z振荡培养箱(广东省医疗器械厂)以及培养皿(9 cm×3 cm)、滤纸等。
1.2 测定方法
1.2.1 可溶性糖含量测定 采用蒽酮比色法[5]来测定栀子种子的可溶性糖含量,称取新鲜种子样品0.5 g,放入研钵中,研磨匀浆,转移至50 mL烧杯中,去离子水少量多次洗涤研钵,合并洗涤液,用塑料膜封口,在沸水中提取30 min。待冷却后,将提取液转移到100 mL容量瓶中定容,用移液管吸取可溶性糖提取液1 mL放入具塞试管中,重复3次,加入5 mL 0.1%蒽酮试剂。摇匀后放入沸水中计时10 min,流动水冷却20 min。以空白为对照,用紫外可见分光光度计在620 nm波长处测其吸光度,通过葡萄糖标准曲线的回归方程(文中省略)计算糖含量,再利用公式计算样品的可溶性糖含量。
样品可溶性糖含量=C×V/(a×W×1 000)×100%,
式中,C为用葡萄糖标准曲线的回归方程所求出的糖含量(mg),a是测定时所加入的提取液体积(mL),V为提取液的总体积(mL),W是所测样品的鲜重(g)。
1.2.2 淀粉含量测定 采用高氯酸法测定栀子种子的淀粉含量,将提取可溶性糖剩余的残渣转移至50 mL烧杯中,加去离子水20 mL,沸水浴15 min之后加入9.2 mol/L高氯酸,沸水浴15 min,过滤至50 mL容量瓶中,定容,摇匀,即淀粉提取液。吸取淀粉提取液1 mL,转至具塞试管中,分别加5 mL葸酮试剂,沸水浴10 min,流动水冷却20 min,以去离子水为对照,重复3次。于620 nm波长处测其吸光度,根据葡萄糖标准曲线的回归方程计算糖含量,再利用公式计算样品的淀粉含量。
样品淀粉含量=[(C×V/A)/(W×1 000)]×100%×0.9,
式中,C为用葡萄糖标准曲线的回归方程求出的糖含量(mg),A为吸取样品液的体积(mL),V是提取液的总体积(mL),W是所测样品的鲜重(g)。
1.2.3 粗脂肪含量测定 用索氏提取法[6]测定栀子种子中粗脂肪的含量,取称过重(W1)且烘干的脱脂滤纸,再称取适量的栀子种子,严密包裹于滤纸中。包裹的样品在105 ℃烘2 h后干燥,称重(W2),烘干后的种子尽量保持在0.1 g,然后放在索氏提取器的承受瓶中,加入100 mL乙醚,置于50 ℃水浴中反复抽提8 h。待脂肪提取完后,取出滤包并在105 ℃下烘1.5 h,使乙醚完全挥发,再放入干燥器冷却,称重(W3),至恒重。该测定重复3次。利用公式计算样品的粗脂肪含量。
样品粗脂肪含量=(W2-W3)/(W2-W1)×100%。
1.2.4 可溶性蛋白含量测定 采用考马斯亮蓝法[7]测定栀子种子的可溶性蛋白含量,称取栀子种子样品0.5 g,置于研钵中,用4 mL去离子水匀浆研磨,转移到离心管中,再用适量去离子水清洗研钵,合并洗液转移至离心管,10 000 r/min离心10 min,取上清液定容至50 mL。再取1.0 mL稀释液转移至具塞试管中,加入5 mL考马斯亮蓝G-250液,充分混合,放置2 min后在595 nm处测其吸光度,通过g-球蛋白标准曲线的回归方程(文中省略)计算蛋白质含量,再利用公式计算样品的可溶性蛋白含量。
样品可溶性蛋白含量=[C×Vt/Vs×Wf×1 000]×100%,
式中,C为用g-球蛋白标准曲线的回归方程求出的蛋白质含量(mg),Vt为提取液体积(mL),Wf为样品的鲜重(g),Vs为测定时加入的提取液体积(mL)。
1.2.5 游离氨基酸含量测定 采用茚三酮比色法[8]测定栀子种子的游离氨基酸含量,精密称取栀子种子样品0.1 g于研钵中,加入5 mL 95%乙醇匀浆研磨,用适量95%乙醇少量多次洗涤研钵,合并清洗液,定容至25 mL,70 ℃保温30 min后过滤,用95%乙醇补充减少的体积。取滤液1 mL,加3 mL 0.1%茚三酮和0.1 mL 0.1%抗坏血酸,沸水浴15 min后冷却至室温,于580 nm处测其吸光度,通过g-球蛋白标准曲线的回归方程计算蛋白质含量,再利用公式计算样品的游离氨基酸含量。
样品游离氨基酸含量=[C×Vt/Vs×Wf]×100%,
式中,C为用g-球蛋白标准曲线的回归方程求出的蛋白质含量(mg),Vt为提取液总体积(mL),Wf为样品的鲜重(g),Vs为测定时加入的提取液体积(mL)。
2 结果与分析
2.1 可溶性糖含量的变化
可溶性糖是种子发芽生长的物质基础,在种子的萌发过程中,可溶性糖既可以被分解以提供能量,又可以转化为其他物质为细胞的生长提供原料;栀子种子萌发阶段可溶性糖含量的测定情况见图1。由图1可知,在栀子种子萌发过程中,可溶性糖的含量发生了明显的变化,不同萌发阶段其可溶性糖含量呈升高-降低-升高-降低-升高的变化,整体呈曲线上升趋势。具体来看,由萌发前到长叶阶段整个萌发期可溶性糖含量增加了0.308个百分点,其中以生根阶段的可溶性糖含量最低,为0.230%;在吸胀阶段含量达到最高,为1.301%,这一阶段可溶性糖的含量变化最大;之后的各阶段可溶性糖含量均低于吸胀阶段,并且在露白、变绿阶段又出现明显下滑,含量分别为0.721%、0.736%,产生的原因可能是在种子萌发的初始阶段,随着吸胀过程的进程,种子内发生了一系列复杂的生理生化变化,酶的活性增强,贮藏物质在酶的作用下被分解为简单的小分子化合物,从而使可溶性糖含量增加;而在后面的一系列萌发阶段里,可溶性糖多已被利用,用以合成或转化为其他物质,如为蛋白质合成提供碳骨架和ATP的合成提供底物,并为种子的萌发和幼苗生长提供能量,从而导致可溶性糖含量降低[7]。当种子长根后,或者进一步有侧根生成时,种子内部的物质代谢可以自给自足,因此在后面长叶阶段里,可溶性糖含量又呈现升高的趋势。
