医学影像技术技能精选(九篇)

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第1篇：医学影像技术技能范文

[关键词] 自体输血；异体输血；胃癌；炎性因子；免疫功能

[中图分类号] R5 [文献标识码] A [文章编号] 1674-0742（2016）02（a）-0106-02

Effect of Autogeneic or Allogeneic Transfusion on Inflammatory Factor and Immunologic Function in Patients with Radical Operation for Carcinoma of Stomach

LUO Yun， WANG Hong-mei

Blood Transfusion Department， The people s Hospital of Taixing of Jiangsu Province， Taixing， Jiangsu Province，225400 China

[Abstract] Objective To research the effect of autogeneic or allogeneic transfusion on inflammatory factor and immunologic function in patients with radical operation for carcinoma of stomach. Methods 96 cases of early gastric cancer patients receiving the radical operation for carcinoma of stomach in our hospital from June 2012 to August 2014 were selected and randomly divided into the autogeneic group and the allogeneic group with 48 cases in each， the allogeneic group were transfused with allogeneic whole blood， the autogeneic group were transfused with autologous blood， the natural killer （NK cells）， proleulzin（IL-2）and T lymphocyte subsets level（CD3+、CD4+、CD4+/CD8+）of the two groups before and after operation were compared. Results The NK cells and IL-2 of the two groups at the same day after operation were obviously decreased compared with those before operation，（P

[Key words] Autogeneic transfusion； Allogeneic transfusion； Gastric cancer； Inflammatory factor； Immunologic function

胃癌是源于胃黏膜上皮细胞的恶性肿瘤，患者早期可无任何体征，中晚期常见上腹压痛及肿块，晚期患者会出现贫血、消瘦、营养不良甚至恶病质等表现[1-2]。由于胃癌的恶性程度较高，手术切除是根治早期胃癌的唯一方法[3]，该研究2012年6月―2014年8月临床观察96例在该院接受胃癌根治术的患者，旨在探讨自体、异体输血对患者炎性因子及免疫功能的影响，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

整群抽选2012年6月―2014年8月就诊于该院的早期胃癌患者96例，所有患者均经临床诊断及X线、腹部超声、胃镜等相关检查确诊，且自愿在该院接受根治术治疗，排除伴有心、肝、肾其他严重疾病及免疫性疾病者，排除精神、意识障碍不能配合研究者，排除有放、化疗和激素治疗史患者，排除不签署知情同意书者。且该研究经该院伦理委员会审核批准。上述96例患者按照随机法将其分为自体组（n=48）和异体组（n=48），自体组中男30例，女18例，年龄34～68岁，平均（46.5±6.2）岁；体重53～79 kg，平均（66.3±5.4）kg；异体组中男29例，女19例，年龄35～67岁，平均（47.2±7.1）岁；体重52～79 kg，平均（68.4±5.1）kg，两组患者在基线资料方面比较差异无统计学意义（P>0.05），具有可比性。

1.2 方法

所有患者在该院接受根治性手术，术前明确肿瘤部位、大小，制定手术方案，上腹正中切口，探查清除后切除病胃、重建消化道，术毕。两组患者麻醉、手术方式相同，异体组术中输异体全血400～600 mL，自体组麻醉后术前经桡动脉放血400～600 mL，并静脉输入同等6%羟乙基淀粉（国药准字H2006436），术毕将自体血输回。

1.3 观察指标

分别于术前、术后当天及术后7 d取患者清晨静脉血，检测自然杀伤细胞（NK细胞）、白介素-2（IL-2）及T淋巴细胞亚群（CD3+、CD4+、CD4+/CD8+）水平。

1.4 统计方法

采用SPSS 17.0统计学软件分析研究数据，计量资料以均值±标准差（x±s）表示，行t检验，P

2 结果

2.1 炎性因子

术后当天两组患者NK细胞、IL-2较术前显著下降（P

表1 两组患者手术前、后NK细胞及IL-2水平比较（x±s）

注：①与术前比较，P

2.2 疫功能指标比较

术后当天两组T淋巴细胞亚群各指标均显著下降（P

3 讨论

早期胃癌行根治性切除术是目前唯一治愈手段，术后5年生存率达80%以上[4]。但肿瘤患者围术期输血对其预后及5年生存率具有一定的消极影响[5]。由于血液是多种成分组成的混合物，可与机体免疫系统发生相互作用，诱发受血者免疫功能抑制，促进肿瘤细胞的生长，使肿瘤复发[6]。

有研究[7]显示围术期胃癌患者输注异体红细胞会影响其细胞免疫功能。IL-2具有免疫增强作用，参与B细胞激活、增殖，输血后T细胞产生IL-2减少，IL-2功能降低，B细胞激活和抗体产生减少、NK细胞功能不全，导致机体免疫功能抑制。因此，临床应严格执行输血标准，减少不必要的输血。该研究中异体输血组术后当天IL-2水平显著下降，且明显低于自体输血组，术后7 d异体输血组NK细胞水平也显著低于自体输血组。异体输血对患者免疫功能影响较大。且自体组术后7 d T淋巴细胞亚群指标恢复到术前水平，而异体组CD3+（60.3±11.2）%、CD4+（30.4±6.2）%、CD4+/CD8+（0.88±0.25）显著少于自体组。可见自体输血1周后患者免疫功能渐渐恢复，而异体组则出现了较长时间免疫功能抑制。

综上，胃癌患者自体输血较异体输血对患者免疫功能影响小，值得推广。

[参考文献]

[1] 洪金全，陈志远，张进萍，等.围术期异体红细胞输注对胃癌患者T细胞亚群的影响[J].中国输血杂志，2014，27（12）：1299-1302.

[2] 陈超，陈腾，奉典旭，等.围手术期输血对老年胃癌术后近期影响及远期复发率的影响[J].胃肠病学和肝病学杂志，2014，23（5）：517-519.

[3] 李卫，周铃，李敏，等.围手术期输血对胃癌根治手术患者并发症发生的影响[J].实用癌症杂志，2015，30（7）：1065-1067.

[4] ，欧阳永忠，汤明，等.围手术期输血与胃癌根治术后并发症的关系[J].中华医学杂志，2014，94（10）：751-754.

[5] 李文静，蒋学兵，王燕菊，等.输血前不规则抗体筛查与临床输血安全[J].国际检验医学杂志，2012，33（17）：2065-2066， 2068.

[6] 李岚，孙彦.异体输血对恶性肿瘤患者的影响[J].国际检验医学杂志，2013，34（23）：3250-3251.

第2篇：医学影像技术技能范文

关键词：  海木； 小鼠； 学习记忆

海木Trichilia connaroides为楝科（Meliaceae）植物，别名老虎楝、鸡波、鹧鸪花，在我国主要分布于广西、云南、贵州［1］。民间用药中，海木的根常被作为治疗关节炎、咽喉炎、扁桃体炎和其他疾病的方药［2］，有清热解毒，祛风湿腰腿痛和心、胃气痛等功效［3］。有研究报道，海木氯仿提取物对通过化学处理、热处理和甲醛诱导处理的昆明小鼠和Wistar大鼠建立的炎症模型，表现出显著的依赖性止痛作用和抗炎活性［4］。关于海木影响学习记忆功能的研究，目前尚未有报道。本文以昆明小鼠为对象，探讨海木提取物对学习记忆功能的作用。

1  材料与仪器

1.1  动物昆明小鼠300只，体质量为（25±5）g，雄性，清洁级，购于广西医科大学实验动物中心。许可证号：SCXK桂2003-000。

1.2  药物和试剂

海木枝叶于2009-03采于广西桂林市永福县寿城，经广西植物研究所刘演研究员鉴定为楝科植物海木（Trichilia connaroides）。采后粉碎，60度烘干备用；75%消毒酒精、乙醇（分析纯）、石油醚（分析纯）、氯仿（分析纯）均购于天津福晨化学试剂厂；正丁醇（分析纯），购于上海申博化工有限公司；0.9﹪氯化钠注射液（广西南宁百会药业集团有限公司，生产批号：0902003）；银杏叶片（12×24s，桂林益佰漓江制药有限公司，生产批号：090901）；盐酸氯丙嗪注射液（50 mg∕2 ml，上海禾丰制药有限公司，生产批号：080502）；亚硝酸钠（北京益利精细化学品有限公司，生产批号：991116）；无水乙醇（分析纯）（广东光华化学厂有限公司，生产批号：20090115）。

