动物免疫的方法精选(九篇)

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第1篇：动物免疫的方法范文

[关键词]免疫血清；免疫；免疫学试验；效价

[中图分类号]R392.7

[文献标识码]B

[文章编号]1674-4721(2009)12(b)-139-02

动物免疫血清的制备是一项常用的免疫学实验技术，广泛用于临床诊断、治疗和预防中，为教学、科研、检验之常用。在医学免疫学教学中，形象、直观、简易的直接凝集反应有助于学生了解抗原、抗体及抗原抗体间的免疫反应等抽象的概念，免疫血清的质量直接影响实验的特异性和敏感性。因此，制备高质量的免疫血清是建立高水平检测方法的前提条件。但免疫血清的制备较复杂，且需学生动手操作，用量较大，为达到这一目的，除了具备理想的免疫原外，还需要选择适宜的动物和设计有效可行的免疫程序或方案。通过多年的工作实践，笔者制备了高效价、高特异性、高亲和性的动物免疫血清，既经济又方便，供教学、科研所用，提高了实验的开出率。

1　方法与结果

1.1　动物的选择及饲养

制备抗血清的动物主要是哺乳类和禽类。羊、马、豚鼠、兔都是常用的动物，在实验中，选择动物时应考虑抗原与动物的种属关系、抗原性质与动物种类、免疫血清的需要量、要求以及动物个体等因素。因不同动物对同一抗原的敏感性不同，免疫时至少取用2只以上动物。选择制备免疫血清的动物必须是适龄、健壮、无感染的正常动物，体重最好在2～3 kg，年龄6个月以上，因雌性动物在性周期的不同阶段和怀孕、授乳时机体对抗原的敏感性有较大改变，所以一般挑取雄性动物。动物免疫后要认真做好动物的编号、标记、管理和记录，本实验用的动物是健康家兔。

1.2　抗原的制备

1.2.1　抗原稀释

用灭菌生理盐水将抗原稀释为2mg／ml，放置4℃过夜，次日取出，与佐剂混合制成乳剂后用于动物免疫。免疫原的注射剂量随抗原的性质有较大差异。一般考虑抗原的免疫原性的强弱、分子量大小、抗原的纯度、有无毒性及动物个体状态、免疫途径和时间、佐剂的使用与否等。对于纯的可溶性抗原，免疫时需与等量的弗氏完全佐剂混合，其免疫剂量以动物体重计算，一次注入的总剂量以0.5 mg／kg为宜。通常免为100～1000μg／次。另外免疫周期长者可少量多次注射，免疫周期短者可大量少次注射制备高度特异性的抗血清，选用低剂量抗原短程免疫法。

免疫周期随抗原和免疫方法的不同以及是否使用佐剂而变化。单次注射抗体产生缓慢，效价低，维持时间短，但抗体特异性高；多次注射无以上缺点，但抗体特异性有所降低，一般以3～4次较合适。注射间隔时间一般以1～2周为宜。间隔时间短，起不到再次免疫的作用；太长，则免疫过程延长，从而影响血清的特异性，如无佐剂时间隔2～4d，加用佐剂时可间隔10～30d。初次免疫与第二次免疫的间隔时间多为2～4周，此后，每次加强免疫的间隔时间为2～3周。

1.2.2　佐剂和抗原乳剂的配制

1.2.2.1　佐剂的配制。弗氏完全佐剂，各实验室的配方不尽相同，我室采用的配方如下：医用液体石腊20 ml与羊毛脂12g混匀加热溶化，分装于青霉素小瓶，用纱布、线绳扎紧瓶塞。高压灭菌，4℃保存备用。于免疫前准备抗原乳剂制备时，以活卡介苗代替死结核菌，每毫升试剂中加入10mg活卡介苗，即为弗氏完全佐剂。

1.2.2.2　抗原乳剂的制备。本实验选用注射器推注法：将抗原溶液和等量的完全佐剂(注意佐剂必须先加热融化。不超过50℃)分别吸入两个5 ml注射器内，在两个注射器的12号针头间用一根长约8-12 cm的医用无毒塑料管。将两个注射器连接在一起(塑料管必须浸泡消毒与注射器针头相连接)。针头塑料管1～2 cm然后两人相对而坐。缓缓推动针栓，使管内溶液进入塑料管道至对侧注射器内，每次必须把管内容物全部推出，另一侧同样操作，使管内液体往返混合直至形成油包水乳剂为止。

制成的乳剂是否形成油包水乳剂直接影响免疫效果，因此，必须进行质量检查。检查的方法：将制成的乳剂滴在凉的自来水表面，质量合格的乳剂滴入水面保持乳滴珠完整而不分散；如进入水面后立即扩散，水面油花逐渐扩大即不合格，应继续乳化至合格为止。

1.3　免疫途径、注射时间、部位及剂量

不同的免疫途径，抗原在体内的的代谢速度不同，对免疫系统的刺激强弱也就不同，因而产生抗体的水平也就不同。抗原的注射途径可根据免疫动物个体的大小、抗原及抗体制备目的或要求不同，选用皮内、皮下、肌肉、静脉或腹腔等不同途径免疫。本实验对家兔使用皮内和皮下多点注射。第1周在足、掌皮内注射含佐剂抗原0.1ml，第2周在腹部皮下注射含佐剂抗原0.5 ml，第3周在腹部皮下注射不含佐剂抗原0.5 ml，第4周在腹部皮下注射不含佐剂抗原0.5 ml。

1.4　试血及测定抗体效价

末次注射10 d后于耳静脉采血2 ml，分离血清进行试血。笔者选用免疫双扩散法在56℃条件下加热30 min灭活补体。在琼脂板中间孔加稀释的抗原10μl( mg／ml)，周围孔依顺时针方向，分别加入用生理盐水或PBS按1：2，1：4，1：8，1：16，1：32和1：64的比例稀释的动物免疫血清。经37℃保温24 h后观察结果，效价在1：16以上即可决定采血。选用环状沉淀试验将一定浓度的抗原200μl加入到环状沉淀管中，然后在抗原液面上加入稀释的免疫血清，如在20 min内，抗原与血清的交界面能出现“++”的沉淀环，以沉淀环的直径、大小来判断效价的高低。一般效价高达1：2040以上才可放血。

1.5　取血、分离、分装及保存

免疫动物经效价检测合格后即可考虑取血。为减少血清中的脂肪含量，放血前可考虑停食12 h。本实验采用心脏穿刺取血，无菌技术进行操作，动物于仰卧位固定，用食指探明心脏博动量高部位，剪去少许毛。用2.5％碘酒和75％酒精消毒后，以9号针头在预定位置与胸部呈45。角刺入心脏，微微上下移动针头，待血液进入针筒后，即将注射器位置固定取血。2.5kg体重的家兔一次可取血20～30ml。取血后由静脉缓缓注入等量5％葡萄糖液以补足失血量。取血的兔子经2～3个月休息。可再次加强免疫后取血。

1.6　分离血清及免疫血清的保存

无菌条件下将平皿或三角瓶内的血液凝固血块收缩后，用无菌滴管吸取血清，于3 000 rpm离心15 min。取上清液。合格后的抗血清以1：100比例加入1％的硫柳汞或5％的叠氮钠，最后浓度分别为0.01％或0.05％，用无菌滴管将抗血清分装小管，每管装1ml左右。-20℃以下保存，可保存2年以上。如有条件可将血清冷冻干燥保存于4℃以下冰箱。保存时间更久。

