基因多态性研究精选(九篇)

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第1篇：基因多态性研究范文

一、BRCA1/BRCA2基因

1.BRCA1基因

BRCA1的分子结构和生物学功能： Hall等通过基因连锁分析，发现位于17q21的乳腺癌易感基因。Narod等调查验证了此基因并命名为BRCA1。BRCA1 基因是一个约100kb 的大基因，人类BRCA1 蛋白由1863个氨基酸残基组成，分子量为180 000-220 000，其N-末端有一个126残基的锌指区， 位于第3-5外显子之间。BRCA1 蛋白具有以下特征性结构域：

①BRCA1蛋白质N 端为锌指结构域， 具有泛素连接酶的作用。②C 末端为一酸性结构域， 对细胞周期监控DNA 损伤修复起重要作用。两个BRCT 交界处形成疏水沟区域常在乳腺癌中常发生突变。③Rad51 结合区，与DNA 损伤修复蛋白Rad51结合。④转录活性区， BRCA1 蛋白C端富含酸性氨基酸， 提示该区具有转录激活作用。BRCA1编码蛋白在维持细胞正常增殖、分化中发挥重要作用。①参与DNA损伤修复。②BRCA1 具有转录活化和转录抑制的双重作用。③参与细胞周期调控。④参与细胞凋亡。

另外有研究表明BRCA1 的磷酸化能调节紫外线诱导的凋亡中caspase-3的激活作用。另外，Joukov等研究表明BARD1/BRCA1 复合物在有丝分裂纺锤体形成过程中， 对于维持染色体的稳定性及抑制肿瘤生长起重要作用。流行病学资料证实 BRCA1 基因与乳腺癌关系十分密切， 特别在家族性乳腺癌中占重要地位。此基因在散发性乳腺癌患者中检出率为8% ， 而在40 岁以下， 双侧乳腺癌、乳腺癌伴卵巢癌者及其一级亲属中、有家族性乳腺癌病史的家族成员中， BRCA1 突变检出率可达40-50%。

2.BRCA2 基因

BRCA2 基因的分子结构和生物学功能： BRCA2 抑癌基因在1994 年由Wooster 等发现，定位于染色体13q12-13， 1996 年克隆出全长cDNA。BRCA2DNA 长度为70kb， mRNA 长11385bp， 有27 个外显子， 其中26 个外显子长10443bp， 编码由3418 个氨基酸残基组成的蛋白质， 已知其C-末端对肿瘤抑制作用至关重要。BRCA2 与BRCA1 序列相似之处极其有限， 如BRCA2 之1783-1863 氨基酸与BRCA1 之1394-1471 相似。在生物学功能上BRCA2与BRCA1相似，都执行参与DNA 损伤修复、调节转录和细胞周期调控功能。目前已发现约1/3的家族性乳腺癌患者可以测出BRCA2 突变， 尤其在男性乳腺癌及胰腺癌和肝癌均可见与BRCA2 突变有关 ， BRCA2携带者的卵巢癌的相对发病风险为17.69，但其绝对发病风险要比BRCA1携带者低。所有这些表明BRCA2 作为新发现的肿瘤易感基因对肿瘤发生的深远影响。

二、FGFR基因

1 FGFR基因分子结构与生物学功能：成纤维细胞生长因子受体至少有三类：酪氨酸激酶受体，富光氨酸FGF受体和肝素硫酸糖蛋白。成纤维细胞生长因子受体是一类穿膜的络氨酸激酶受体，于1974年Gospodarowicz在牛垂体中分离得到具有促进分裂增殖效应的多肽。细胞外区域为3个免疫球蛋白样结构区（D1、D2、D3），以及一个三氨基酸序列HAV（组氨酸-丙氨酸-缬氨酸）。细胞内区域是络氨酸激酶区。

FGFR2基因位于10q26，包含22个外显子，根据D3拼接可有3a，3b.3c三种异构性，其功能与多种生物活性有关，包括促进细胞增殖，分化和增强细胞活性。如果其中某些氨基酸的改变就会导致FGFR功能的改变或丧失。FGFR2基因的突变可致子宫内膜癌、宫颈癌、乳腺癌、肺癌以及胃癌发生。在乳腺癌和胃癌中FGFR2基因拷贝数的增加，使得FGFR2过表达而导致FGFR2信号的激活。

再者，由于FGFR2复制子排斥最后一个外显子，从而引起在基因增殖过程中发生了FGFR2羧基端的缺失，导致基于FRS2接头分子组成型磷酸化作用的FGFR2信号激活。乳腺细胞癌变的关键因素就是基因突变和调控失常，Easton通过三阶段全基因组关联研究（genome-wide association study， GWAS）发现了FGFR2rs291582的变异显著增加高加索人群患乳腺癌的危险性。