2.2 淀粉含量的变化
淀粉是种子内的大分子物质,是最重要和分布最广泛的碳水化合物与营养物质,在种子成熟后就作为营养物质而贮存于种子内;也可以在萌发过程中,通过自身的代谢、利用可溶性糖或其他营养物转化而来。种子萌发时,淀粉在淀粉酶的作用下降解为小分子量的可溶性物质,同时释放出大量的能量供胚吸收利用,所以其含量的变化是种子代谢状况的重要指标。栀子种子萌发阶段淀粉含量的测定情况见图2。由图2可知,栀子种子的淀粉含量很低,干种子仅为0.000 54%;在吸胀阶段显著增加,且淀粉含量达到最大,为0.001 35%,增加了0.000 81个百分点,此变化表明栀子种子萌发初期淀粉的代谢水平增强,可能是其他营养物质降解后转化为淀粉所致;之后的露白阶段种子里淀粉含量急剧减少,为0.000 37%;但此后淀粉代谢又增强,原贮藏的淀粉被水解为可溶性的碳水化合物供胚生长所用;随着胚芽的生长伸长,淀粉的含量缓慢回升;之后又缓慢下降,至生根阶段降至最低,为0.000 08%,说明淀粉被分解代谢后转化为小分子量简单的营养物质,并运转到生长部位,作为构成新组织的成分和产生能量的原料了。
2.3 粗脂肪含量的变化
脂肪是种子主要的贮藏营养物质之一,它与糖和蛋白质共同构成细胞的组成物质;栀子种子萌发阶段粗脂肪含量的测定情况见图3。由图3可知,栀子种子内贮藏的粗脂肪含量较高,为10.54%,这应该是其种子生长所需能量的重要来源。随着种子的萌发进程,粗脂肪含量呈现降低-升高-降低的变化,在吸胀阶段粗脂肪含量大幅减少,为3.79%,可能是在脂肪酶的作用下转化成小分子量物质的缘故,从而为胚根的生长提供物质保障和能量需求;以后随着胚继续生长,粗脂肪含量呈不断升高,到达变绿阶段时含量达到最大,为18.75%,个中原因可能是可溶性糖和淀粉转化为粗脂肪造成的;再以后粗脂肪含量不断下降,至长叶阶段降至5.07%,说明随着胚芽的不断伸长,种子内部代谢活动也越加旺盛,且组织不断分化,胚需要更多的能量、营养来供其生长;贮藏的粗脂肪可被分解为脂肪酸和甘油,然后运输到生长部位,形成新的结构物质和为呼吸作用提供能量,既可通过乙醛酸循环转化为糖,又可作为呼吸基质被消耗掉,所以粗脂肪是种子萌发过程里重要的营养物质与能量来源。
2.4 可溶性蛋白含量的变化
蛋白质也是种子内贮藏的重要营养物质,在种子萌发时蛋白质可水解产生氨基酸,用于新蛋白质的合成,从而为种子萌发和幼苗的生长提供氮素营养;同时可溶性蛋白含量的提高,还会增加细胞的渗透浓度和功能蛋白的数量,有助于维持细胞的正常代谢。栀子种子萌发阶段可溶性蛋白含量的测定情况见图4。由图4可知,在栀子种子萌发过程中,可溶性蛋白含量呈现升高-降低的变化,其中在干种子中的含量仅为0.098%,而在变绿阶段含量达到1.320%,升高了1.222个百分点,可能原因是胚乳的生理活动尚未加强,代谢水平弱,胚细胞伸长所需的养料和能量需求较少,贮藏蛋白开始降解,加之部分淀粉和可溶性糖转化为蛋白质,使蛋白质的含量急剧增加。此后含量迅速下降,至长叶阶段含量最低,为0.002%,比干种子含量还低了0.096个百分点。这反映出长叶阶段种子内的代谢活动较强,不断伸长的胚根和后期的组织分化、长出叶片等对可溶性蛋白的需求迅速增加,促使贮藏蛋白大量水解,而根系此时还不能从土壤中吸收新的氮元素来补充所致。
2.5 游离氨基酸含量的变化
氨基酸是生物机体的众多生物活性物质之一,是构建细胞、修复组织的基础材料;氨基酸对植物的营养贡献不只是提供氮源,还对植物的生理代谢产生不可低估的影响,如氨基酸具有减轻环境重金属离子对植物的毒害作用;栀子种子萌发阶段游离氨基酸含量的测定情况见图5。由图5可知,栀子种子在不同的萌发阶段游离氨基酸的含量变化十分明显,如在干种子时含量为0.092 5%,而到了吸胀阶段则含量最高,为0.265 0%,升高了0.172 5个百分点;但到露白阶段,游离氨基酸含量又急剧下降,变为0.019 8%,而此时的可溶性蛋白含量呈明显增加的趋势,有可能是游离氨基酸被用来合成了蛋白质缘故,并且至伸长阶段仍然很低;不过到变绿阶段急剧升高,为0.226 0%,此时种子内部的淀粉和可溶性糖的含量都有所降低,极有可能是转化为游离氨基酸的缘故;到生根阶段又降到低位,并且是整个种子萌发阶段里最低的水平,游离氨基酸含量只有0.002 6%,此时种子内部物质代谢旺盛,胚根和叶片的生长都消耗了大量的氨基酸;之后至长叶阶段含量才略有上升,此时可溶性蛋白的含量不断下降,可能有部分蛋白质被水解而补充了氨基酸缘故。
3 小结与讨论
种子内的淀粉、粗脂肪、可溶性糖含量的变化反映了种子内可利用态物质和能量的供应基础水平[9],而可溶性蛋白有一部分是参与各种代谢的酶类,其含量的变化是了解植物代谢状况的一个重要指标[10]。测定植物体内游离氨基酸含量对研究植物在不同条件下及不同生长发育时期氮代谢的变化以及植物对氮素的吸收、运输、同化及营养状况等都有着重要意义。植物体内的生理指标反映了植物的生存状态,不同环境因素对这些指标有着不同的影响,通过对这些指标的探讨,可以推断体内多种生理反应的机制[11]。试验结果表明,栀子种子萌发过程中,随着种子吸水量的增加,各种酶被激活,粗脂肪首先被分解利用,转化为其他营养物质,随后可溶性糖、淀粉、游离氨基酸等营养物质在相关酶的作用下也逐步分解,为胚的生长提供氮源、碳源和能量,蛋白质最后被动员。它们在植物种子内的分布与变化反映了植物种子萌发阶段营养物质的运转情况,而且在种子萌发阶段中起着重要的调控作用[12]。其中氨基酸存在2个大量积累的阶段,可能是为后期的组织生长准备物质基础;而粗脂肪的分解可视为种子萌发的标志。