第2篇：动物免疫的方法范文

（兵团第六师五家渠市畜牧兽医工作站，新疆五家渠831300）

收稿日期：2014—11—24

摘要：实施动物强制免疫是国家预防控制重大动物疫病的有效手段之一。本文对六师辖区内畜禽实施口蹄疫、高致病性禽流感、猪瘟、高致病性猪蓝耳病和小反刍兽疫强制免疫抗体检测不合格单位进行了走访调查，查找并分析了影响动物免疫水平的相关因素，为今后进一步做好重大动物疫病防控工作提供参考。

关键词 ：动物疫病；免疫；调查

近年来，随着畜牧业的快速发展，新的动物疫病不断发现、传入，高致病性禽流感、小反刍兽疫、高致病性猪蓝耳病、口蹄疫A型等传染病先后发生流行。严重影响了畜牧产业的发展，给我国养殖业带来了巨大经济损失[1]。我国高度重视动物疫病防控工作，动物疫病实行预防为主的方针，有计划的实施动物疫病控制、消灭和净化工作。

六师对辖区内畜禽实施口蹄疫、高致病性禽流感、猪瘟、高致病性猪蓝耳病和小反刍兽疫按照重大动物疫病强制免疫的要求，在3月、7月、11月开展集中免疫，月月补免，新生畜、补栏畜禽及时实施初免和加强免疫，应免畜禽100%免疫，常年免疫密度达90%以上。并对口蹄疫、高致病性禽流感等免疫情况进行抗体检测，评价免疫效果，要求口蹄疫、高致病性禽流感等免疫抗体合格率达70%以上。通过检测，口蹄疫、高致病性禽流感等个体免疫合格率基本上达到了70%以上，但是部分检测场点合格率低于70%。对此，我们对免疫抗体检测不合格单位进行了走访调查，查找并分析了影响动物免疫抗体产生的相关因素，现总结如下。

1漏免

动物流动性大，调运频繁，导致部分动物没能及时免疫。尤其是一些专门从事活畜买卖的活动者，他们根据活畜交易价格进行灵活交易，其饲养活畜的时间长短不一，而动物防疫采取的是定期免疫，易导致漏免。而且，受养殖场舍建设条件限制，已免动物和未免动物混群饲养。随机采样时，未免动物的样品占到一定比例，从而导致免疫群体免疫合格率低，还有一部分动物在免疫过程中由于保定不彻底，逃脱免疫，采样时采集到该动物样品，也降低了免疫合格率。

2实际免疫情况不详

《动物防疫法》规定，饲养动物的单位和个人应该履行动物防疫义务，即畜主作为防疫主体，有义务做好动物防疫工作。兽医机构对其进行技术指导、培训、宣传教育和监督。而当前的现状是，大型的、公司化运作的养殖企业，有专职的防疫人员开展免疫工作，中、小规模养殖场、散养户仍然依赖兽医站人员为其实施免疫。防疫人员在任务量大时，把疫苗交给养殖户，由养殖户自己免疫。在监管不力时，不管养殖企业，还是中、小规模养殖场、散养户，其免疫是否实施，免疫时间、免疫数量、免疫剂量等不得而知。另外，由于工作待遇较低，防疫任务繁重，防疫员工作积极性受到影响，个别防疫员免疫工作不到位。

3疫苗质量问题

目前市售疫苗厂家多，疫苗品种、类型繁多，有单苗、双价苗、联苗，有灭活苗、弱毒苗，也有合成肽疫苗、基因工程疫苗等，可能部分批次的疫苗质量存在问题。笔者曾遇到一起疫苗质量事件，某口蹄疫A型疫苗，外观、包装完好，且按照要求保存，在第一次吸取液体后，剩余液体出现分层现象。近年来，牛、羊口蹄疫O型和亚I型免疫抗体检测出现以下情况：牛、羊口蹄疫O型免疫抗体检测均合格的单位，其亚I型免疫抗体检测却不合格；或者出现牛、羊口蹄疫O型、亚I型免疫抗体检测均合格的单位，其口蹄疫O型免疫抗体检测合格的数量要比亚I型多，二者免疫合格率相差较大，认为也可能是疫苗的质量问题。

另外，未按照疫苗保存温度要求保存，灭活疫苗紧贴冰箱内壁结冰；或冷冻疫苗未用疫苗专用车辆运送，造成疫苗有效成分下降、失活，都会影响免疫质量。

4免疫操作不当

常用疫苗免疫方法有注射免疫、饮水免疫、滴鼻和点眼等方法。不管使用那种免疫方法进行免疫，如果操作不当，就会造成疫苗污染、免疫剂量不足等问题，导致机体产生的抗体水平低下。另外，如果免疫器械受损，未能及时进行检查和更换，将直接导致免疫剂量不足，影响免疫抗体水平。

5免疫期过长

动物在免疫后免疫抗体水平呈上升趋势，当达到一定水平后会维持一段时间，之后逐渐下降[1]。因此，免疫期长，免疫抗体效价也越低，免疫合格率就会越低。以小反刍兽疫为例，2014年1月份实施紧急免疫接种，3月份检测，免疫合格率达到70%以上，8月份检测，免疫合格率仅为60%。免疫合格率下降了10%，如果不进行加强免疫，在以后的检测中，小反刍兽疫免疫抗体水平还会下降。

6个体差异

部分牲畜体质虚弱，免疫后不能很好的产生免疫抗体。部分牲畜有免疫耐受性，疫苗免疫不敏感，导致免疫抗体处于低水平状态。

7未加强免疫

按照免疫程序，新生畜禽在初免后，间隔1个月时间应实施加强免疫，且剂量加倍。但是调查发现，部分畜禽没有很好地实施加强免疫。尤其是在小规模肉鸡饲养场，由于饲养周期短，受其它疫苗免疫程序影响，禽流感H5N1亚型灭活疫苗只免疫1次。与加强免疫的群体抗体效价和免疫合格率相比，其免疫效价和免疫合格率均低于加强免疫的样品。

8应激反应

在实施免疫时，畜禽很容易受到高温天气、惊吓、保定、剧烈运动等因素的影响，发生应激反应。另外，疫苗免疫也是一种应激因素。发生应激反应会影响机体免疫系统和功能，降低机体防卫能力，造成免疫抑制。同时，防卫机能减弱，容易引发其它疾病发生，也可造成免疫抑制。

9免疫抑制性疾病

免疫抑制性疾病不仅引起原发感染和继发感染，而且损害机体免疫功能，导致免疫耐受、免疫麻痹，降低疫苗免疫应答能力，甚至不产生免疫应答，致免疫失败。如猪病有繁殖障碍和呼吸障碍综合征、猪圆环病毒II型、猪瘟、伪狂犬病、猪气喘病等，鸡病有传染性法氏囊病、马立克氏病、鸡传染性贫血病、禽白血病等。

参考文献

[1]胡辉忠.湟中县重大动物疫病防控现状调查与思考[J].上海畜牧兽医通讯， 2012（2）： 69-70.

