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doi:10.3969/j.issn.1674-4985.2012.05.047
全血细胞分析是临床常用的参考指标,其检测值直接指导着临床工作,对疾病的诊断与治疗有着重要的意义[1]。随着临床工作量不断增加,绝大多数县级以上医院都已拥有2台以上不同型号的血细胞分析仪。此次,为了验证同一制造商不同型号血细胞分析仪各项参数检测结果之间的准确性、差异性和一致性,规范多台血细胞分析仪之间比对试验的操作,按照卫生部和新疆维吾尔自治区临检中心参比实验室的规范要求,对笔者所在医院实验室内3台全血细胞分析仪进行了比对分析研究。
1 材料与方法
1.1 材料 标本采用来笔者所在医院就诊的随机门诊患者新鲜抗凝全血。仪器类型为XT-1800I、XT-1800I、BC-3000(3台仪器均为日本 SYSMEX公司生产)。全套试剂均为SYSMEX公司提供的原装配套试剂。
1.2 方法
1.2.1 技术要求 由经技术培训合格的专业人员按相关操作流程进行操作。
1.2.2 对比试验方法 以1台经校准并验证合格的XT-1800I作为本室的基准仪器,XT-1800I、BC-3000作为比对仪器。每天随机选择10份经EDTA-K2抗凝的新鲜全血标本 (包括高、中、低值),分别在3台仪器上严格按操作说明书进行测定,每份标本连续测定2次,记录WBC、RBC、HGB、HCT、PLT的结果,再将连续测量15 d的各项数据进行计算,求出均值和CV值,制成对比表格[2]。
1.2.3 参比实验室标准 即WBC≤±3.9%、RBC≤±2.4%、HGB≤±2.1%、HCT≤±2.1%、PLT≤±6.8%。
2 结果
通过统计试验数据,求取数据平均值,3台血液分析仪之间所有检测样本各项参数的变异系数(CV)最大值相差分别是:WBC≤±3.92%、RBC≤±0.57%、HGB≤±1.76%、HCT≤±0.77%、PLT≤±1.59%。
在多次比对试验中,仅发现XT-1800I 的WBC出现了一次 CV值超出标准CV≤±3.9%(即比对仪器的WBC≤±3.92%),其他各项目检测指标的变异系数(CV值)以及在不同血细胞分析仪上的偏差(变异系数 CV%),均符合参比实验室的标准和要求。
3 讨论
从比对结果来分析,此次笔者所在医院实验室内XT-1800I、XT-1800I、BC-3000(日本 SYSMEX公司生产)3台仪器精密度均很高,其测量结果重复性好,变异系数均较小,偏倚度小,实验仪器与参比仪器检测结果有很好的相关性,差异无统计学意义[3]。其中1台XT-1800I的WBC出现1次CV值超出标准,可能是由于机器使用频率高(24 h开机)、标本量大,致使仪器耗损,导致WBC检测结果不稳定。而同类的各台仪器之间的可比性则较强,结果的一致性较好[4]。
随着医疗事业和诊疗技术的不断发展及改进,各种先进的检验仪器和新的项目正逐渐应用于临床。临床和患者也在不断的对检验科提出更高的要求,需要检验工作者为临床提供更为丰富的诊断指标、更加便捷和快速的检测方法、更加低廉的检测费用,但最重要的是提供更准确的数据。为了保证检测结果的准确性、可靠性和快捷,目前检验科亟待解决的问题就是要进一步完善实验室质量管理,规范标准化的操作程序,重视加强并规范检验人员的技术培训。通过定期对不同型号但同类的检验仪器进行新鲜全血的校准和比对试验,根据判定规则,当比对仪器检测结果超出允许范围时,用标准仪器定值新鲜全血,再用定值新鲜全血校准比对仪器,这样使比对仪器和标准仪器具有同一溯源性[5]。保证仪器的性能质量和各项参数的准确更加准确稳定,才是保证血液分析仪检验质量可靠性的重要措施。
参 考 文 献
[1] 熊立凡.临床检验基础[M].第3版.北京:人民卫生出版社,2006:80-81.
[2] 周微雅,周达利,黄作群.不同血细胞分析仪比对试验在质量控制中的应用[J].广西医学,2007,29(11):1740-1742.
[3] 徐朝,李军,蒋芬,等.多台全自动血细胞分析仪检测结果比对方法的建立[J].中国健康月刊,2011(5):65-66.
[4] 刘玲玲,冀旭峰,高洪臣.实验室内多台血细胞分析仪的校准和比对分析[J].吉林医学,2011(1):13-14.