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沼气工程是一项以农村畜禽养殖粪便和农作物秸秆等废弃物为原材料,以获取再生能源并解决环境污染问题为目的的农村能源工程[1-3]。通过微生物厌氧发酵,产生以甲烷为主的沼气作为再生燃料;同时降解消耗其原材料中的有机质,从而减少环境污染。为达到污染治理的目的,相关沼气工程还有一个重要的延伸环节,即发酵尾产物沼渣、沼液的去向问题。经过发酵过程,虽然尾产物中有机质显著下降,但尾产物仍含有丰富的N、P、K和微量元素,以及维生素、氨基酸等活性成分[4-5]。因而,有机肥是当前沼渣、沼液的理想消化方向。现代农业生产过程中,化肥已成为保证作物产量的决定性因素。但由于过度使用化肥而带来的水体富营养化等环境问题,以及蔬菜、大米等食品质量下降问题也相当突出。利用有机肥改良土壤环境,改善食品质量是当前农业发展的新趋势[11]。近年来,有关沼液在生菜、西红柿和玉米等农作物栽培中的应用研究也时有报道。
关于沼液在水稻生产中应用的报道很多,但所得结论却差异很大。多数研究认同沼液施肥可以减轻病虫害,提高水稻产量和质量,但张进等却发现沼液完全代替化肥施用对水稻生长及产量形成是不利的。另外,也有不少研究认为沼液浸种可以提高水稻种子的萌发,并提升幼苗质量。相关报道集中于不同沼液浸种时间对种子萌发的影响,但适宜的浸种时间尚无定论,如李骏等[17]认为以12~36h为宜,丁丽则认为以24~44h为宜。有关适宜浸种沼液浓度的研究较少。李骏等[17]的浸种实验中并未对沼液进行稀释,而魏章焕等则提出纯沼液浸种效果不如稀释液〔V(沼液)∶V(水)=1∶1〕。上述研究结果的差异除了因为部分实验条件粗糙、精确度有限以外,也可能与不同来源的沼液本身质量存在较大差异有关。相关沼液浓度和浸种时间的不确定性给沼液在生产实践中的应用带来诸多困扰。为进一步明确沼液在水稻浸种过程中的应用价值及其使用方法,该研究在室内环境因素精确控制条件下,研究不同沼液浓度对水稻浸种效果的差异。考虑到不同来源的沼液在组成成分和浓度上存在较大差异,文中列出了此次实验所用沼液的基本理化参数,以便后续不同沼液间的比较。
1材料与方法
1.1实验材料采用水稻日本晴品系(yzasativa),人工选取饱满种子作为研究对象。实验所用沼液来自上海林海生态技术股份有限公司下属富民农场沼气工程点。沼液基本理化性质:pH值为7.14,电导率为5.88mS•cm-1,ρ(COD)为37878.8mg•L-1,总氮、总磷、总钾、铜和锌的质量浓度分别为1569.1、1757.1、1367.5、130.1和219.0mg•L-1。
1.2浸种及萌发过程以去离子水稀释沼液,获得2%、5%、10%、25%、50%和100%(纯沼液)浓度梯度(相当于总氮质量浓度为31.4、78.5、156.9、392.3、784.6和1569.1mg•L-1)。依次量取稀释后的沼液50mL于小烧杯中,每杯放入20颗种子,搅动使其完全浸入液体中。每组沼液浓度设置5个重复,同时设纯水处理作为对照。为防浸种过程中沼液残余微生物耗氧而导致水稻种子缺氧,将小烧杯置于气浴恒温振荡器(SHZ-82A,金坛)中旋转培养,设定温度为30℃,转速为150r•min-1。24h后将沼液倒掉,种子转移至光照培养箱(新苗GZX-250BS-Ⅲ,上海)内催芽。种子放入玻璃培养皿中,上下各铺1层滤纸,每日早晚2次以去离子水湿润滤纸,并以无明显积水为准。培养箱设定t(光)∶t(暗)=12h∶12h,〔光〕照度为6000lx,温度保持在30℃。
1.3萌发指标测定自催芽开始后每隔24h调查萌发种子数,以幼芽伸出2mm以上为萌出依据。参考CHIAPUSIO等[20]的萌发速率指数(S)分析不同处理间种子萌出的快慢,具体计算公式:S=(N1/1+N2/2+N3/3)/(N1+N2+N3)。其中,N1、N2和N3分别为催芽开始后第24、48和72h时萌出的种子数。预实验结果表明,在该实验条件下,自催芽开始3d后不再有新的种子萌出,即在实验第3天从每皿中选出3株长势最佳的幼苗(50%沼液处理取全部幼苗),测定其茎长、茎粗、根数和总根长等形态学参数。鉴于该实验所得萌发率与已有报道差异很大,该实验自催芽初始和3d后分别测定培养材料的呼吸速率。具体测定以CIRAS-2光合测定系统联合土壤呼吸室(PPSystems,美国)进行,每组沼液处理随机取3个皿,将全部材料(包括萌发的幼苗和未萌发的种子)转移至呼吸室中,以大气为气源,控制流速为200mL•min-1,测定温度为室温(28℃)。期间保持材料表面湿润,待仪器稳定后读出CO2摩尔分数差值〔x(CO2)〕。测定结束后称量材料鲜重,并以此换算出单位质量材料每小时的呼吸量。计算方式:呼吸速率=x(CO2)×气体流速×10-3/24.7×60/鲜重。其中,24.7为28℃和标准大气压下空气的平均摩尔体积,L•mol-1;60为时间单位换算率,min•h-1。待测材料鲜重呼吸速率(以CO2计)单位为μmol•g-1•h-1。最后将每皿幼苗的芽(茎叶)和根自基部切开,烘干至恒重后称量并换算为单株平均干重。