1.3  仪器BA—200小鼠避暗仪，DT—200小鼠跳台测试箱，MT—200Morris水迷宫视频跟踪分析系统，均由成都泰盟科技有限公司提供，RE—200旋转蒸发仪（上海亚荣生化仪器厂），SHZ—D（Ⅲ）循环水式真空泵（巩仪市予华仪器有限责任公司），电子分析天平（北京赛多利斯仪器系统有限公司）等。

2  方法

2.1  海木萃取物的制备

称取海木干枝叶适量，加入适量的无水乙醇，加热回流2h，用四层纱布过滤，得到的上清液提取液，重复提取3次，合并提取液，减压回收溶剂，得膏状物，将此膏状物用乙醇∶水=1∶3的比例除去叶绿素，回收溶剂至干，即得粗提部分。将所得粗提物分成两份，一份备用，另一份依次用石油醚、氯仿、正丁醇、水进行固-液萃取，即得到石油醚部分、氯仿部分、正丁醇部分、水提部分。将各部分分别减压回收溶剂至干，最后得到的膏状物即是石油醚萃取物、氯仿萃取物、正丁醇萃取物和水提物。

2.2  动物分组在各项实验分组之前均用相应的仪器对小鼠进行神经行为学测试和筛选，剔除与其他小鼠具有较大差异的，再将其余的小鼠随机分组，每组10只。

2.3  海木对正常小鼠学习记忆功能作用的活性部位筛选（避暗法）将小鼠分为正常组、粗提物组、石油醚组、氯仿组、正丁醇组、水提物组和阳性对照组共7组。各给药组按100 mg/kg剂量灌胃1 ml，正常对照组灌胃等容量的生理盐水，阳性对照组按16 mg/kg剂量灌胃等容量银杏叶片溶液，1次/d，连续给药10 d，于给药第9天进行避暗训练，第10天给药后30 min按文献［5］方法测定小鼠在避暗仪中30 min内的错误次数（进入暗室受到电击的次数）和潜伏期（每只小鼠放入明室从开始测试到第一次进入暗室的时间）。

2.4  海木氯仿萃取物对正常小鼠空间记忆功能的影响（Morris水迷宫法）将小鼠分为正常组、氯仿萃取物小、中、大剂量组和阳性对照组共5组。给药组分别按50，100，150 mg/kg剂量灌胃海木氯仿萃取物1 ml，正常对照组灌胃等量生理盐水，阳性对照组按16 mg/kg剂量灌胃等量银杏叶片溶液，1次/d，连续给药10 d。于给药第5天进行1次定位航行训练，于末次给药后30 min按文献［6］方法测定小鼠寻找平台潜伏期及撤除平台后经过原平台的次数及在原平台象限停留的时间。

2.5  海木氯仿萃取物对盐酸氯丙嗪所致记忆获得障碍小鼠的影响（避暗法）动物分组和给药与“2.4”同，除正常对照组外，实验小鼠于给药第9天皮下注射盐酸氯丙嗪注射液（4 mg/kg），30 min后进行避暗训练，第10天末次给药30 min后测定小鼠在避暗箱中30 min内的错误次数和潜伏期。

2.6  海木氯仿萃取物对亚硝酸钠所致记忆巩固障碍小鼠的影响（跳台法）动物分组和给药与“2.4”同，除正常对照组外，实验小鼠于给药第9天进行跳台训练后立即皮下注射亚硝酸钠水溶液（120 mg/kg），第10天末次给药30 min后按文献［5］方法测定小鼠在跳台测试箱中30 min内的错误次数及潜伏期。

2.7  海木氯仿萃取物对乙醇所致记忆再现障碍小鼠的影响（跳台法）动物分组和给药与“2.4”同，实验小鼠于给药第9天进行跳台训练，第10天除正常对照组外，在末次给药后灌胃40%乙醇（0.1 ml/10 g），30 min后测定小鼠在跳台测试箱中30 min内的错误次数及潜伏期。

2.8  数据处理所有数据以±s表示,数据统计分析采用SPSS13.for windows统计软件进行组间t检验和单因素方差分析比较组间差异，P＜0.05 为差异具有显著性，P＜0.01为具有非常显著性差异。

第3篇：医学影像技术技能范文

摘　要：目的：探讨地黄饮子对AD鼠学习记忆及胆碱能损害的影响。方法：模型组以D－乳糖(D－gal)腹腔注射合并β淀粉样蛋白(Aβ)注射海马制备AD动物模型，各治疗组分别在造模的同时灌胃地黄饮子和执脑衰胶囊、哈伯因。运用穿梭箱检测各组大鼠的学习记忆能力，采用生化法检测备组大鼠脑匀浆AchE。免疫组化方法观察SYN蛋白的变化。结果：中药治疗组均可使各组大鼠潜伏期降低、主动回避反应阳性率明显升高。被动遗避时间显著降低，表明主动、被动反应水平均有所回升，有显著性差异。灌服中药后各治疗组脑组织AchE活性降低，大鼠海马、皮层神经元SYN蛋白表达增加。结论：地黄饮子对痴呆鼠学习记忆能力的提高及改善神经元损伤的作用，可能与地黄饮子改善鼠脑神经元胆碱能损害，来上调海马和皮层神经元SYN蛋白的表达有关。

关键词：地黄饮子；老年性痴呆；p淀粉样蛋白；乙酰胆碱酯酶；突触素

中图分类号：R285.5 文献标识码：A 文章编号：1673－7717(2007)07－1370－03

老年性痴呆，亦称阿尔茨海默病(Alzheimer’s disease，AD)是一种常见于老年人的神经退行性变性疾病。本实验根据AD发病的β淀粉样蛋白(AB)致病学说制备AD复合动物模型，观察地黄饮子对AD大鼠胆碱能损害及突触素的影响，旨在探讨本方防治AD的作用机理。

1 实验材料

1．1 实验动物

健康Wistar雄性大鼠140只，普通级，重(2.60±20)g，黑龙江中医药大学实验动物中心提供。

1．2 药物与试剂

地黄饮子制备方法：醇、水提取液与挥发油提取液，离心、浓缩至适量。合并上述醇、水提液及挥发油制成含生药lg/mL的浓缩液。抗脑衰胶囊由石家庄四药股份有限公司生产(国药准字Z13021850，生产批号040107)，配制成含生药O.2403g/mL水溶液。哈伯因由河南竹林众生制药股份有限公司生产(国药准字H10940156，生产批号040103)，配制成0.0018/L水溶液。试剂：D－半乳糖(D－gal)由上海华舜生物工程有限公司提供(批号707222)。A13t－40，Sigma公司提供(Lot：088K49512)。乙酰胆碱酯酶(AchE)检测试剂盒由南京建成生物化学有限公司提供。突触素(SYN，Synaptophysin)免疫组化试剂盒，由武汉博士德生物工程有限公司提供，PV二步法免疫组化试剂盒由北京中山生物技术有限公司提供。

1．3 主要实验仪器

脑立体定位仪(NARISHIGE SN－2型日本)、大鼠穿梭程序控制仪(ZIL－2中国医学科学院药物研究所)、摄影显微镜(OLYMPUS日本)等。

2 实验方法

2．1 分组方法

140只Wistar大鼠随机分成7组：空白组，假损伤组，模型组，抗脑衰对照组(中药对照组)，哈伯因对照组(西药对照组)，中药治疗高、低剂量组，每组20只。

2．2 模型制备

假损伤组腹腔注射生理盐水。余组均给予D－半乳糖[50mg/(kg・d)]腹腔注射4周，造成亚急性衰老；4周后再脑内注射凝聚态Aβ1-40。假损伤组注射生理盐水1μL。其余各组均注射Aβ。

2．3 给药方法

中药治疗组腹腔注射造模同时分别给予地黄饮子高、低剂量灌胃[相当含生药5.4g/(kg・d)和2.7g/(kg・d)]，中、西对照组分别给予抗脑衰胶囊、哈伯因溶液灌胃[含生药分别为2.403g/(kg・d)、0.018mg/(kg・d)]，余组灌胃等量蒸馏水，1次/天，共5周。