【关键词】血细胞分析仪;校准;误差
全自动血细胞分析仪快速、方便、精确度高,是人工无法替代的阻抗法三分群。血液分析原理是溶血素破坏RBC后,根据白细胞体积大小通过计数通道时所产生的脉冲大小来对WBC进行分类计数。显微镜下计数WBC是在油镜下通过观察细胞大小、形态、染色质的结构特点,胞浆的着色特点,有无核仁等对白细胞进行分类。不同的仪器直方图是不同的,但只要是白细胞直方图出现R1、R2、R3报警,都要进行形态学复检。异常白细胞直方图只是让检验者粗略判别各类白细胞比例或有无明显异常细胞,进而进行形态学复查时注意这些变化的真正意义,而不能仅凭白细胞直方图的变化来进行诊断。血液分析仪只对典型的血液病做出提示性诊断,以便作进一步检查。如果使用不配套的试剂导致直方图不典型或对报警掌握不够,就会忽视血涂片造成漏检甚至误检。
1资料与方法
1.1样本来源:健康人及临床患者新鲜抗凝全血(EDTA-K2,抗凝真空负压采血管采集)。
1.2方法:仪器校准:用校准参考仪器MEK7222-K型血细胞分析仪之进口原装配套校准品对其进行校准,再在该仪器上将健康人新鲜抗凝全血连续测定11次,弃去第1次结果,计算其余10次各指标之均值作为新鲜血参考定值。用此定值新鲜血代替校准品对BC-5500及ABX-60两台血细胞分析仪进行校准(样本采集到校准完成4小时内结束)。
1.3比对试验:选取临床患者高、中、低值5份新鲜抗凝全血在上述校准后的各台仪器上与其他样本一同测定(测平行样取均值)。以MEK7222-K型血细胞分析仪所测结果为标准,分别计算BC-5500及ABX-60两台血细胞分析仪所测结果之偏差(CV%)。
2结果
用新鲜血校准的BC-5500、ABX-60两台血细胞分析仪之检测结果与校准参考仪器MEK7222-K分析仪之检测结果配对比较t检验,均为P>0.05,表明差别无显著性意义;RDW最大CV值为3.8%,PLT最大CV值为6.9%,MPV最大CV值为14.6%,其余各项指标CV值均<3.0%,五项基础指标之偏差均小于卫生部临检中心允许的可接受范围:WBC<2.8%、RBC<2.5%、HGB<2.0%、HCT<2.6%、PLT<6.9%。
3讨论
血细胞分析是临床最常用的实验室检测指标,其结果的准确与否直接影响到多种疾病的诊疗。全自动血细胞分析仪由于计数准确,精密度高,操作简便、快速,因而发展迅速,已逐渐取代传统手工方法,成为临床实验室的主要检测手段。但由于生产血细胞分析仪的厂家多,各自使用的测定原理和方法不尽相同,导致其测定结果及参考范围有所差异。国内各医院使用不同厂家和型号的血细胞分析仪已成为普遍现象,致使分析结果呈现不同程度的差异,给临床跟踪观察与对比带来困难。
血细胞分析结果只有直接或间接地溯源至参考方法,才能保证检测结果的正确性和不同仪器间结果的可比性。血细胞分析仪校准品是权威部门认可的标准物质,只能用于与之配套的同一品牌型号的仪器,由于其价格昂贵、有效期短、进口入关手续复杂而不能及时获得等问题,使其难以在实验室推广。
所谓自动血细胞分析仪实际上就是一台比较器,它将实测数据与校准数据进行比较,继而得出检测标本的分析结果。由此可见,校准物在仪器测定结果的准确是否上起到决定性作用。最好的校准品是经ICSH推荐的参考方法定值的新鲜人体血液:①氰化高铁血红蛋白法测定血红蛋白(HGB)。②微量红细胞压积法测定红细胞比容(HCT)。微量计数板手工计数RBC和WBC。③相差显微镜计数血小板,该新鲜血适用于各种型号仪器的校准。有报道可购买一台性能最佳血细胞分析仪之配套校准品校准该仪器,再以该仪器作为校准参考仪器取得新鲜血各项参数用于其他多台仪器的校准。上述比对结果显示:用新鲜血校准的BC-5500及ABX-60两台血细胞分析仪与校准参考仪器MEK7222-K分析仪各参数间进行配对资料t检验,均为P>0.05,表明差别无显著性意义;五项基础指标之CV值均小于卫生部临检中心允许的可接受范围:尤以WBC、RBC、HGB、HCT四项指标的符合性最好。因EDTA-K 2抗凝血中,血小板体积不稳定,随时间延长而增大,可能是导致PLT、MPV偏差较大的主要原因。
实验结果证明,用配套校准品校准一台性能最佳血细胞分析仪,再用新鲜血在该仪器上取得参数后去校准其他多台分析仪可取得满意结果,该方法既简便易行又经济实用。
参考文献
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[2]叶应妩,王毓三,申子瑜,等.全国临床检验操作规程.南京:东南出版社,2006:47-81.
[3]顾可梁,陈军浩,谷俊侠,等.医学实验诊断学进展.南京:东南大学出版社,2000:47-53.
【关键词】 迈瑞BC-3000血细胞分析仪;白细胞分类;白细胞复检率
WBC的分类计数具有广泛的临床意义, 准确的WBC分类显得尤为重要。随着科学的不断发展, 血细胞分析仪也应运而生。更是因为血细胞分析仪操作简便快速、结果的精密和准确度比较高, 在拥有少量血液即可为临床医学研究提供多项、及时、可靠和有效的分析参数的情况下, 人们更乐意采用这种技术极大地提高血液检验结果的效率和质量, 为人类健康进行服务。
1 资料与方法
1. 1 一般资料 收集2014年1月1日~10月31日社区内PLT正常或者是增高减低的患者标本6000例, 其中正常组4000例, 均为2014年1月1日~10月31日中社区医院接待的健康体检者, 男2007例, 女1993例, 年龄18~66岁。PLT异常组2000例, 增高组500例, 其中男280例, 女220例。PLT减低组1500例, 男750例, 女750例。
1. 2 仪器 迈瑞-3000血细胞分析仪是2005年迈瑞公司出品的, 具有10.2〃彩色大屏幕LCD同屏显示所有参数和直方图的血细胞分析仪。主机能自动存储35000份样本的全部参数(包括直方图), 历史数据的管理、查询更便捷。是中国血液细胞分析仪首家通过CE认证的产品。
1. 3 方法 将收集到的6000例血小板计数值正常或者是增高减低的患者标本根据Sysmex XT-2000i血细胞分析仪、雅培1700血红细胞分析系统收集到的数据, 同迈瑞BC-3000血细胞分析仪作比较, 对比三部分析仪测定PLT及MPV、PDW、PCT结果。血小板正常及异常组标均为EDTA-K2抗凝血2 ml, 质控品恢复室温。将标本和控制品充分混匀, 但要避免因剧烈震荡或混匀时间过长造成溶血或产生气泡, 使血小板及其计数产生误差。室内质控要求血小板计数每次均在控。