欧洲女性的绝经后人群中进行的GWAS同样也发现rs2420946，rs2981529，rs120024，rs121964与乳腺癌发病密切相关。单连峰等通过我国北方女性乳腺癌基因型数据进行Meta分析和关联研究，明确指出FGFR2基rs2420946，rs2981582，rs1219648多态性增加了中国汉族女性患乳腺癌的危险。有研究表明，多种人类恶性肿瘤细胞里都有FGFR2的高度表达，中南大学湘雅附二院曾报道FGFR2在膀胱癌中的表达，同时有报道FGFR2在子宫内膜的表达。

三、ZNF365基因

锌指蛋白结构与生物学功能：锌指蛋白是一类具有手指状结构域的转录因子，在基因表达调控，细胞分化，胚胎发育等方面具有重要作用。最早发现于1983年。Pabo等于1988年曾这样描述锌指结构：在调节蛋白一小段氨基酸序列中含有几个Cys残基，这些区域是依赖锌的DNA结合域，它通过结合锌自我折叠形成短的稳定的手指状结构。ZNF365生物学功能因其不同染色点与不同临床疾病相关联。Couch FJ等40名研究者通过GWAS对12，599 BRCA17，132BRCA2携带者进行分析，发现ZNF365（10q21.2）变异与乳腺癌易感基因BRCA1和BRCA2突变相关联。Lindstr?m S等在基因组关联研究的 meta 分析和报告显示ZNF365 rs10995190乳腺癌有明显联系。单核苷酸多态性 rs10822013 染色体 10q21.2，位于锌指蛋白 365 （ZNF365） 基因。虽然大约有20个共同遗传易感性基因位点已确定为乳癌风险通过全基因组关联研究 （GWASs），迄今报告的遗传风险变种解释只有一小部分的遗传力这个常见的癌症。Cai Q等进行了四个阶段 GWAS 包括 17153 例和 16943 东亚妇女的基因多态性分析结果显示东亚妇女乳腺癌的遗传风险的基因多肽性与10q21.2 rs10822013的明显相关性。

四、Pokemon基因

Pokemon 即POK 红系髓性致癌因子，定位于人类第19 号染色体短臂1 区3 带中的第3 亚带，有2 个外显子和2 个内含子。作为转录抑制因子的Pokemon 有可能通过直接抑制抑癌基因或凋亡基因发挥其癌基因的活性。Maeda 等研究发现Pokemon 基因能够特异性地抑制抑癌基因ARF 的活性，并间接导致p53 基因失活，从而促进肿瘤的发生发展。 有研究发现Pokemon mRNA 和蛋白质在乳腺癌中的表达均显著高于正常乳腺组织。有研究显示Pokemon 在乳腺癌组织中表达率高达86.8%，且与肿瘤大小及淋巴结转移之间均有显著相关性，而Pokemon 高表达者其生存率显著降低。这些均提示Pokemon基因通过调控相关目的基因促使乳腺癌的发生，并在肿瘤的发生发展过程中发挥重要作用。

综上所述，乳腺癌的发生是一个多基因、多因素、多阶段的累积过程，乳腺癌易感基因的发现和研究对于阐明乳腺癌的发病机理有重要意义。与异常表达的相关基因有可能成为检测乳腺癌的分子标志物，但是否为高度灵敏、高特异性的标志物尚需进一步探索论证。可以明确的是，寻找理想的标志物未来仍是我们的研究重点，只有找到合适的分子标志物，才能协助临床在乳腺癌的早期诊断、早期治疗及疗效检测、预后评估等方面有新突破

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第2篇：基因多态性研究范文

关键词 Leptin基因；基因多态性；肉品质

中图分类号 S813.3 文献标识码 A 文章编号 1007-5739（2016）06-0238-02

1 Leptin基因的发现

20世纪中叶，有些学者开始探索导致肥胖的原因[1]，在1953年Kennedy就推测脂肪组织可能产生一种调节体重的激素，在1958年Horvey通过实验证明这个激素是下丘脑下发挥作用。到了1969年美国学者Coleman利用异常肥胖突变小鼠（ob 小鼠）和又肥胖又带糖尿病的的小鼠（db小鼠）上面进行了实验解释了调节体重的这个物质。此基因编码的蛋白质注射在ob肥胖小鼠后发现它可以改变其外表，从此该蛋白质被称为瘦素（Leptin），它又被称为苗条蛋白，抗肥胖因子等等。1991年Friedman等提出了包括Leptin的5种可致肥胖的单基因突变，为瘦素的分子生物学研究打下了基础；1994年 Zhang等[2]成功克隆小鼠的Ob基因以来，在鼠、人和其他动物进行大量研究；到了2010年科学家研究证明了Leptin的调节食欲和体重的作用。