1.4数据分析与统计不同沼液浓度处理间以单因素方差分析和Duncan多重比较法统计分析指标差异显著性,指标变化趋势与沼液浓度间相关性以Pearson双尾检验进行分析。试验结果以平均值±标准误差形式表示。
2结果与分析
2.1不同浓度沼液浸种对水稻种子萌发率和萌发速率的影响图1显示,日本晴水稻种子萌发率很高,经纯水浸种可达98%,其萌发速度也很快。24h沼液浸种对日本晴水稻种子萌发率和萌发速率未产生促进作用。2%~5%沼液对水稻种子萌发率无显著影响。但10%及更高浓度的沼液使水稻种子萌发率急剧下降(P<0.05),25%和50%沼液处理萌发率分别仅为对照的50%(P<0.05)和3%(P<0.05),纯沼液处理无种子萌发(P<0.05)。沼液浸种同样降低了水稻种子的萌发速率。除2%沼液处理水稻种子萌发速率较对照无显著变化(P>0.05)外,更高浓度沼液浸种后水稻种子萌发速率呈显著下降趋势(图1)。其中,5%沼液处理S值较对照下降27%(P<0.05),10%~25%沼液处理S值分别较对照下降57%~76%(P<0.05),50%沼液处理S值仅为对照的1%(P<0.05)。
2.2不同浓度沼液浸种对水稻形态学参数的影响催芽开始后72h内,纯水浸种的对照幼苗芽长可达3.6cm(图2)。2%沼液浸种后水稻幼苗芽长与对照相比无显著差异(P>0.05)。5%及以上浓度沼液浸种后水稻幼苗芽长随沼液浓度的升高呈线性下降。其中,5%和50%沼液浸种处理芽长分别较对照下降16%(P<0.05)和86%(P<0.05)。粗出现小幅下降,但较对照差异不显著(P>0.05)。仅50%沼液处理较对照下降28%(P<0.05)。对照水稻幼苗平均根数为4.3条•株-1(图2)。2%沼液浸种后水稻幼苗单株根数可达5.0条•株-1,较对照增加15%(P<0.05)。随着沼液浓度的升高,这种促进作用随即消失。5%沼液浸种后单株水稻幼苗根数比对照下降12%(P>0.05)。10%~50%沼液浸种使单株水稻幼苗根数急剧下降,仅为对照的23%(P<0.05),即每株只有1条根。纯水浸种条件下单株水稻平均总根长为8.4cm(图2)。除2%沼液浸种处理单株总根长与对照无显著差异外(P>0.05),更高浓度沼液浸种对水稻幼苗单株总根长整体呈抑制趋势。其中,5%沼液处理单株总根长较对照下降28%(P<0.05),10%~25%处理较对照下降69%~76%(P<0.05)。50%沼液处理单株总根长为对照的5%(P<0.05)。
2.3不同浓度沼液浸种对水稻幼苗生物量的影响沼液浸种对水稻幼苗生物量的影响见图3。2%沼液浸种后水稻幼苗芽生物量较纯水浸种的对照略有增加,但差异不显著(P>0.05,图3)。更高浓度沼液处理水稻幼苗芽生物量随沼液浓度的升高呈线性下降。其中,5%沼液处理水稻幼苗芽生物量较对照下降22%(P<0.05),50%沼液处理芽生物量较对照下降83%(P<0.05)。不同浓度沼液浸种均显著降低了水稻幼苗根生物量(图3)。其中,2%和5%沼液浸种后水稻幼苗根生物量较对照分别下降27%和40%(P<0.05),10%~50%沼液浸种使根生物量下降62%~86%(P<0.05)。芽/根生物量比值进一步证实沼液浸种对水稻幼苗根的抑制作用大于对芽的抑制作用(图3)。这表现为不同浓度沼液处理水稻幼苗芽/根生物量比值均高于对照,其中2%~25%沼液浸种后幼苗芽/根比值上升31%~44%,50%沼液处理芽/根比值较低、中浓度沼液处理有所下降,但仍比对照高8%。
2.4沼液浸种浓度与水稻萌发参数的相关性分析由单因素方差分析可知,不同浓度沼液处理间上述测定指标均存在显著差异(表1)。其中,水稻种子萌发率,萌发速率,幼苗芽长、根数、总根长、芽生物量和根生物量的差异均达极显著水平(P<0.001),另外,幼苗茎粗和芽/根生物量比值的差异也达显著水平(P<0.05)。由相关性检验可知,上述多数指标的变化趋势与处理沼液浓度呈显著负相关关系。其中,水稻种子萌发率,萌发速率,幼苗芽长、根数、总根长、芽生物量和根生物量分别与沼液浓度之间在α=0.001水平上相关极显著,茎粗与沼液浓度之间在α=0.01水平上相关显著。仅芽/根生物量比值与沼液浓度之间的相关性未达显著水平。
2.5不同浓度沼液浸种对水稻材料呼吸速率的影响沼液浸种24h后,即催芽刚开始且仅部分水稻种子露白时,不同浓度沼液处理呼吸作用就已发生显著变化。其中,2%沼液浸种后水稻种子呼吸速率与纯水浸种的对照无显著差异(P>0.05,图4),但5%沼液处理种子呼吸速率较对照增加4.6倍(P<0.05)。更高浓度沼液处理下,水稻种子呼吸速率变化幅度有所下降,10%处理呼吸速率较对照提高2.8倍(P<0.05),25%沼液处理较对照仍提高1.3倍(P>0.05),但50%沼液处理水稻种子呼吸速率被抑制,比对照降低21%(P>0.05)。催芽72h时,对照水稻材料(主要为幼苗)呼吸速率较催芽初始(种子)上升约3倍(图4)。催芽72h时所有沼液处理水稻呼吸速率均显著低于同期对照,其中,2%~10%沼液处理呼吸速率较对照下降30%~32%(P<0.05),25%沼液处理较对照下降48%(P<0.05),50%沼液处理较对照下降63%(P<0.05)。
3讨论与结论
提出问题:种子萌发需要哪些适宜的环境条件?
