有核细胞计数精选(九篇)
前言：一篇好文章的诞生，需要你不断地搜集资料、整理思路，本站小编为你收集了丰富的有核细胞计数主题范文，仅供参考，欢迎阅读并收藏。
第1篇：有核细胞计数范文
免疫组化S-P法检测ARMET的表达,免疫荧光双标染色检测ARMET和CHOP的表达,PI染色观察对细胞凋亡的影响。结果 氯化钆处理组细胞数目减少,胞体变小变圆;ARMET在氯化钆组(5×10-6mol/L)的阳性细胞百分数为(42.1±6.6)%,在正常对照组的阳性率为(6.1±1.6)%,差异有统计学意义(P0.05);免疫荧光双标染色提示氯化钆组ARMET和CHOP均高表达;PI染色可见氯化钆组细胞被深染、胞核断裂等凋亡特征。结论 氯化钆可诱导大鼠腹腔巨噬细胞内质网应激和凋亡,其作用机制可能与胞内钙超载引起的非折叠蛋白反应有关。
【关键词】 氯化钆;巨噬细胞;内质网应激;凋亡
Study of endoplasmic reticulum stress and apoptosis of peritoneal macrophage in ratinduced by Gadolinium chloride
HUANG Xue-gui, ZHAO Jun.Hefei Women and Children Health Center, Hefei230000, China
【Abstract】 Objective To investigate the effect of endoplasmic reticulum stress and apoptosis of peritoneal macrophage in rat induced by Gadolinium chloride. Methods Rat peritoneal macrophage(PMΦ) were isolated and cultured. After PMΦ treated with Gadolinium chloride and Tunicamycin, the expression of ARMET was determined by immunohistochemical method, immunoflurorescent double staining were employed to detect the expression of CHOP and ARMET, PI stain was used to observe PMΦs apoptosis. Results The amount of cells were greatly reduced and the cell body were shrinked to round in GdCl3group. The percentage of cell ARMET positive-expressed were (42.1±6.6)% in GdCl3group(5×10-6 mol/L), while the value of control group were(6.1±1.6)%, the difference between the two groups was significant(P
【Key words】 Gadolinium chloride; Macrophage; ER stress; Apoptosis
作者单位:23000合肥市妇幼保健院
钆(Gd)是属镧系的一种稀有元素,它主要以GdCl3的形式存在。GdCl3具有抑制肝脏Kuffer细胞吞噬、分泌功能的作用,因此被作为工具药广泛用于研究单核/巨噬细胞系统在多种病理过程中的发病机制[1]。其可通过抑制巨噬细胞的活化减少炎症介质(TNFα、IL-1β、IL-6等)的产生,阻止炎性反应的发生、发展。至于GdCl3如何作用于巨噬细胞,未见有文献报道。本文以大鼠腹腔巨噬细胞(PMΦ)为研究对象,分别用GdCl3和阳性对照药衣霉素(Tunicamycin)处理,采用免疫组织化学、免疫荧光双标染色及碘化丙啶(PI)染色等方法,探讨GdCl3对巨噬细胞内质网应激和凋亡的作用。
1 材料与方法
1.1 材料
1.1.1 实验动物 SD大鼠8只(SPF级),,8周龄,体质量180～200 g,安徽医科大学实验动物中心提供(皖实动物准字第01号)。
1.1.2 主要仪器 REVCO ELITE Ⅱ型CO2培养箱(美国Asheville NC)、IX-71荧光倒置显微镜(日本Olympous公司)、SW-CJ-2FD超净工作台(苏州净化)、TDL-5Z台式离心机(湖南星科)、BL-2200H型电子分析天平(日本岛津)、TS-A型水平摇床(金坛国胜实验仪器厂)、SHP-160B型数显生化培养箱(江苏金坛宏凯仪器厂)。
1.1.3 药物与试剂 氯化钆(GdCl3.6H2O),分子量371.7,Sigma公司。DMEM完全培养基,Gibco公司产品。皂角素(saponin),上海生工公司。牛血清白蛋白(BSA),Roche公司。DAB试剂盒,北京中杉金桥公司,批号080402。兔抗ARMET多克隆抗体、鼠抗CD68单克隆抗体,英国AbD Serotec公司。鼠抗CHOP单克隆抗体,美国Santa Cruz公司。DAPI试剂、PI、Tunicamycin均为美国sigma公司产品。
1.2 方法
1.2.1 大鼠腹腔巨噬细胞(PMΦ)的分离培养[2]将SD大鼠断头处死后,置入75%乙醇溶液中浸泡消毒5 min,打开腹腔灌注冷的PBS液15 ml,用手亲揉腹部2 min,用无菌移液管吸出腹腔洗液,于4℃、离心(1500 r/min×10 min),弃上清;再用含10%胎牛血清的DMEM培养液重悬细胞,进行细胞计数;调细胞浓度为1×109/L,加入用多聚赖氨酸包被的24孔板中,1 ml/孔,置5%CO2、37℃培养箱内贴壁2 h后,弃去上清,再用PBS轻洗2次,加入DMEM继续培养。
1.1.2 PMΦ给药方案 将PMΦ培养至第7 d,细胞融合达到80%时进行给药处理。试验分为正常对照组、GdCl3组、Tunicamycin组。①正常对照组:分为两组,每组细胞分别加入与② 、③组等量的生理盐水与DMSO溶媒。②GdCl3组:精密称取GdCl3.6H2O晶体7.9 mg溶于生理盐水,充分溶解后过滤除菌,得5×10-3M的母液,取母液4 μl加入4 ml DMEM中,混匀后换液,每孔加1 ml,培养24 h后处理。③Tunicamycin组:取用DMSO配制的2.5 mg/ml的母液用DMEM按1:1000稀释,每孔加1 ml,培养4 h后处理。以上各组均设四个复孔。
1.2.3 细胞免疫化学 PBS摇洗10 min×2次,用预冷的4%多聚甲醛4℃固定30 min, 再用含0.1% BSA+0.1%皂角素的PBS,4℃封闭30 min。每孔滴加一抗(ARMET,1:20,用含0.1% BSA+0.1%皂角素的PBS稀释)100 μl,4℃孵育过夜。次日PBS洗后滴加带HRP标记的猪抗兔二抗(1:100)37℃孵育1 h,DAB显色,苏木素复染,盐酸酒精分色,蓝化,滴加DAPI染核, PBS洗10 min×2次后, 荧光显微镜下观察,摄像。
1.2.4 免疫化学阳性细胞计数 在DAB显色的细胞组织化学玻片上,用高倍镜(×400)每孔随机取五个视野计数阳性细胞,每组按四孔计数,求出阳性细胞的百分数,并以(x±s)表示。
1.2.5 细胞免疫荧光双标染色 PBS摇洗10 min×2次,用预冷的4%多聚甲醛4℃固定30 min, 再用含0.1% BSA+0.1%皂角素的PBS,4℃封闭30 min。滴加两种一抗,4℃孵育过夜。次日用PBS洗后滴加1:500稀释的两种荧光标记二抗,37℃避光孵育1 h。用PBS洗10 min×2次后,滴加DAPI液(5 μg/ml)室温避光显色5 min后,荧光显微镜下观察,摄像。
1.2.6 PI染色 每孔加入PI染液(5 μg/ml),孵育过夜。次日PBS摇洗10 min×3次,荧光显微镜下观察,摄像。
1.3 统计学处理 采用SPSS 12.0统计软件对实验数据进行分析,计量资料以x±s表示,组间数据的显著性检验采用单因素方差分析,P
2 结果