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第3篇：动物免疫的方法范文

【关键词】 ，，重症肌无力;受体，胆碱能;小鼠，转基因

［摘要］ ［目的］ 探讨电鳐乙酰胆碱受体诱导人免疫球蛋白转基因小鼠实验性自身免疫性重症肌无力的机制. ［方法］ 将电鳐电器官分离并纯化的乙酰胆碱受体作为免疫原，免疫人免疫球蛋白转基因小鼠，以放射免疫方法测定小鼠血清中抗乙酰胆碱受体抗体滴度，以免疫荧光技术观察小鼠骨骼肌中抗乙酰胆碱受体抗体的结合性. ［结果］ 小鼠血清中的抗乙酰胆碱受体抗体滴度为155～539pmol，小鼠肌肉中具有人抗乙酰胆碱受体抗体. ［结论］ 电鳐乙酰胆碱受体刺激人免疫球蛋白转基因小鼠产生的人抗乙酰胆碱受体抗体，可与肌肉组织中的乙酰胆碱受体结合，导致肌肉收缩无力，可诱导重症肌无力.

［关键词］ 重症肌无力;受体，胆碱能;小鼠，转基因

ABSTRACT:OBJECTIVE To investigate the pathogenesis of experimental autoimmune myasthenia gravis（EAMG），induced with Torpedo acetylcholine receptor（AChR），in mice transgenic for human immunoglobulin（Ig）loci.METHODS Mice transgenic for human Ig loci were immunized with Torpedo AChR，isolated and purified from electronic organs of Torpedo.The titers of anti-mouse AChR antibody in the sera of mice were determined by radioimmunoassay.The binding of human anti-AChR antibodies to the AChR in the muscle of mice was measured by immunofluorescence technique.RESULTS The titers of anti-mouse AChR antibodies in the sera ranged from155to539pmol.The human anti-AChR antibodies were found to bind to the muscle section.CONCLUSION The human anti-AChR antibodies，secreted from the mice transgenic for human Ig loci，induced with Torpedo AChR，are able to bind to AChR in the mouse muscles，which leads to the damages of AChR，resulting in the animal EAMG.

Key words:myasthenia gravis;receptors，cholinergic;mice，transgenic

抗乙酰胆碱受体抗体与神经肌肉接头处的乙酰胆碱受体结合，可激活补体而使突触后膜乙酰胆碱受体遭到破坏，导致肌肉收缩无力，出现重症肌无力症状.引起重症肌无力的病因目前尚不清楚，但若给动物免疫乙酰胆碱受体或注射抗乙酰胆碱受体抗体，可引发实验性自身免疫性重症肌无力 ［1，2］ .在以乙酰胆碱受体作为免疫原建立重症肌无力动物模型中，常用由电鳐电器官制备的乙酰胆碱受体，是因为电鳐的乙酰胆碱受体含量及与哺乳类动物骨骼肌乙酰胆碱受体的同源性均较高 ［3］ .电鳐乙酰胆碱受体刺激动物产生的抗电鳐乙酰胆碱受体抗体可与动物本身骨骼肌的乙酰胆碱受体进行交叉反应.本实验室曾报道了以电鳐乙酰胆碱受体免疫人免疫球蛋白转基因小鼠建立重症肌无力动物模型 ［4］ ，其中发现实验动物出现重症肌无力的关键症状，即肌肉收缩无力，血清中亦检测到了抗电鳐乙酰胆碱受体抗体.本文探讨了电鳐乙酰胆碱受体诱导人免疫球蛋白转基因小鼠实验性自身免疫性重症肌无力的机制.

1 材料与方法

1.1 材料 含人免疫球蛋白μ，γ1，κ胚系基因的转基因小鼠由荷兰马斯特里赫特大学医学院神经学系神经免疫学实验室根据文献［5，6］介绍的方法建立.电鳐乙酰胆碱受体由本实验室从电鳐电器官（Pacific Biomarine，California，USA）中分离，并经眼镜蛇毒素亲和层析纯化获得 ［7］ ; 125 I-α-银环蛇毒素为英国Amersham Pharmacia Biotech公司产品;小鼠乙酰胆碱受体粗提液由本实验室从小鼠骨骼肌中提取;羊抗人免疫球蛋白血清为本实验室自制;羊抗人免疫球蛋白G购自美国Cappel，ICN Pharma-ceuticals公司，用时以1∶100稀释;异硫氰酸荧光素标记的兔抗羊免疫球蛋白抗体购自德国Cappel，ICN Biochemicals公司，用时以1∶50稀释.

1.2 动物的免疫 15μg纯化的电鳐乙酰胆碱受体中加入完全弗氏佐剂，注射于9只小鼠尾根部皮下，3，5周后分别以15μg纯化的电鳐乙酰胆碱受体加入不完全弗氏佐剂行加强免疫;对照组3只小鼠只注射完全弗氏佐剂或不完全弗氏佐剂.

1.3 抗乙酰胆碱受体抗体的测定 应用放射免疫方法测定小鼠血清中抗乙酰胆碱受体抗体的滴度. 将2nmol25 I-α-银环蛇毒素混合入200μL小鼠乙 酰胆碱受体粗提液内，在4℃条件下标记4h，加入5μL动物血清，4℃过夜，以过量的羊抗人免疫球蛋白血清沉淀小鼠乙酰胆碱受体-抗体复合物，用磷酸盐缓冲液洗涤后，在γ计数仪上测定放射比活性.抗体滴度用每升α-银环蛇毒素结合摩尔数表示.

转贴于

1.4 骨骼肌抗乙酰胆碱受体抗体结合性测定 应用免疫荧光技术观察小鼠骨骼肌中抗乙酰胆碱受体抗体的结合性.将小鼠骨骼肌冰冻切片并以丙酮固定后，用20g/L牛血清白蛋白封闭15min，加入羊抗人免疫球蛋白G，作用45min，洗涤，加入异硫氰酸荧光素标记的兔抗羊免疫球蛋白抗体，继续作用45min，观察结果.

2 结果

2.1 小鼠血清抗乙酰胆碱受体抗体滴度 在行第2次加强免疫注射电鳐乙酰胆碱受体3d后，心脏穿刺采血，检查血清中抗体滴度.9只实验小鼠的抗乙酰胆碱受体抗体滴度为155～539pmol（Fig1）.

2.2 骨骼肌抗乙酰胆碱受体抗体的结合 免疫荧光观察结果表明，小鼠肌肉冰冻切片中可见抗乙酰胆碱受体抗体（Fig2略）.

3 讨论

自从1973年Patrick和Lindstrom ［8］ 应用电鳗乙酰胆碱受体免疫家兔建立第一个重症肌无力动物模型以来，已经在小鼠、大鼠、豚鼠、猴及猪等多种动物中成功地建立了重症肌无力模型，为研究重症肌无力的发病机制和免疫治疗提供了有效途径.制作出与人重症肌无力更为接近的实验性自身免疫性重症肌无力动物模型已成为紧迫的研究课题.较为理想的动物模型应含有人免疫球蛋白、主要组织相容性抗原和乙酰胆碱受体基因.1994年Lonberg等 ［5］

建立了表达人免疫球蛋白的转基因小鼠，这使制作 这种新的重症肌无力动物模型成为可能.人免疫球蛋白转基因小鼠无论接受何种乙酰胆碱受体的免疫刺激，均将产生人免疫球蛋白，得到的重症肌无力动物模型在免疫学方面更接近人重症肌无力.本研究结果表明，人免疫球蛋白转基因小鼠在接受电鳐乙酰胆碱受体刺激后，小鼠血清中抗乙酰胆碱受体抗体滴度在155～539pmol范围内，仅为抗电鳐乙酰胆碱受体（免疫原）抗体滴度（6～296nmol） ［4］ 的0.2%，与Berman等 ［9］ 研究结果相一致.免疫荧光观察证实，小鼠肌肉中存在人抗乙酰胆碱受体抗体.上述结果表明，电鳐乙酰胆碱受体作为免疫原，可刺激人免疫球蛋白转基因小鼠产生人抗乙酰胆碱受体抗体，它可与肌肉组织中乙酰胆碱受体结合，导致乙酰胆碱受体功能失调，最终诱导实验性自身免疫性重症肌无力.人免疫球蛋白转基因小鼠实验性自身免疫性重症肌无力动物模型的建立及其机制的阐明，为研究制作理想的重症肌无力动物模型奠定基础，亦为获得人源性抗乙酰胆碱受体单克隆抗体及基因工程抗体提供了新的途径.