收集信息:农民伯伯在播种之前,往往会先将土壤疏松。并让土壤保持一定的湿度,然后才往土壤播种,隔一段时间之后,种子就会纷纷从土壤里面开始萌发出来。我们经常会看到,在温暖的日子里,种子萌发的速度要远比寒冷的日子里萌发快得多。疏松土壤的主要目的,可能是为了让土壤中有充足的空气。保持一定的湿度,主要是为了给种子的萌发提供一定的水分。温暖的日子。种子萌发更快,可能是种子萌发需要适宜的温度的缘故。
假设:种子萌发时需要适量的水分、适宜的温度和充足的空气。
实验器材:多粒小麦种子(或豌豆等)、清水、8只培养皿(可用碗、碟代)、4张滤纸、冰箱
实验操作:在4只培养皿中,分别铺上滤纸,再分别编为1号、2号、3号和4号。然后往3号和4号培养皿加入适量的清水,往2号培养皿加满清水,而1号培养皿不加清水。于是往培养皿分别加入10粒种子。用另外的培养皿将装有种子的培养皿覆盖。然后将4号培养皿放入冰箱(如果无冰箱,可将4号皿放入密闭容器中,再将此容器沉没于冷水中)里(冷藏室3%-6%),1号、2号和3号培养皿放人常温的房间里(常温一般指气温20℃~25℃),最后观察种子的萌况。
实验记录:
分析论证:
提示:比较分析上列“观察到的现象”,作出结论:“种子萌发时需要适量的水分、适宜的温度和充足的空气。”
说明:
当爱情的种子在你心中萌发……姑娘,总有那么一天,你会对仅仅与女友交往感到不那么惬怀,似乎生活中还缺少点什么,而且显得十分重要,急待充
实。也许你已经到了那样一个微妙的年龄;骤然对小伙子产生某种异乎导常的变态心理,抑或有那么一位小伙子特别惹你喜爱。似乎他有一种魔力吸引你去亲近他;你也巴不得他那对传神的眼睛不时地望着你,乃至使你产生乐不可支的。然而,当你与他正面相逢时,你又会腼腆地躲避他的目光,羞涩感油然而生,觉得此时此刻就同一个小伙子亲昵未免轻佻。其实,爱情的种子已在你心中萌发。这说不上什么罪孽,不过过早的热恋往往铸成大错。
愿你珍惜爱情的活力!
大多数姑娘在她们作为成年女性觅求终身伴侣之前,多因不适度的热恋,无谓地消耗了自身的最宝贵的爱情活力。至于青梅竹马的爱情那又该另当别论。也许你会问我:“难道我就不应当有男朋友吗?我们是志同道合,情趣相投、不会做出任何伤风败俗的事。我俩的悄悄话要比姑娘们之间的饶舌有价值得多……”即便如此,但有一点你必须明白:在一切具有人之本能的青年人之间,其热恋爆发之速往往出乎人之意料,导致相互间的友谊失去存在的可能一一这里不是两性之间的真正友谊一一只可能是所谓的志同道合。如果有谁真的向往爱情一一寻求一位诚实的男朋友,当然,这里的他应该是专一的和忠诚的;而你首先应具有自知之明、毅力和自我牺牲精神。如果你在这些方面还很欠缺,就该先练练自制力。另外,请你相信:爱情的活力并非取之不尽,用之不竭。你必须珍惜它,将它留给将要同你结婚的丈夫,留给你未来的孩子。过早的热恋只会过多地消耗你的爱情活力。虽然你内在的无形的感情冲动要比小伙子的内心激越来得强烈,但小伙子本能的有形的感情冲动却要比你的外官反应强烈得多。女孩子也许不可能知道男孩子在成熟过程中的生理特征。因此,作为姑娘适时地变得精明些,最好还是独身处世,度过这人生的岔口。
愿你珍惜神圣的一吻!
未成熟的果实是不能采摘的,同样,未成熟的人也不宜步入情场。恋爱、亲吻,这究竟意味着什么?“亲吻是伤风败俗的”,这已是无稽之谈。然而,许多青年人拿“吻”当儿戏,还自鸣得意,满不在乎:一个真正聪明的姑娘,她定然会有完全不同的想法:“吻”是倾慕的象征,是爱情的标志。配偶之间的“吻”,好比订终身的海誓山盟,是白头偕老的爱情的序幕,吻是心田的感情激荡在外形上的体现,蕴藏着无限深沉的爱,如果你贸然赐之一“吻”,却不是发自肺腑的爱情,而是由于好奇或一时所致,这岂不是十足的轻狂?难道你就没有见过有的人,不正是由于那轻浮的一“吻”,使得原本十分珍贵的东西丧失了真正的价值?也许多数姑娘听见此话会付之一笑:何必把这爱情的一“吻”,这极乐的片刻看得如此可怕?她们殊不知由于轻浮,把神圣的“吻”变成了廉价的商品。她们也不相信一个姑娘的童贞会因此遭到伤害。事实上,哪怕是一个特别好追逐姑娘的小伙子,他对一个自尊而善于应酬的女子也不得不尊重几分。要知道一旦这些小伙子成熟之后,他们也绝不会赏识那些易被劫得一“吻”的明日黄花。
姑娘,练练自制力吧!