2.1 光镜下观察细胞形态学变化 倒置显微镜下观察,对照组细胞形态正常,生长良好,可见较多的梭形细胞。而GdCl3组细胞数目减少,胞体变小变圆。Tunicamycin组也类似。见图1。
图1 不同处理后腹腔巨噬细胞的形态
A:正常对照组;B:GdCl3组;C:Tunicamycin组×100
2.2 ARMET在不同处理腹腔巨噬细胞的表达 ARMET是一分泌性胞浆蛋白,其阳性表达为棕黄色或棕褐色,见图2。ARRET在GdCl3组的阳性率为42.1%(123/292),在正常对照组的阳性率为5.8%(21/360),差异有统计学意义(P0.05),见图3。为了进一步说明ARMET在不同处理组细胞的表达情况,采用了免疫荧光双标染色法,以鼠抗CD68单克隆抗体鉴定PMΦ,可见GdCl3组红色荧光较强,对照组几乎无荧光。见图4。
图2 ARMET在不同处理腹腔巨噬细胞的表达
A:正常对照组;B:GdCl3组;C:Tunicamycin组DAB×400
图3 腹腔巨噬细胞表达ARMET的阳性率(x±s,n=20)
图4 ARMET在不同处理组腹腔巨噬细胞的表达
A、E、I:核染料DAPI(蓝);B、F、J:抗CD68抗体免疫反应阳性细胞(绿);
C、G、K:抗ARMET抗体免疫反应阳性细胞(红);D、H、L:叠加后的图像。 ×400
2.3 CHOP在不同处理组腹腔巨噬细胞的表达CHOP是一个核转录调节因子,又称凋亡诱导蛋白,它是内质网应激的标志物。CHOP主要位于胞浆,在正常情况下,CHOP的表达量很少,但应急可诱导其激活并大量表达[3]。从图5可以看出,GdCl3组细胞的胞浆CHOP有表达,跟对照组相比,红色荧光较强。
图5 CHOP在不同处理组腹腔巨噬细胞的表达
A、E、I:核染料DAPI(蓝);B、F、J:抗CD68抗体免疫反应阳性细胞(绿);C、G、K:抗CHOP抗体免疫反应阳性细胞(红);D、H、L:叠加后的图像。 ×400
2.4 PI染色结果 PI是一种核酸染料,它不能透过完整的细胞膜,但在凋亡中晚期的细胞和死细胞,PI能够透过细胞膜而将细胞核红染。从图6可知,跟对照组相比,GdCl3组细胞被深度红染,部分胞核短裂呈分叶,碎片状,且多边集。
图6 不同处理组腹腔巨噬细胞的PI染色
A:正常对照组;B:GdCl3组;C:Tunicamycin组×400
3 讨论
内质网(ER)是分泌性蛋白在细胞内进行折叠、修饰和组装的场所[4],蛋白质的这些加工过程是其功能成熟所必需的[5]。在内质网中,一旦聚集的非折叠蛋白超过内质网的负荷能力,就会引起ER 应激[6]。ER应激可以上调精氨酸富含蛋白ARMET的表达。同时,ER 应激激活了非折叠蛋白反应(unfolded protein response,UPR)来缓解内质网的压力,但长期严重的内质网应激则会导致细胞凋亡及死亡。
能引起ER应激的因素很多,如基因突变或机体的状态改变包括钙平衡失调、氧化应激、缺血、营养不足、感染等[7,8]。GdCl3作为钙敏感通道激动剂可通过G蛋白-PLC-IP3信号转导途径,引起肌浆网内钙释放增加,导致细胞内摄入的钙增加而引发钙超载[9]。进而引发ER应激与UPR导致细胞凋亡。此外,内质网钙的流出引起胞浆Ca2+浓度的升高,后者通过净流入可快速增加线粒体钙,线粒体多余的Ca2+通过渗透性转移诱导细胞凋亡[10]。至于氯化钆诱导大鼠腹腔巨噬细胞内质网应激和凋亡的具体机制,还有待进一步研究。
参 考 文 献
[1] Lee YG, Lee SH,Lee SM.Role of Kuffer cells in cold/warm ischemia reperfusion injury of rat liver. Arch Pharm Res,2003,23(6):620-625.
[2] 姚航平, 张立煌, 冷建杭. 白细胞介素18重组腺病毒对小鼠腹腔巨噬细胞免疫功能的影响.
浙江大学学报(医学版), 2001, 30(5): 248-251.
[3] Ron D, Habener J F. CHOP, a novel developmentally regulated nuclear protein that dimerizes with transcription factors C/EBP and LAP and functions as a dominant-negative inhibitor of gene transcription. Genes Dev, 1992,6(3): 439-453.
[4] Voeltz G K, Rolls M M, Rapoport T A. Structural organization of the endoplasmic reticulum. EMBO Rep, 2002, 3(10):944-950.
[5] Hampton R Y. ER-associated degradation in protein quality control and cellular regulation. Curr Opin Cell Biol, 2002,14(4): 476-482.
[6] Rutkowski D T. A trip to the ER: coping with stress. Trends Cell Biol, 2004, 14(1):20-28.
[7] Liu CY, et al.Structure and intermolecular interactions of the luminal dimerization domain of human IRE1 alpha. J Biol Chem 2003, 278(20):17680-17687.
[8] Kadowaki H, et al. Survival and apoptosis signals in ER stress: the role of protein kinases. J Chem Neuroanat,2004, 28(1-2):93-100.
第2篇：有核细胞计数范文
作者：药志胜
出版社：华夏出版社
出版时间： 2010-7
定价：45.0元
荐书理由
宝宝成长可谓一天一个样，根据宝宝快速成长的实际情况，本书将0～3岁详细划分为12个成长阶段，针对每一阶段婴幼儿身体发育情况和对外界反应能力，分别设计了智力发展游戏、情感发展游戏、语言能力游戏、动作训练游戏、习惯养成游戏，这些游戏，其道具容易得到，难易程度适合相应年龄段的宝宝，游戏过程充满乐趣，特别适合父母与宝宝一起玩耍。
《拉伸》
作者：（美）安德森
出版社：北京科学技术出版社
出版时间： 2010-8
定价：32.0元
荐书理由
这本书可以帮你缓解颈部、肩膀、腰部等部位的紧张酸痛，可以消除忙碌的工作带来的健康压力，还可以让你在繁重的生活中得到片刻的休息和释放。
这是一本教你如何专业而简单地伸展身体、缓解疲劳的神奇书。您可以在书中找到适合自己的拉伸动作，跟着图片，按照说明，去拉伸颈、肩、臂、背、腰、髋、臀、腿等任何想锻炼的部位，相信你会迷上拉伸带来的奇妙感觉。
《积极情绪的力量》
作者：（美）弗雷德里克森
出版社：中国人民大学出版社
出版时间： 2010-12
定价：39.8元
荐书理由
这本书是积极心理学研究成果的大集结，它不仅洞察了积极情绪的潜力，而且提出了增加积极情绪的切实方法。这是一本会让你感觉良好的书，它提供了获得快乐、健康以及创造力的秘诀，这些秘诀有着坚实的科学基础。当你不高兴时，就拿出这本书读几章吧！本书提出的概念就如同黑夜中的闪电，给予追求幸福的人以新的启示。 本书是近年来积极心理学最重要的通俗著作。阅读它，思考它，运用它，分享它，你的人生将自然而然地发生积极的改变。
《对症蔬果速查全书》罐
作者：李健
出版社：武汉出版社
出版时间： 2011-1
定价：45.0元
第3篇：有核细胞计数范文
由于本人刚刚接任教导处主任工作，工作经验足等种种原因，致使本次活动存在了一定的瑕疵，在此对各位做课老师深表歉意。