2．4 观察指标

2．4．1 大鼠穿梭实验操作方法，实验分为训练和正式测试两部分，训练期为3天；第4天测试记忆能力，记录第4天的电击次数、电击时间和主动逃避时间。计算主动回避的阳性率[(循环次数一遭受电击次数)/循环次数×100％]。

2．4．2 AchE测定行为学测试后大鼠断头取脑，制备脑匀浆，离心，取上清液。测定参照试剂盒说明书。

2．4．3 脑SYN蛋白表达检测，行为学测试完毕，大鼠迅速处死取脑(去除小脑)，固定，修块，标本选在注射部位后。透明，包埋，切片，采用免疫组化(PV二步法)检测，光镜下观察鼠脑海马及皮层神经元蛋白表达。滴加一抗(1：50比例稀释)，滴加二抗(山羊抗小鼠)工作液，阴性对照为一抗加PBS。

2．5 数据处理

数据采用x±s表示，数据统计分析均在spss11.0软件中进行，采用方差分析，多组间两两比较用LSD法。

3 实验结果

3．1 地黄饮子对AD鼠穿梭箱试验的影响结果见表1。

结果表明，模型组大鼠潜伏期延长、主动回避反应阳性率明显降低，被动逃避时间显著延长，与空白组、假损伤对照组有显著差异(P＜0.01)，表明该造模方法可以使大鼠学习记忆获得。各治疗组均可使模型鼠潜伏期降低、主动回避反应阳性率明显升高，被动逃避时间显著降低，表明主动、被动反应水平均有所回升，有显著性差异(P＜0.01)，说明地黄饮子各剂量组具有类似抗脑衰、哈伯因的作用，能够提高痴呆鼠学习记忆能力。

3．2地黄饮子对AD鼠脑匀浆AchE的影响结果见表2。

结果表明，空白组与假损伤组比较无显著性差异(P＞0.05)。造模可引起大鼠AchE活性异常升高，与空白组、假损伤对照组比较有显著差异(P＜0.01)。而模型鼠在服用地黄饮子、抗脑衰胶囊、哈伯因后，可显著抑制模型大鼠脑组织中的AchE活性(P＜0.01或P＜0.05)，其中哈伯因抑制Ache活性最为明显(P＜0.01)，这与胆碱酯酶抑制剂类药物已知的作用机制相符。

3．3 地黄饮子对AD鼠脑海马和皮层SYN蛋白的影响

染色后在海马区、皮层均可见弥漫性SYN棕黄色阳性表达，染色较深。结果采用CMIAS多功能真彩色病理图象分析系统进行分析，计算阳性目标总面积与统计场总面积比值。统计分析结果见表3。结果显示，造模损伤所致的SYN低表达经治疗后，均有所提高，其中中高组、西药对照组能明显上调皮层及海马SYN蛋白表达含量，与模型组相比具有显著差异(P＜0.01)；而中药对照组及中低组SYN含量也有所回升，与模型组比较有差异(P

第4篇：医学影像技术技能范文

目的 观察血管紧张素Ⅳ（AngⅣ）对糖尿病大鼠海马胆碱乙酰转移酶（ChAT）表达及认知功能的影响。方法 38只SD大鼠随机分为正常对照组、糖尿病组和糖尿病+AngⅣ组，建立STZ糖尿病大鼠模型， Morris水迷宫测试大鼠学习和记忆能力，免疫组化观察大鼠海马ChAT的表达，RTPCR检测ChAT mRNA水平的表达。结果 糖尿病+ AngⅣ组海马chAT及其mRNA表达与糖尿病组相比明显增高（P

【关键词】 血管紧张素Ⅳ；胆碱乙酰转移酶；认知功能

【Abstract】Objective To explore the effects of angiotensin Ⅳ on the expression of choline acetyltransferase (ChAT) and its mRNA in hippocampus and cognitive function of diabetic rats. Methods 38 SD male rats were pided into normal， diabetic model and angiotensin Ⅳ treatment groups randomly. Diabetes was induced by a single peritoneal injection of streptozotocin. 11 weeks later， learning and memory behaviors were investigated by a spatial version of Morris water maze test. The expression of ChAT of all rats was examined with immunohistochemical method and its mRNA expression was detected by RTPCR. Results Compared with diabetic model group， the changes of ChAT and its mRNA in hippocampus significantly increased in angiotensin Ⅳ treatment group（P＜0.05）. Meanwhile， learning and memory grade in angiotensin Ⅳ treatment group were better than those in diabetic model group（P＜0.05）. Conclusions Angiotensin Ⅳ could improve cognitive ability in diabetic rats by increasing the expression of ChAT and its mRNA levels.

【Key words】Angiotensin Ⅳ；Choline acetyltransferase；Cognition

有研究发现与认知功能有关的基底前脑、海马等处的胆碱能神经元在糖尿病认知功能障碍早期就存在明显退行性改变和代谢紊乱，ChAT表达减少〔1〕。胆碱乙酰转移酶（ChAT）是乙酰胆碱合成过程中最重要的酶，是决定生物体内乙酰胆碱含量的关键因素。国外有研究者报道血管紧张素Ⅳ（AngⅣ）对认知功能有着重要的影响，但AngⅣ对胆碱能神经递质表达以及糖尿病认知功能障碍的发病过程有无影响，目前尚未见报道。故本研究建立链脲佐菌素（STZ）糖尿病模型，运用Morris水迷宫测试其行为学改变，用免疫组化和RTPCR技术观察海马神经元ChAT及其mRNA表达变化，并用AngⅣ进行干预，进一步观察AngⅣ对糖尿病大鼠海马ChAT表达及其认知功能改变的影响，探讨糖尿病认知功能障碍可能的发病机制。

1 材料与方法

1.1 材料

STZ（美国Alexis公司）；血糖仪（德国罗氏公司）；大鼠脑立体定位仪（美国Stoelting公司）；Morris水迷宫及水迷宫记录分析系统（中国医学科学院药物研究所研制）；AngⅣ（购自美国凤凰药业有限公司）；兔抗大鼠胆碱乙酰转移酶多克隆抗体（购自美国UCL公司）；RTPCR试剂盒（购自美国TaKaRa公司）；Trizol（上海生工生物工程技术服务有限公司）；引物合成：赛百盛基因工程有限公司。

1.2 动物分组与处理

SD雄性大鼠38只，8～10周龄，体重180～220 g，购自重庆医科大学动物实验中心。动物适应喂养1 w后，随机分为正常对照组10只、糖尿病组14只和糖尿病+AngⅣ组14只。建立STZ糖尿病模型，大鼠禁食12 h，糖尿病组和糖尿病+AngⅣ组按60 mg／kg剂量腹腔一次注射1%STZ（溶于pH4.2，0.1 mol／L柠檬酸柠檬酸钠缓冲液），正常对照组注射等量缓冲液。血糖稳定3 d后，尾静脉随机血糖＞16.67 mmol／L认为糖尿病模型建立成功。成模后第11周，各组均进行水迷宫测试，之后糖尿病+AngⅣ组侧脑室每天注射AngⅣ5 nmol（1 nmol/μl），糖尿病组和正常对照组注射等体积的生理盐水，持续1 w，所有实验大鼠再次进行水迷宫测试。实验终点糖尿病组大鼠死亡2只，糖尿病+AngⅣ组大鼠死亡3只。

1.3 Morris水迷宫测试

Morris水迷宫操作系统，包括直径150 cm的圆形水池，高15 cm、直径10 cm的平台，平台表面低于水面2 cm，水迷宫记录分析系统。糖尿病模型建模成功后第11周，训练3 d，第4天进行隐藏平台获得实验，分析潜伏期，考察学习能力。第5天撤去平台进行空间搜索实验去除平台观察2 min内大鼠在中心区域停留时间百分比以及通过原平台的次数，测试记忆能力。干预1 w再次重复上述实验。