纵使你确有必要也虔诚地想找个对象了,而且察知某某是忠诚地而不是表面地爱你,他尊重你而不企图戏弄你,那你也该缓行,练练你的自制力,耐心地等一等。为了双方都获得纯洁而高尚的爱情,无论是你还是他,在恋爱时期都该过独身生活,直至各自渐渐成熟起来。让时间证明你们的爱情是否经得起考验。
关键词:牵牛;种子萌发;海水胁迫
中图分类号:S681.6;S604+.1;Q948.113 文献标识码:A 文章编号:0439-8114(2012)04-0747-03
2009年国务院审议通过了《江苏沿海地区发展规划》,拉开了江苏省沿海新一轮开发的帷幕。江苏省拥有海域滩涂面积6.873×105 hm2,占全国总数的1/4以上,而且每年继续以2.00×103~3.33×103 hm2的速度淤涨。按照滩涂围垦规划,江苏省近期将围填1.80×105 hm2,远期围填将达到4.67×105 hm2。新垦土地将大力发展先进制造业、新能源产业、现代服务业和现代农业。与此相适应的园区绿化也开始引起人们的重视,筛选、引种、繁育具有一定耐盐碱性的植物是围垦园区绿化的重要任务之一。
牵牛[Pharbitis nil(L.)Choisy]系旋花科(Convolvulaceae)牵牛属(Pharbitis Choisy)一年生蔓性缠绕草本花卉植物。其蔓生茎细长,约长3~4 m,全株多密被短刚毛;叶互生,全缘或具叶裂;聚伞花序腋生,1朵至数朵花,花冠喇叭型,花瓣边缘的变化很多,花色鲜艳美丽,有红色、粉色、玫红、白色、紫色、蓝色、双色系列等;蒴果球型,成熟后开裂,种子粒大,黑色或黄白色,寿命很长[1];花期6~10月,朝开午谢。牵牛原产于南美洲,中国各地都有栽培[2],性喜温暖、向阳环境,耐热,也耐半阴,不耐寒,怕霜冻,入秋则枯,对土壤要求不严,较耐旱,耐盐碱及土壤瘠薄环境,但在湿润肥沃壤土中生长好,为夏秋季常见的蔓性草花。野生牵牛多生于山野灌丛中及村边、路旁、河谷、果园和山坡等地,适应性极广;园林应用上因其枝蔓秀丽、花大、花繁、色艳丽且适应性强、栽培容易而广为种植,是城乡庭院常见的观赏植物,可做小庭院及居室窗前遮阴、阳台小型棚架、庭院篱垣的美化植物,也可盆栽为丛状或植为地被。近年来,人们对牵牛的化学成分、药理作用等方面进行了研究[3],对其提取液作为新型植物源药物进行了初步探讨[4],并对同属近亲种的种子萌发特性开展了研究[5,6],但关于盐碱胁迫下牵牛种子萌发的研究未见报道。试验利用不同浓度的海水溶液处理牵牛种子,分析牵牛种子对海水溶液的耐受能力,以期为牵牛的盐碱土栽培打下理论基础。
1材料与方法
1.1材料
供试的牵牛种子于2010年9月采自连云港师范高等专科学校校园内,选取发育良好、子粒饱满种子备用。海水由江苏省海洋生物技术重点试验室提供,盐度为18.2‰(海水密度计,上海华晨医用仪表有限公司),用去离子水将海水配制成浓度(体积分数)分别为1%、3%、5%、10%、20%、30%、40%、50%的海水溶液。
1.2方法
1.2.1种子预处理牵牛的种子为硬实种子,用浓硫酸处理1 h 后[7],再用自来水冲洗干净,备用。
1.2.2方法将铺有2层滤纸的干净培养皿作为发芽床,每个培养皿中整齐放置50粒种子,分别加入1%、3%、5%、10%、20%、30%、40%、50%的海水溶液,每个处理的加入量以润湿滤纸为宜,另设去离子水为对照(CK)。每个处理重复3次,置于25 ℃的恒温箱内无光培养,并适时适度补充相应浓度的海水。从试验的第二天开始观察记录种子萌发的数量及生物量(根长+芽长)。幼根伸出的长度约为种子长度等长时视为发芽,发芽数连续3 d不增加则视为发芽结束。
1.2.3种子萌发参数的计算及数据处理由于参试的牵牛种子在第五天后各处理的发芽数不再增加,并且在第二天牵牛种子的发芽数最多,因此,牵牛种子发芽率=培养第五天种子的累计萌发数/参试种子数×100%;发芽势=第二天种子萌发的总数/参试种子数×100%;发芽指数=∑(逐日发芽种子数/对应发芽日);活力指数=发芽指数×(根长+芽长)。利用Mocrosoft Excel 2000和SPSS 11.0软件对所得数据进行方差分析与作图处理。
2结果与分析
2.1海水胁迫对牵牛种子发芽率的影响
不同浓度海水处理对牵牛种子萌发的影响结果见表1、图1,从表1、图1可见,在20%浓度以下的海水处理范围内,牵牛种子的发芽率先略微下降后缓慢升高,到20%浓度时,牵牛种子发芽率已经恢复到与对照处理基本持平的水平;当浓度进一步提高,达30%及以上后,牵牛种子的发芽率开始降低,但20%浓度的海水处理发芽率与对照差异仍不显著;超过30%以后,开始出现显著差异。
2.2海水胁迫对牵牛种子发芽势的影响
在10%海水浓度以下时,牵牛种子的发芽势随着海水浓度的升高呈现出小幅下降后再升高的趋势,到10%浓度时发芽势超过了对照,形成一个小高峰(图2),但与对照相比差异不显著(表1);当海水浓度大于10%以后,随着浓度的增加,发芽势开始逐渐下降,且均与对照差异显著。
2.3海水胁迫对牵牛种子发芽指数的影响
不同浓度海水处理对牵牛种子发芽指数的影响结果见图3,由图3所示,随着海水浓度的升高,牵牛种子的发芽指数先下降,再缓慢上升,到10%浓度时达到最高值,但此时的发芽指数还是低于对照的水平,且差异显著(表1)。当海水浓度超过10%后,发芽指数开始显著下降。
2.4海水胁迫对牵牛种子活力指数的影响
不同浓度海水处理对牵牛种子活力指数的影响结果见图4,由图4所示,在10%海水浓度以下时,随着海水浓度的升高,牵牛种子的活力指数同样呈先下降后上升的趋势,在10%浓度时达到最高值,并且超过了对照,呈显著水平差异;当海水浓度大于20%后,牵牛种子的活力指数随着海水浓度的增加而下降。但在20%浓度时,活力指数仍超过了对照,且差异显著(表1)。
3讨论
发芽率是体现种子萌发质量的直观指标,在30%海水浓度以下,海水对牵牛种子的发芽率影响不大,即使海水浓度达到50%,牵牛种子的发芽率仍有85%,说明牵牛对海水的耐受性较强。发芽势和发芽指数是展示种子萌发活力的两个重要指标。在1%~10%海水浓度范围内,牵牛种子的发芽势随海水浓度升高呈现总体上升的趋势,并且在10%浓度时略微超过对照;发芽指数与发芽势的情况基本相同,在10%浓度时达到高峰,但比对照略低。说明在10%浓度以内,海水对牵牛种子萌发活力虽有一定的影响,但影响不大。活力指数可以更全面地分析种子的萌发能力[8],试验结果表明,海水浓度达10%时,牵牛种子的活力指数达到最高,而且远远超过了对照;即使海水浓度达到20%,牵牛种子的活力指数也还是超过了对照,并且差异显著。综合以上试验结果,笔者认为牵牛种子能耐受海水胁迫的浓度在20%(盐度为18.2‰)以内。至于各项指标中低浓度海水处理的结果比对照略低的原因,或许是统计上的误差造成的。