［参 考 文 献］

［1］ Meng F，Stassen M，Schillberg S，et al..Constructionand characterization of a single chain antibody fragment derived from thymus of a patient with myasthenia gravis ［J］.Autoimmunity，2002，35:125.

［2］ De Baets M，Stassen M.The role of antibodies in myas- thenia gravis［J］.J Neurol Sci，2002，202:5.

［3］ Lennon VA，Lindstrom JM，Seybold ME.Experimental autoimmune myasthenia:a model of myasthenia gravis in rats and guinea pigs［J］.J Exp Med，1975，141:1365.

［4］ 李红花，金桂花，孟繁平，等.重症肌无力转基因小鼠模型的建立［J］. 延边大学医学学报 ，2006，29（2）:79.

［5］ Lonberg N，Taylor LD，Harding FA，et al..Antigen- specific human antibodies from mice compressing four distinct genetic modifications［J］.Nature，1994，368:856.

［6］ Fishwild DM，O'Donnell SL，Bengoechea T，et al.. High-avidity IgGκmonoclonal antibodies from a novel strain of minilocus transgenic mice［J］.Nat Biotechnol， 1996，14:845.

［7］ 杨康鹃，孟繁平，de Baets M.电鳐乙酰胆碱受体的分离 和纯化［J］. 延边大学医学学报 ，2004，27（1）:5.

第4篇：动物免疫的方法范文

【关键词】动物吸伤;伤口处理;注射狂犬疫苗;免疫球蛋白血清

动物咬伤是门诊常见疾病，而宠物、家畜等温血动物咬伤或抓伤可以引起人畜共患的疾病，如狂犬病，鉴于狂犬病的100%致死性和暴露后处置的安全性，伤口的处理尤为重要，现报告如下：

1临床资料

1.1 一般资料:全部伤者来自2008.3.13-2011.5.30本院门诊病人，男142例，女89例，年龄1-5岁20人，6-14岁64人，15-60岁138人，60岁以上9人。致伤动物：猫20例，狗196例，鼠1例，猴1例，兔1例。处理时间：1小时处理198例，4小时处理23例，8小时处理25例，≥24小时处理：2例。伤势程度：II期228例，III期3例，缝合2例，全部狗咬，1例肌注免疫球蛋白，肌注破伤风112例，肌注狂犬疫苗231例:其中1小时内肌注113例，1-8小时内62例，8-24小时51例，24小时以上5例。

1.2处理方法：伤口用皂水或肥皂、流动水彻底冲洗，无论是否自行处理经伤口，未结痂，处理至少15分钟，由医务人员规范处理，用生理盐水将伤口洗净，然后用干菌脱脂棉将伤口处残留液吸尽，避免在伤口处理留肥皂水，较深伤口清洗时，用注射器插入伤口深部进行灌注清洁，做得全面彻底，伤口较大时可使局部麻后进行冲洗，伤口深时应用双氧水，最后碘伏或碘酒进行消毒。2例颜面部给予缝合，3例给予5天静滴抗生素防感染，10例给予抗生素口服。1例处理伤口用免疫球蛋白在伤口及周围作浸润注解。

2结果

伤口全部治愈，无并发症，1例肌注狂犬疫苗后发热39。C，给予对症处理。随访无并发症。

3讨论

讨论：狂犬病是引起人类共的急性传染病，狂犬病在人体内潜伏期可以是几天长至数年，发病后病程进度较快，一般1月患者即痛苦地死亡，死亡率高达100%，狂犬病疫苗的使用对减少狂犬病的发生起到了至关重要的使用。

3.1狂犬病预防:

表1 WHO推荐的暴露后治疗指南

3.2及时处理伤口:尽快用20%肥皂水或0.1%新洁尔灭反复冲洗，办求去除狗涎，挤出污血。如果是穿通伤口，应用插管插入伤口内，用注射器灌清水冲洗，冲洗后用5%碘酊反复烧灼伤口。除非伤口大血管需紧急止血外，即使伤口深大，也不应缝合、包扎。对伤口周围的皮肤有针刺，尽量挤压出血或用火罐拔毒，。切忌用嘴吮吸伤口，以防止口腔黏膜感染。严重咬伤及伤口靠近头部的病人，用抗狂犬病免疫血溥 或免疫球蛋白在伤口及周围作浸润注射。此外，需要防止细菌感染或破伤风[1]。

3.3狂犬疫苗接种:我国对暴露后接种的方案为：一般咬伤按5针法免疫（0、3、7、14、28天各接种1针），严重咬伤者应于第0、3天加倍量注射。疫苗应在上臂三角肌肌内注射，儿童应在大腿前外侧区肌内注射，严禁臀部注射。

对于某些免疫低下和特殊人群应在首针注射加倍或3倍剂量注射，如：注射疫苗前1个月内注射过免疫球蛋白或抗血清；慢性病病人如肝硬化；先天性或获得性免疫缺陷病病人；接受免疫抑制药物（包括皮质类固醇和抗疟疾药物）病人；老年人；暴露后48小时更长时间接种疫苗者；严重营养不良者。由于狂犬病的潜伏期很长，因此对暴露后已过数月者也应与刚被暴露者一样以相同方案接种疫苗。

关于禁忌证的问题，专家认为因为狂犬病是致死的疾病，对高度危险的暴露者由于某种原因而不给予全程治疗的做法应慎重考虑。患者对一种疫苗发生过敏反应可以改用另一种类型的疫苗。只有在接种疫苗后出现无法控制的严重过敏反应时才能中断疫苗接种。有严重变态反应史的患者接种疫苗时应备有肾上腺素。孕妇不应作为狂犬病疫苗接种的禁忌证。对于一般患者必须给予全程足量的疫苗免疫[2]。

3.4狂犬人免疫球蛋白 狂犬人免疫球蛋白主要用于接触狂犬病动物对象的预防，被病犬2咬伤后立即按每公斤体重肌内注射20IU狂犬人免疫球蛋白，若与狂犬疫苗联合使用，效果更好。在预防狂犬病过程中，疫苗可作为重要补充，生效快，使用安全可靠，不会引起变态反应[3]。