1. 4 统计学方法 采用SPSS13.0统计学软件进行数据统计分析。计量资料以均数±标准差( x-±s)表示, 采用t检验。P
2 结果
迈瑞BC-3000检测系统WBC在极低值医学决定水平处值上, 与目标系统不具有任何可比性, 见表1。而Sysmex XT-2000i血细胞分析仪和雅培1700血红细胞分析与迈瑞BC-3000血细胞分析仪之间在PLT及MPV、PDW、PCT中比较, 差异无统计学意义(P>0.05)。
3 讨论
血小板计数是临床反映患者止血与血栓疾病的一种常用的指标, 也是MPV、PDW、PCT等可靠性的基础。而血细胞中的白细胞是一个庞大的血细胞家族, 其形态结构和生理功能是多样的, 但是不是相互孤立的, 在机体的防护、免疫和创伤愈治过程中起协同作用。尽管它们是血液中的一类细胞成分, 但其功能的发挥, 更多地体现在循环管道外的器官组织中[1]。在功能方面它们与这些器官组织中的许多细胞成分如巨噬细胞、肥大细胞、成纤维细胞等密切相关。因此, 每仪器血细胞标本的数据都有重要的作用, 可是每一款代器对血小板计数都存在或多或少的差异, 常常影响临床对疾病的诊断和治疗效果的评估。WBC以前称为白血球。血液中的一类细胞, 是人类身体里面与疾病做斗争的“护卫队”。根据白细胞的细胞质内有无特殊颗粒, 可将其分为有粒白细胞和无粒白细胞。前者常简称为粒细胞, 根据其特殊颗粒的染色特性, 又分为中性粒细胞、嗜碱性粒细胞和嗜酸性粒细胞。白细胞也通常被称为免疫细胞。在显微镜下可以看到, 血细胞中体积比较大、数量比较少、具有细胞核。其主要作用是吞噬细菌、防御疾病。
本次就迈瑞BC-3000血细胞分析仪白细胞分类及其复检率进行研究, 对正常组的研究发现, 当血小板的形态和数量基本正常时, 血小板和红细胞共同通过计数闭, 血小板的大小分布能清楚地与红细胞区分开来。由于红细胞破坏后形成2.0 fl左右碎片, 容易被误认为血小板, 使血小板及其参数计数假性升高, 这种情况在新生儿较多见[2]。由于测血小板与红细胞在一个检测系统, 当红细胞体积偏小时, 即被误认为是血小板, 从而使血小板计数假性升高[3]。
综上所述, 迈瑞BC-3000血细胞计数仪测定能够很好地为临床医学服务。
参考文献
[1] 边红放.血细胞分析仪血小板检测的影响因素及对策.医疗装备, 2011, 24(3):56.
[2] 郭玉娥, 赵洪泉, 赵志明.血细胞分析仪计数血小板的影响因素. 中国误诊学杂志, 2012, 5(1):152-153.
[关键词] 血小板;血细胞计数仪;散点图;直方图;假性血小板减少
[中图分类号]R446.11+1[文献标识码]B[文章编号]1673-7210(2008)11(b)-063-02
血细胞分析仪具有高效、快捷、重复性好等优点,已被各家临床医院广泛应用,但应用中血小板计数时常出现假性血小板减少,令操作者真假难辨,相关报道甚少,本文就我院2006年中47例假性血小板减少原因分析如下:
1 对象与方法
1.1 研究对象
本院2006年门诊及住院患者中47例血小板假性减少者,男27例,女20例。末梢血标本17例, EDTA-K2抗凝静脉血标本30例。
1.2 仪器
美国库尔特HMX血细胞分析仪及配套试剂。日本希森美康KX-21血细胞分析仪及配套试剂。日本OLYMPUS显微镜及草酸铵法血小板稀释液。
1.3 方法
对47例假性血小板减少患者,根据全国血液学复检专家小组指定的复检标准,对于仪器计数血小板偏低、仪器有报警提示、散点图及直方图异常时,推片镜检血小板形态及分布情况;重新采血按《全国临床检验操作规程》第3版要求进行显微镜下草酸铵法血小板复检,计数3次取均值;末梢血预稀释后,EDTA-K2抗凝静脉血标本应放置室温30 min充分混匀后进行血细胞分析。
2 结果
10例患者的末梢血标本,经显微镜下草酸铵法血小板计数结果得以纠正,同时血涂片瑞氏染色后镜检观察血小板形态及分布未见异常。
7例末梢血标本,10例EDTA-K2抗凝静脉血标本经室温30 min后进行血细胞分析及草酸铵法血小板计数结果均得以纠正,血涂片瑞氏染色后镜检观察血小板形态及分布未见异常。
8例EDTA-K2抗凝静脉血标本经室温30 min后进行血细胞分析结果仍然减少,草酸铵法血小板计数结果得以纠正,血涂片瑞氏染色后镜检观察发现血小板大小不等聚集团块。
5例EDTA-K2抗凝静脉血标本经室温30 min后进行血细胞分析血小板计数结果仍然减少,草酸铵法血小板计数结果纠正,血涂片瑞氏染色后显微镜下观察发现“血小板卫星现象”。
7例EDTA-K2抗凝静脉血标本经室温30 min后进行血细胞分析结果仍然减少,草酸铵法血小板计数结果得以纠正,血涂片瑞氏染色后镜检观察发现巨大血小板体积。
3 讨论
10例末梢血标本假性血小板减少患者,多因穿刺组织损伤、组织凝血因子混入血标本中产生肉眼无法见到的凝块[1],是造成血细胞分析仪计数血小板假性减少的直接原因,对此类末梢血标本假性血小板减少患者,应该予以阅片,必须重新采血。
7例末梢血标本,10例EDTA-K2抗凝静脉血标本经室温30 min后进行血细胞分析得以纠正的患者,考虑血液离体后血小板产生可逆性聚集,使血小板计数结果偏低。末梢血标本经过预稀释随着与稀释液作用时间延长血小板均匀离散,抗凝静脉血标本中的EDTA-K2随着放置时间延长亦能使血小板逐渐离散[2],因此采取经室温放置30 min充分混匀后进行血细胞分析可避免血小板假性减少的发生[3]。
8例血涂片瑞氏染色后显微镜下观察发现血小板呈大小不等聚集团块。此类患者多见于肿瘤、自身免疫病、肺心病、晚期孕妇、肝病、毒血症等一些不明原因产生凝集素,使EDTA-K2抗凝血中血小板聚集呈大小不等团块,血细胞计数仪会把这些凝集团块当作白细胞来计数,这样血小板计数结果将假性减少,而白细胞数量增加;对于此类血小板减少一般仪器可有警报提示和散点图、直方图异常,库尔特HMX血细胞分析仪会在WBC结果后面做出[*R]提示,WBC散点图DF1、DF2图像下方血小板区细胞分布密度向右延伸[4],提示有血小板凝集的存在;希森美康KX-21血细胞分析仪会在WBC结果后面做出WL提示,WBC直方图上Ghost区和SCR之间的鉴别线与直方图交点抬高,提示有大颗粒存在。对此类患者采用草酸铵法血小板计数。