本次活动中，一共有18位教师参加了汇报课。应该说这18节课都很精彩，每位教师都有不同的教学风格。活动中每位做课老师都经过精心的准备，都付出了很多，如：王克相老师在为每位老师制作、寻找课件的同时还要备好自己的课，讲好自己的课；胡俊森老师在准备自己课的同时，还要为大家服好务，布置好上课场地；范兴华老师在家中拿来了钳子、剪子等等做为教具，让学生掌握所学知识在生活中的应用。本次活动最让我感动的是逄世华老师，她自己花钱制作了教具，可以说既使她取得了一等奖，奖金还远远不能达到制作教具费用，但逄老师这种精神，这种奉献精神，这种为教育教学的奉献精神，值得我们在座的每一位教师去学习。其他老师也都还有很多很多的闪光之处，在此我就不一一赘述。
本次活动中授课教师对课程标准有了更深的理解，对教学目标、教学重点难点、教学策略等环节的设计与组合都有科学的把握，而且基本都能熟练的运用多种电教手段进行辅助教学，教师的基本素质已经大大提高。
本次评课，我们是就课评课。也就是说，我们评的是这一节课，这节课既不代表过去，也不代表将来。所以我肯请各位教师正确对待评奖结果。有问题可以找我交流。
下面我从以下几点进行总结：
一、 注重倡导自主、合作、探究的学习方式。
学习方式的改革是本次基础教育改革的重要目标。改变学习方式，实际上是改变一种习惯，当务之急在于建立教学新理念，即由过去的传授式学习变为自主、合作、探究式学习。在这一方面，各位参加汇报课的老师都在力求体现这一理念。赵泾戈老师的四边形的教学过程的设计：四边形——长方形—正方形——长方形、正方形的区别—说说生活中四边形—动手实践，层次清楚结构合理，充分发挥了学生的主动性。特别是“学生根据自己的方法为四边形分组”这一个环节，让学生通过自己已有的经验来解决问题，培养学生的独立性和自主性，引导学生质疑调查、探究，在实践中学习 ，促进学生在教师指导下主动地、富有个性地学习。金正文老师
让学生读第二——第四节提出“出现了哪些你熟悉的人和事？”通过生生交流，拓展了学生学习空间，扩大了学生的知识面。范兴华老师在教学中能充分运用“合作学习”这一学习方式，分组协作，实验总结杠杆的作用，根据自己组中伙伴们挂砝码的个数与力臂的长短，在小组中讨论杠杆如何用省力、费力、不省力也不费力，然后再以小组的形式汇报果，培养了团体合作的精神。
二、 注重双边互动，关注每一个学生。
教学过程是师生交往、积极互动、共同发展的过程，在这一过程中必须体现尊敬、热爱、理解、帮助学生的理念。新的课程标准倡导师生平等交往的教学行为，这有助于建立人道的、和谐的、民主的、平等的师生关系。要关注每一个学生，使广大的学生在课堂上都能得到训练。刘丽梅老师在课堂中这样评价学生“跟小书法家写得一样、你写得真漂亮”，给孩子以鼓励。崔嫦娟在课中说到老师当组长，你们当组员，拉近了师生的关系，这些都体现了“尊重、热爱学生”的理念。张丽娟老师的〈认识立体图形〉教学中，质疑问难，“我们把相同形状的物体分在了一起，它们都叫什么名字？你到书中去找一找。”发挥教师“组织者、引导者”的作用，进入学习新课的环节。
三、注重切合学生实际。
课程标准要求教学必须符合学生身心发展的特点，适应学生的认知水平，密切联系学生的经验世界和想象世界。这充分体现了“以人的发展为本”的新的课程理念。聂秀娟老师的行为艺术中设计的小熊与小狗在公园的情境剧，教育幼儿在生活中“不乱扔垃圾”；王丽娟的〈观察物体〉，从学生已有的生活经验出发，让孩子们从不同方位观察物体，说说在不同的方位能看到物体的几个面。这些环节的设计，与学生的生活联系紧密，学生做起来、说起来不难，却有助于突破难点。曾会君老师利用猜礼包的形式，激发学生的学习兴趣，巩固加深对单词的识记。范兴隆老师在提问题之前说：谁来回答老师的问题，老师保证你一定回答得上，来鼓励学生，激发学生的学习兴趣等等。
三、 注重学生个性发展，培养求异思维。
〈基础教育课程改革纲要（试行）〉明确要求：“注重培养学生的独立性和自主性，引导学生质疑调查、探究，在实践中学习 ，促进学生在教师指导下主动地、富有个性地学习。教师应尊重学生地人格，关注个体差异，满足不同学生的学习需要，创设能引导学生主动参与的教育环境，激发学生的学习积极性，培养学生掌握和运用知识的态度和能力，使每个学生都能得到充分的发展。”这次活动中，老师们的这一理念的贯彻是一亮点。崔嫦娟老师在识字教学中，如何记住“问”字时，利用猜字谜、换偏旁等方法去记字。鼓励学生动脑，充分发挥个性，从不同角度去记字；胡玉花的教学环节中，利用三角板能画出多少度的角，让学生想，并动手实践，学生归纳出利用三角板可以画出十个不同角度的角。
当然，在活动中，老师们的精彩表现何止这些？每一位老师都有各自的长处，不可能一一评述。18节课都
很精彩。这次汇报课活动的课堂教学评价量分表，是由进修学校新制定出来的。根据课改动向，我们教师的教学方式必须加以调整。我们这些上课教师的素质都很不错，怎样把课上得更好，更受学生欢迎？本着共同学习，共同进步的原则，把本次活动中我认为的不足总结如下，望各位批评指正交流。
1、教学环节过于饱满。为了能让听课的评委和老师有个完整的课的印象，设计的课的内容太多，致使出现为了赶课而没能充分发挥学生的能动性，老师吃力，学生也没调动起来，整堂课就见老师在讲。
2、老师讲的比重过多。传统的“问教法”的痕迹太重，而生与生之间的对话太少。某些能引导学生去发现去总结的地方，老师也包办代替了。
3、合作学习没有得到广泛运用。现在的一个重要的教学手段就是合作学习，这也是新课标极力倡导的“自主、合作、探究”的学习方式中重要的一环。
4、教师的角色并没有从根本上得到改变。教师要注意的是，在教学过程中，教师是组织者，是引导者，是参与者和评价者，要把自己定位在是学生学习的伙伴、朋友的位置。这样，上课时，老师们和学生的交流自然而然的就轻松愉快了很多，课堂气氛活起来了，学生动起来了。在这样的氛围中更让学生愉快的学，主动的学。
第4篇：有核细胞计数范文
论文关键词：再生水管道,管材设计选优,内外壁防腐钢管,钢筒混凝土管,玻璃钢夹砂管
0引言
包头市河西电厂始建于2005年，属燃煤火力发电厂。电厂水源由包钢污水处理中心处理后的再生水供给，是包钢集团支援市属企业，推动包头市节约黄河水、合理利用污水再生资源的举措。包钢污水处理中心提供给包头市河西电厂再生水量为3000m/h，敷设1条管径为DN900，长度为8900m的再生水管道。
由于再生水处理主体工艺属混凝、沉淀、过滤和杀菌灭藻，对污水中含盐成分没有去除作用，因此再生水腐蚀的因子较多。加之，从包钢污水处理中心输送到河西电厂的再生水管道要穿越包兰铁路两处、较长的铁路栈场一处，穿越公路一处、昆都仑河一处以及大片的耕地。穿越昆都仑河处需要降水施工。按照包钢已有输水管道敷设在河流和耕地处多年的实践证实，采用钢筋混凝土管道抗震能力差，包头市属地震8度设防区，在1996年5月3日地震时，此类管道接口有些漏水。但是采用钢管，管外壁有腐蚀穿孔的现象。另外，在日常运行中，若发生管道破裂，抢修的混凝土管道施工困难，影响抢修时间。
众所周知，对于热力电厂，有效供水量是电厂的生命线。为了确保敷设管道供水安全可靠，施工、维护方便，事故时抢修便捷，投资经济合理，技术先进实用，管道选材尤为重要。我们经过设计选优，进行经济技术综合指标的评价，选用玻璃钢夹砂管道，多年的运行证实，效果很好。该工程于2007年被评为包钢优秀工程设计三等奖。
1再生水输水管道的基本情况
包钢污水处理中心的再生水处理基本工艺为：包钢厂区合流污水→格栅→预沉→沉淀→过滤→加氯杀菌灭藻→送给用水户。
包钢污水处理中心处理水量为8000m/h，其中5000m/h回用到包钢厂区，3000m/h送给河西电厂。处理后水质指标如表1
表1再生水水质指标
项目
SS（mg/L）
pH
暂硬（dH ）
总硬（dh ）
油（mg/L）
Cl （mg/L）
SO （mg/L）
数值
≤20
7.8~8.4
≤14
≤28
≤5
第5篇：有核细胞计数范文