4动物咬伤处理应注意

4.1动物咬伤，会造成狂犬病的传染，可疑动物、温血动物、野生动物、啮齿动物、猫、蝙蝠等，一定要接种疫苗。

4.2可疑动物舔伤抓伤，伤口处理是预防狂犬病的关键，伤口处理愈早愈好。

4.3预防伤口较深、较宽可给予破伤风疫苗，狂犬病疫苗、狂犬病等免疫球蛋白的预防。在经济条件的一定给予用抗狂犬病免疫血清或免疫球蛋白在伤口及周围作浸润注解。

4.4健康教育：尤其是学校、幼儿园的小朋友，掌握狂犬病的常识，在被抓伤、舔伤后能及时告诉家长得到及时处理，更好防病。

参考文献

[1]蔡淑清.狂犬病.杨绍基主编.传染病学.2006.6.100

第5篇：动物免疫的方法范文

一、指导思想

坚持“预防为主、防控结合”的原则，深入科学发展观统领防控工作全局，切实履行“村不漏户、户不漏畜、畜不漏针”的职责，以高致病性禽流感、口蹄疫、高致病性猪蓝耳病、鸡新城疫、猪瘟等重大动物疫病和狂犬病等人畜共患病为防控重点，统筹兼顾牛出败等动物疫病，以建立长效机制为基础，为提高防控能力为核心，以控制重大动物疫病、保障公共卫生为目标，以建立完善的技术服务体系为依托，不断提高预警、预报、预防控制和应急处置能力。坚持“加强领导、密切配合、依靠科学、依法防治，群防群控、果断处置”的防控方针，确保我镇全年无重大动物疫情发生。

二、总体目标

（一）免疫目标。

2014年对高致病性禽流感、口蹄疫、猪瘟、高致病性猪蓝耳病、鸡新城疫五种强制免疫的总体要求是，群体免疫密度常年维持在90%以上，其中应免疫畜禽免疫密度要达到100％，免疫抗体合格率全年达到70%以上。

（二）档案的建立和保存。

在完成免疫工作基础上，要以村委会为单位建立动物免疫档案，对猪全面实施佩戴二维码标识，牛羊佩戴免疫耳标。农村散养户及养殖专业户的免疫档案由镇畜牧兽医站建立保存。

（三）建立免疫示范村。

每个村委会至少建立2个以上免疫示范村。在免疫示范村范围内，强制免疫动物的免疫率、猪二维码标识的佩带率、免疫证的发证率和建档率均达100%。非免疫示范村的猪二维码标识的佩带率和动物免疫的建档率至少达90%以上。以后各村委会的免疫示范村以每年2个村以上的速度增加。

三、免疫原则及免疫程序

各种疫苗免疫接种剂量和方法按相关产品说明书规定使用。

四、实施步骤

春季集中免疫时间短，接种的疫苗种类多，技术要求高。各村要科学安排猪的高致病性猪蓝耳病、口蹄疫和猪瘟等各种疫苗的接种时间，避免在短时间内连续注射疫苗的现象。春季免疫分五个阶段进行：

（一）准备动员

3月初召开春季动物免疫工作部署会议，广泛宣传动物免疫的重要性和必要性。做好疫苗组织、器械购置、人员组织等准备工作，抓紧时间安排做好春季免疫操作技术培训班。

（二）集中免疫阶段

按上述的免疫原则和要求，3月10日至5月上旬，对所有的家禽和家畜开展禽流感、口蹄疫、猪瘟、猪蓝耳病、鸡新城疫等重大动物疫病集中免疫接种。并在规定的免疫时间后抽检血清进行免疫抗体监测。

（三）补漏复查阶段

5月初，各村委会自行组织检查验收，查漏补缺，补免补防，并进一步完善免疫档案。

（四）总结阶段

5月30日前，春季动物免疫工作全部结束，认真做好春防的总结，档案材料汇总和上报工作。

（五）迎检阶段

6月份，准备迎接国家和省里的检查，做好相关的材料准备。

五、保障措施

（一）加强领导，明确责任

重大动物疫病集中免疫工作是预防动物疫病的重要环节，各乡镇政府和有关单位要进一步增强对免疫工作的责任感、使命感和紧迫感，充分认识做好重大动物疫病防控工作的重大意义，坚决克服麻痹思想、厌战情绪。一定要充分做好春防的准备工作，做到措施更具体，目标更明确，要求更严格。要相应成立免疫领导小组、技术小组，制定免疫方案，组织召开主要领导、村委会干部和村畜牧兽医员参加的动物免疫动员大会，部署任务，分片包干，落实责任，扎扎实实地开展动物免疫工作，向社会宣传动物免疫的重要性和必要性，争取全社会各界的支持。

（二）技术培训

技术培训采用县、镇二级培训机制。培训内容包括免疫操作方法、疫苗的使用及注意事项、免疫效果监测、疫苗的运输、储存、免疫档案的建立等内容，采用理论和实际相结合的方式，注重培训内容的针对性和实用性，以切实提高基层防疫队伍业务素质和工作能力。

（三）经费保障

镇政府应采取多种办法和多种渠道，积极筹措疫苗费用、耳标钳、免疫器具、消毒药品、急救药品、业务培训、冷链维修运转、村级防疫员补助等经费。

（四）疫苗组织及供应

镇政府必须加强强制免疫用疫苗管理，规范疫苗进出库制度。要按“高效、精确、节约”的原则使用疫苗，严格根据免疫进度领取疫苗，杜绝浪费现象的发生。县畜牧兽医局负责强制免疫用疫苗的组织和供应工作。各乡镇对疫苗储存的冷链设备要进行检查和维修，确保疫苗安全存放，有效使用。特别是在集中免疫工作开展前，要对村级防疫员使用的携带式冷藏箱的保温性能进行全面检查，有问题的应及时修理或报废，以保证疫苗质量。

（五）免疫效果监测

免疫效果监测是检查免疫接种成败的重要手段，是制定补免计划、免疫程序的基础。实行常年监测、集中监测和随机抽检监测相结合的机制，重点在集中免疫后根据免疫的进度组织开展免疫效果的监测，并对其监测结果进行汇总、评价，于5月30日前上报省动物疫病预防控制中心。要做好诊断试剂和相关用品的订购，以免贻误监测工作开展。县畜牧兽医局将组织免疫抗体监测组，不定期到各村委会和各饲养场，进行抗体随机检测和效果评价，并以监测结果做为评价各乡镇免疫效果的主要依据。

（六）检查、督导、验收和总结

在免疫工作开展后，镇畜牧站要组织有关领导及业务技术骨干，到各村委会、自然村检查督促免疫工作，及时发现存在的问题，进行阶段性总结和阶段性汇报。免疫工作基本结束后，每个村委会应进行自我验收或由县畜牧兽医局组织抽查验收。

六、其他要求

（一）对调出县境的非屠宰家禽和非屠宰家畜在调运前2周分别进行一次禽流感免疫和口蹄疫免疫。未按规定免疫的家禽家畜，防疫监督机构不得出具动物检疫合格证明（未满2周龄的雏禽除外）。

（二）尽量减少免疫应激反应。修订后的《动物防疫法》规定，因依法实施强制免疫造成动物应激死亡的，给予补偿，具体补偿标准和办法由国务院财政部门会同有关部门制定。发生不良反应时，应积极采取救治措施，避免饲养者的损失。同时耐心做好群众的思想工作。