5例血涂片瑞氏染色后发现“血小板卫星现象”。“血小板卫星现象”是偶见于EDTA-K2抗凝血中,血小板黏附、围绕于中性粒细胞(或偶尔黏附于单核细胞)的现象,系EDTA和白细胞表面的IgG或Fc片段相互作用、非特异性结合血小板表面的GPⅡb/Ⅲs所致,虽与疾病和药物无关,这些黏附、围绕于中性粒细胞的血小板被误计为白细胞,造成血小板假性减少[5],由于“血小板卫星现象”造成血小板减少,可造成仪器对白细胞分类不确切,应采取草酸铵法血小板计数纠正,有文献报道用枸橼酸盐抗凝可消除此现象。
7例血涂片瑞氏染色后发现血小板体积偏大。这类患者多见于肿瘤、白血病、肝病。一般血细胞分析仪计数血小板阈值在2~30 fl,因此血小板体积大于30 fl时,超过仪器计数血小板阈值,不被纳入血小板计数范围,被误认为是小红细胞,因此是血小板计数结果偏低[6,7],对此库尔特HMX血细胞分析仪WBC散点图DF1、DF2图像下方血小板区细胞分布密度向右延伸[4],MPV值增高,PLT直方图底部分布较宽,提示有血小板凝集的存在;希森美康KX-21血细胞分析仪RBC结果后面出现RL、MPV值增高,PLT直方图底部分布较宽,鉴别线与直方图的交点抬高。此时应采用草酸胺法血小板计数纠正其结果。
综上所述,根据全国血液学复检专家小组制定的复检标准,对于仪器计数患者血小板偏低时,仪器有报警提示、散点图及直方图异常,应及时推片镜检及采取草酸胺法血小板计数纠正其结果,避免假性血小板减少现象发生,以提高检验结果的准确性。
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【关键词】 白细胞;细胞仪分类;手工分类
Reliability analysis of the credibility of WBC by BC-5500 hematology analyzer
XU Jin-hua,HUANG Yu-hui,HUANG Ri-jiao,et al.
Department of Clinical Laboratory,The Fifth Affiliated Hospital of Sun Yat-sen University,ZhuhaiGuangdong519000,China
【Abstract】 Objective To analyse the BC-5500 hematology analyzer of the white blood cells to the credibility of the five categories. Methods The classification of the equipment within and between-batch precision measurement,Physical examination were normal people,normal patients and patients with blood diseases diagnosed specimens instruments classified at the same time with the manual classification,and statistical analysis.Results BC-5500 hematology analyzer of the classification of white blood cells good reproducibility and high precision. Conclusion BC-5500 hematology analyzer of the white blood cell classification technology has reached a higher level.
【Key words】 White blood cell; Cytometry classification; Manual classification
作者单位:519000中山大学附属第五医院检验科
本科于2008年引进了两台深圳迈瑞生物医疗电子股份有限公司生产的BC-5500血液细胞分析仪,在使用了一年的时间里,笔者对该仪器的分类计数与手工分类进行了对照,以了解该仪器的白细胞分类情况。
1 对象和方法
1.1 仪器 中国深圳迈瑞公司的BC-5500; OLYMPUS 3100 显微镜;改良Neubauer 计数盘。
1.2 试剂 BC-5500 配套试剂;瑞氏染色液:按《全国临床检验操作规程(第3 版) 》的方法配置[1]。
1.3 标本 本院体检中心体检者50例,确诊的血液病患者50例,其他患者50例。标本均为新鲜EDTA -K2抗凝全血。
1.4 方法 采集受检者空腹静脉血2 m l,注入由广州阳普医疗科技股份有限公司提供的含EDTA -K2 的真空管内立即轻轻颠倒混匀(8~10 次),3 h内检测完毕。BC-5500 型分析仪按要求进行日常保养, 确定仪器处于良好的工作状态, 每天做室内质控。
1.4.1 准确度测定 分别采集体检中心体检者50例,住院部确诊的血液病患者50例,其他住院患者50例,先用BC-5500计数三次白细胞的分类百分比,再由2名检验技师严格按照《全国临床检验操作规程(第3 版)》用显微镜直接计数法进行分类计数,每人每份标本分别计数三次,并对两种方法的百分比结果进行分析。
1.4.2 精密度测定
1.4.2.1 批内精密度 取高、中、低三种标本分别连续测定 11 次,2~11 次求出白细胞分类各项 CV(%)。
1.4.2.2 批间精密度 用深圳迈瑞公司提供的质控物连续测定 20 d,求出白细胞分类各项 CV(%)。
1.5 统计学处理 采用SPSS 11. 0 统计软件进行统计分析。计量资料以均数±标准差(x±s)表示,比较采用t检验,P
2 结果
2.1 精密度
2.1.1 批内精密度,结果见表1。
