实验动物学概论精选(九篇)

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第1篇：实验动物学概论范文

关键词：胃卡他；胃肠炎；腺炎；灌肠疗法；喂养护理要点

中图分类号：S858.292 文献标识码：A

1.绪论

犬的消化系统疾病是最常见而最重要的犬类疾病，而这其中大多疾病都是由于其主人缺乏科学合理的营养、喂养、护理知识而引起的。尤其是在爱犬患病或病愈恢复过程中，犬的消化功能。必然受到了很大的削弱。由于胃肠功能的削弱及紊乱，犬机体所摄入的营养必然减少，容易对机。体产生各种不利的影响。

2.犬易发的三种消化系统疾病

犬病门诊中，消化系统疾病最为多见，现结合临床实践，介绍犬易发的胃卡他、胃肠炎、腺炎三种疾病。

2.1胃卡他

胃卡他是指胃粘膜表面的炎症，临床以呕吐、胃痛、脱水为特征，常呈急性经过。

2.1.1病因

多因一次性过食难以消化的食物或采食了污秽、腐败的食物，或食物过冷过热，或喂给刺激性药物引起。也可继发于某些传染病、寄生虫病等。

2.1.2症状

病犬精神沉郁，食欲减退或废绝，饮欲增加，但喝后即吐，呕吐频繁，初吐食糜，以后吐出带泡沫的粘液。弓背，触压腹前部胃区敏感疼痛，常伸展前肢卧于冷暗处，眼泪增加，舌苔黄白，口臭。呕吐严重时出现眼球凹陷、皮肤弹性降低等脱水症状。

2.1.3治疗

保护胃粘膜，消除炎症，纠正脱水及酸碱平衡紊乱。

①禁食。由食物原因引起的胃卡他，应禁食24小时并限制饮水，24小时后，只给少量温水、稀饭、温奶等。

②对症治疗。维持消化机能可肌注维生素B100毫克/次，止吐可肌注胃复安2～4毫升/次，解痉止痛可肌注盐酸山莨菪碱（654-2）1毫克/公斤体重。脱水严重者，静脉注射5%葡萄糖生理盐水50～80毫升/公斤体重，维生素C 0.5克/次，维生素B2毫升，每天1～2次。

③抗菌消炎。肌注庆大霉素或氨苄青霉素1万～2万单位/公斤体重，地塞米松2～4毫克/次。也可并用犬病消，0.3～0.4毫升/公斤体重。

④健胃。病情好转后，可口服多酶片1～2片/次，中药保和丸1～2丸/次。

2.2胃肠炎

胃肠炎为胃和小肠粘膜及粘膜下组织的重剧炎症，以腹泻、腹痛、发热、毒血症为特征。临床上多见粘液性、出血性胃肠炎。

2.2.1病因

原发性胃肠炎由单纯的胃肠卡他发展而来，如采食了发霉变质的肉类、鱼类，很快发生腹痛、腹泻、发热等症状。B族维生素缺乏，机体抵抗力降低，外感风寒也可引起。继发性胃肠炎可见于某些病毒病（如犬瘟热、犬细小病毒病）、细菌病（如大肠杆菌病、沙门氏杆菌病）、寄生虫病（如绦虫、蛔虫感染）以及滥用抗生素等。

2.2.2症状

病初呈急性胃肠卡他症状，以后呈胃肠炎症状。病犬精神不振，食欲废绝，呕吐喜饮，饮后即吐。发展为肠炎时，表现频繁水样下痢，并混有粘液、血液，体温升高到40～40.5℃，松弛，排便失禁。随腹泻的发展，病犬眼球下陷，皮肤弹性降低，结膜发绀，出现脱水和酸中毒症状。

2.2.3治疗

排除病因，采取综合治疗措施。

①饮食疗法。禁食24小时，只给少量口服补液盐饮水，配方为氯化钠3.5克、碳酸氢钠2.5克、氯化钾1.5克、葡萄糖20克、水1000毫升，混合溶解，每次每公斤体重50～100毫升，饮服或灌服。

②对症治疗。止吐：胃复安10毫克/次，肌注；止血：止血敏15～20毫克/公斤体重，肌注；增强抵抗力：维生素B100毫克/次，维生素C0.5克/次，肌注；久泻不止：口服复方苯乙哌啶片2.5毫克/次，一日2～3次。

③强心，补液，防止酸中毒。5%葡萄糖生理盐水50毫升/公斤体重，50%葡萄糖10～20毫升，维生素C0.5克，盐酸山莨蓉碱1毫克/公斤体重，混合静注。心衰时加入10%安钠咖0.5～2毫升。伴随酸中毒时，可将5%碳酸氢钠注射液按3～5毫升/公斤体重用5%葡萄糖稀释至1.25%，静脉注射。