［摘要］ 目的 评价蛋白酶抑制剂乌司他丁（ulinary trypsin inhibitor，UTI）对原位肝移植术（orthotopic liver transplantation，OLT）中血浆促炎性细胞因子和氧自由基代谢水平的。 将20例择期行OLT手术患者随机分为两组。UTI组（U组，n=10）：切皮后将UTI 30万u加入100ml生理盐水，持续静脉输注1h，然后每4h重复1次。对照组（C组，n=10）：以等容量生理盐水代替。分别于麻醉后切皮前（T0）、无肝前期120min（T1）、无肝期30min（T2）、新肝期5min（T3）、新肝期60min（T4）和术毕（T5）抽取静脉血测定血浆IL-6、IL-8、TNF-α和丙二醛（MDA）浓度，以及超氧化物歧化酶（SOD）活性。术中连续监测心输出量、混合静脉血氧饱和度、中心温度、ECG、CVP、PETCO2、SpO2、桡动脉压、肺动脉压。维持中心温度不低于35.5℃。结果 T0时组间血浆IL-6、IL-8、TNF-α、MDA和SOD水平差异均无显著性（P＞0.05）。与T0比较，两组血浆IL-6、IL-8从T2～T5各时间点均升高（P＜0.01）；两组血浆TNF-α从T1～T5各时间点均升高（P＜0.05或0.01）；两组血浆MDA从T3～T5各时间点均升高（P＜0.05或0.01）；C组血浆SOD从T3～T5各时间点降低（P＜0.01）；U组血浆SOD仅在T3时降低（P＜0.05）。与C组比较，U组血浆IL-6、IL-8水平在T2～T5各时间点降低（P＜0.05或0.01），TNF-α和MDA水平在T3～T5各时间点降低（P＜0.05或0.01），SOD水平在T3～T5各时间点升高（P＜0.05）。结论 UTI可抑制OLT导致的全身性炎性反应，减少自由基的产生。
［关键词］ 蛋白酶抑制剂；肝移植；促炎性细胞因子；氧自由基
Effects of ulinastatin on proinflammatory cytokines and oxygen free radicals during orthotopic liver transplantation
FENG Guo-hui，LEI Zhi-li，YU Peng，et al.Department of Anesthesia，General Hospital of Chinese People’s Armed Police Forces，Beijing 100039，China
［Abstract］ Objective To evaluate the effects of ulinastatin on proinflammatory cytokines and oxygen free radical during orthotopic liver transplantation(OLT).Methods Twenty ASA Ⅲ～Ⅳ patients with end-stage liver diseases，undergoing OLT were randomly pided into two groups.Ulinastatin group received intravenous infusion of ulinastatin 3×105IU in 100ml normal saline after skin incision and every 4 hours thereafter(n=10).Control group received same amount of normal saline instead of ulinastatin(n=10).Blood samples were taken before skin incision(T0)，120min after skin incision(T1)，30min after liver was removed(T2)，5min (T3) and 60min (T4) after reperfusion of the graft and at the end of operation (T5)for determination of plasma IL-6，IL-8，TNF-α，MDA concentration and SOD activity.After anesthesia induced，cardiac output，mixed venous oxygen saturation and central venous temperature were continuously monitored during operation.ECG，CVP，SpO2，PETCO2，radial artery and MPAP were also continuously monitored during operation.PETCO2 was maintained at (35～40)mmHg during operation.Blood temperature was maintained above 35.5℃ during operation.Results Two group plasma IL-6 and IL-8 concentrations were significantly increased from T2 to T5 as compared with the baseline values(P＜0.05)，whereas plasma levels of TNF-α were significantly increased from T1 to T5 and compared with in the group C plasma TNF-α，IL-6 and IL-8 concentrations were significantly decreased.Two group plasma MDA did not change significantly before and during anhepatic phase but were significantly increased during reperfusion of the graft and at the end of surgery as compared with the baseline values(P＜0.01).Plasma MDA concentrations were significantly decreased in the group U compared with in the group C.SOD activity decreased from T3 to T5 in group C compared with the T0(P＜0.01).In group U SOD activity decreased at T3 compared with the T0(P＜0.05).but SOD activity in group U are higher than those in group C from T3 to T5 phase(P＜0.05).Conclusion Ulinastatin inhibits release of proinflammatory cytokines and reduces production of oxygen free radicals during OLT.
［Key words］ ulinary trypsin inhibitor;liver transplantation;cytokines;oxygen free radicals
乌司他丁（ulinary trypsin inhibitor，UTI）是从男性尿中分离纯化的尿胰蛋白酶抑制剂，新近的发现它可以抑制体外循环引起的炎性因子释放［1］。UTI是否可以改善原位肝移植术（orthotopic liver transplantation，OLT）围术期炎性反应尚无定论。本研究拟观察UTI对OLT术中血浆促炎性细胞因子和氧自由基代谢的影响。1 资料与方法
1.1 一般资料 择期行OLT患者20例，ASA Ⅲ或Ⅳ级。见表1
1.2 方法 随机分为两组，UTI组（U组，n=10）：切皮后将UTI（广东天普制药有限公司，批号02050104）30万IU加入100ml生理盐水，持续静脉输注1h，之后每隔4h重复使用；对照组（C组，n=10）：以等容量生理盐水代替。
表1 两组患者一般资料比较 （x±s）