1.4 AngⅣ干预

成模后第11周，各组大鼠水迷宫测试完毕即行AngⅣ干预。大鼠经4%水合氯醛（10 ml／kg）腹腔注射麻醉后，固定于脑立体定位仪，沿颅顶正中线剪开头皮暴露颅骨，大鼠侧脑室穿刺坐标〔2〕：前囟后1.0 mm，右1.5 mm，深3.5 mm。微型电钻沿此穿刺点钻孔。将带内芯的不锈钢套管（外径0.9 mm，内径0.5 mm）垂直插入侧脑室内，牙托粉黏合固定套管，凝固后缝合伤口。术后大鼠分笼饲养并予青霉素抗炎。导管置入后第4天开始进行侧脑室注射，生理盐水将AngⅣ配成所需浓度(1 nmol／μl)，微量注射器3 min内将5 μl AngⅣ溶液匀速注入侧脑室（AngⅣ组），留针1 min，每天给药1次。正常对照组和糖尿病组注射等体积生理盐水，持续7 d。

1.5 免疫组化

采用SP法免疫组织化学染色。 处死大鼠，1%多聚甲醛心脏灌注取脑，石蜡包埋连续冠状切片，根据试剂盒说明检测ChAT在各组大鼠海马的表达。每只标本随机取1张切片，每张切片高倍镜（×400）下随机选择3 个视野的海马区域，采用ImagePro Plus6.0软件测定该区域ChAT阳性染色神经元的平均光密度值。

1.6 RTPCR法

大鼠断头，低温下快速取出海马组织，液氮冻存。称取50 mg海马组织，提取总RNA，进行RTPCR，ChAT引物序列为5'ACCTCGTCTGTGGAGTTTGCG3'，5' TCAAGATTGCTTGGCTTGGTT3'。条件：94℃预变性2 min；94℃30 s；57℃退火30 s；72℃延伸30 s，26个循环；72℃再延伸10 min；4℃保存。取PCR产物5 μl进行琼脂糖凝胶电泳鉴定，照相记录。凝胶成像分析系统扫描RTPCR电泳结果，用Quantity One软件测定Volumn值，计算ChAT／βactin比值。

1.7 统计学处理

数据用x±s表示，均经过方差齐性检验和正态性检验，采用SPSS10.0统计分析软件进行方差分析。

2 结 果

2.1 隐藏平台获得实验

糖尿病组潜伏期增加，与正常对照组比较差异有显著性（P＜0.05）。糖尿病+AngⅣ组较糖尿病组潜伏期明显缩短（P＜0.05），较正常对照组稍延长，但无统计学意义（P＞0.05），见表1。表1 大鼠空间搜索实验/隐蔽平台搜索实验结果(略)

2.2 空间搜索实验

糖尿病组与正常对照组相比，中心区停留时间百分比和通过原平台位置次数较明显下降（P＜0.05）。上述参数，糖尿病+AngⅣ组较糖尿病组明显增加（P＜0.05），与正常对照组比较无明显差异（P＞0.05），见表2。

2.3 免疫组化结果

糖尿病组海马ChAT阳性神经元平均光密度明显降低，与正常对照组相比有显著性差异（P＜0.05）。糖尿病+AngⅣ组与糖尿病组比较，上述指标明显增加（P＜0.05），但与正常对照组比较无明显差异（P>0.05）。见表2，图1。

2.4 ChAT mRNA的表达

糖尿病组ChAT mRNA表达水平明显下降（P＜0.05），经AngⅣ干预后可显著增加ChAT mRNA表达水平（P＜0.05），差异具有统计学意义。见表2，图2。表2 各组大鼠海马ChAT蛋白和mRNA表达结果(略)

3 讨 论

糖尿病认知功能障碍最早在上世纪20年代提出，随后很多学者也证实糖尿病患者确实存在明显的获得性的认知功能缺陷，这种认知缺陷在1型糖尿病和2型糖尿病都可以发生，主要表现为学习和记忆功能的减退。本实验采用STZ糖尿病模型，结果提示糖尿病大鼠在成模11 w出现学习能力减退；记忆能力也显著受损，与文献报道相一致〔3〕。本实验通过免疫组化和RTPCR方法检测糖尿病大鼠海马ChAT的表达，结果提示ChAT表达的显著降低导致糖尿病认知功能障碍发生。

血管紧张素Ⅳ（AngⅣ）是血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）C末端的6肽片段，由AngⅡ在氨基肽酶B的作用下裂解而成，AngⅣ在体内通过与其特异性的高亲和力受体AT4结合发挥作用。近年来有系列研究发现，AngⅣ不仅可以在被动回避反应实验中增强记忆和学习，而且可以预防由美加明、东莨菪碱、乙醇和缺血导致的记忆缺失〔4～6〕。本研究表明AngⅣ对糖尿病认知功能障碍有明显的改善作用。目前AngⅣ改善认知功能的机制仍不明确，推测其可能的途径有：①易化海马的长时程增强（LTP）效应；②A抑制海马神经元凋亡；③改善脑灌注〔7〕。而且我们的实验还发现在给予AngⅣ干预以后，糖尿病大鼠海马的ChAT的蛋白表达水平和mRNA表达水平都明显增加，与其Morris水迷宫成绩改善呈显著正相关，因此我们认为AngⅣ增加海马的ChAT表达水平，促进乙酰胆碱的合成，可能是其改善糖尿病认知功能障碍的又一重要途径，这为临床防治糖尿病认知功能障碍提供了新的思路。

然而，糖尿病认知功能障碍的发病机制极其复杂，RAS系统各成员与糖尿病认知功能的关系仍未完全阐明，继续深入的研究二者的关系将为糖尿病慢性并发症的防治提供坚实的实验基础，使更多的糖尿病患者受益。

参考文献

1 盛树力.糖尿病脑病与老年性痴呆〔J〕.中华内分泌代谢杂志，2001；17：5860.

2 包新民，舒斯云.大鼠脑立体定向图谱〔M〕.北京：人民卫生出版社，1991：128.

3 Biessels GJ，Kamal A，Ramakers GM，et al.Place learning and hippocampal synaptic plasticity in streptozotocininduced diabetic rats〔J〕. Diabetes，1996；45(9):125966.

4 Tchekalarova J，Kambourova T，Georgiev V.Interaction between angiotensin IV and adenosine A(1) receptor related drugs in passive avoidance conditioning in rats〔J〕.Behav Brain Res，2001；123(1):1136.

5 Albiston AL，Pederson ES，Burns P，et al.Attenuation of scopolamineinduced learning deficits by LVVhemorphin7 in rats in the passive avoidance and water maze paradigms〔J〕.Behav Brain Res，2004；154(1):23943.

第5篇：医学影像技术技能范文

[关键词] 依达拉奉;血管性痴呆;学习记忆;Chat;NR2B

[中图分类号] R965[文献标识码]A [文章编号]1673-7210(2010)02(c)-023-02

Effect of Edaravone on learning, memory and expressions of hippocampal Chat and NR2B in rats with vascular dementia

LI Yanbo, ZHANG Shenglin

(Department of Geriatrics, the First Clinical Hospital of Shanxi Medical University, Taiyuan 030001, China)

[Abstract] Objective: To research the effect of Edaravone on learning, memory and expressions of hippocampal of Chat and NR2B in rats with vascular dementia (VD). Methods: VD rat models were established by two-vessel occlusion and Sodium Nitroprusside depressurization. Morris test was performed to detect the cognition of rats. Immunohistochemistry was used to observe the expressions of Chat and NR2B in hippocamp. Results: The learning and memory of VD group (group B) were higher compared with sham-operation group (group A), Edaravone group (group C) and preventive treatment group (group D), and the expressions of Chat and NR2B were decreased in hippocamp of group B (P0.05). Conclusion: Edaravone improves the learning and memory in VD rats, its effects may result from the increase in hippocampal Chat and NR2B expression, we can also conclude that Edaravone has a preventive effect on cognitive decline in rats.