2 Leptin基因的结构及其多态性

牛Leptin基因全长大约18.9 kb，包含3个外显子、2个内含子，有长约3 kb的启动子序列，第一外显子（片段长度34 bp）和第一内含子处于5′非翻译区，编码区位于外显子2和3，外显子全长4 240 bp，第一和第二内含子的大小约为14 kb和1.7 kb。第三外显子包含编码区（编码118或119氨基酸）和3′非翻译区，是一个非常保守的基因结构[3-4]。mRNA长度为2 930 bp，通过和其他哺乳动物（人、猪、小鼠、羊、山羊）的基因序列比较，结构基本相同。小鼠Leptin基因与人、羊、牛、牦牛、猩猩、恒河猴、大鼠、猪、鸡和北京鸭等均有同源性。在氨基酸水平，大鼠和小鼠Leptin之间有96%的同源性，人与大鼠、小鼠Leptin具有84%的同源性。Stone等将该基因定位在牛的第4号染色体[5]，Pfister-Genskow等又将其确定在距离BTA4 101 cM处[6]。Friedman等小鼠位于第6号染色体上，Isse等克隆了人类Leptin基因，其定位于第7号染色体[7]，Sasaki等猪位于18号染色体[8]。大量文献报道牛Leptin基因也存在非常丰富的 SNP 位点，目前NCBI上公布了125个SNPs位点。Konfortov等对22头牛长度为1 788 bp的基因片断进行检测并测序找到了20个SNPs，其中有6个SNPs在外显子上[9]。Yoon等以24头韩国牛为研究对象，在对包括Leptin基因外显子和约1 kb的启动子区域的片段测序后，结果发现57个突变[10]。Liefers等测定了613头奶牛的Leptin的启动子区域，共发现14个多态位点[11]并报道了Leptin基因多态与肉牛的胴体成分和奶牛的产奶量高度相关[12]。到目前为止，Bernard 等检测了牛内含子1的部分突变（如：103位点，T/C；126 位点，C/G；143位点，C/T）（EMBL，AJ236854）[13]。

3 Leptin的生物学作用

Leptin是分子量为16 KDa的主要在脂肪细胞的蛋白质类激素，由167个氨基酸残基构成，且含有一个由21个氨基酸残基构成的信号肽序列，是球形分子，以单体形式存在于血浆中[14]。血浆中有80%左右的Leptin与蛋白质结合，只有游离的Leptin才起生物作用[15]。Leptin是由ob（肥胖）编码的基因参与调节食欲，基础代谢和胴体脂肪重量。随着老鼠、牛、猪和羊血浆瘦素浓度的增加脂肪沉积和食欲下降并增加基础代谢水平。因此，瘦素在维持体重方面具有重要作用。外源性的Leptin显著降低老鼠、鸡、猪和绵羊采食量和体重[16]。Leptin作为肥胖信号以负反馈环方式来通知大脑并且在内分泌、血管生成、免疫功能、繁殖、骨形成、饲料转化率、生长发育及各种生理功能中也起到重要的作用[17-18]。Tartaglia等克隆了小鼠OB-R的cDNA[19]。Leptin受体基因位于4号染色体上，全长约5.1 kb，编码1 162个氨基酸，属于细胞因子受体家族。OB-R由胞外区，跨膜区和胞内区3个部分组成。OB-R的主要生理功能是与Leptin结合，使Leptin发挥调节体内的能量平衡，脂肪贮存等生理作用，参与Leptin的自分泌调节，并参与Leptin调节能量平衡以外的其他方面的作用（如代谢、生殖、造血等）。

4 Leptin基因多态性与肉品质相关性研究

Leptin是哺乳动物中一种高度保守的细胞因子样激素。在牛身上Leptin基因多态性高度引起科学家的关注并在日增重、采食量、奶牛产奶量、生长性状、胴体性状、肉品质、生育性状和繁殖性状有着重要影响，并且在不同的牛群中该基因的多态性也存在差异。