2.3腺炎

是犬腺排泄管阻塞，分泌物积聚，发生感染而引起的炎症。

2.3.1病因

犬腺位于内外括约肌之间的腹侧，呈球形，直径约1厘米，左右各1个。腺以2～4厘米长的管道开口于粘膜与皮肤交界处，相当于时钟4点和8点的位置，将犬尾提起易看到。其分泌物为灰色或褐色油脂状，具强烈臭味。当腺过度分泌时，腺导管阻塞或括约肌功能不良，均易致腺体内分泌物滞留，引起感染、发炎、肿胀。

2.3.2症状

早期患犬表现不安，食欲减少或废绝，不断回头试图啃、舔部位，或后躯坐地有擦肛动作。有的病犬排粪困难，不时努责但仅能排出少量干硬粪便。日久则红肿，向外突出，流灰褐色液体，附近有多量灰褐色分泌物附着。挤压腺，可从中排出多量灰褐色液体，有的呈化脓性感染，形成脓肿，易破溃与外界相通。

2.3.3治疗

彻底挤出腺内液体，并用生理盐水或0.1%高锰酸钾溶液反复冲洗，然后注入青霉素溶液10万～20万单位。也可用庆大霉素8万单位、2%盐酸普鲁卡因4毫升混合注入腺内。配合肌注清开灵、犬病康等，效果更好。

3、巧用灌肠疗法治疗犬消化系统疾病

在宠物治疗中最多碰到是犬的消化系统疾病,针对病情采用的简单的灌肠法可收到了不错的效果。

3.1灌肠疗法的适用范围

①犬表现为上吐下泻,粪便带血腥臭等肠胃炎症状时,可以应用灌肠疗法进行治疗,排除稀粪,清空肠道,直肠直接给药。

②犬发生大便干燥，排便困难等粪便秘结时，可应用灌肠治疗软化粪便，肠道。

③犬表现强烈的呕吐，食欲废绝，按压腹壁可以摸到香肠状的有弹性的硬物等肠套叠症状时，可以用深部灌肠法来治疗。

④在犬口服给药困难的情况下，可以用直肠灌肠进行给药。

3.2具体操作方法

取输液空瓶一只，内装温热[35度左右]的灌肠液，安装上输液器，把输液器下方的连接头剪去，将塑料管的端插入人用14号导尿管中。打开输液开关，检查插头处是否漏水，如有漏水，可将塑料管再向内插紧，关上输液开关。

将犬俯卧保定在治疗台上，把治疗台的后两只腿垫起，使犬呈前低后高的。如果犬较为驯服，可让其站立进行灌肠。剪去犬周围的污浊被毛，把导尿管的圆头端从插入，边插边放液，以肠道易于插入。尽量多地插入导尿管，尤其是作保留灌肠时，利于药物深入肠管。如发现堵塞，可来回抽动导尿管，或让犬将积粪排除后再继续灌肠。

作用是通便驱气和清洁肠道。灌肠溶液较大，一般一次用量250-1000毫升[根据犬体形大小而定]，常将溶液瓶抬高，使罐入压力增大，灌肠速度较快。灌完后立即让犬排泄。

3.2.1留液灌肠法

作用是输入治疗药物，补充营养物质或软化硬结的粪便，灌肠速度不宜过快，溶液量不宜过大，灌完后仍保持前低后高的，并用犬尾根堵塞一段时间。在做输入药物和补充营养物质的保留灌肠之前，最好先用温水进行洗肠，将积粪排出。

3.2.2常用的灌肠溶液

①生理盐水刺激性轻，可用于肠道有疾患的清肠通便。

② 0.1%-0.2%肥皂水（在开水中加入肥皂至乳白色为止），用于手术前清肠或分娩前催产，同时可起驱气作用。

③松节油溶液（松节油4毫升加入500毫升肥皂水搅匀），可以驱出肠内积气。

3.2.3留液灌肠的灌肠液

①在生理盐水中加入抗菌消炎药物，可以治疗急慢性肠炎。

②30-60毫升甘油或植物油，加温水至100-200毫升[盛和林等编著：哺乳动物学概论，华东师范出版社，1985]；用5%硫酸镁30毫升、甘油60毫升，加入90毫升温水配制成1：2：3灌肠液；用食盐10克溶于100毫升温水中，配制成10%高渗盐水，可以用来软化粪便，肠道，促使积粪排出。