表1
高、中、低 3 种标本检测结果的 CV(%)
项目 高值中值低值
中性粒细胞4.355.105.67
淋巴细胞 5.015.986.23
嗜酸性粒细胞 4.865.235.87
嗜碱性粒细胞3.564.034.99
单核细胞 5.235.516.01
2.1.2 批间精密度 中性粒细胞:4.42,淋巴细胞:4.05,嗜酸性粒细胞:5.20,嗜碱性粒细胞:5.23,单核细胞:5.71;均在仪器设定的范围之内。
2.2 准确度 BC5500 型分析仪分类与手工法镜检分类结果的比较,结果见表2。
表2
BC5500 型分析仪对白细胞的分类与手工法镜检分类结果的比较
组别细胞分类 例数仪器分类(%)手工分类(%)
体检中心体检者中性粒细胞50 55.9±9.00* 54.3±8.60
淋巴细胞34.7±9.75* 32.6±9.21
嗜酸性粒细胞 3.20±2.10* 2.96±2.96
嗜碱性粒细胞0.40±0.40# 0.21±0.20
单核细胞5.85±1.75# 3.55±2.20
确诊的血液病患者1中性粒细胞46 49.1±36.5* 50.1±34.6
淋巴细胞47.5±37.7* 42.1±39.5
嗜酸性粒细胞 5.80±5.10* 5.30±4.98
嗜碱性粒细胞 0.25±0.25# 0.12±0.10
单核细胞17.1±16.4# 13.6±13.2
确诊的血液病患者2中性粒细胞4 51.6±33.5
淋巴细胞43.2±36.1
嗜酸性粒细胞2.01±2.68
嗜碱性粒细胞0.41±0.16
幼稚细胞23.1±10.7
单核细胞3.61±2.08
其他患者中性粒细胞5049.5±33.7*47.9±34.8
淋巴细胞41.6±33.0*39.7±35.1
嗜酸性粒细胞8.00±7.90*7.56±8.20
嗜碱性粒细胞0.40±0.30#0.11±0.15
单核细胞 9.95±5.15#6.53±5.30
注:两种方法比较,* P>0.05,#P
3 讨论
迈瑞公司生产的BC 5500 型分析仪运用激光, 流式细胞术, 细胞化学染色等多项技术, 利用细胞内颗粒的密度,核分叶对激光的折射等先进手段, 通过1°~ 5°的低角度和8°~20°高角度激光散射对细胞进行计数和分类。因此BC 5500型分析仪用于非血液患者的细胞计数是可行的。通过批内和批间精密度结果分析,BC-5500血细胞分析仪分类计数的CV值均在仪器设定的范围之内,精密度较高,重复性好。对非特殊性的标本,该仪器能够准确的作出分类。
由表2 可知:无论普通体检组还是患者组, 中性粒细胞、淋巴细胞、嗜酸性粒细胞, 仪器分析与手工镜检结果比较差异无显著性 (P>0.05)且相关性非常显著(r= 0.916)。患者组仪器法伴有不同提示的, 镜检分类均有不同程度的变化。体检组和普通患者组单核细胞、嗜碱性粒细胞, 仪器分类与镜检结果差异有显著性(P
综上所述,BC-5500血细胞分析仪对白细胞的分类情况已经达到了较高的水平,足以满足临床的基本需要。当然,作为一种全血细胞分析仪白细胞分类方法只能作为一种过筛手段进行初检[3], 对于血液中各种细胞的多形态, 多变化的特点, 仪器的识别能力不如人工显微镜检查准确。在使用全自动分析仪时一定要注意, 先进的仪器不能完全替代显微镜分类, 当血细胞数量、比例、分布图、散点图有异常时[4], 应该做血涂片人工镜检, 以免漏诊异常形态细胞和血液系统疾病。
参 考 文 献
[1] 中华人民共和国卫生部医政司.全国临床检验操作规程.东南大学出版社,2006:136.
[2] 唐沪强, 许凯声, 扬律.STKS 血细胞分析仪白细胞分类结果评价.上海医学检验杂志, 1999, 14(2):82.
【摘要】血细胞分析仪具有快速、方便、重复性好、工作效率高等优点,但是由于自身检测原理的限制以及血小板易于粘附、聚集、破坏等特点,血细胞分析仪测定血小板时常常会出现假性减少现象。为此,现将血细胞分析仪计数血小板出现假性减少的原因进行简单的探讨。
【关键词]】血细胞分析仪 血小板假性减少 原因分析
近年来,随着科学技术的发展,医学检验技术的不断完善,血液分析仪器法检测已逐渐取代了手工计数,血细胞分类的仪器检测的准确度也大大提高,全自动血细胞分析仪在临床检验中的应用也越来越广泛,提高了临床检验的工作效率,然而,仪器检测受多种因素的影响以及血小板易于粘附、聚集、破坏等特点,血细胞分析仪测定血小板时常常会出现假性减少现象,致使检测结果与实际临床不符,给医生的诊断带来很大困难,也使检验医师不敢冒然报告。为此,现将血细胞分析仪计数血小板出现假性减少的原因进行简单的探讨。
1 标本采集
正确采集血标本是获得准确、可靠实验结果的关键。在样本采集前, 应根据实验要求决定采血方法、所需血量及适用抗凝剂。
1.1 皮肤采血:采血不顺利、多发生在老人,儿童及体质较差的的患者,因采血不顺引起组织损伤,易于凝血、混入组织液,而且局部皮肤揉擦、针刺深度不一、个体皮肤厚度差异等都会影响检查结果;凝血因子混入血标本造成血小板集聚。所以,采血部位的皮肤应完整,无烧伤、冻疮、水肿或炎症等。皮肤消毒后,应待75%乙醇挥发后采血,避免流出的血液扩散而不成滴。采血时针刺深度2~3mm。因第一滴血混有组织液,应擦去,如血流不畅切勿用力挤压。
1.2 静脉采血: 静脉采血时止血带结扎时间应小于1分钟,待消毒液干后再进行穿刺,避免反复穿刺将组织液抽到注射器内,或将气泡混入。应熟练掌握操作方法,抽血不宜过快,避免抽血过快血小板破坏,影响结果的准确性。
1.3 抗凝剂EDTA的影响:按照国际血液学标准化委员会(ICSH)的建议,1.5~2.2mg的EDTA-2K抗凝1ml的全血可以抑制血小板聚集,从而达到抗凝的目的。但有极少数人的血小板在用EDTA抗凝时,反而会出现血小板聚集,这种EDTA依赖性假性血小板减少可能与血浆中存在的抗血小板抗体和/或抗心磷脂抗体等自身抗体有关。另一种现象是血小板粘附于白细胞上的“血小板卫星现象”,它是由于白细胞表面的IgG或Fc段与血小板表面的GPⅡb/Ⅲa结合所致,与疾病和药物也无关。对于这类标本,只能换用非EDTA抗凝剂进行重新计数,比如枸橼酸盐或在EDTA抗凝血中加入肝磷脂1。