第6篇：动物免疫的方法范文

关键词：狂犬病；疫苗接种；伤口处置

【中图分类号】R529 【文献标识码】A 【文章编号】1674-7526(2012)04-0029-01

1 材料与方法

1.1 研究对象：我院2009年1月至2011年1月门诊治疗的1688例暴露后狂犬病伤口处置的患者作为研究对象，进行研究。

1.2 研究内容：按照中国疾病预防控制中心《狂犬病暴露后预防处置操作指南》(2007)，对患者进行正确的狂犬病预防处置操作[1],并登记患者的一般情况、伤口情况、动物致伤的情况和疫苗注射的情况。

2 结果

2.1 一般特征:作为研究对象的1688例患者中，无一发生狂犬病免疫失败的病例，也没有发生狂犬病的患者。其中男性患者905例，占53.61%，女性患者783例，占46.39%。患者中年龄最的10个月，被犬咬伤脚部；年龄最大85岁，被犬咬伤脚部；其中0-9的424例，占25.11%，10-19岁患者281例，占16.65%，20-29岁198例，占11.72%，30-39岁269例，占1594%，40-49岁187例，占11.07%，50-59岁168例，占995%，60岁以上的有161例，占9.54%。

2.2 动物致伤情况:伤人的动物有犬、猫、鼠、果子狸等，其中被猫所伤患者有335例，占19.85%；被犬所伤的有1298例，占76.90%；被果子狸伤者有2例，占0.01%；被鼠伤者34例，占2.01%；因切狗肉切伤手的患者19例，占1.13%。致伤动物免疫情况：未经免疫的动物415例，占24.86%，免疫史不详的1273例，占75.14%。暴露程度的分级为：I度暴露402例，占2381%。Ⅱ度暴露812例，占48.10%。Ⅲ度暴露474例，占2809%，暴露的部位分别是：下肢856例，占50.71%，上肢740例，占43.84%，躯干部67例，占3.96%，混合伤（下肢和上肢，下肢和头部，上肢和头部）25例，占1.49%。

2.3 免疫处理情况:在被动物咬伤的1688例患者中，最快在20分钟内进行免疫处理，时间最长的在受伤之后8年才来就诊，24小时内就诊的有1390人，占82.34%，24-48小时就诊的患者196人，占11.61%，3-10天就诊的有65例，占390%，10天之后来就诊的有37例，占2.19%。1688例被咬伤的患者到医院进行处理的1508例，占89.33%，没有处理伤口的180例，占10.67%。全部1688例患者均注射人用狂犬病疫苗，均进行注射使用人冻干狂犬疫苗，其中158人注射了人狂犬病免疫球蛋白及抗狂犬病血清，比例为9.36%。

2.4 讨论:本次研究的1688例患者中，男性占53.61%，女性占46.39%，男性患者多于女性，可能由于男性活动多，和动物接触的机会多，受到动物的攻击也多，0-9岁的患者受伤者最多，占25.11%，与该年龄段的孩子喜欢动物，逗猫逗狗等，加以自身防御力差，且喜欢户外活动有关。因此，需要对0-9岁年龄段加强看管和教育，防止受伤。

伤人的动物犬最多，占76.90%，其次是猫，占19.85%，其中大部分为流浪猫、狗。动物致伤与现在人们生活水平的提高，饲养动物的人数增多有关，越来越多的人饲养各种各样的动物，因而被伤害的几率也大大增加；从动物面积的情况看，未免疫的占24.86%，免疫史不详的占75.14%，由于目前养犬的数量上升，犬密度升高，但免疫率地，同时外观健康的犬存在携带狂犬病毒的现象，因此相关部门应提高对犬的管理及免疫接种，增加犬的免疫比例，减少狂犬病的发病几率；受伤后不处理伤口或是处理不当事狂犬病发病的重要原因之一，如果及时彻底的对伤口进行清洗消毒可以明显降低发病率。被动物咬伤后24小时内到医院就诊率达82.34%，这与近年来对加强对狂犬病的宣传力度有关，但当天及时就诊率较低，说明对狂犬病的防治知识还需提高，受伤者的自我保护意识不强，同时也提示了有关部门应该继续加强有关狂犬病的防治知识宣传，普及被动物咬伤之后处理伤口的正确方法，是今后工作的重点；1688例患者之中，Ⅲ度暴露474例，占28.09%，但进行了抗狂犬病血清和人狂犬病免疫球蛋白注射的患者仅占9.36%，未达到《狂犬病暴露后预防处置操作指南》(2007)要求的29．73％，这与注射狂犬病免疫血清之前要做过敏试验、操作复杂有关[2]。而狂 犬病免疫球蛋白价格偏高，患者的经济承受能力有就诊限，限制了其使用量[3]。所以，加强对群众进行狂犬病防治的知识，尤其是动物致伤后的治疗知识尤为重要，能够显著增加暴露后迅速就诊率，暴露后在短时间内到具有高医疗水平的机构进行狂犬病免疫处置。

此次调查的1688例患者均主动进行狂犬病暴露部位的处置，没有出现狂犬病发病，与暴露后及时按要求对伤口进行处理、接种疫苗与注射人狂犬病免疫球蛋白及抗狂犬病血清存在一定的相关性.所以，加强对动物的免疫管理，被咬伤后伤口的处理，疫苗的正确使用，加强对儿童、学生及户外活动多的男性等易被犬等动物袭击的人群狂犬病防治知识的宣传力度，是预防及控制狂犬病发病率的良好途径。

参考文献

第7篇：动物免疫的方法范文

[关键词] 重大动物疫病 过敏死亡 免疫

[中图分类号] S852.4 [文献标识码] A [文章编号] 1003-1650（2013）03-0187-01

免疫接种是预防、控制动物疫病的有效措施。近年来，我县按照各种动物疫病免疫方案的要求，对规模养殖场采取程序化免疫，散养户采取春、秋集中免疫，常年补针相结合的免疫方法，基本做到了应免尽免。但在实际工作中，有时会出现动物免疫过敏甚至死亡的事例。据统计，发生过敏反应的过敏率大约在0，003%左右，致使防疫工作一度陷入畜主怕、防疫员难的困境，给防疫工作带来一定的影响。针对这个问题，近年来，本人先后与全县各乡镇的30多名防疫员进行了广泛的交流，分析其原因，提出以下应对措施和建议：

一、原因分析

1.疫苗运输、保存不当

疫苗运输不规范，少数乡、村防疫人员在贮存疫苗时没有达到要求的温度范围，有的甚至未使用疫苗冷藏箱，疫苗取出后在免疫前受到阳光照射或在常温下放置时间过长等，从而影响疫苗的效价甚至过期失效。

2.防疫时消毒不严

个别乡、村防疫人员不按操作规程办事，为了省工省钱，舍不得用酒精棉球，未做到“一畜一针，一针一棉”的要求，一针打到底，有时根本不消毒，很可能诱发疫病甚至导致死亡。

3.防疫员责任心不强、操作不当

疫苗剂量没有严格按说明书执行，超量或减量注射，注射部位不准，时深时浅；有时打飞针，形成错位注射或剂量不够。

4.未按规定程序接种

按规定程序重复接种，是强化免疫应答，巩固免疫效果的有效方法。个别养殖场有时对防疫工作不够重视，对免疫程序不懂，对某些疫苗的保护期限不知，认为接种某一种疫苗就万事大吉，不强化免疫，结果免疫抗体达不到应有的效果而发病。