20%左右浓度的海水对牵牛种子萌发的影响不大的主要原因,应是牵牛种子仍然可以从这些较低浓度的海水中吸收一定的水分供种子萌发所致;但当海水浓度进一步升高时,牵牛种子萌发的各项指标开始下降,主要原因是高浓度的海水对牵牛种子形成了渗透胁迫和离子胁迫[9],造成植物细胞出现质壁分离、离子失衡和营养缺失等情况而影响到种子萌发。
分布在中国的旋花科植物有23个属,其中3个属包含有盐生植物[10],占中国盐生植物总属数的1.5%,这3个属分别是打碗花属(Calystegia R. Br)、番薯属(Ipomoea L.)和腺叶藤属(Stictocardia Hall. f.),它们基本上分布在广东、福建、台湾等省的沿海地区。南北沿海均有分布的仅为肾叶打碗花[C. soldanella(L.)R. Br.],但其在绿化上价值不大。试验结果表明,牵牛也具有较强的耐盐碱特性,可以通过驯化后作为沿海滩涂或围垦区的垂直绿化植物进行应用。
参考文献:
[1] 田连起,石延榜,李波,等. 牵牛子(黑丑、白丑)生熟饮片的紫外谱线组法鉴别研究[J]. 中国民族民间医药,2010,19(17):23-24.
[2] 丁宝章,王遂义,高致明,等. 河南植物志(第三册)[M]. 郑州:河南科学技术出版社,1997.
[3] 王金兰,华准,赵宝影,等. 牵牛全草的化学成分研究(Ⅱ)[J]. 中成药,2011,33(3):488-491.
[4] 王燕,吴振宇,杜艳丽,等. 牵牛种子提取物对朱砂叶螨触杀活性的测定[J]. 中国农业科学,2009,42(8):2793-2800.
[5] 赵则海,李佳倩,梁盛年,等. 不同pH值对裂叶牵牛种子萌发和幼苗生长的影响[J]. 肇庆学院学报,2009,30(2):44-47.
[6] 韩晓弟,赵宏,武冬雪. 海带提取液对圆叶牵牛种子萌发与幼苗生长的影响[J]. 特产研究,2008(2):29-32.
[7] 金波,东惠茹. 硫酸处理对舞草和牵牛种子破除硬实的效果及其生理效应[J]. 种子,1994(4):42-43.
[8] 喻方圆,周景莉,香香. 林木育苗质量检验技术[M]. 北京:中国林业出版社,2008.70-77.
关键词海藻浸提液;小白菜;种子萌发;浓度
中图分类号 S634.3 文献标识码A文章编号 1007-5739(2011)02-0124-02
海藻是海洋中分布最广的生物,从微小的单细胞生物到长达数十米的巨藻,种类繁多,有绿藻门、褐藻门、蓝藻门、红藻门等,这些藻体中含有丰富的海藻多锖蛋白质、脂肪、维生素、矿物质以及具有特殊功效的生理活性物质。海藻酸是一种重要的抗逆物质,在生物体内既可以作为结构成分,又可用于提供能量,而且是许多生物的抗逆代谢物。海藻肥是一类纯天然、无毒、无副作用的新型肥料,其富含氨基酸、矿物质、多糖、维生素及生理活性物质,具有提高作物产量、改善作物品质和增强作物的抗旱、耐寒、抗病性等功效,并对蔬菜中农药和化肥的积累、残留有明显地降低作用,是农产品无公害生产中一种理想的肥料[1-3]。海藻肥料作为新一代天然海洋生物肥,具有多种高活性成分和营养元素,有明显的增产效果和极强的抗逆作用,将以其在环境保护、经济效益方面的突出表现而应用于农业生产中。
相对于常规肥料,海藻肥不仅能显著地促进作物根系发育,提高植物光合作用,而且还能促进果品早熟,大大改善农作物品质,特别是对蔬菜、瓜果、花卉等经济作物,应用效果更为显著[4]。在当前形势下,深入开展海藻提取物类肥料的研究和应用在中国具有特殊的意义。中国海藻资源非常丰富,既有天然生长的大型藻类,又有人工养殖的海藻。中国又是农业大国,作物品种丰富,地域广阔,有巨大的市场潜力和应用前景。海藻提取物属于纯天然、绿色、环保的植物生长调节剂,其研究和应用必将对我国的农业发展产生巨大的促进作用[5-6]。该文通过海藻浸提液对小白菜种子萌发的促进作用研究,以为其在农业生产中的应用提供依据。
1材料与方法
1.1试验材料
供试海藻浸提液由实验室自行制备,将海藻置于一定浓度的碳酸钠溶液中,加热解离后,过滤除去不溶性组分,得到海藻浸提液;供试蔬菜为小白菜。
1.2试验设计
试验设4个处理,即海藻浸提液300倍(A)、500倍(B)、1 000倍(C)液,以清水处理作对照(CK)。3次重复。
1.3试验方法
种子、滤纸及培养皿均预先用1%氯酸钠溶液消毒,而后分别置于不同浓度的海藻浸提液中浸种24 h,浸种后各处理取30粒种子,平放在铺有直径为10 cm滤纸的培养皿中,自然晾干后播种。记录发芽种子数,生长18 d后,记录苗高、根长、根数、幼叶数及叶面积。
2结果与分析
2.1不同处理对小白菜种子发芽率的影响
从图1可以看出,海藻浸提液处理对小白菜种子发芽率有明显的促进作用。随着稀释倍数的增加,与CK相比,处理A、B、C发芽率分别提高31.5%、29.7%、22.2%,其中以处理A的效果最好。
2.2不同处理对小白菜根长的影响
从图2可以看出,海藻浸提液处理对小白菜根长有明显的促进作用。随着稀释倍数的增加,与CK相比,处理A、B、C的根长分别增长13.3%、18.1%、35.0%,其中以处理C的效果最好。
2.3不同处理对小白菜根数的影响
从图3可以看出,海藻浸提液处理对小白菜根数上有明显的增加作用。随着稀释倍数的增加,与CK相比,处理A、B、C的根数分别增加39.6%、45.0%、59.2%,其中以处理C的效果最好。
2.4不同处理对小白菜幼叶数的影响
从图4可以看出,海藻浸提液处理对小白菜幼叶有明显的促进生长作用。随着稀释倍数的增加,与CK相比,处理A、B、C的幼叶数分别增加11.5%、16.4%、12.5%,其中以处理B的效果最好。
2.5各处理对小白菜种子幼叶面积的影响
从图5可以看出,海藻浸提液对小白菜幼叶面积有明显的促进作用。随着稀释倍数的增加,与CK相比,幼叶面积分别增长12.4%、190.3%、114.5%,以处理B的效果最好。
3结论与讨论
试验结果表明,经过海藻浸提液处理的小白菜,其各项生长指标均比对照有显著的提高,其中在幼叶面积这项指标上,以稀释500倍液处理的效果最显著,可以推广使用。为充分发挥海藻肥肥效的最佳施用方案,包括施用时间、次数、浓度和方法,以及海藻肥能否完全替代化肥施用等,有待继续深入研究。
4参考文献
[1] 肖志强.美奇天然海藻肥在大豆上应用效果[J].现代化农业,2010(5):14.