1.4 标本放置时间不足:在实际工作中,采取标本后立即进行检测,有时会出现血小板计数假性减少现象。用EDTAK2作为抗凝剂已被国际血液学标本委员会认定并广泛应用。EDTAK2会使血小板形态发生变化,其外膜形成微小管。游离端向外伸展形成伪足聚集一体。此时测定血小板会假性减低,直方图呈锯齿状异常。但随着时间延长可逆性聚集体会破坏。因此采取室温放置30分钟可以避免这种情况的血小板假性减少。
2 标本检测
2.1 检测前,对检测仪器进行检查、校准,使其处于最佳工作状态。每天坚持做室内质控,并根据质控结果判断当日检测的所有数据是否可靠。
2.2 检测中,注意环境温度应在18-25°C,低于15°C或高于30°C时均会对结果产生影响。
2.3 检测后,对出现明显异常的标本及时查找原因,重新测试,遇到危急值结果的,及时与临床医师联系。
巨大血小板导致血小板计数假性降低:病人由于某些疾病血小板体积较大,超出了血细胞分析仪测定血小板的阈值,使血小板计数假性降低。此种情况可见血小板直方图底部分布较宽,MPV值较高。
3 小结
血小板计数对血栓与出血性疾病的诊断和治疗有重要的参考价值。在实际工作中,要排除一些干扰因素,保证血小板检测结果的准确性,作为检验人员一定要具有很强的责任心,加强质控管理,不断提高检测结果的准确性,为临床提供可靠的诊断和治疗依据 。
参考文献
[1] 全国临床检验操作规程(第3版)
[2] 李骏浅析血细胞分析时血小板假性减少原因
关键词:网织红细胞;全自动血细胞分析仪;疟原虫
Evaluation of performance of ADVIA2120blood-counter system for detection of reticulocytes.
Abstract:Objective To evaluate the performance of ADVIA2120for the test of reticulocytes. Methods ADVIA2120was used for detection of high/normal/low reticulocyte samples and the reproducibility,the rate of carrying contamination and stability were observed.The results were compared with manual method. Results Reproducibility:except that the CV of high nucleic acid was13.82%~17.4%,the CV of the other indexes was less than8.19%;linearty:r=0.9979;stability:percentage CV of Ret at4℃in24hwas3.8%;the rate of carrying contamination was0.22%;compared with the manual methods:r=0.9962,P>0.05. Conclusion The srate of carrying contamination by using ADVIA2120blood-counter system in test of reticulocytes is low,stable and showing a nice linear correlation suitable for clinical use.
Key words:Reticulocytes;Automatic blood-counter system;Plasmodium
网织红细胞(Reticulocytes,Ret)传统的人工测定烦琐而费时,准确性受操作人员的经验、水平、细胞计数量、染色效果及涂片质量等因素影响大,重复性也差。全自动血细胞分析仪测定网织红细胞应用逐渐增多,因临床应用时间不长,其性能尚有待观察。ADVIA2120全自动血细胞分析仪是拜耳公司新推出的五分类机型,配备全自动网织红细胞分析功能,可提供14项相关参数,因部份指标临床意义尚无确论,故本文仅选择6项与细胞数量相关的指标进行评价。现进行重复性、线性、携带污染率、稳定性测试,并与手工百分率分类结果进行比较,报道如下。
1 资料与方法
1.1 资料
1.1.1 标本来源 住院患者,网织红细胞按仪器初步测量结果分为高、中、低三类。
1.1.2 设备 美国ADVIA2120全自动血细胞分析仪、日本OLYMPUSBX-60多功能光学显微镜、上海医疗设备厂HH-W21-600电热恒温水育箱、姜堰康健医疗器具有限公司KJRM-1摇匀器。
1.1.3 ADVIA2120全自动血细胞分析仪原装配套试剂及全血质控品(批号0605204);珠海贝索公司网织红细胞染液和瑞氏染液,按试剂使用说明操作。广州阳普公司EDTA-K2血常规抗凝管(批号0602012)。
1.2 方法 按相关评价原则,ADVIA2120全自动血细胞分析仪重复测定样本,评价仪器日内精密度、日间精密度、线性、携带污染率和稳定性,测定前摇匀器正、反向摇动3min。
1.2.1 日内精密度 按美国临床实验室标准化委员会(NC-CLS)制定的方案 [1] ,选择本院住院患者血样,网织红细胞按仪器初步测量结果分为高、中、低三类,各1份,每份重复测定10次,并计算平均值(x)和变异系数(CV)。
1.2.2 日间精密度 因临床血标本稳定性差,故以原厂全血质控品每日9:00、12:00、16:30测定三次,取均值,连续测定10d,并计算平均值(x)和变异系数(CV)。
1.2.3 线性评价 按美国临床实验室标准化委员会(NCCLS)制定的线性验证方案EP6-A [2] ,选择一份网织红细胞细胞高值样本,在技术指标范围内做比例稀释,仪器测定各浓度2次,取均值,所得数据进行回归分析。
1.2.4 携带污染率 按国际血液学标准化委员会制定的程序 [3] ,将高值样本连续测定3次(H 1 、H 2 、H 3 ),紧接着连续测定低值样本3次(L 1 、L 2 、L 3 ),携带污染率结果为[(L 1 ~L 3 )/(H 3 -L 1 )]×100%。