[Key words] Edaravone; VD; Learning and memory; Chat; NR2B

依达拉奉是一种新型的脑保护药,具有清除自由基、抗细胞凋亡和神经保护作用[1]。临床研究结果表明,依达拉奉在脑梗死中有显著的神经保护作用[2-3]。血管性疾呆(VD)是一组由于缺血或出血性的脑血管病及全脑缺血低氧引起的认知功能障碍综合征。本文通过观察依达拉奉对VD大鼠海马Chat、NR2B表达的影响,研究依达拉奉的预防及治疗作用,为VD的治疗提供新思路。

1 材料与方法

1.1动物分组及模型制备

实验动物由山西医科大学实验动物中心提供,选用雄性Wistar大鼠36只,体重200～250 g,适应性饲养2周,采用“两血管阻断+硝普钠降压法”[4]制备VD大鼠模型,B组(VD组)、C组(依达拉奉治疗组)、D组(预防治疗组)行双侧颈总动脉反复缺血-再灌注2次,每次10 min,同时在缺血-再灌注前给予硝普钠2.5 mg/kg腹腔注射,A组仅暴露双侧颈总动脉而不结扎,且不注射硝普钠。

1.2 给药方法

C组大鼠于术后第7天给予依达拉奉皮下注射3 mg/kg,D组于造模麻醉前给予同等剂量的依达拉奉,每天1次给药,共20 d;A组与B组给予等量生理盐水皮下注射。

1.3 学习记忆能力的测定

根据Morris水迷宫实验进行大鼠学习记忆功能测定,历时5 d,前4 d记录在2 min内找到并爬上平台的时间为大鼠的逃避潜伏期,即学习成绩;第5天撤掉平台后,记录大鼠穿越平台的次数以测试其记忆能力。

1.4 制备组织切片

各组动物分别于造模后第30天处死,灌洗固定后剥取海马组织,石蜡包埋,脱蜡,应用免疫组化方法制片。

1.5灰度值分析

各组取海马CA1、CA3区各10个测试点,求平均值进行分析。

1.6 统计学处理

数据以均数±标准差(x±s)表示,然后运用SPSS 13.5统计软件进行单因素方差分析,显著性检验水准α=0.05。

2 结果

2.1 水迷宫实验结果

见表1。

2.1.1定位航行实验结果B组逃避潜伏期均较A、C、D组延长(P

2.1.2 空间搜索实验结果B组穿越平台次数较A、C、D组减少(P

2.2 图像灰度值分析

与A组比较,B组海马CA1、CA3区的Chat及NR2B表达明显,差异有高度统计学意义(P

表2 各组大鼠海马CA1、CA3区Chat、NR2B表达(x±s)

与A组比较,■P

3讨论

本实验结果表明,B组大鼠逃避潜伏期明显延长,而C组与D组较B组均缩短,且D组与A组比较,差异无统计学意义,说明依达拉奉能够改善VD大鼠的认知,同时说明依达拉奉有预防VD发生的作用。其机制可能与依达拉奉能够抑制脂质过氧化、清除过量自由基、保护细胞线粒体、阻止自由基释放而引起的迟发型的组织损害有关[5]。

Chat是胆碱能神经元的特殊标志,Chat免疫反应阳性神经元减少与大鼠学习记忆障碍程度呈正相关[6]。本实验发现,Chat蛋白在B组海马区表达极少,可能是因为脑组织遭受自由基的氧化损伤,导致神经细胞凋亡。在C组与D组中其表达增加可能是因为依达拉奉清除过量生成的自由基保护细胞线粒体,抑制脂质过氧化作用和血管内皮细胞损伤[2],阻止了caspase-3的活化[7],提高了Bcl-2的表达[8],减少了缺血区神经细胞的凋亡。

NR2B是NMDA受体的调节亚单位,在学习和记忆中起关键作用[9]。脑缺血引起神经元去极化,导致谷氨酸(Glu)的大量释放,Ca2+内流主要由谷氨酸受体的一种亚型NMDA受体通道介导,Ca2+超载造成神经元损伤,这就是Glu对神经元的兴奋毒性损伤[10]。本研究中,VD大鼠海马NR2B表达减少的机制可能与海马缺血、低氧致神经元死亡或结构受损有关,也可能与神经元低代谢影响神经传递有关,而经依达拉奉干预后NR2B表达增加可能与依达拉奉能够抑制谷氨酸释放[11],进而改善局部脑血流量和脑微循环及脑能量代谢有关。

本实验发现,C组Chat及NR2B表达与D组比较,差异无统计学意义,但水迷宫实验中D组较C组学习记忆能力提高,可能仍有其他机制的影响,有待于进一步研究。

[参考文献]

[1]Shimon A, Tatsushi K, Chika KON, et al. Anti-apoptotic and neuroprotective effects of edaravone following transient focal ischemia in rats [J]. Eur J Pharmacol,2005,516(2):125-130.

[2]Edaravone Acute Infarction Study Group. Effect of a novel free radical scavenger, edaravone (MCI2186), on acute brain infarction. Randomized, placebo-controlled, double-blind study at multicenters [J]. Cerebrovas Dis,2003,15(3):222-229.

[3]Watanabe T, Tanaka M, Watanabe K, et al. Research and development of the free radical scavenger edaravone as a neuroprotectant [J]. Yakugaku Zasshi,2004,124(3):99.

[4]王蕊,杨秦飞,唐一鹏,等.大鼠拟“血管性痴呆”模型的改进[J].中国病理生理杂志,2000,16(10):914.

[5]Ikeda T, Xia YX. Effect of the free radical scanvenger, 3-methyl-1-phenyl-2-pyrazolirr-5-one (MCI-186), on hypoxia-ischemia-induced brain injury in neonatal rats [J]. Nero Lett,2002,329(1):33-36.

[6]范文辉,李露斯,刘之荣,等.血管性痴呆的动物模型、神经病理及其胆碱能机制[J].中国临床康复,2002,6(21):3172-3173.

[7]Xiao B, Bi FF, Hu YQ, et al. Edaravone neuroprotection effected by suppressing the gene expression of the Fas signal pathway following transient focal ischemia in rats [J]. Neurotox Res,2007,12(3):155-162.

[8]Miyasou T, Kwon AH, Tsuji K, et al. Edaravone prevents Fas-induced culminant hepatic failure in mice by regulating mitochondrial Bcl-xl and Bax [J]. Shock,2008,30(2):212-216.

[9]Loftis JM. The N-methyl-D-aspartate receptor subunit NR2B: localization, functional properties, regulation, and clinical implications [J]. Pharmacol Ther,2003,97(1):55-85.

[10]Choi DW. Calcium: still center-stage in hypoxic-ischemic neuronal death [J]. J Trend Neuro,1995,18(2):58-60.

第6篇：医学影像技术技能范文

【关键词】 紫草素;D-半乳糖;老年性痴呆模型

老年性痴呆(AD)是一种严重危害老年人群身心健康的慢性神经退行性疾病,其发生机制与自由基过载造成的氧化应激反应密切相关,后者可引起痴呆模型动物脑内脂质过氧化产物丙二醛(MDA)含量增高、超氧化物歧化酶(SOD)水平降低,是AD发生的重要影响因素。新疆软紫草有效成分紫草素具有体外抗氧化及抗衰老等多种药理活性,对氧化应激损伤具有较好的拮抗作用,但其是否具有脑内抗氧化及改善AD患者学习记忆的作用尚未见明确报道。本研究采用AD大鼠模型,通过观察其脑内MDA和SOD含量的变化,初步探讨紫草素对AD的防治作用。

1 材料与方法

1.1 动物及分组 30只雄性Wistar大鼠,体质量230~270 g,购自新疆实验动物中心,合格证号XJLA-2008-04。动物

基金项目:石河子大学高层次人才科研基金项目(项目编号:RCZX200664)

作者单位:721000宝鸡市人民医院(景富春);石河子大学药学院药本05级1班(高建波 刘冬);石河子大学药学院药理系(许玉华 王振华); 石河子大学药学院中药系(谭勇)

被随机分为对照组、模型组、阳性药组、紫草素高剂量组和紫草素低剂量组, 5只/组。

1.2 药物和试剂 D-半乳糖(批号080120)和考马斯亮蓝G250购自上海蓝季公司、超氧化物歧化酶(SOD,批号20080515)及丙二醛(MDA,批号20080407)试剂盒为南京建成生物工程研究所提供,软紫草有效成分紫草素(20070806)购自中国生物制品检定所,其他试剂均为国产分析纯,水为超纯水。