Schenkel .F.S等对小母牛、公牛等杂交牛的Leptin基因5个SNP的基因分型并进行胴体性状与肉品质相关性研究，结果发现2个外显子2与脂肪、瘦肉产量、脂肪等级（E2JW，PC（C57R）的CC或CT基因与背膘厚度、MCS、FCS、肌内脂肪含量和多不饱和脂肪酸含量（P（S100T）与胴体性、屠宰率、QIB和脂肪酸含量显著相关（P < 0.05）[24]。李 娇等以中国西门塔尔公牛为研究对象检测E2FB的多态性，并与经济性状进行关联分析表明：在试验中未发现E2FB位点与经济性状有显著相关（P>0.05）并UASMS2位点对平均日增重和剪切力有显著影响（PT）跟脂肪厚度和剪切力有相关[27]，可Crews等报道发现该位点对胴体性状包括背膘厚、大理石纹、胴体重、眼肌面积等无显著影响[28]。L.F.B. Pinto等分析内洛尔公牛身上Leptin基因的单核苷酸多态性与肉色，分别于7、14、21 d后分割排酸的蒸煮损失率并观察发现E2FB中的TT基因型虽然是低频率，但与7 d后成熟肉的蒸煮损失率相关[29]。Nkrumah等研究显示，在胴体级别和瘦肉率上携带T等位基因的个体低于携带C等位基因的个体，但在大理石纹等级上没有差异[30]。Nkrumah等对UASMS2位点进行研究，结果显示：TT基因型个体背膘厚、大理石花纹评分分别增加31%～39%、9%～13%，TT基因型个体饲料摄入量、生长率、代谢体重和屠宰体重也都有增加。此外，UASMS1、UASMS2、UASMS3可能与肌肉脂肪含量有关[31]。Chung E.R等研究结果发现了25个SNPs，其中g.2 418 C>G和g.2 423 G>A与韩国牛的背膘厚显著相关；在2418位点，CG基因型比GG基因型有更高的背膘厚；在2423位点，GA基因型比GG、AA基因型有更高的背膘厚[32]。P.M. Corva等对放牧公牛Leptin基因的启动子区域（SNP1）与非同义单核苷酸多态性（SNP2）研究显示SNP1与眼肌面积并SNP2与屠宰率与背膘厚显著相关[33]。Buchanan等研究报道，在内含子2上，Buchanan等研究报道Leptin基因发现C73T的突变不仅与肉牛脂肪沉积相关，在加拿大荷斯坦奶牛产奶量和乳脂量也有显著影响[34]。D.B.S. Silva等对Leptin基因进行多态性检测并进行在内洛尔牛的生长与胴体性状的相关性研究。这单核苷酸多态性（SNPs）-1457（AJ571671：G-1457A>G）和A59V（AF536174.1：例321C>T）及微卫星BM1500（3.9KB下游）进行基因分型并发现启动子区SNP-1457没有相关性，SNP A59V臀部脂肪厚度及肉色具有相关性，BM1500跟臀部脂肪厚度（宰前）、皮下脂肪厚度、体重、胴体长具有相关[35]；还有H.Kulig等研究Leptin 基因A59V突变可显著影响利木赞牛第 210天体重和3～210 d日增重[36]。kononoff等对杂交母牛和杂交肉牛的经济性状进行分析，结果表明Leptin基因C73T的转换与成熟牛胴体脂肪沉积增多有关。TT基因型个体质量等级高于CT和CC基因型个体分别7.6%和7.1%；但胴体级别分别比CT、CC的少12.5%、15.1%，CC基因型个体平均屠宰体重要大于TT型个体（365.5 vs 362.3 kg），但TT和CT个体间屠宰体重没有显著差异[37]。以上研究结果显示不同牛品种Leptin基因与肉品质具有不一样的相关性，可以说Leptin基因可以作为肉品质性状的候选基因。

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第3篇：基因多态性研究范文

【关键词】  阿司匹林抵抗;基因多态性

阿司匹林作为一种有效的抗血小板聚集药物广泛应用于心脑血管疾病的防治，临床观察显示阿司匹林能减少约25%的心脑血管疾病复发。然而，并不是所有患者都能从阿司匹林治疗中获益，有研究显示0.4%～83.3%个体对阿司匹林的抗血小板作用不敏感，即存在阿司匹林抵抗现象(aspirin resistance,ar) [1]。阿司匹林抵抗的确切机制不明，遗传可能为其重要因素，本文将近年ar与基因多态性方面的研究作如下综述。

1 阿司匹林抵抗

1.1 阿司匹林抵抗的定义 bhatt[2]等将阿司匹林抵抗分为临床性及生化性。临床性为患者口服阿司匹林后仍发生缺血性血管疾病;生化性为口服阿司匹林后，未能改变血小板功能试验结果。