1.2.5 稳定性试验 因血样皆为低温保存,考虑温度为主要影响因素。取一份血样分为3管,放置于4℃冰箱。分别于0min、15min、30min、45min、1h、2h、3h、4h、5h、6h、7h、24h、48h、72h每个时间点测定3次,取均值。
1.2.6 相关性评价 按NCCLS H20-A1 [4] 文件,将30份标本制作3张血片,2名有经验的主管技师随机各选一张,双盲法计数网织红细胞百分率 [5] ,取均值后与仪器测定结果进行相关性比较。
1.3 统计学处理 采用SPSS10.0统计软件进行配对t检验和回归分析。
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2 结果
2.1 日内精密度测试 高值项目日内精密度较好,低值项目高核酸浓度网织红细胞比率(%)日内精密度偏大。见表1。
表1 ADVIA2120网织红细胞测定日内精密度(略)
2.2 日间精密度测试 高值项目日间精密度较好,低值项目高核酸浓度网织红细胞比率(%)日精密度偏大。见表2。
表2 ADVIA2120网织红细胞测定日间精密度(略)
2.3 线性评价 初始计数为0.38×10 12 /L的样本按比例稀释后理论结果为(0.304、0.228、0.152、0.076、0.038)×10 12 /L,实际测定结果为(0.298、0.231、0.148、0.063、0.033)×10 12 /L,得回归曲线y=1.0225x-0.0086,相关系数r为0.9989,P>0.05。(见图1)
2.4 携带污染率 高值样本3次测定结果分别为H 1 =0.64×10 12 /L、H 2 =0.67×10 12 /L、H 3 =0.65×10 12 /L,低值样本3次测定结果分别为L 1 =0.03×10 12 /L、L 2 =0.03×10 12 /L、L 3 =0.02×10 12 /L,携带污染率0.22%。稳定性试验:4℃冷藏后测定,百分率结果均值分别为6.42%(0min)、6.18%(15min)、6.27%(30min)、6.19%(45min)、6.33%(1h)、6.22%(2h)、6.34%(3h)、6.28%(4h)、6.21%(5h)、6.35%(6h)、6.37%(7h)、6.25%(24h)、5.68%(48h)、5.21%(72h),结果显示24h内网织红细胞百分率变化无统计学意义(P>0.05),48h后网织红细胞百分率降 低,变化有统计学意义(P0.05)。
图1 ADVIA2120全自动血细胞分析仪网织红细胞线性评估(略)
图2 网织红细胞ADVIA2120测定与手工法测定相关性(略)
3 讨论
网织红细胞测定在各种贫血的鉴别诊断、疗效观察、肿瘤患者放、化疗后骨髓造血功能评估等有着重要的临床意义,及时、准确的网织红细胞测定有利于动态了解骨髓红系增生情况。ADVIA2120全自动血细胞分析仪网织红细胞测定原理是先用戊二醛和十二烷基硫酸钠将红细胞球形化并固定,氧氮杂芑750使RNA染蓝色,着色程度与RNA含量成正比,细胞通过FLOWCELL在激光照射下产生散射,应用MIE原理,得到网织红细胞的14项测量参数和计算参数,因对网织红细胞血红蛋白浓度分布宽度、血红蛋白含量分布宽度等指标临床意义尚无确论,故仅选择6项与细胞数量相关指标进行评价。
从结果看,ADVIA2120全自动血细胞分析仪网织红细胞测定具有良好的精密度,除高核酸浓度网织红细胞比率因计数值较低,故cv值在日内和日间偏大外(13.82%~17.4%),其它项目cv值在1.18%~8.19%之间,处于理想范围之内。稳定性测试表明4℃24h内网织红细胞百分率结果稳定,结果的差异无统计学意义(P>0.05,CV3.8%),48h后网织红细胞百分率降低。低温虽能减缓红细胞新陈代谢,但网织红细胞向成熟红细胞的转化未完全停止,时间过长导致RNA降低的比率增高并出现统计学意义(P0.05,图1),携带污染率低(0.22%),达到临床应用要求。与手工法的百分率结果比较相关性佳(r=0.9962,P>0.05,图2),考虑到仪器法检测细胞数量大,可有效避免细胞在血片分布上的统计学误差,特别是低值测量结果,因此仪器法应更为理想。临床应用中遇1例疟疾患者样本,入院仪器查血色素68g/L,RBC2.23×10 12 /L,网织红细胞计数0.32×10 12 /L,网织红细胞百分率14.35%,经外周血片瑞氏染色,感染虫体之RBC为10.3%(计数1000个RBC),抗疟治疗3周后查血色素85g/L,RBC3.03×10 12 /L,网织红细胞计数0.08×10 12 /L,网织红细胞百分率2.64%,外周血片瑞氏染色未查见虫体和受染RBC。文献报道受疟原虫感染的RBC中RNA含量是增加的 [6] ,那受染RBC在RNA增高时是否归为网织红及RNA不高时如何区分则缺乏妥善的处理办法。在手工煌焦油蓝活体染色、ADVIA2120的氧氮杂芑750染色及sysmex2100的荧光染色不能分辨的情况下,对疟疾血样做外周血片瑞氏染色,计数受染细胞比例,可大致判定干扰程度。
总体而言,ADVIA2120全自动血细胞分析仪网织红细胞测定避免了传统手工法的诸多缺点,如肉眼判读的主观性、细胞的分布误差、检测的低效率等问题,在全血分析时可根据情况随时选择加做网织红分析,无需再取血样,其便利性和高效性是手工法无可比拟的,加之重复性、稳定性、准确性及携带污染率各指标均符合临床应用要求,在有条件的医院全自动仪器法测定网织红细胞是很好的选择。
参考文献
[1]Evaluation of the Linearity of Quantitative Measurement Procedures:A Sta-tistical Approach;Approved Guideline.NCCLS document EP9-A2,2002.
[2]Evaluation of the Linearity of Quantitative Measurement Procedures:A Sta-tistical Approach;Approved Guideline.NCCLS document EP6-A.Vol.23,2003.