③5毫升地塞米松、10毫升安痛定、40毫升鱼腥草，加生理盐水100毫升，配制成混合溶液，可以用来治疗犬的各种高热，能起到迅速退热的作用。

④生理盐水200毫升加入安乃近5毫升或加入0.5%阿托品1毫升，深部灌肠，可治疗早期的肠套叠，缓解肠痉挛，减轻疼痛，充盈肠管，可使套叠的肠管复位。

4、预防犬消化系统疾病的常识

犬的消化系统疾病是最常见而最重要的犬类疾病，而这其中大多疾病都是由于其主人缺乏科学合理的营养、喂养、护理知识而引起的。尤其是在爱犬患病或病愈恢复过程中，犬的消化功能 必然受到了很大的削弱。由于胃肠功能的削弱及紊乱，犬机体所摄入的营养必然减少，容易对机 体产生各种不利的影响。因此，主人在平时的喂养管理、患病期间及恢复过程应注意以下几点：

4.1健康犬只平时的喂养管理要点

4.1.1幼犬（出生-8月龄）

刚出生的幼犬由于其消化器官还未完全发育成熟，其消化能力极其有限，胃肠只能消化母乳。因而1月龄以内的幼犬最好喂母乳。在喂乳时可加入少许酵母片的水溶液，以帮助幼犬更好地消化吸收母乳。同时，喂母乳宜分多次进行，一般每天可以分6~8次喂食。

为了你的幼犬健康，请坚持母 乳哺乳幼犬原则。小犬断乳后，其身体的生长发育，尤其是自身骨骼、牙齿的生长形成往往需要充足而均衡的营养。特别是对蛋白质、脂肪、碳水化合物、微量元素及维生素等的需求较迫切，这些物质需求的满足与否会直接关系其日后能否长成一条健康体美的成犬。

普通的食物则很难完全搭配满足到幼犬的营养需要，这就需要给你的爱犬提供专门配置的优良犬粮了。因此，市面提供的各种专业特制的幼犬粮不妨用间隔搭配的方法喂给犬。这对减少幼犬胃肠道疾病和日后更好、更快的生长发育产生极为重要的作用。

此外，该时期幼犬的胃肠道疾病也可能由体内肠道寄生虫和感染外界的细菌、病毒引起。最常见的肠道寄生虫是蛔虫、钩虫和鞭虫，因而每月定期预防性驱虫是必要的。而细菌性胃肠道病则多是在机体劳累、衰弱、抵抗力下降时，被致病性菌种经污染的食物、呼吸道等途径入侵感染而致病的。因而，在日常喂养管理上应尽量保持犬食的清洁卫生，喂食时要做到定时、定量、定质的原则。对于病毒性胃肠道疾病，免疫接种是最安全和有效的预防解决办法。一般确认有效的免疫 程序是在小犬满2个月龄的时候进行首次免疫接种疫苗，必要时可以21日的间隔时段再注射2针，以确保幼犬获得足够的机体保护力。

许多其它因素也会直接或间接地诱发消化道的疾病，因而主人应尽量避免犬只受到这些因素的影响。最常见是因天气突然变化、洗澡或吹冷气等引起的受冻感冒，又或者是食物转变过快引发的胃炎。幼犬的食物应尽量煮熟后方可食用，食用时 可加入些许含碘食盐，以帮助其调节胃口。切记不要让犬吃生鸡蛋、生肉、生肝及油腻的食物。

4.1.2成犬（8月龄-5岁）

对于生长的犬来说，其消化功能日趋完善，有较强的消化吸收能力，故其消化道疾病发病率也逐渐降低，但犬主也不应因此而放松对爱犬的护理。这个时期的胃肠道疾病多是继发于一些传 染病或内科病，例如：由于主人粗心喂了大块骨头而导致便秘或肠梗塞，犬细小病毒病引起出血 性肠食炎，过引起反复性胃肠炎等。

4.1.3老年犬（5岁以上）

当你的伴侣动物进入了老年期，它的消化、吸收能力将大大减退。同时伴随其牙齿的磨损、脱落，食物若过难咀嚼完全则会对其消化系统增加负担而导致胃肠道疾病的发生。老年犬易发生 便秘和消化不良等胃肠道功能紊乱疾病。为了避免这些疾病，对老年犬的喂养宜定时、少量，食 物要保证卫生干净、易消化。特别要注意多吃一些富含维生素及微量元素的物质，例如水果、钙 片、肝脏等。尤其要注意的是让老年犬多些运动和提供充足的饮水。