5.免疫注射后未进行观察，出现过敏症状后未及时抢救

个别乡、村防疫人员粗心大意，免疫注射后不给畜主说明情况，让其观察动物的反应，或者动物过敏反应后未及时抢救，延误有效抢救时机导致死亡。

二、主要对策

1.把好疫苗运输与贮存关

1.1严格按照说明书贮存运输疫苗，做到防高温、防暴晒，防疫时将疫苗装入盛有冰袋的冷藏箱内，避免高温和阳光直射。分类保存疫苗，一般冻干苗-10～15℃，灭活苗2～8℃保存。

1.2防疫员把好注射前消毒关。按照“一畜一针，一针一棉”的要求，搞好免疫时的消毒，禁止一针多畜不按规定消毒。

1.3防疫员把好注射剂量关。按照不同畜种、年龄、体重等按规定剂量进行接种，杜绝超量或减量注射，疫苗启封后要按12小时内使用，不得隔日再用。

1.4把好接种部位关。严格按照疫苗种类规定的注射部位注射，不得错位注射，禁止打飞针和不按规定的部位、深度注射。

1.5防疫员把好过敏抢救关。对个别家畜免疫注射后出现气喘、呼吸加快、发抖等过敏反应，尽快使用肾上腺素、地塞米松等抗过敏药物抢救。

各乡镇要认真贯彻落实国务院关于“地方各级政府对防疫工作负总责，政府主要领导是第一责任人，分管领导是主要负责人”的防疫工作责任制，提高认识，组织协调各相关部门做好秋防的各项工作。要督促落实防疫所需器械、疫苗、监测、过敏反应死亡和扑杀补贴等各项防控工作经费。要逐级落实工作责任，认真执行重大动物疫情举报核查、免疫效果监测、免疫档案管理等重大动物疫病防控工作管理制度，做到重大动物疫病防控工作科学化、规范化、制度化。要及时组织开展秋防督察，查找工作中存在的问题并及时予以解决，总结工作中积累的好的经验及时予以推广，保证各项免疫措施能够落到实处，防疫工作能够扎实有效开展。要充分认识秋防工作的重要性和紧迫感，切不可麻痹大意，决不能掉以轻心，要精心组织，全面做好华亭县重大动物疫病集中免疫工作，落实责任，强化督查，全面做好免疫工作。

参考文献

[1]王雪玲，原林，刘铁龙.动物疫病免疫失败的原因及主要对策[J].河南畜牧兽医，综合版.2012年，第9期3页33-35页；

第8篇：动物免疫的方法范文

一、提高养殖技术，提升养殖环境是做好动物防疫工作的基础条件

科学证明，不同的养殖环境、养殖方式和管理程序，不仅对动物的生长起决定性作用，而且对动物的抗病能力会产生不同的影响，更重要的是密切关系到动物疫病的发生与传播。如当今畜禽实行高密度饲养，大大提高了饲养效率和经济效益，促进了畜牧业的高速发展；但是也带来了另一方面问题，在这种饲养方式条件下，动物的抗病能力显著下降，疫病传播和发生的机会大大增加。所以提高养殖技术，提升养殖环境对做好动物防疫工作意义重大。

1.坚持规模化、标准化的生产方式，不断提高生猪养殖的生产水平

适度规模的饲养，统一标准的生产操作可以使品质提高、成本下降、生产率提升。

2.建立和执行与动物防疫要求相适应的畜牧业生产管理制度

从生产管理角度，动物防疫技术和畜牧业生产相结合，要通过形成生产制度，把动物防疫要求溶入到畜牧业生产的各个阶段。

3.坚持科技创新，有效提高新技术应用的能力，提升养殖业科技水平

科技进步是养发展的根本动力，在养殖发展过程中，不仅要发挥了自身已有的科技优势，更是把科技创新作为重要指导方针贯彻始终。积极引进国内外先进技术和生产设备，将其推广应用到生猪生产中，积极探索发酵床养殖、高床饲养、人工授精、早期断奶、育种改良、饲料配方、生物能利用等新型养殖技术，有效解决养殖技术瓶颈，提升生猪养殖的科技水平。

二、隔离消毒是做好动物防疫工作的重要环节

动物疫病传播有三个环节：传染源、传播途径、易感动物。在动物防疫工作中，只要切断其中一个环节，动物传染病就失去了传播的条件，就可以避免某些传染病在一定范围内发生，甚至可以扑灭疫情、最终消灭传染病。但对养殖场来说，不能只注重通过免疫手段保护易感动物这个层次，只有同时做好消毒隔离工作，消灭传染源切断传播途径，才是防止重大动物疫情发生的最关键措施。

1.建立人员，物品隔离制度

生产区内禁止非本场生产、管理人员出人；外来人员出人需经兽医批准，进人生产区人员必须换鞋、更衣、洗手、紫外线消毒。凡生产区内的工具、物品、固定使用，不得随便带离场外使用。必须进人生产区的车辆、物品应视种类不同作必要的消毒处理方可进入。严禁将活畜禽、生肉类带人场内，已出场动物及产品严禁返回生产区。引人种用动物或商品动物，必须隔离饲养一个月后，确认健康才能进人生产区。

2.各饲养场应根据自身的生产方式、主要存在的疫病、消毒剂和消毒设备设施的种类等因素因地制宜地制定消毒程序。饲养舍应每天进行打扫、清洗、保持舍内整洁、干燥，并经常性进行灭鼠和灭蝇、灭蚊工作，同时应搞好场内绿化。病死动物应深埋或高温处理，病死动物的粪便实行封闭性堆积发酵。

三、免疫预防是动物防疫工作的重中之重

在一定的范围内，只要消除了某种病原的易感动物，就能防止这种病原引起的动物疫病。消除易感动物的方法，除了加强饲养管理，提高动物本身的体质外，按照免疫程序给动物普遍接种相应的疫苗，是最重要、最有效的办法。

1.具体给当地动物接种几种疫苗，除了国家要求强制免疫的，可根据当地发生动物疫病的种类、发展趋势和周围动物疫病流行态势来确定。免疫过程中，要注意疫苗的质量、免疫操作的规范性。

2.注重做好免疫监测工作，免疫监测利用血清中抗体水平动态和消长规律，可优先选择疫苗，并可对多种疫苗进行合理制定免疫程序，避免不同种疫苗相互干扰，达到全面免疫。

四、疫病控制是防止疫病扩散的重要手段

随着形势的发展，养殖业中散户逐渐淡出，规模化、集约化养殖逐渐占领市场。动物发病概率加大，疫病发生在所难免，针对畜禽各类疫病的出现，要做到“早发现、早报告、早诊断和早处置”。

1.出现疾病先兆应及时发现，动物发病都有先兆，任何病都有潜伏期，仅是潜伏期长短而已，一旦发现动物疫病或疑似传染病时，必须立即向当地兽医行政主管部门报告。

2.对发病畜禽及早诊断，疫情诊断一般要符合三个指标：临床指标、病理指标、病原学指标。而是在诊断发病原因的基础上，有目的、有针对性地用药，这样才能起到事半功倍的效果，避免无目的地滥用药物。

第9篇：动物免疫的方法范文

【摘要】 目的 观察 FTS提高正常动物、荷瘤动物及免疫缺陷型动物自然杀伤性细胞（NK）活性的作用。方法 用正常动物、荷瘤动物及免疫缺陷型动物模型皮下注射不同剂量的FTS后，取其脾NK细胞测定其对靶细胞（L929）的杀伤能力。结果 FTS 2.5mg/kg、1.25mg/kg能够显著地增加正常小鼠及免疫力低下模型小鼠的NK细胞对靶细胞的杀伤能力（P

【关键词】 血清胸腺因子；NK；L929；抗肿瘤

【Abstract】 Objective Observation the FTS to enhance the normal animal， the Dutch lump animal and the immunodeficiency animal nature killing germ cell （NK） active function.Methods After the normal animal， the Dutch lump animal and immunodeficiency animal model hypodermic injection different dosage of FTS， take its the spleen NK cell to determine it to the target cell （L929） kill capability.Results FTS 2.5mg/kg，1.25mg/kg can obviously increase the normal mouse and the immunity low model mouse’s NK cell to the target cell kill capability （p< 0.01）.Conclusion FTS can enhance the NK cell activeness， has function which the anti-tumor and the immunity strengthen.