两组麻醉诱导采用咪唑安定0.05～0.1mg/kg、依托咪酯0.3mg/kg、芬太尼5μg/kg、维库溴铵0.1mg/kg静脉注射；吸入异氟醚，酌情追加芬太尼和维库溴铵维持麻醉和肌松。所有患者均行经典非转流术式，术中吸入纯氧，呼气末二氧化碳分压维持在35～45mmHg（1kPa=7.5mmHg），麻醉诱导后经右侧颈内静脉或锁骨下静脉置入Swan-Ganz导管，使用Baxter Vigilance连续心输出量测定仪连续测定心输出量，混合静脉血氧饱和度及中心静脉血温，监测心电图、中心静脉压、脉搏血氧饱和度、桡动脉压、肺动脉压。将加温毯置于患者下肢及背侧，输液通路及加温输液装置相连，维持血温不低于35.5℃。
分别于麻醉后切皮前（T0）、无肝前期120min（T1）、无肝期30min（T2）、新肝期5min（T3）、60min（T4）和术毕（T5）抽取静脉血测定血浆IL-6、IL-8、TNF-α（放射免疫法）和丙二醛（MDA）浓度（硫代巴比妥酸比色法），以及超氧化物歧化酶（SOD）活性（黄嘌呤氧化酶法），标准试剂盒由北京海科锐生物技术中心提供。
1.3 统计学方法 2004版CHISS软件进行统计学分析，计量资料以均数±标准差（x±s）表示，组间比较采用独立样本t检验，组内比较采用双因素方差分析，计数资料采用χ2检验，P＜0.05为差异有显著性。
2 结果
第6篇：有核细胞计数范文
[关键词] 马尔康柴胡； 柴胡； AMDIS； 保留指数； 挥发油； 定性； 相对含量
柴胡为常用中药，除《中国药典》2010年版收载的2个来源（伞形科植物柴胡Bupleurum chinense DC.或狭叶柴胡B. scorzonerifolium Willd.的干燥根）外[1]，柴胡属20余种植物在我国不同地区作为柴胡地区习用品入药[2]。
马尔康柴胡B. malconense的干燥全草是《四川省中药材标准》2010年版收载的地方习用品“竹叶柴胡”的来源之一[3]，产自四川阿坝州，主要为野生，因其价格低廉，使用广泛，用量较大。马尔康柴胡与药典收载柴胡不仅品种不同，且药用部位亦不同，但所载功能与主治却和药典收载柴胡基本一致，其科学性有待验证。
柴胡挥发油是其疏散退热作用的主要活性成分[4]。本文采用拟自动质谱退卷积定性系统（automated mass spectral deconrolution and identification system，AMDIS）和保留指数分析方法，对马尔康柴胡地上、地下部分的挥发油成分与北柴胡进行比较研究，为马尔康柴胡是否具有柴胡治疗感冒发热的物质基础，且其地上、地下部分是否可同等入药提供科学依据。
1 材料
Agilent 7890A/5975C GC-MS 气相色谱质谱联用仪，色谱柱HP-5MS 5% Penyl Methyl Siloxane（0.25 mm×30 m，0.25 μm），质谱图匹配的谱库 NIST08 MS database，匹配一化学工作站MSD ChemStation E. 02.01.1177，AMDIS（美国安捷伦公司）。正己烷、无水硫酸钠为分析纯，C8-C20系列正构烷烃标准溶液（mixture no. 04070）购于Fluka Chemika。
马尔康柴胡药材由作者采自四川省阿坝州汶川县，北柴胡购自成都市北京同仁堂药店，经成都中医药大学卫莹芳教授鉴定前者为马尔康柴胡B. malconense的全草，后者为柴胡B. chinense的干燥根。
2 方法
2.1 挥发油提取方法 取药材粉末（过2号筛）各50 g，置于1 000 mL圆底烧瓶中，加蒸馏水300～500 mL，浸泡2 h。随后安装挥发油提取器，加热回流6 h，得淡黄棕色澄明油状液体，静止1 h，后读数（mL）。加入2 mL正己烷稀释后，转移出来。加入适量无水硫酸钠，于5 ℃静置24 h脱水。将脱水后的挥发油装于螺口小瓶密闭，于5 ℃保存，以备测定。
2.2 GC-MS测定方法 色谱条件：初始温度40 ℃，保持3 min，以8 ℃・min-1的速率升至120 ℃，以2 ℃・min-1的速率升至200 ℃，以6 ℃・min-1的速率升至260 ℃，保持3 min。载气为He，流速1 mL・min-1。分流比20∶1，进样量1 μL。进样口温度280 ℃，溶剂延迟4.00 min。质谱条件：电离方式EI源，电子能量70 eV，离子源温度230 ℃，扫描范围50～400，扫描速度2.11 s・dec-1。测定北柴胡（根）与马尔康柴胡地下、地上部分的总离子流谱图（TIC），见图1～3。
3 数据分析方法
3.1 重叠峰拆分 中药挥发油成分复杂，应用GC-MS分析挥发油得到的TIC图谱中存在大量的重叠峰。工作站软件中带有AMDIS，它基于模型峰的算法，把性状与保留值完全相同的碎片峰重新组合，去掉其他的干扰峰，进而构建一张比较“纯净”的谱图[5]。这种提纯谱图的功能，可以有效的拆分重叠峰，进而准确的对化合物定性。
选择某一段TIC谱图，运行AMDIS，可初步得出这段TIC中化合物数目，对应各化合物特征碎片峰可将重叠峰进行分离。然后对相应扫描点的提纯谱图与图谱库对应的匹配化合物进行比对、分析，确定其结构[6]。
举例说明，见图4，由图4-a可见，通过运行AMDIS的run命令后，18.51～18.73 min有7个化合物；选择18.560 min处对应化合物的“纯化”谱图（4-b）后，再运行“go to NIST MS program”；给出的最佳匹配物是caryophyllene即β-石竹烯（4-c），匹配概率达91.6%。然而选择该时间点的原始图谱直接与图谱库进行比对，最佳匹配物仍是caryophyllene，但匹配概率仅为56.4%。表明“纯化”质谱图剔除了相应的干扰峰，对原始图谱进行了拆分纯化。
3.2 保留指数的测定 一些化合物的质谱极相似，可以高匹配度匹配的化合物不止一种。仅靠质谱图的匹配，难以对化合物准确定性。根据Van den Dool于1963年提出的用于计算机程序升温保留指数ITP的计算公式[7]。
ITP=100n+100[式中T代表保留温度，x表示待分析的成分，n和n+1分别代表待分析化合物前后2个相邻正构烷烃的碳原子数。
相同实验条件下，测定C8-C20系列正构烷烃标准溶液的TIC谱图见图5。
计算本实验条件下待鉴定化合物的保留指数ITP，见表1，与质谱匹配度高的几种化合物文献记载的保留指数I进行比对，将偏差较大的匹配化合物排除，选择保留指数较为一致的（偏差不超过3%），为化合物的准确定性提供依据。
4 结果
采用水蒸气蒸馏法提取北柴胡（根）、马尔康柴胡地下与地上部分的挥发油，得率分别为0.20%，0.15%，0.1%。采用GC-MS联用技术，对化合物进行定性，并采用面积归一化法，得出各化合物的相对百分比含量，见表2。
5 结论与讨论
柴胡挥发油中以萜类及其氧化物为主。从北柴胡鉴定出50种化合物，含量占挥发油总量的74.82%；从马尔康柴胡地下部分鉴定出47种，占57.06%，地上部分鉴定出45种，占66.69%。
马尔康柴胡与北柴胡挥发油成分种类有一定相似性。马尔康柴胡地上部分与北柴胡共有成分33种，占其已鉴定化合物种类的73%；马尔康柴胡地下部分与北柴胡共有成分为44种，占其已鉴定化合物种类的94%，地下部分挥发油种类与北柴胡具有更高的相似性。
马尔康柴胡与北柴胡挥发油主要成分种类及相对含量有较大差异。北柴胡挥发油中相对含量较高的主要为月桂醛（9.060%）、乙酸十二烯基酯（5.426%）、氧化石竹烯（4.591%）、草烯-1，6-二烯醇（4.451%）、斯巴醇（4.356%）等；马尔康柴胡地下部分主要含镰叶芹醇（17.736%）、2-正戊基呋喃（3.991%）、氧化石竹烯（2.457%）、月桂醛（2.197%）等，地上部分主要含氧化石竹烯（15.693%）、斯巴醇（6.059%）、β-石竹烯（5.243%）、草烯-1，6-二烯醇（2.979%）等。
石竹烯及其氧化物与柴胡疗效相关，是抗炎镇痛及香味的主要活性成分[8]。马尔康柴胡地上、地下部分均有较高含量的氧化石竹烯，且主要挥发油成分种类与北柴胡有较好一致性，提示马尔康柴胡全草作为地区习用品，用于感冒发热等，具有一定科学依据。但马尔康柴胡地上、地下部分挥发油成分存在较大差异，两者非共有成分达28个，约占该物种挥发油化合物总数的50%，其整体疗效还需进行系统药效学研究。
[参考文献]
[1] 中国药典. 一部[S]. 2010：263.
[2] 潘胜利，顺庆生，柏巧明，等. 中国药用柴胡原色图志[M]. 上海： 上海科学技术文献出版社，2002： 9.