4.2患有消化道疾病或病愈恢复期的犬只的喂养护理要点

①给予容易消化的流体食物，如：稀肉粥，肝脏拌稀饭，菜肉汤等。

②适当在犬食中加入少量健胃消食的保健性药物或一些维生素，如：酵 母片、维生素 C片、鱼肝油丸等。

③尽量避免过食，不要给予高脂肪、高蛋白，难以消化和加重胃肠负担的食物。

④每天喂食要少量多餐，同时要努力做到定时、定量、定质的大原则。

⑤患病期间应尽量减少洗澡的次数，以及加强保温护理工作。

⑥患便秘的犬只应给予充足的饮水和运动，以促进胃肠的蠕动、排空，减少食物在胃 肠内的积压负担。

⑦主人要多留意患病犬的饮食次数、食量、饮食欲，以及排便或尿的次数及其性状。

参考文献

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第2篇：实验动物学概论范文

关键词　Mef2；原核表达；多克隆抗体

中图分类号　R39211 文献标识码　A 文章编号　10002537（2012）05006404

Mef2属于MADS家族转录因子基因，MADS家族是指其蛋白质结构域含有高度保守的MADS结构域的一类转录因子的总称［1］．MADS结构域是一种DNA结合结构域，由55～63个氨基酸组成，所识别并结合的DNA保守序列为CArG框［CC（A/T）6GG］．

Mef2位于果蝇2号染色体上，mRNA全长5　990　bp，编码501个氨基酸．脊椎动物有4种MEF2蛋白（MEF2AD），而果蝇中只有1种MEF2蛋白（DMEF2）［2］．不管是脊椎动物还是果蝇中的MEF2蛋白都含有一个高度保守的MADS和MEF2结构域，并且由它们来介导DNA结合、二聚作用、蛋白质蛋白质的相互作用［3］．

Mef2最初是在分化的肌肉细胞中作为一个肌肉特异结合的活性因子被鉴定的，1997　年却发现Mef2基因在心脏发育的过程中起重要作用［4］．在果蝇中，Mef2首先在原肠胚形成时在整个中胚层中表达，随着胚胎的发育，它的表达逐渐限制在体节、内脏和心肌细胞中［56］．鉴于Mef2基因在果蝇心脏发育的过程中起着重要的作用［7］，所以制备一个特异性好的多克隆抗体尤其重要，对进一步以果蝇为模型研究Mef2基因具有重要的意义．

1.1　实验材料和试剂

大肠杆菌Rosseta菌种，pET28a菌种以及coli　DH5α菌种为本实验室提供；限制性内切酶EcoRⅠ和XhoⅠ，DNA、蛋白质相对分子质量Marker，Tag　DNA聚合酶购自深圳晶美公司；pMD18T载体和连接酶购自大连TaKaRa公司；UNIQ10柱式DNA　胶回收纯化试剂盒购自上海生工公司；质粒提取试剂盒购自OMEGA公司；Glutathione　SepharoseTM　4B蛋白纯化试剂盒购自PIERCE公司；弗氏佐剂购自Sigma公司；丙烯酰胺、甲叉双丙烯酰胺、IPTG（异丙基βD硫代半乳糖苷）等购自上海Sangon公司；新西兰大白兔购自中南大学实验动物学部．

1.2　引物设计与合成

从NCBI数据库（http：//ncbi.nlm.nih.gov）检索出果蝇Mef2基因的序列，根据巢式PCR的原理利用Primer　Premier　5．0　软件设计两对引物：第一对：DMef2S1：5′CGCCAGCTGCCGGAAATCCA　3′；DMef2A1：5′GCGTCTGCAGCGTGACCACT　3′．第二对（分别加入EcoR　Ⅰ和Xho　Ⅰ酶切位点）：DMef2S2：5′GAGAATTCATGGGCCGCAAA　AAAATTCA　3′　EcoR　Ⅰ；DMef2A2：5′GGCTCGAGGTGGACTGGCCTGCAGCAGG　3′　Xho　Ⅰ．

1.3　基因克隆和载体构建

选取30只野生型果蝇，液氮冷冻30　min，用Trizol法提取总RNA［8］，反转录PCR扩增，获得firstchain　cDNA．然后以firstchain　cDNA为模板用第一对引物进行PCR扩增，然后以所得产物为模板，用第二对引物进行PCR扩增，得到目的片段［9］．目的片段经纯化后克隆入T载体，转化入DH5α感受态细胞中，酶切检测筛选出阳性单克隆，经测序鉴定后将DN段从pMD18TMef2质粒上切下，连入pET28a载体（EcoRⅠ和XhoⅠ酶切线性化），得到阳性克隆，经EcoRⅠ和XhoⅠ双酶切鉴定后，得到重组表达质粒pET28aMef2．