【Key words】 FTS;NK;L929;anti-tumor

血清胸腺因子（thymulin，FTS）是胸腺组织中由9个氨基酸残基组成的小分子肽，是一类具有增强机体免疫功能的多肽［1］，自然杀伤细胞（NK）具有抗肿瘤、抗感染和免疫调节功能［2］，是抗肿瘤的免疫监视作用中的第一道防线［3］，因此，NK活性的提高对于机体的抗肿瘤能力的提高是有很积极作用的，本文通过研究FTS对不同模型动物NK细胞活力的影响，了解FTS的免疫调节作用。

1 材料与方法

1.1 药物与试剂 血清胸腺因子（批号060821，由深圳市翰宇生物工程有限公司提供），其纯度为>96%，冻干粉末，冷冻保存，临用前取FTS 1mg，加1ml消毒生理盐水稀释为1mg/ml的原液，供皮下注射用。阳性对照药为胸腺肽，冻干粉末，20mg/支（黑龙江迪龙药业有限公司提供，批号20061001）；环磷酰胺，针剂，10mg/10ml（山西普德药业有限公司提供，批号20060203）；0.1%中性红染液；细胞溶解液（50%醋酸+50%乙醇）；0.25%胰酶；RPMI-1640培养液。

1.2 瘤株 小鼠H22，取接种于小鼠的腹腔第7天的瘤株，配成106/ml瘤细胞悬液，接种于小鼠前肢腋窝皮下0.2ml/鼠。

1.3 靶细胞（L929） 实验前一天换液，用0.25%胰酶消化后，用含10%小牛血清的RPMI-1640稀释成1×105/ml。

1.4 动物 实验用体重18～20g的SPF级雄性昆明小鼠，动物合格证号：SCXK京（2005-2006），均由中国药品生物制品检定所实验动物中心提供。饲养观察2天后使用。实验动物室为无菌空气二级过滤，人工日光灯12h自动照明，恒温、恒湿送风，温度22～24℃，相对湿度40%～45％。鼠笼具为塑料盒，不锈钢丝盖。

1.5 免疫缺陷型动物模型 用18～20g的昆明小鼠称重后皮下注射环磷酰胺，剂量为80mg/kg，给药体积0.1ml/10g，5天后称重，将体重降低的小鼠随机分组用于实验。

1.6 剂量设置 根据药效曲线结果设置剂量为高、中、低三个剂量组，小鼠给药剂量2.5、1.25、0.63mg/kg，给药体积为0.1ml/10g。阳性对照药胸腺肽，临用前配成13mg/ml，小鼠皮下0.1ml/10g，剂量为130mg/kg。空白对照用NS，药液临用时根据动物个体体重调整给药体积。

1.7 给药方法 分别取接种H22瘤株24h后的昆明小鼠，健康动物及免疫缺陷型动物各50只，均分为5组，分别按高、中、低3个剂量注射FTS，对照组注射NS，用胸腺肽做阳性对照，均皮下注射给药，每天给药1次，共给药14天。

1.8 小鼠脾NK细胞的制备 将给药后的小鼠断颈放血，取脾置于无血清RPMI-1640培养液中去杂质，研磨成单个细胞后用100目筛及200目筛过滤，将滤液1000rpm，5min离心，去上清，除红细胞后，用无血清RPMI-1640培养液洗1次，最终用含10%小牛血清的RPMI-1640培养液配成0.5×107/ml。

1.9 检测指标 用酶标仪在490nm测定各组的OD值，杀伤率%=靶细胞OD值-实验组OD值/靶细胞OD值。实验数据用x±s表示，组间比较用t检验。

2 方法与结果

将L929细胞加入96孔板，100μl/孔，37℃，5% CO2培养4h，使其贴壁，然后实验孔每孔加入100μl脾NK细胞，对照孔加入无血清RPMI-1640培养液100μl，37℃，5% CO2培养24h，取出，弃上清，用NS洗3次，滤纸吸干。加入中性红100μl/孔，37 ℃， 30min，弃上清，用NS洗3次，加入细胞裂解液100μl/孔，混匀后，用490nm测各孔的OD值。

2.1 FTS对正常小鼠NK细胞活性的影响 制备实验到期的正常小鼠的脾NK细胞，按实验方法进行实验，结果见表1。表1 FTS对正常小鼠NK细胞活性（略）注：与对照组比较，*P

由表1可见，与NS组比较，FTS 2.5mg/ml可以极显著地增强正常小鼠NK细胞的活性，而胸腺肽没有显著的增强作用。

2.2 FTS对免疫缺陷型小鼠NK细胞活性的影响 制备实验到期的免疫缺陷型小鼠的脾NK细胞，按实验方法进行试验，结果见表2。表2 FTS对免疫缺陷型小鼠NK细胞活性的影响 （略）注：与对照组比较，**P

由表2可见，与NS组比较，FTS 2.5mg/ml、1.25mg/ml可以极显著地增强免疫缺陷型小鼠NK细胞的活性，而胸腺肽的增强作用较弱，与对照组比差异无显著性。

2.3 FTS对荷瘤小鼠NK细胞活性的影响 制备实验到期的H22荷瘤小鼠的脾NK细胞，按实验方法进行试验，结果见表3。表3 FTS对荷瘤小鼠NK细胞活性的影响 （略）注：与对照组比较，**P

由表3可见，FTS 2.5mg/ml、1.25mg/ml可以对荷瘤小鼠NK细胞的活性表现出极显著的增强作用，而胸腺肽没有显著的增强作用。3 结论

由实验1～3可知，FTS各剂量间呈现量效关系，高、中剂量组可以显著地增强免疫缺陷型小鼠、荷瘤小鼠及正常小鼠NK细胞的杀伤能力（P

【参考文献】

1 JF Bach， M Dardenne， JM Pleau. Biochemical characterization of a serum thymic factor.Nature， 1977， 266（3）:55-56.

2 P Merlino， JA Marsh. Evidence for the direct action of thymulin on avian NK cells. Develop Comp Immunol，2001，25:337-343.

3 P Merlino， JA Marsh. Evidence for the direct action of thymulin on avian NK cells. Develop Comp Immunol， 2001， 25:337-343.

4 左增艳，柳钟勋.新型生物反应调节剂、当归多糖（ASDP）抗肿瘤作用及对荷瘤小鼠免疫功能的影响.中国免疫学杂志，2000，16（10）:545-546.