1.3 仪器 Thermo 多功能酶标仪,Morris水迷宫(中国医学科学院药物研究所),德国IAK-R104组织匀浆机,湖南凯达TGL20M高速冷冻离心机。

1.4 造模及给药方法 模型组、阳性药组、紫草素高剂量组和紫草素低剂量组大鼠均腹腔注射D-半乳糖300 mg/(kg•d),对照组同样方法注射0.9%氯化钠注射液2 ml/(kg•d),连续6周。于第6周末次给药结束后开始进行水迷宫实验,将筛选合格动物纳入后续实验,水迷宫试验方法参照文献[1]。其中,阳性药组给予灌胃给药哈伯因0.008 mg/100(g•d),紫草素高剂量组和低剂量组分别灌胃给药紫草素0.7 mg 和0.35 mg/100 g•d,连续1周。对照组及模型组灌胃给药等容积生理盐水。给药结束后先行水迷宫实验,然后进行脑匀浆SOD和MDA测定。

1.5 脑匀浆SOD和MDA含量测定 对照组、模型组、阳性药组、紫草素高剂量组和低剂量组均于末次给药后迅速置0℃冰面断头处死,冰浴下快速匀浆,继以低温高速离心,设定速度3000 r/min,离心时间10 min。取上清液备用。SOD和MDA试剂的配制均参照试剂盒相应说明书。脑匀浆中蛋白含量测定用考马斯亮蓝G250法。

1.6 统计学方法 所获数据均采用x±s表示,用SPSS for Windows 10.0统计软件作单因素方差分析(ANOVA),以P

2 结果

2.1 紫草素对D半乳糖损伤所致老年性痴呆模型大鼠的行为学影响 见表1。与对照组大鼠相比,模型组大鼠在Morris水迷宫中的游泳持续时间明显延长,搜索策略多为随机式或边缘式。两种指标的组间差异具有统计学意义(P

表1

紫草素D半乳糖致老年性痴呆模型大鼠在Morris水迷宫中的游泳时间(x±s,n=30)

组别剂量(mg/kg)游泳时间(s)

Day1Day2Day3Day4Day5

空白2.0092.71±22.6771.81±43.0654.42±45.0928.01±25.3425.22±25.46

模型150.00106.33±36.992.23±39.94*84.24±43.84**52.78±48.27*48.74±46.40*

阳性药0.0898.56±27.7281.76±41.1266.92±41.1140.91±24.6531.47±27.52

紫草素高剂量7.00102.85±29.5483.23±38.6172.67±39.8842.35±26.4337.08±23.32

紫草素低剂量3.50104.53±30.6386.30±45.2382.79±40.3751.33±27.9047.55±33.12

注:与空白组比较,*P

2.2 紫草素对D半乳糖损伤所致老年性痴呆模型大鼠脑匀浆中SOD和MDA含量的影响 见表2。模型组大鼠各时间点的SOD浓度均明显低于对照组,而阳性药组和紫草素高剂量组在各时间点则显著高于模型组,两两比较差异具有统计学意义(P

表2

紫草素对D半乳糖致老年性痴呆模型大鼠脑匀浆中SOD和 MDA含量的影响(x±s,n=6)

组别剂量(mg/kg)SOD(NU/mg•prot)MDA(nmol/mg•prot)

空白2.00471.98±12.16**49.74±11.53**

模型2.00439.92±8.1286.82±18.47

阳性药0.08467.18±10.74**59.87±6.69*

紫草素高剂量7.00458.55±7.30*59.31±16.40*

紫草素低剂量3.50451.78±0.0661.55±7.90*

注:与模型组比较,*P

与SOD不同,MDA的浓度在各组呈现出相反的变化,其差异亦有统计学意义(P

3 讨论

老年性痴呆(AD)是一种严重危害老年人群身心健康的慢性神经退行性疾病。近年来,随着全球人口老龄化步伐的加快,该病的患病率呈现上升趋势。据国内外有关调查显示,西方发达国家60岁以上老年人的痴呆患病率达2.3%~11.9%,我国在北京、上海、西安和成都等四个中心城市对年龄≥55岁人口进行的调查表明痴呆患病率为2.7%~7.3%。

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研究表明,AD的发生与多种因素导致脑内学习记忆相关神经元损伤有关[2],其中氧化胁迫反应是主要病理改变之一。氧化胁迫可引起痴呆模型动物脑组织胆碱能神经和多巴胺能神经功能受损,胆碱乙酰化酶活性降低,单胺氧化酶活性(MAO-B)升高,造成脑内与学习记忆和认知功能相关的神经递质乙酰胆碱(ACh)及多巴胺等的水平降低。还可导致衰老神经元胞浆中脂质过氧化产物丙二醛(MDA)的含量明显增高,后者呈帽状结构围绕脂褐素沉积,并成为老年斑的组成部分。氧化胁迫尚能造成其顶下小叶中表达超氧化物歧化酶(SOD)及在海马中表达谷光甘肽(GSH)的mRNA基因转录水平降低,促进了神经元变性和痴呆的发生。

新疆软紫草提取物具有抗氧化和抗衰老等多种药理活性[3],其抗氧化能力相当于2,6-二叔丁基对甲酚的42%和维生素C的35.5 %[4],对D-半乳糖所致急性氧化性肝损伤具保护作用,对超氧阴离子(O-2)、羟自由基(•OH)和单线态氧(1O2)等有较强清除能力,对氧化胁迫损伤具有较好的拮抗作用[5],同时尚可延长果蝇寿命并呈现出一定的量效关系[6]。这些研究结果表明,软紫草可能具有抗AD患者神经元氧化胁迫损伤作用。

本研究发现紫草素具有一定的抗脑内氧化胁迫作用,能明显改善D半乳糖痴呆模型大鼠脑匀浆中的SOD 和MDA的活性及含量变化,改善其学习记忆能力,提示以紫草素为研究靶点有可能开发出新的抗老年痴呆药物,开展紫草素抗老年性痴呆作用研究具有重要基础及临床研究价值。

参 考 文 献

[1] 丛伟红,刘建勋,徐立. 脑维康对D半乳糖致脑老化模型大鼠学习记忆的影响. 中药药理与临床,2007,23(5):155.

[2] 刑宏义,孙圣刚. Alzheimer病的胆碱能系统研究进展.国外医学神经病学神经外科学分册,2000,27(5):262-264.

[3] 肖培根. 新编中药志. 化学工业出版社,2002:976-986.

[4] 王威. 天然紫草素的研究. 食品科学, 2002, 23(6):56-58

[5] 买尔旦•马合木提, 刘燕 , 尼加提•热合木. 新疆紫草提取物对 D2氨基半乳糖致小鼠急性肝损伤的保护作用. 中国中药杂志,2006,31(19):1646-1649.

第7篇：医学影像技术技能范文

关键词：独活；痴呆；AD模型大鼠；学习记忆能力

中图分类号：R285.5文献标识码：A文章编号：1673-7717(2011)12-2641-02

Effect of Duhuo on Abilities to Study and

Memorize of Model Rats Suffering from Alzheimer

ZHU Mandi1，QU Jing2，CUI Jiapeng2,advisor: WANG Caixia2

(1.Liaoning Health Vocational and Technical College, Shenyang 110101, Liaoning, China；

2.Liaoning University of TCM, Shenyang 110847,Liaoning,China)

Abstract:Objective：To investigate the mechanisms of Duhuo to affect the ability of learning and memory in AD model of Wister rats.Method：Aβ-amyloid protein injection method of Wister rats and Hippocampus was used to shape AD model, traditional Chinese medicine Duhuo, Western medicine indomethacin and saline were administered. After four weeks, effects of drugs on learning and memory in rats are observed through the water maze experiment. Result: And Conclusion：Duhuo water granula could regulate immune function so as to prevent and treat immune injury.