1.4　Mef2融合蛋白诱导表达及纯化

pET28aMef2重组表达质粒转化入大肠杆菌菌株Rosseta，筛选出阳性菌落，然后接种于LB　培养基（含100　mg/L　氯霉素，卡那霉素）37　℃　培养12　h左右，以1∶　50转接扩大培养至OD600达0.6，按0.1　mol/L　加IPTG，25　℃诱导，4、5、6、7　h各取1　mL菌液，确定最佳诱导时间．

收集诱导后大肠杆菌，PBS漂洗后超声裂解，离心取上清．4　℃下与经Binding　Buffer漂洗活化后的NiIDA凝胶柱结合，Washing　Buffer洗去杂蛋白，Elution　Buffer洗脱目的蛋白，获得纯化的HisMef2融合蛋白，-80　℃保存备用．

1.5　Mef2多克隆抗体制备

将纯化后的HisMef2蛋白与弗氏完全佐剂按体积1∶　1在注射器中推成乳剂，分散约12个点对同一新西兰大白兔进行背部皮下免疫注射．在第一次注射后14、21、28　d，将HisMef2蛋白按体积比1∶　1与弗氏不完全佐剂在注射器中推成乳剂，进行多次免疫．第35天主动脉取血，静置过夜（4　℃），3　000　r/min离心处理10　min，取上清分装保存（-80　℃）．

1.6　效价测定

获得免疫兔血清后，用诱导的总蛋白进行Western　blot实验检测抗体效价．将含pET28aMef2重组子的菌株在LB培养液中37　℃培养，将5　mL接种于200　mL新鲜培养基中，用IPTG在25　℃条件下诱导5　h后，收集细菌，PBS重悬，然后用SDSPAGE电泳分离．将Mef2抗体分别以1∶　100、1∶　500、1∶　1　000和1∶　2　000的体积比稀释后，以免疫前兔血清作为对照，采用Western　blotting方法检测抗体的特异性［10］．

2　结果与分析

2.1　重组质粒pET28aMef2的构建与鉴定

将纯化后的果蝇Mef2基因片段克隆到pMD18T载体中，经测序鉴定与基因理论序列100%匹配，然后用EcoRⅠ和XhoⅠ双酶切，连入pET28a载体（EcoRⅠ和XhoⅠ酶切线性化），获得重组质粒pET28aMef2．经酶切和测序鉴定重组质粒正确（图1）．

2.2　Mef2　融合蛋白诱导表达及纯化

将重组子转入Rosseta感受态细胞中，以0.1　mmol/L　IPTG进行诱导，30　℃条件下进行时间梯度诱导1，2，3，4，5，6　h分别取样检测蛋白的表达，结果（如图2）显示Mef2蛋白在诱导1　h后就开始表达，随着时间推移表达量增加，在3　h后趋于稳定．

3　讨论

为了以果蝇为模型进一步研究Mef2基因的功能，本文通过试验获得了Mef2原核表达融合蛋白，制备了高效价和特异性好的兔抗Mef2血清．在获得融合蛋白的过程中，先通过软件分析选取了亲水性好而又含结构域少的一段序列，为获得特异性好的抗体提供了前提条件［12］．在诱导蛋白的过程中，IPTG　的终浓度选取的是0.1　mmol/L　，蛋白表达量相对高，又不至于因IPTG　浓度太高对细胞的生长产生毒性作用，试验相对容易成功．

pET28a（+）载体是一种常用的原核表达载体，具有Kan抗性，质粒大小为5.3　kb．载体的N端携带His标签、凝血酶基因及T7启动子标签序列；在C端具有His标签序列，　pET28a（+）载体可在BL21（DE3）、Rosstea等表达菌株中高表达融合有His标签的蛋白，便于下游蛋白纯化．pET28a这种载体没有本身溶解性高的多肽融合蛋白，也没有催化二硫键形成的酶融合蛋白，而且不含信号肽序列，所以同一种蛋白用这个载体，形成包涵体的可能性更大些［13］．

本试验中，作者通过构建pET28aMef2重组质粒、诱导表达HisMef2融合蛋白获得了高纯度的蛋白并免疫新西兰大白兔制备了Mef2抗体．通过效价检测证明制备的Mef2多克隆抗体具有较好的特异性，能满足试验要求．　因此，它为将来运用染色质免疫沉淀、免疫共沉淀、免疫组化等手段深入研究Mef2基因的功能奠定了基础．

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