[3] 四川省食品药品监督管理局. 四川省中药材标准[M]. 成都：四川科学技术出版社，2010： 250.
[4] 霍梦逸，刘新，林於，等. 柴胡挥发油中有效解热成分的研究[J]. 药物分析杂志，2013，33（7）：1202.
[5] 黄盈煜，谢维平，欧阳燕玲. GC-MS/AMDIS系统在茶叶中17种有机氯和拟除虫菊酯农药残留检测确证中的应用[J]. 中国卫生检验杂志，2010，20（7）：1606.
[6] 王坚，陈鸿平，刘友平，等. 应用自动质谱退卷积定性系统拆分中药挥发油总离子流谱图中的重叠峰――以青皮为例[J]. 中国中药杂志，2013，38（10）：1564.
[7] Van Den Dool H， Kratz P D. A generalization of the retention index system including linear temperature programmed gas-liquid patition chromatography[J]. J Chromatogr， 1963， 11： 463.
[8] 刘晓宇，陈旭冰，陈光勇. β-石竹烯及其衍生物的生物活性与合成研究进展[J]. 林产化学与工业，2011，23（1）：104.
Study on composition of essential oil in above-ground and root of
Bupleurum malconense and root of B. chinense by
AMDIS and retention index
YAN Jie， WEI Ying-fang*， Gu Rui
（The Ministry of Education Key Laboratory of Standardization of Chinese Crude Drug，
Pharmacy School， Chengdu University of Traditional Chinese Medicine， Chengdu 611137， China）
[Abstract] Chemical constituents of the essential oil in above-ground and root of Bupleurum malconense and root of B. chinense were investigated by GC-MS compiled with automated mass spectral deconvolution and identification system（AMDIS） and retention index. The results showd that the components of essential oil in B. malconense have some similarities with the one in B. chinense， and both of them have the higher content of caryophyllene oxide which is an active component of anti-inflammatory and analgesic. These results suggested that as a local substitute， B. malconense has a certain scientific basis of the treatment for cold fever.
第7篇：有核细胞计数范文
关键词：SysmexXS-500i血液分析仪；人工镜检；检测；异型淋巴细胞
传染性单核细胞增多症及病毒感染是由于外周血中出现异型淋巴细胞，临床上常采用血涂片染色人工分类计数的方法计数其比例[1]。随着检验技术的发展，SysmexXS-500i血液分析仪因其诊断准确率高，具有异型淋巴细胞提示功能，在临床上被广泛的运用。为此，本文特将两种检测技术的结果进行对比分析，现报告如下。
1资料与方法
1.1一般资料 收集我院2011年4月～2014年5月进行异性淋巴细胞计数的标本150例，其中，以单核细胞型为主的标本有50例，以幼稚型细胞为主的标本有60例，以浆细胞型为主的标本有40例。
1.2方法 仪器及试剂：SysmexXS-500i血液分析仪；显微镜；乙二胺四乙酸二甲；血样采集采用硅化管抗凝。
检验方法：①人工镜检检测：将患者标本制成厚薄均一、体尾分明的涂片，采用瑞士-吉姆萨染液染色后，在显微镜观察下，选择体、尾处的血膜，计数100个白细胞。②SysmexXS-500i全自动血液分析仪检测：人工分类计数异型淋巴细胞计数大于20%的标本20份，人工异型淋巴细胞计数大于10%，小于20%的标本30份，人工异型淋巴细胞计数大于0%，小于10%的标本40份，人工异型淋巴细胞计数为0%的标本为60份。将人工分类的异型淋巴细胞送至SysmexXS-500i全自动血液分析仪检测，记录各标本的异型淋巴细胞提示信息。
1.3观察指标 观察SysmexXS-500i全自动血液分析仪与人工镜检的的检测符合率。
1.4统计学处理 SysmexXS-500i全自动血液分析仪与人工镜检的各项观察指标情况采用SPSS18.0软件进行统计处理。检测符合率采用？字2检验，以P
2结果
人工镜检结果：异型淋巴细胞计数大于20%的标本10份，符合率为50.00%，异型淋巴细胞计数大于10%，小于20%的标本15份，符合率为50.00%，异型淋巴细胞计数大于0%，小于10%的标本28份，符合率为70.00%，异型淋巴细胞计数为0%的标本为40份，符合率为66.67%。
SysmexXS-500i全自动血液分析仪检测结果：异型淋巴细胞计数大于20%的标本18份，符合率为90.00%，异型淋巴细胞计数大于10%，小于20%的标本29份，符合率为96.67%，异型淋巴细胞计数大于0%，小于10%的标本39份，符合率为97.50%，异型淋巴细胞计数为0%的标本有57份，符合率为95.00%。
由此可知，SysmexXS-500i全自动血液分析仪检测符合率明显优于人工镜检的总符合率（P
3讨论
异型淋巴细胞主要是由于病毒与B淋巴细胞受体结合形成，在不断的复制及增殖过程中，被T淋巴细胞识别，从而激发T细胞的增殖及转化，出现在循环血液中，形成细胞毒性效应，主要以T细胞及B细胞为主[2]。
近年来研究发现，异型淋巴细胞与EB病毒感染有关，EB病毒的囊膜主要由感染的细胞核膜组成，核膜上有识别淋巴细胞上的EB病毒受体，EB病毒导致的传染性细胞增多症中的异型淋巴细胞显著增多。根据异型淋巴细胞与病毒的关系，临床检验中应加强异型淋巴细胞的检查。在检测过程中，应采用最新的检查技术，提高异型淋巴细胞的检测率，确保传染性单核细胞增多症的及时确诊，及时治疗[3]。SysmexXS-500i自动化血液分析仪主要采用半导体激光照射分析技术，结合核酸染色技术，当半导体激光照射被检测细胞时，细胞内容物被侧向散射光反映出来，细胞体积被前向散射光反映出来，其中，侧向散射光被主要反映细胞内的DNA与RNA的含量，通过细胞产生的信号对异型淋巴细胞计数[4]。正常淋巴细胞的特点为体积小、颗粒少，在前向散射光及侧向散射光的二维三点图上表现为低前向散射光及侧向散射光。由于EB病毒的刺激，异型淋巴细胞表现为体积大、颗粒少等特点，在SysmexXS-500i自动化血液分析仪检测中，表现为高前向散射光、低侧向散射光，在正常的淋巴细胞上形成一个淋巴细胞群，并表现为向上拖尾的形状[5]。测定异型淋巴细胞比传染性单核细胞多了一个指标，但是由于异型淋巴细胞的形态具有多样性，大淋巴细胞的诊断难度较大，采用人工镜检技术会存在一定的误差。而SysmexXS-500i全自动化血液分析仪，可通过利用前向散射光及侧向散射光这一特性，为区分淋巴细胞提供了指标[6]。
综上情况可知，SysmexXS-500i全自动化血液分析仪检测符合率明显优于人工镜检的总符合率（P
总而言之，SysmexXS-500i全自动化血液分析仪检测异型淋巴细胞总符合率明显优于人工镜检，可将检测结果及时反馈至临床，为临床治疗提供依据。
参考文献：
[1]吴健，贾国泉，吴瑞斌，等.复发性生殖器疱疹患者外周血T淋巴细胞和共刺激分子的检测[J].中国皮肤性病学杂志，2010，24（12）：1113-1114，1124.
[2]吴毅平，王海平.肝癌肝移植受者术后检测CD4+CD25+T淋巴细胞的临床意义[J].中华器官移植杂志，2014，35（3）：146-148.
[3]栾超，杨永红，王焱，等.银屑病患者皮肤中原位记忆T淋巴细胞的检测[J].中华皮肤科杂志，2014，47（11）：800-802.