1.2 阿司匹林抵抗的分型 有研究[3]将生化性阿司匹林抵抗分为3型：(1)ⅰ型阿司匹林抵抗(药动学型)：口服同样剂量的阿司匹林，体内血栓素(tx)合成和胶原诱导血小板聚集均未被抑制。而体外富血小板血浆中加入100 μmol/l阿司匹林后可被抑制，提示使用小剂量阿司匹林有相当大的药动学差异。(2)ⅱ型阿司匹林抵抗(药效学型)：无论体内及体外，口服阿司匹林后，tx合成和胶原诱导血小板聚集均未被抑制，提示该型阿司匹林抵抗的机制与环氧化酶(cox)的遗传多态性有关。(3)ⅲ型阿司匹林抵抗(假性阿司匹林抵抗)：口服阿司匹林后能抑制tx合成，但不能抑制胶原诱导的血小板聚集。该型患者之所以被冠以“假性抵抗”，因为阿司匹林已抑制了tx合成，而不能抑制其他物质如胶原诱导的血小板聚集。

2 阿司匹林抵抗机制

ar发生的具体机制尚不清楚，可能与药物剂量不足[4]，环氧化酶1(cox1)及血小板糖蛋白(gp)的基因多态性，胶原，吸烟，血脂异常等多种因素有关。血小板活化路径可由血栓素a2(thromboxanea2，txa2)、二磷酸腺苷(adenosine diphosphate，adp) 、胶原、凝血酶和糖蛋白(glycoprotein，gp)ⅱb/ⅲa 受体等诱导,而阿司匹林仅能有效地阻断血栓素a2途径。目前，对于血小板活化路径及基因多态性与阿司匹林抵抗的关系研究主要集中在以下几个方面[56]：(1)血栓素激活途径中编码环氧合酶1 (cycloxygenase1 ，cox1) 的基因多态性。(2)gpⅱb/ⅲa激活途径中编码血小板膜gpⅲa的血小板抗原1/血小板抗原2 (platelet antigen1/platelet antigen2，pla1/pla2)多态性。(3)胶原激活途径中编码血小板膜gpⅰa/gpⅱa的807c/t和873g/a多态性。(4)5二磷酸腺苷受体p2y1的基因多态性。这些多态性位点有可能影响阿司匹林的抗血小板作用。现从基因水平分析阿司匹林抵抗的机制。

2.1 环氧合酶基因多态性 cox是前列腺素合成过程中的重要限速酶，它有两种同工酶：cox1和cox2。cox1是花生四烯酸转换为前列腺素g/h途径中的第一个酶，其有两种酶活性，一种环氧化酶活性催化前列腺素g的生成，一种氢过氧化物酶(hox)活性减少前列腺素g，生成前列腺素h，前列腺素h更进一步被cox催化成为前列腺素和血栓素[7]。阿司匹林抗血小板作用机制主要是使cox1丝氨酸530不可逆的乙酰化，从而使该酶失活，阻断了txa2的形成。目前已发现多个cox基因多态性位点[8]，不同cox的单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphisms，snps)可影响cox的蛋白结构或构象，使其对阿司匹林抑制作用的敏感性极不均一，构成一些病人ar的结构基础。

maree等[9]将144位冠心病患者按cox1单核苷酸多态性分为五组[a842g，c22t(r8w)，g128a(q41q)，c644a(g213g) 和c714a(l237m)],均给予阿司匹林口服，发现a842g与c50t完全连锁不平衡。携带含有突变体842g等位基因的患者与野生型a842相比，花生四烯酸诱导的血小板激活和血清血栓烷b2 (txb2 ，txa2 的下游产物)产生更明显,提示携带突变体842g等位基因的患者对阿司匹林治疗较不敏感。表明cox1的遗传变异性可以影响花生四烯酸诱导的血小板聚集和血栓形成，病人对阿司匹林的反应部分决定于cox1的基因型。gonzalezconejero等[10]的研究则显示cox1 50t等位基因可能与阿司匹林抵抗有关。

2.2 血小板糖蛋白(gp)ⅱb/ⅲa基因多态性 血小板糖蛋白gpⅱb/ⅲa是细胞黏附受体整合素家族中的一员，含有纤维蛋白、纤维连接蛋白、von willbrand factor(vwf)等黏附蛋白的特异结合位点，参与血小板黏附和聚集。ar可能和血小板膜gpⅱb/ⅲa受体复合物的多态性有关，gpⅱb/ⅲa受体是血小板活化的最后共同通路。编码gpⅱb/ⅲa的基因具有高度的多态性。gpⅱb/ⅲa基因(包括编码gpⅱb和gpⅲa的基因) 突变、缺失或插入导致表型改变，进而引起血小板功能改变。迄今已发现c157t、a1163c、a1553g、t1565c等多个gpⅲa多态性位点，较为常见的是外显子2第1565位氨基酸的突变，即t1565c(leu33pro) ，编码leo的位点称为pla1(hpa1a)，编码pro的位点称为pla2 (hpa1b)。关于gpⅱb基因多态性的研究较少，主要有gpⅱbmax/max +(g2603a，v837m)，hpa3a/3b(t2622g，ile843ser) ，gpⅱbg1063a(glu324lys) 等多态现象，其中研究最为广泛和深入的是gpⅱb残基843位ile/ser的变异，它与人类血小板抗原3 (hpa3) 相关。