Key words:Duhuo；AD；AD model Wister Rats；abilities of learning and memory

老年性痴呆(Alzheimer’s Disease,简称AD) 是指老年期发生的以慢性进行性智力衰退为主要表现的神经精神疾病，是老年人的常见病和多发病，也是严重危害老年人身心健康的重大疾病之一，目前对此缺乏有效的治疗方法。我国人口老龄化的进程，随着社会的发展将日益加剧，本病将带来严重的医疗和社会问题\[1\]。

此项研究是以祛风除湿药物独活来延缓衰老和防治AD，根据中医传统理论并结合现代流行病学的研究成果，研究独活颗粒剂对AD模型大鼠学习记忆能力的影响，为中药治疗AD开创新的思路，具有重要的理论及应用价值。

1 实验材料

1.1 实验药品 江阴制药厂生产的独活颗粒剂，批号0702119，购于辽宁中医药大学附属医院药局；上海常虹制药厂生产的盐酸吲哚美辛片，批号20070709，购于辽宁省中医院药局；β-淀粉样蛋白（1-40），批号为0710120，购于瑞士巴亨公司；10%水合氯醛，0.9%的氯化钠溶液，购于辽宁省中医院药局。

1.2 实验动物 Wistar大鼠36只，均为雄性、健康，且都为15周龄（合格证书SCXK辽2003-0009号），体重为（350±20）g。

1.3 主要仪器及设备 Morris（包括电脑自动摄象装备系统）水迷宫系统；江湾Ⅰ型C大鼠脑立体定位仪，微量注射器、牙科钻及手术器械等；DS-88型高精度数学电子天平；M飞鸽牌离心机\[TDL-5-A\]；JEM-1200EX型透射电子显微镜；AX70OLYMPUS光学显微镜；RM2245型石蜡切片机；LKB-LTI型超薄切片机；电热恒温水浴锅。

2 实验方法

2.1 实验动物的分组 实验大鼠36只按完全随机化原则分为4组：模型组、独活组、西药组、假手术组，每组9只。

2.2 造模 将Aβ1-40用无菌生理盐水稀释成2g/L溶液，置37℃温箱内七天成为凝聚态的Aβ1-40备用。以10%的水合氯醛溶液腹腔注射麻醉动物。麻醉成功后，将独活组、西药组、模型组大鼠固定于大鼠脑立体定位仪上，经备皮消毒后，沿颅中缝做2～3cm的切口，经剥离而暴露前囟，用牙科钻在左右侧海马区钻开颅骨，用微量注射器自颅骨表面垂直进针4.5cm，缓慢注入凝聚态1μL Aβ1-40，留针5min后缓慢出针，缝合切口。假手术组以同样方法注射等量0.9%的氯化钠溶液，术后各组连续肌注3天青霉素以抗感染，剂量均为20万单位/天。

2.3 大鼠水迷宫实验 将大鼠放入水中，利用其生存本能，造模前、后各记录1次其学习找到平台的时间。训练大鼠于实验前学会水迷宫。将每只大鼠在相同入水点放进2次。记录大鼠的游泳轨迹、逃避潜伏期、游泳总路程等。允许大鼠在120s内找到平台，并于找到平台后在其上面保持30～60s以加强记忆。如果在此时间内找不到平台，就把大鼠引导到平台上，同样保持30～60s，再进行下一次训练。独活组每日以0.365g/mL浓度溶液灌胃，每天2mL/只，实验至第28天开始，进行药后空间学习记忆能力训练测试3天。

大鼠海马组织形态观察：大鼠在水迷宫测试以后，经戊巴比妥钠(40mg/kg)腹腔麻醉，分离出海马组织，用10%福尔马林固定后，采取石蜡包埋。

统计方法：采用SPSS 13.0软件包进行统计学分析，采用配对t检验，用±s表示。

3 结 果

3.1 AD模型大鼠水迷宫学习记忆能力的测定 见表1，插页Ⅲ图1。

注：与假手术组比较,*P

结果显示，术前各组比较均无差异；模型组、西药组、独活组各组给药前与手术前比较均有显著性差异（P

3.2 AD模型大鼠形态学方面的改变 光镜下观察：除淀粉样物质呈现红色以外，其他组织均呈现浅红色，细胞核呈现蓝色。见插页Ⅲ图2。

HE染色观察大鼠海马组织形态：光镜下，大鼠经海马注射Aβ后，海马区细胞根据形态上判断为小胶质细胞，因其聚集、增生、核小、深染，呈三角形或扁圆形，胞质少；稍向外周为反应性星形胶质细胞，表现为核稍大，染色较浅，呈卵圆形；CA1区锥体神经细胞被胶质细胞所取代，因其细胞带不完整，神经元丧失。周围细胞胞质嗜酸性增强，胞核固缩、溶解、消失，出现较多变形坏死的神经细胞，多数神经细胞形状不规则，部分神经核呈三角形或多角形等固缩状，核内结构模糊，浅染，大量胶质细胞增生见图1。

4 讨 论

4.1 AD模型的建立方法 AD动物模型主要有以下几种：与中枢胆碱能相关的AD动物模型、铝造成的AD动物模型、与β淀粉样蛋白(Aβ)相关的AD动物模型、自然衰老的动物模型、自身免疫性痴呆模型等。本研究所选用的是脑内注射Aβ模型，将Aβ注入动物脑内，造成神经元变性，其病理改变是脑内Aβ沉积，而脑注射部位有局灶性坏死。AD主要的病理学特征是脑神经细胞外形成SP、细胞内有NFT以及神经元丢失，其临床表现主要是中枢性认知障碍。

4.2 学习记忆的生理生化基础 AD的病因主要有以下几种学说：胆碱能学说、自由基学说、炎症和免疫学说、遗传学说、激素因素、免疫系统机能障碍、病毒学说、铝中毒学说、钙超载学说等。AD的主要临床表现是学习记忆能力障碍、智力减退以及行为与人格的改变。学习记忆能力的下降可能是和神经细胞突触的变化有关。大量研究证实，海马与学习记忆的关系极其密切\[2\]，因海马直接参与信息的存储和记忆。

4.3 中药预防AD 本实验通过给大鼠脑内注射Aβ造模，使其脑内出现β淀粉样蛋白沉积，学习记忆能力明显减退，独活颗粒剂能明显改善其学习记忆能力，因此，证实独活通过对免疫损伤的抑制作用，以达到延缓脑老化的目的。

独活，味苦辛而甘，微温。入肝、肾、膀胱经，具有祛风除湿、散寒止痛的作用。临床主要利用药典中对独活功效的记载来治疗风湿性疾病，同时独活还具有行气活血、温养营卫、通补兼得的抗衰老作用。

独活中的主要活性成份蛇床子素具有明显延缓细胞膜老化，阻止自由基对脑组织不饱和脂肪酸的氧化损伤作用，保护细胞膜结构,发挥抗衰老的机制。

祛风胜湿药通过调节机体免疫功能和抗炎作用治疗风湿系统疾病的疗效确切，与非类固醇类抗炎药物有类似的作用靶点\[3\]。中医祛风胜湿理论对减轻机体的炎性损伤不仅在风湿病治疗领域已得到充分证实，而且在临床中也得到广泛应用。因AD脑中存在炎症因子，祛风胜湿药同非类固醇类抗炎药物对免疫炎性损伤均具有很好的疗效，因此，提出独活可能对AD的治疗有效。

5 结 论

独活颗粒剂能够改善AD模型大鼠的学习记忆能力。

参考文献

\[1\] 范小兰，王玮，赵小贞．年龄、性别因素对大鼠水迷宫测试成绩的影响［J］．福建医科大学学报，2003，3(37)：53-54.