[4]李绵洋，朱平，王成彬，等.MHC五聚体方法检测基因疫苗体外诱导的抗原特异性细胞毒T淋巴细胞[J].中华检验医学杂志，2010，33（7）：686-690.
第8篇：有核细胞计数范文
【关键词】血小板计数；自动分析；镜检
【中图分类号】R-0 【文献标识码】B 【文章编号】1671-8801（2014）02-0350-02
血小板计数是诊断血液疾病和患者出凝血时间的重要资料，其结果决定诊断的正确性以及医生的治疗方案。目前血小板计数广泛采用血细胞分析仪进行检验，主要是通过电阻抗法和光学法进行原理进行检测，但对于其计数结果可能存在不准确，为此，我们对同一标本分别用镜检、血细胞分析仪法两种方法进行检验，对检验结果进行比较分析，现报道如下。
1 临床资料与方法
1.1 临床资料：2012年10-11月间，昆华医院门诊化验室患者的PLT检验标本100份，患者年龄1-85岁，平均年龄45岁；男38例，女62例。
1.2 标本留置方法：检查当日早晨空腹，用EDTA-K2抗凝管抽取静脉血2ml，上下颠倒混匀10-15次，室温放置。标本留置后1h内完成PLT计数检测。
1.3.1备与试剂；双目镜显微镜、血小板计数板；雅培五分类血细胞分析仪，血细胞分析仪的配套试剂。
1.3.2 试验方法：血细胞分析仪按照损伤流程，每天进行质量控制，用专用校准品进行仪器校正。按照检测流程对同一标本用雅培五分类血细胞分析仪单独完成全血细胞计数。镜检法PLT计数前对血细胞计数板进行校正，由两名相关工作人员按照《全国临床检验操作规程》独立完成PLT计数取两人平均值为检验结果。
1.4 统计学方法：均所有数据输入SPSS12.0进行统计分析，用配对样本和t检验，以p
2 结果
3 讨论
雅培CD-3200血细胞分析仪的原理为电阻抗法，PLT与红细胞同时进入计数池计数，根据各种细胞不同电阻来分类白细胞计数。健康人红细胞体积与血小板体积有明显差异，可以通过电阻准确区分二者。我们的恶观察结果也发现，当血小板在着呢工厂范围内时，雅培CD-3200血细胞分析仪对血小板计数结果与镜检结果差异无统计学意义。而病理情况下，当标本中有小红细胞或大血小板等血细胞时，血小板与红细胞之间有重叠，血液中可产生一些大小与血小板相似的非血小板颗粒，如红细胞碎片、小红细胞、真菌、细菌和免疫复合物等，电阻法可能将其分为血小板，而将大血小板误认为红细胞[1]。导致计数结果不准确，我们的观察结果也发现，当镜检血小板计数300x109/L组计数低于镜检计数，差异有统计学意义。提示我们用雅培CD-3200血细胞分析仪进行血细胞分析时，对异常报道结果就进行手工复核，以免出现误差，影响患者诊断与治疗。
综上所述，雅培CD-3200血细胞分析仪符合临床对血常规检验需要，可以提高检验效率，缩短检验时间，减轻劳动负荷，但对仪器提示血细胞分布异常的标本，需要采取镜检的方法进行复核，以免出现计数误差。
参考文献：
[1]朱忠勇.准确计数血小板方法学研究进展[J].国外医学临床生物化学与检验学分册，2002，23（3）：131-132.
第9篇：有核细胞计数范文
[关键词] 临床观察；沙利度胺；原发性骨髓纤维化；骨髓形态
[中图分类号] R551.3 [文献标识码] B [文章编号] 2095-0616（2016）09-131-03
[Abstract] Objective To explore and analyze the clinical effect observation of thalidomide on treating the bone marrow morphology of primary myelofibrosis. Methods 60 patients with primary myelofibrosis in clinical from August 2007 to May 2010 in our hospital were divided into control group and observation group according to random number table method，30 cases in each group.The whole patients received hydroxyurea treatment，and the observation group also received thalidomide therapy.After 6 months' treatment of the two groups，the index change levels of the size of spleen，size of liver， platelet count，hemoglobin count， white blood cell count etc in before and after treatment were compared among the two groups.In the observation group，the myelogram changes of on admission， after 1 year's treatment，after 3 years' treatment and after 5 years' treatment were evaluated. Results After treatment，in the two groups，the index change levels of the size of spleen，size of liver，platelet count，hemoglobin count，white blood cell count etc all improved，but those index change levels of the observation group were significantly better than those of the control group，the differences had statistical significance （P
[Key words] Clinical observation；Thalidomide；Primary myelofibrosis；Bone marrow morphology
原发性骨髓纤维化属于骨髓增殖性肿瘤，是造血干细胞的克隆性疾病，与原发性血小板增多症、真性红细胞增多症、慢性粒细胞白血病等并列[1]。原发性骨髓纤维化存在肝脾肿大，可见泪滴样红血细胞，临床特征为髓外造血、骨髓纤维组织增生、贫血。大量研究表明，沙利度胺治疗原发性骨髓纤维化观察骨髓形态发现沙利度胺可作用于巨核细胞，可显著改善患者的临床状态，临床效果确切[2]。探析原发性骨髓纤维化应用沙利度胺治疗对骨髓形态改变的影响及临床效果十分重要，故临床选择2007年8月～ 2010年5月本院收治的原发性骨髓纤维化患者进行沙利度胺治疗，效果满意，现报道如下。
1 资料与方法
1.1 一般资料
临床选择2007年8月～2010年5月本院收治的原发性骨髓纤维化患者60例，其中男39例，女21例，年龄25～64岁，平均（53.6±2.5）岁，纳入标准：符合中华医学会血液疾病科学会制定的原发性骨髓纤维化的诊断标准[3]，经骨髓病理活检、骨髓细胞学、外周血涂片等检查确诊。全部患者均知情同意，自愿参加本研究，经医学伦理委员会通过。骨髓病理分期：骨-骨髓硬化期（OMS期）12例，斑状增生期（中间期）24例，骨髓纤维化期（MF期）24例；观察组中男19例，女11例，患者年龄25～65岁，平均（52.6±2.4）岁，骨髓病理分期：骨-骨髓硬化期（OMS期）6例，斑状增生期（中间期）12例，骨髓纤维化期（MF期）12例，对照组中男20例，女10例，年龄25～64岁，平均年龄（53.5±2.5）岁，骨髓病理分期：骨-骨髓硬化期（OMS期）6例，斑状增生期（中间期）12例，骨髓纤维化期（MF期）12例，两组患者上述资料年龄、性别、病理分期等差异无统计学意义（P>0.05），具有可比性。