大量证据表明，gp受体多态性是动脉血栓形成的遗传危险因素，它能造成黏附受体成分的表达、功能和免疫遗传学的多样性。血小板激动剂(如txa2)通过细胞内信号激活gpⅱb/ⅲa受体，介导纤维蛋白原及其受体结合，然后促进血小板聚集。阿司匹林通过干扰cox非依赖性细胞内信号转导并使gpⅱb和gpⅲa分子乙酰化来抑制gpⅱb/ⅲa的活化。尽管还未完全弄清，但目前所知的cox非依赖性信号转导途径可能包括跨膜蛋白受体、磷脂酶、ca2 +释放、腺苷酸环化酶、鸟苷酸环化酶和蛋白激酶c等。某些弱的激动剂(如adp、肾上腺素和胶原蛋白)导致的gpⅱb /ⅲa激活可被阿司匹林部分抑制。在pla2基因型存在时,抗血小板作用可以因这种替代途径减少而降低。

agnieszka slowik等[11]研究发现pla2等位基因是男性患者大血管病变所致卒中独立的危险因素。该研究分别选取92例大血管病变所致卒中患者及184例对照者，103例小血管病变所致卒中患者及206例对照者，182例心因性卒中患者及182例对照者。结果显示小血管病变及心因性卒中患者与对照者相比，pla2等位基因出现的频率相似，无统计学意义;而大血管病变所致卒中的男性患者pla2出现频率高(39.7% vs 23.0%;p=0.003 ，or=2.51;ci为1.21～5.20)。grove等[12]检测了1191例健康人和1019例冠心病患者的pla2频率，在这些患者中529例以前有过心肌梗死史。结果健康人中28%为pla2基因型，28%的冠心病患者(除外心肌梗死患者)为pla2基因型，35%的心肌梗死患者为pla2阳性。健康对照与心肌梗死患者之间pla2基因频率有统计学差异。因此，他们认为斯堪的纳维亚人pla2基因型与心肌梗死而不是冠心病的危险增加有关。szczeklik a研究的结果提示与pla1相比，pla2等位基因更倾向于促进血栓的形成从而参与了阿司匹林抵抗的发生。papp e等[13]研究也发现,阿司匹林抵抗患者中pla2等位基因出现的频率要明显高于那些对阿司匹林有良好反应的受试者，而且该研究中所有pla2/a2 基因型患者对阿司匹林的抗血小板反应均不良。这就提示pla2等位基因可能与阿司匹林疗法反应的不充分、不敏感相关。然而，macchi等[14]的研究发现pla1等位基因更容易对小剂量阿司匹林治疗发生抵抗。

2.3 血小板糖蛋白gpⅰa/ⅱa受体基因多态性 gpⅰa/ⅱa (整合素α2β1 )位于连接血小板与胶原纤维(ⅰ、ⅱ型)或非胶原纤维( ⅲ、ⅳ型)的二价阳离子键的中间。在正常个体与那些先天遗传存在α2基因的四个等位基因的个体中,其血小板表面表达的gpia/ⅱa是不同的。gpia基因位于第5号染色体上，对于这一基因的一些相关研究，揭示它的一些有症状或无症状的多态现象，以及由此引起的受体的结构和功能的改变，以及血小板表面的gpⅰa/ⅱa受体多拷贝间的差异。α2gpia多态性—807ct(phe224)和873ga(thr246)已被证实与血小板表面受体不同的表达有关。基因型807tt(873aa)与受体的高密度表达有关，而807cc(873gg)则与低密度表达有关。杂合子则与中间受体表达的水平有关。第三种多态性是由于1648位点上g到a被替换所致，这同时也引起505位点(br系统)上glu/lys被替换。同时，gpia807c/t与glu505 lys之间存在基因相关，且br的多态性与位于核苷酸环化酶837(ct)上的一个稀有多态性相连结，携带等位基因i(807t/873t/873a /brb)者表现出高水平的gpⅰa/ⅱa，而携带等位基因ⅱ(807c /837t/873g/brb)和ⅲ(807c/837c/873g/bra)者则表现出低水平的血小板整合素。胶原是一种重要的血小板聚集诱导剂，血小板胶原受体血小板膜糖蛋白ⅰa/ⅱa密度增加可能是血栓形成的潜在危险因素和阿司匹林抵抗的原因，血小板膜糖蛋白ⅰa/ⅱa基因多态性可以增加血小板膜胶原受体的密度[15]，从而降低阿司匹林疗效。