第8篇：医学影像技术技能范文

慢性支气管炎(CB)是一种严重危害人类健康的常见病，随着世界人口老龄化的到来，临床上CB的患病率逐年升高，早期积极防治具有重要意义。野为清热类药，具有疏风清热、消肿解毒、抗感染、抗病毒的功效，在全国各地(包括甘肃在内)均有出产。本实验旨在探讨野提取物对CB大鼠免疫功能及病理形态学的影响，通过实验揭示其效应及其部分作用机理，为野的临床广泛应用提供实验依据。

材料与方法

药物与试剂：精制脂多糖，美国Sigma公司产品；野提取物，野购自甘肃中医学院附属医院，提取物由甘肃中医学院中药制剂教研室协助制备；SOD测试盒，南京建成生物工程研究所提供(批号20080424)；其他试剂均为分析纯级。

实验仪器：电子天平，电子分析天平(上海精密科学仪器有限公司)，VIS-7220分光光度仪(北京瑞利分析仪器厂)，HH.SH.CV2型电热恒温水浴锅(济南医疗器械厂)。

实验动物：SPF级Wistar大鼠，48只，体重200±20g，雌雄各半，由甘肃中医学院科研实验中心提供。

分组及模型制备：48只Wistar大鼠，随机分为空白对照组，CB慢性支气管炎模型组，喘息灵对照组，野提取物低、中、高剂量组，每组8只。各组大鼠腹腔注射乌拉坦(1.4g/kg)麻醉后，仰卧位固定于操作台，常规消毒，纵向切开颈部，分离皮下，暴露气管，4号针头穿刺气管，除了正常对照组气管注入液以生理盐水代替内毒素外，其余注入1g/L的脂多糖200μl建立CB模型［1,2］；第8天起，正常对照组、CB模型组每日灌服等体积生理盐水，中药对照组灌服喘息灵胶囊0.13g/（kg•日），野低、中、高剂量组分别灌胃野提取物0.7、1.4，2、8g/（kg•日），共21天。

观察指标：①脾脏指数和胸腺指数检测：各组动物按上述方法给药后，第22天各组大鼠称重后处死，解剖，取脾脏、胸腺，用生理盐水洗净，吸干，称重，以脏器湿重(mg/g)表示脾脏指数和胸腺指数。②血清及肺组织匀浆的制备：各组动物按上述方法给药后，第22天各组大鼠股动脉取血分离血清待检。③用黄嘌呤氧化酶法测定各组大鼠血清及组织中的SOD水平。

结 果

野提取物对大鼠脾脏指数、胸腺指数的影响：模型组脾脏指数较空白对照组下降明显(P＜0.05)，野中、高剂量组脾脏指数比慢性支气管炎模型组大鼠明显升高(P＜0.05)，且高剂量组脾脏指数与低剂量组比较有显著差异(P＜0.05)；胸腺指数各组间比较无显著性差异。见表1。

野提取物对大鼠血清及肺组织SOD含量变化的影响：模型组大鼠血清和肺组织中的SOD活力与空白对照组比较明显降低(P＜0.05)，除野提取物低剂量组外，其余各组与模型组比较，大鼠血清和肺组织中的SOD活力均明显升高差异(P＜0.05)，且高剂量组与低剂量组比较有统计学意义(P＜0.05)。见表2。

讨 论

本研究CB模型制造成功，脾脏指数、胸腺指数是反映机体免疫功能最直接的指标。采用脂多糖复制的CB大鼠模型由于缺氧和慢性炎症，细胞耗氧量明显增加，体内产生大量自由基，其血清、肺组织中SOD活力显著下降，脂质过氧化反应增强，而肺部慢性炎症又使得机体抵抗力降低，抗自由基能力减弱，加剧了细胞坏死和组织损伤，致使病情进一步加重，肺功能进一步减退［1］。而经野提取物具有抗氧化作用，治疗后，SOD水平显著提高，表明野提取物确具有降低脂质过氧化反应，减轻氧自由基损伤，保护肺组织的作用。

本课题实验证明调节免疫、降低脂质过氧化反应，改善肺组织的病理损伤均为野提取物减轻CB炎症效应的机制。

第9篇：医学影像技术技能范文

【关键词】 瑞舒伐他汀；奥美沙坦酯；高血压

DOI：10.14163/ki.11-5547/r.2016.30.094

高血压多发于老年群体中， 为临床常见心血管疾病。其致病原因为生活方式不健康、膳食结构不合理等。高血压老年患者临床症状不典型， 易受外界因素影响， 血压较不稳定， 且易产生性低血压[1]。相关研究指出， 高血压患者心血管不良事件的发生率不仅与患者的血压值密切相关， 且与血压变异性的变化联系紧密[2]。传统治疗高血压多采用单药口服治疗， 效果较不理想。本研究选取本院收治的68例老年高血压患者， 通过分组， 对比分析瑞舒伐他汀联合奥美沙坦酯对老年高血压患者内皮功能及血压变异性的影响。结果报告如下。

1 资料与方法

1. 1 一般资料 选取本院2013年5月～2015年4月收治的68例老年高血压患者， 随机为对照组和研究组， 各34例。对照组男18例， 女16例， 平均年龄（69.4±7.5）岁；研究组男19例， 女15例， 平均年龄（69.5±7.6）岁。两组患者一般资料比较， 差异无统计学意义（P>0.05）， 具有可比性。

1. 2 方法 对照组患者予以奥美沙坦酯（福建天泉药业股份有限公司， 国药准字H20150016）口服治疗， 1次/d， 20 mg/次。研究组患者在对照组基础上予以瑞舒伐他汀（山东朗诺制药有限公司， 国药准字H20153194）口服治疗， 1次/d， 10 mg/次。两组患者均连续治疗12周。

1. 3 观察指标 比较两组患者治疗前后血压变异性及内皮功能指标变化。包括内皮功能指标ET-1、NO。血压变异性包括日间收缩压标准差（dSSD）、日间舒张压标准差（dDSD）、夜间收缩压均数（nSBP）、夜间舒张压均数（nDBP）、24 h SBP、24 h DBP。

1. 4 检测方法 两组患者均于清晨抽取5 ml空腹外周静脉血， 予以抗凝及离心处理后， 取上清液置入EP管内低温下保存。应用放射免疫法及化学比色法分别测定ET-1、NO水平。

1. 5 统计学方法 采用SPSS18.0统计学软件进行数据统计分析。计量资料以均数±标准差（ x-±s）表示， 采用t检验；计数资料以率（%）表示， 采用χ2检验。P

2 结果

2. 1 两组患者内皮功能指标变化比较 治疗前， 两组患者内皮功能指标比较， 差异无统计学意义（t=1.319、0.755， P>0.05）；治疗后， 两组患者内皮功能指标均显著改善， 研究组ET-1及NO水平优于对照组（t=6.349、6.916， P

2. 2 两组患者血压变异性比较 治疗前， 两组患者血压变异比较， 差异无统计学意义（t=0.779、0.182、0.304、0.526、0.759、0.412， P>0.05）；治疗后， 两组患者血压变异性均优于治疗前， 且研究组明显优于对照组（t=3.022、3.162、3.353、2.038、2.022、2.135， P

3 讨论

近年来， 随着我国人口老龄化趋势的发展及人们生活方式的转变， 其发病率逐年增长。但相关研究显示[3]， 我国老年高血压患者的血压控制达标率与治疗率较低。目前， 高血压的临床治疗目标为最大程度降低死亡率及心血管并发症发生率。

相关研究表明[4]， 血压波动幅度较大是引发脑卒中的独立影响因素， 血压波动上升， 脑卒中发生危险随之增加， 同时还可引发内皮炎症反应。因此控制高血压患者血压变异性水平可有效预防、减少心血管事件发生。ET-1与NO为血管内皮细胞功能重要标识， 由血管内皮细胞合成， 二者水平与高血压形成与发展联系密切。本研究对老年高血压患者予以瑞舒伐他汀与奥美沙坦酯联合治疗， 结果显示治疗后， 两组患者内皮功能指标均显著改善， 研究组ET-1及NO水平优于对照组（P

综上所述， 对老年高血压患者予以瑞舒伐他汀与奥美沙坦酯联合治疗， 可显著降低患者血压变异性， 有效改善内皮功能， 在临床治疗中具有重要意义。

参考文献

[1] 沈燕青， 徐欣， 陈浩.瑞舒伐他汀联合奥美沙坦对老年高血压患者内皮功能和血压变异性的影响.中国老年学杂志， 2016， 36（3）：611-613.

[2] 贺文婷， 欧妍， 拓红梅.瑞舒伐他汀和缬沙坦对高血压患者颈动脉内膜厚度及血清炎症因子的影响.陕西医学杂志， 2014， 43（11）：1531-1532.

[3] 黄珏凡.瑞舒伐他汀联合坎地沙坦治疗高血压合并高脂血症的临床观察.包头医学院学报， 2013， 29（3）：45-47.

[4] 周政.缬沙坦氨氯地平片联合瑞舒伐他汀对高血压患者hs-CRP和MMP-9浓度的影响.吉林医学， 2016， 37（3）：567-568.