[3] Protocol for evaluation of automated hematology analyzer.ICSH.Clin Lab Heamotal,1984,6:69.
[4]Reference leukocyte differential count(Proportional)and evaluation of in-strument methods,NCCLS document H20-A,vol12,1992.
关键词:迈瑞BC-2600全自动血球计数仪 仪器性能 总重复性
近年来,我镇进行迈瑞BC-2600全自动血球计数仪监测工作,以手工法检测结果的对照研究已取得部分进展,仪器法方便快捷,省时省力,能大批量开展工作,但部分检测结果不如手工法可靠,不能完全替代手工法,而且手工发费时费力,速度慢,但在细胞低,特别是占百分比较低的细胞分类方面比仪器法更可信。
血细胞分析仪所检测的项目(血红蛋白测定、红细胞计数、白细胞计数、红细胞体积、血小板计数)是临床上应用最为广泛的实验室指标,其结果直接影响对病人的诊断及治疗。为了解我们所使用仪器的性能,根据国际血液学标准化委员会(ICSH)公布的有关血细胞分析仪的评价方案,我们对深圳迈瑞公司BC一2600全自动血细胞分析仪进行总重复性评价,结果报告如下。
1材料和方法
1.1 仪器及试剂BC一2600全自动血细胞分析仪、配套试剂、校准品。
1.1 仪器及试剂BC一2600全自动血细胞分析仪、配套试剂、校准品。
1.2 样品临床就诊人员的EDTA―K2抗凝(1.5―2.0mg)、静脉血2.0ml。
1.3 使用MICROSOFr EXCEL软件进行统计分析
1.4 项目 WBC、RBC、HGB、MCV、PLT。
1.5 方法随机抽取按操作规程正常采集的EDTA―K2抗凝静脉血液20份,按常规方法分别测定WBC、RBC、HGB、MCV、P 各三次,每次间隔时间为2小时,从标本采集到第三次测定完成累计时间不超过6小时。根据测定数据计算WBC、RBC、HGB、MCV、PLT的总重复性(即各项目的CV% )。
1.6 计算公式
1.6.1 组内离均差平方和(SSQ)计算:SSQ=∑(各测定值)
2一∑(各标本小计) 2/n
n为重复测定次数,本实验重复测定次数为3次。
1.6.2 总重复性计算(用不精密度CV%表示):
3讨论
经过对BC一2600五个项目的测定,得出白细胞计数(WBC)、红细胞计数(RBC)、血红蛋白测定(HGB)、平均红细胞体积(MCV)、血小板计数(PLT)的总重复性(以CV%计分别为1.15% 、0.86% 、0.29% 、3.98% ,符合企业标准。)随着实验室全面管理的不断强化和血细胞分析仪的普及,对血红胞分析仪的结果重复性提出了更高的要求。总重复性包含了重复测定的随机误差与携带污染双重变异因素,因此能全面评价仪器测定的精密度,良好的重复性是高精密仪器的重要标志,它使我们能为临床医生提供更为准确的检测结果。
参考文献:
[1] 刘斌;潘秀芳;王玉丰.Sysmex sf-3000血液分析仪白细胞分类两种虚假提示及解决方法[J];检验医学与临床;2007,01
[2] 刘世文,陈佳荣,李彩玉.KX-21血液分析仪两种操作模式间的精密度差异分析[J];临床检验杂志;2005,05
【关键词】 血细胞分析仪; 白细胞分类计数; 人工分类计数
The results analysis of white blood cells classification count by F-820,KX-21,HC-1022 blood cell analyzer and artificial classification SU Xin.Binzhou Maternal and Child Care Service Center,Binzhou 256600,China
【Abstract】 Objective To explore the differences between the two groups,three group-dividing blood count instrument white blood cells classification count and artificial classification count,and to provide more accurate results and the reference.Methods 18-20 healthy male 72 cases, female 42 patients were selected and taken EDTA-Na2 anticoagulant with 2 ml from venous,and at the same time,white blood cell count were done by the three instruments and artificial classification.Results The instrument classification and artificial classification were significant difference (P
【Key words】 Blood cells analyzer; White blood cells classification count; Artificial classification
doi:10.3969/j.issn.1674-4985.2012.05.051
血细胞分析仪已广泛应用于临床,代替了繁琐的手工操作,减少了操作过程的随机误差,实验器材的系统误差及检测方法本身的固有误差,改善了实验结果的精确性和准确性,提高了工作效率,各大医院基本都配置了五分群血细胞分析仪。由于条件所限,有相当一部分基层医院还在普遍使用两分群和三分群血细胞计数仪,由于三分群或两分群血细胞计数仪采用的是阻抗分析法,其原理是根据血细胞非传导的性质,以电解质溶液中悬浮颗粒在通过计数小孔时引起的电阻变化进行检测为基础,进行血细胞计数分类和体积测定。也就是靠对细胞体积大小的识别来分类[1],而不是按照细胞内部结构和性质分类,因此对分类结果会有一定的影响。本文对仪器分类结果与人工分类结果进行了比较。
1 资料与方法
1.1 一般资料 健康男性72例,女性42例,年龄18~20岁。
1.2 方法 采用日本东亚sysmax F820两分群血细胞分析仪,sysmax KX-21、美国迈瑞HC-1022三分群血细胞分析仪,试剂采用仪器配套进口试剂;奥林巴斯显微镜,瑞氏染液。首先用四川通广公司产的全血质控物标定仪器,抽取静脉血2 ml,用EDTA-Na2(1.5 mg/ml)防凝,充分混匀,所有标本在4 h内完成检测。同时制备血涂片,用瑞氏染色按全国统一操作规程行人工分类[1]。
2 结果
将有细胞分类报警与无细胞分类报警的标本分别与人工分类做比较,详见表1~6。
3 讨论
从表1、2、3、4可以看出,无报警与有报警结果三分群血细胞分析仪与人工分类差异均有统计学意义(P
参 考 文 献