1.2 方法
对照组予以羟基脲疗法，服用1.0～3.0g/d羟基脲，观察组在此基础上予以沙利度胺疗法与羟基脲联合疗法，即服用沙利度胺50mg/次，3次/d；服用1.0～3.0/d羟基脲，两组均治疗半年，比较两组治疗前后的脾脏大小、肝脏大小、血小板计数、血红蛋白计数、白细胞计数等指标变化水平；局部麻醉髂后上棘，予以骨髓活检针应用一步法取得骨髓标本，Bouin液固定，乙醇梯度脱水后包埋，制成3um切片进行HGF染色，评估观察组的入院时骨髓象、治疗1年后骨髓象、治疗3年后骨髓象、治疗5年后骨髓象变化。
1.3 药物
药物沙利度胺片（常州制药厂，H32026129）；羟基脲片（北京赛科药业有限责任公司，H11020100）。
1.4 观察指标评估标准[4]
正常脾脏大小：长10～12cm；血小板计数：（100～300）×109/L；血红蛋白：成年男性120～150g/L；正常女性110～150g/L；白细胞计数：（4.0～10.0）×109/L。
1.5 统计学处理
分析全部数据进行SPSS19.0软件系统处理分析，计量资料以（）表示，采用t检验，P
2 结果
2.1 两组治疗前后各项临床指标的评估比较
两组治疗后的脾脏大小、血小板计数、血红蛋白计数、白细胞计数等指标变化水平均有改善，但观察组治疗后的脾脏大小、血小板计数、血红蛋白计数、白细胞计数等指标变化水平显著优于对照组，差异有统计学意义（P
2.2 观察组患者骨髓象变化
观察组患者入院时骨髓象、治疗1年后骨髓象、治疗3年后骨髓象、治疗5年后骨髓象变化：入院时患者骨髓组织、髂后上嵴造血组织均被纤维组织替代，为骨-骨髓硬化期；治疗1年患者主要为纤维组织增生，骨髓增生减少，为骨-骨髓硬化期；治疗3年患者红系细胞增生，骨髓增生增多，主要为中、晚幼红细胞增生，多核巨核细胞明显增多，为中间期；治疗5年患者骨髓增生活跃，少数造血主质内主要为粒细胞增生，均有各阶段粒细胞，主要为成熟粒细胞增生，显示浆细胞和嗜酸粒细胞；各阶段均见红系细胞，分布形态均正常，巨核细胞呈多形性改变，数目显著增多，主要为多分叶核巨核细胞增多，病理分期：骨髓纤维化期，见图1。
3 讨论
正常骨髓成熟巨核细胞通常在小梁间区间隙内单个散在分布，且不会出现集聚现象，也不会相互密接，低倍视野内正常值为8～15个/单位，但原发性骨髓纤维化患者中骨髓巨核细胞的异常在整个疾病的发生、进展中均可见，原发性骨髓纤维化患者的MF期多种骨髓造血祖细胞数目升高，尤其以巨核系细胞为主[5-6]；中间期巨核细胞系多形性更加明显，巨核细胞的数目显著上升；OMS期骨髓广泛骨硬化及纤维化，巨核细胞仍增多[7-8]。原发性骨髓纤维化患者早期无明显网状纤维或胶原纤维增生，常表现为血小板明显增多，极易漏诊，需进行早期骨髓形态观察，骨髓涂片可清晰观察细胞形态，是评估粒、红两系病态造血的最佳指标，骨髓印片是对骨髓切片造血功能的初步反馈，不受骨髓稀释的影响，可观察巨核细胞簇和巨核细胞的完整形态。
本研究探析原发性骨髓纤维化患者应用沙利度胺疗法对骨髓形态的观察，结果显示：入院时患者骨髓组织、髂后上嵴造血组织均被纤维组织替代，为骨-骨髓硬化期；治疗1年患者主要为纤维组织增生，骨髓增生减少，为骨-骨髓硬化期；治疗3年患者红系细胞增生，骨髓增生增多，主要为中、晚幼红细胞增生，多核巨核细胞明显增多，为中间期；治疗5年患者骨髓增生活跃，少数造血主质内主要为粒细胞增生，均有各阶段粒细胞，主要为成熟粒细胞增生，显示浆细胞和嗜酸粒细胞；各阶段均见红系细胞，分布形态均正常，巨核细胞呈多形性改变，数目显著增多，主要为多分叶核巨核细胞增多，病理分期：骨髓纤维化期，与刘洁等[9]的研究结果大体一致；正常骨髓中的成熟细胞进入外周血液循环前必须快速通过巨核细胞的分界膜系统[10-11]；而在原发性骨髓纤维化中，多形核中性粒细胞被陷入巨核细胞的分界膜系统，这种假扣押导致中性粒细胞的破坏及凋亡，在巨核细胞内相互作用或出现病理共生现象[12-13]，导致巨核细胞内P选择素分布异常，进而破坏巨核细胞贮存器[14]，血小板转化生长因子及衍生生长因子释放入骨髓微环境，激活成纤维细胞，进而出现骨髓纤维化[15-16]。沙利度胺的作用机理为调节免疫、免疫抑制作用，可对溶酶体膜进行稳定，对中性粒细胞的趋化性进行抑制，出现抗炎功能，同时具有5-羟色胺、组胺、抗前列腺素作用[17-18]。
综上所述，沙利度胺治疗原发性骨髓纤维化可作用于巨核细胞，可显著改善患者的临床状态，临床效果确切，值得临床推广。
[参考文献]
[1] 徐俊卿，徐泽锋，秦铁军，等.小剂量沙利度胺和泼尼松联合或不联合达那唑治疗原发性骨髓纤维化患者贫血的疗效比较[J].中华血液学杂志，2014，35（8）：698-702.
[2] 高辉，王建荣，胡凤霞，等.小剂量沙利度胺联合泼尼松治疗原发性骨髓纤维化14例[J].中国药业，2014，23（17）：96-98.
[3] 陈胜梅，孙慧，刘延方，等.原发性骨髓纤维化不同治疗方案的疗效分析[J].中国实用医药，2014，28（17）：172-173.
[4] 崔鹤仙，赵洪波，李焱，等.沙利度胺联合干扰素α-2b治疗原发性骨髓纤维化的疗效观察[J].中国美容医学，2012，21（12）：267.
[5] 王增胜，富玲，王晓敏，等.小剂量沙利度胺联合泼尼松治疗原发性骨髓纤维化13例疗效观察[J].中国医师进修杂志，2012，35（28）：46-47.
[6] 刘国新，苏楠，柴静媛.小剂量沙利度胺联合泼尼松治疗慢性特发性骨髓纤维化10例临床疗效观察[J].中国医科大学学报，2011，40（4）：380-381.
[7] 李凌君，王雪野，肖中平，等.小剂量沙利度胺治疗老年特发性骨髓纤维化37例临床观察[J].中国老年学杂志，2011，31（23）：4704-4705.
[8] 张子彦，王志英，王国平，等.丙戊酸、沙利度胺联合泼尼松治疗原发性骨髓纤维化临床疗效观察[J].中华临床医师杂志（电子版），2012，6（23）：7854-7856.
[9] 刘洁，常进，高鸿鹏，等.骨髓活检在骨髓增生减低患者诊断中的意义[J].中国药物与临床，2013，13（1）：121-122.
[10] 苏涛，张培红，徐泽锋，等.原发性骨髓增生异常综合征伴骨髓纤维化患者的临床特征和预后分析[J].中华 血液学杂志，2012，33（5）：378-382.
[11] 彭贤贵，张曦，孙佩艳，等.联合骨髓涂片和骨髓活检诊断非霍奇金淋巴瘤骨髓侵犯[J].国际检验医学杂志，2011，32（11）：1195-1196，1198.
[12] 中华医学血液学分会白血病淋巴瘤学组.原发性骨髓纤维化诊断与治疗中国专家共识（2015年版）[J].中华血液学杂志，2015，36（9）：721-725.
[13] 许静，盛梦瑶，周圆，等.建立非基因整合原发性骨髓纤维化诱导性多能干细胞株[J].中国实验血液学杂志，2015，23（5）：1415-1421.
[14] 陈烨，韩雪，白贝贝，等.骨髓增殖性肿瘤伴发血管性疾病的危险因素分析[J].中国医药，2015，10（3）：376-380.
[15] 李冰，徐俊卿，徐泽锋，等.细胞遗传学指标在439例原发性骨髓纤维化患者预后评估中的价值[J].中华血液学杂志，2014，35（11）：990-994.
[16] 俞晴，徐岚，高晓东，等.75例原发性骨髓纤维化患者临床特点和预后分析[J].中华血液学杂志，2014，35（10）：922-925.
[17] 谢琴秀，江晓平，李旭.原发性骨髓纤维化并发门静脉高压症17例临床特点分析[J].中华传染病杂志，2013，31（6）：369-370.