[2] 海藻废液可制备多功能叶面肥[J].农家致富顾问,2010(3):23.
[3] 禹代林,陈洪伟.“美奇”天然海藻肥在油菜中的施用效果初析[J].农业科技,2003(2):14-16.
[4] 袁华芳,周刚.雷力海藻肥在大棚番茄上的应用试验[J].上海蔬菜,2010(3):62.
[5] 孙智广,王忠和,曲恒华.海藻肥及其在葡萄上的应用[J].农业知识:瓜果菜,2004(12):19.
1、发育成熟的种子,在适宜的环境条件下开始萌发;
2、经过一系列生长过程,种子的胚根突破种皮,向下生长,形成主根;
3、胚轴的细胞也相应生长和伸长,把胚芽连同子叶一起推出土面;
4、胚芽伸出土面,形成茎和叶,子叶随胚芽一起伸出土面,展开后转为绿色,进行光合作用;
5、胚芽的幼叶张开行使光合作用;
6、子叶枯萎脱落;
关键词:壳寡糖;小麦;种子萌发;幼苗生长;影响
中图分类号:S482.8;S512.1 文献标识码:A 文章编号:0439-8114(2012)16-3431-02
Effect of Chito-Oligosaccharide on Seed Germination and Seedlings Growth of Wheat
YUAN Jian-ping1,LI Guo-hui2,WANG Shu-min1,GAO Yong-chuang1
(1.College of Life Science, Langfang Normal University, Langfang 065000, Hebei,China;
2. Zhuozhou Bureau of Agriculture, Zhuozhou 072750, Hebei,China)
Abstract: Treating wheat seeds and seedlings with different concentrations of chito-oligosaccharide, the effects of chito-oligosaccharide on wheat seed germination and seedlings growth were discussed. 0.10 μg/mL of chito-oligosaccharide could promote the growth of the bud and root as well as improve the amylase activity of wheat seed obviously, and increase chlorophyll content and root activity of wheat seedling. On the other hand, 10.00 μg/mL of chito-oligosaccharide showed inhibition effect on the amylase activity of wheat seed. These results showed that chito-oligosaccharide had some effects on the growth of wheat and could play great practical value in wheat production.
Key words: chito-oligosaccharide; wheat; seed germination; seedlings growth; effect
壳寡糖(Chito-oligosaccharide)在生物制药、抗肿瘤、提高动物免疫力等医药领域具有不容忽视的作用;在调节植物生长、提高植物抗病力等方面也有广阔的应用前景[1,2]。试验利用不同浓度的壳寡糖溶液处理小麦种子和幼苗,研究其对小麦种子萌发及幼苗生长的影响,以期为壳寡糖更好地应用于农业生产提供理论依据。
1 材料与方法
1.1 试验材料
供试小麦品种:轮选987(购于廊坊市广阳区中爱种子公司)。壳寡糖:由廊坊师范学院生命科学学院微生物实验室制备并提供。
1.2 试验方法
将小麦种子用0.1%的高锰酸钾溶液消毒5 min,然后迅速用去离子水冲洗,用滤纸吸干种子表面的水分[3]。挑选大小一致的种子,分别用浓度为10.00、1.00、0.10、0.01 μg/mL的壳寡糖溶液室温下浸种24 h,同时以去离子水浸种作为空白对照。将处理后的种子播种,出土后分别用清水及上述4种浓度的壳寡糖溶液进行叶面喷施,每24 h喷洒1次。
1.3 测定项目及方法
1.3.1 种子根长、芽长的测定 分别取各试验组处理过的种子200粒,置于铺有2层滤纸的托盘中,上盖4层纱布,置于种子萌发箱中25 ℃恒温培养,种子萌发第四天测量种子的芽长和根长。
1.3.2 淀粉酶粗酶液的提取及活力测定 分别于浸种后0、1、2、3 d随机称取各试验组种子1.0 g,加入25 mL pH 6.4柠檬酸缓冲液,低温迅速研磨,4 ℃、
3 000 r/min离心15 min,上清液即为淀粉酶原液。采用3,5-二硝基水杨酸法测定淀粉酶的活性[4]。
1.3.3 叶绿素含量及根系活力的测定 待小麦幼苗长出3片叶时,称取叶片1.0 g,采用Arnon法测定幼苗叶片的叶绿素含量[5];称取小麦根样品0.5 g,采用TTC法测定幼苗的根系活力[4]。
2 结果与分析
2.1 壳寡糖对小麦种子根长、芽长的影响