2.4 adp受体p2y1基因的变化 adp是血小板聚集的重要介质，adp的调节作用是通过与血小板表面g蛋白偶联p2y受体相连接而实现的。迄今为止已有8种p2y受体亚型被克隆，对p2y1和p2y12的研究较清楚。gαq偶联p2y1受体与adp结合，使钙离子释放，改变血小板形状，使血小板聚集。另一种主要的受体p2y12与g蛋白gi偶联,抑制腺苷酸环化酶，活化磷酸肌酸激酶3，活化gpⅱb/ⅲa受体。任何一个受体的抑制均会引起血小板聚集的显著减少。

adp通过p2y1和p2y12受体刺激血小板的激活和聚集，这些受体的突变与止血异常有关，任何一个受体的抑制均会引起血小板聚集的显著减少。阿司匹林以协同方式减少这些情况的发生[16]。p2y12和阿司匹林的复合拮抗作用已在临床上被证实可显著减少血栓事件的发生[17]。因此，adp受体p2y1基因的相应功能变化能够改变adp的信号功能，并且能降低对阿司匹林(包括p2y12抑制剂，如噻氯匹啶和氯吡格雷)的反应性，导致血栓前状态的产生和对阿司匹林的反应性降低。

fontana等[18]在98名健康研究对象中发现了p2y12受体5种多态性，其中4种是完全连锁不平衡。这导致两种单倍体产生，h1 (86%)和h2 (14% ) 。携带h2单倍体的受试者使用较低浓度的adp (2 μm) ，血小板聚集增多。纯合子h1 (h1 /h1)平均聚集率为34. 7% (n= 74) ，有一个h2等位基因(h1 /h2，n= 21)聚集率为67. 9% ，在有2个h2等位基因(h2 /h2，n=3)聚集率高达82. 5%。这提示p2y12多态性在阿司匹林抵抗中可能起作用。近来发现p2y1 受体a1622g多态性与血小板对adp反应不同相关。携带少见的g等位基因对adp反应更强。jefferson等[19]在332例男性有心肌梗死史的患者中研究发现阿司匹林抵抗患者与p2y1基因c893t多态性密切相关。携带杂合子c893t等位基因患者与携带常见纯合子c893等位基因者相比阿司匹林抵抗率高出3倍，机制尚不清楚。

以上综述了近年来关于基因多态性与阿司匹林抵抗关系的研究结果。由于没有国际公认的对阿司匹林抵抗的定义，多数研究样本量较小，研究结果间还存在很多矛盾，迄今为止遗传对阿司匹林抵抗的作用并不确切。所以仍需继续开展大规模和不同种族人群中的前瞻性研究来证实这些基因多态性与ar有关。

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第4篇：基因多态性研究范文

【关键词】 载脂蛋白E；基因多态性；高敏C反应蛋白；冠心病

【Abstract】 Objective To analyze the polymorphism of apolipoprotein E (ApoE)， and high sensitivity Creactive　protein (hsCRP) levels and the relevance of coronary heart disease (CHD). Methods Phenol chloroform extraction was used to get the DNA from the isolated blocks blood coagulation. Polymerase chain reaction， Hhal endonuclease digestion were used to test the 94 cases of CHD patients and 100 healthy control group ApoE polymorphism. HsCRP level was measured by immune latex transmission turbidity. Results ① ApoE allele frequency: compared with the control group， ε2 allele frequency decreased significantly (P=0.01) in CHD group， ε4 allele frequency increased (P=0.005). ② Serum hsCRP concentration in CHD group was significantly higher than that of control grooup (P＜0.05)， but there was no significant difference between different alleles on hsCRP. Conclusions The ApoE gene polymorphism and serum hsCRP are the sensitive and valuable indicators， which can predict the the risk of cardiovascular disease.

【Key words】 Apolipoprotein E; Genetic polymorphism; High sensitivity Creactive　protein; Coronary heart disease

冠心病(CHD)是常见的多发病，是心血管系统疾病常见的死亡原因之一。研究认为，载脂蛋白E（ApoE）基因多态性与CHD有一定的相关性〔1～3〕，冠状动脉粥样硬化并不是一种简单的脂质沉积疾病，炎症是其重要特征，因此，CHD是一种炎性疾病。高敏C反应蛋白(hsCRP)与CHD的关系逐渐被临床广泛关注。本文对94例CHD患者血液进行AopE基因多态性及hsCRP浓度检测，旨在研究血清hsCRP、ApoE基因多态性与CHD的相关性。

1 对象与方法

1.1 研究对象 CHD组94例，其中壮族42例，汉族52例，均为右江民族医学院附属医院心内科2007年1月至2007年8月住院CHD患者；男59例，女35例，年龄44～77岁，平均（60±12.7）岁，全部符合1979年世界卫生组织修订的CHD诊断标准。对照组100例，均为同期住院的非CHD患者，并排除心脑血管疾病及肝、肾、内分泌等影响脂质代谢的疾病；男56例，女44例，年龄45～80岁，平均（65±10.8）岁。所有受试者在实验前均知情同意自愿参加本实验。

1.2 方法

1.2.1 ApoE基因多态性的检测

1.2.1.1 DNA提取 采空腹静脉血2.5～3.0 ml，EDTA抗凝，用低渗溶血酚氯仿抽提白细胞核酸DNA，双蒸水溶解后作为模板。

1.2.1.2 聚合酶链反应（PCR）扩增 引物设计参考文献〔4〕：引物序列，上游引物P1为： 5′AAC AAC TGA CCC CGG TGG CG3′，下游引物P2为：5′ATG GCG CTG AGG CCG CGC TC3′，由深圳匹基公司合成。PCR反应体系包括10×dNTP(各10 mmol/L)1.0 μl，引物P1和P2各0.8 μl，二甲基亚砜5 μl，DNA模板1.0 μl，Tag DNA聚合酶2 U，加双蒸水至40 μl，混匀即可。PCR反应条件：95℃预变性2 min，然后95℃ 60 s，56℃ 30 s，72℃ 30 s，共35个循环。用20 g/L琼脂糖凝胶电泳确定特异性扩增产物(292 bp片段)。PCR产物的酶切反应:酶切反应体系包括扩增产物10 U，10×Buffer 5 μl，限制性内切酶Hha1 10 U，加双蒸水至总体积40 μl，置于37℃温育3 h。

1.2.1.3 ApoE基因分型 酶切产物经100 g/L聚丙酰胺凝胶电泳，EB染色后紫外线灯下观察，以pBR322DNA/Hae为分子标志物，判断标准参照文献〔5〕方法。

1.2.2 hsCRP检测 采空腹静脉血1.0 ml，分离血清，采用日立7060生化全自动仪，以乳胶增强免疫透射比浊法检测。

1.3 统计学分析 选用SPSS10.0软件进行t检验。

2 结果

2.1 ApoE的基因型和等位基因频率比较及其多肽性与血清hsCRP含量关系 见表1，表2。与对照组比较，CHD组和ε2等位基因频率明显降低(P＜0.01)，ε4等位基因频率明显升高(P＜0.05)。CHD组hsCRP明显高于对照组，而各等位基因组间无显著差异。

表1 ApoE基因型和等位基因频率比较（略）

与对照组比较：1）P＜0.01；2）P＜0.05

2.2 ApoE的基因型测定 PCR扩增产物经Hha1酶切后，显示有不同的片段长度组合，可以进行ApoE基因型测定，即PCRRFLP分析方法。PCR扩增产物位于ApoE基因第4外显子内，涵盖2个突变位点〔6〕，产物长度为227 bp。纯合子E2/2在91，81 bp出现荧光条带；E3/3在91，48 bp出现荧光条带；E4/4在72，48 bp出现荧光条带；杂合子E4/2在91，81，72，48 bp出现荧光条带；E3/2在91，81，48 bp出现荧光条带；E4/3在91，72，48 bp出现荧光条带。见图1。

1:E3/3，2：E2/3，3：E2/4，4：E2/2，5：E3/4，6：E4/4；M：Marker

图1 CHD患者ApoE不同基因型电泳图（略）

表2 ApoE等位基因多态性与血清hsCRP含量关系（略）

与对照组对应等位基因比较：1）P＜0.05

3 讨论

ApoE基因有3个等位基因，即ε2，ε3和ε4，共构成6种不同的基因型：3种纯合型（ε2/ε2，ε3/ε3，ε4/ε4）和3种杂合型（ε3/ε4，ε2/ε3，ε2/ε4）。ApoEε4是脂质代谢紊乱和CHD的重要遗传标记。大多数学者认为，ApoE ε4是早发性CHD发病的独立危险因素〔7〕，CHD患者与对照组人群比较ε2等位基因频率明显降低(P＜0.05)，说明ApoE基因多态性(ε2等位基因缺失)为CHD的危险因子之一，亦即ε2与CHD成负相关，换而言之，ε2等位基因是CHD的保护因子〔8〕。本研究显示，CHD患者ApoE基因型中，E2/2和E2/3显明性低，而E4/4则显著升高(P＜0.05)；而等位基因频率中，ε2明显降低，ε4等位基因频率明显高于对照组(P＜0.05)，与报道相一致〔9，10〕。表明ε2等位基因是CHD的保护因子，ε4等位基因是动脉硬化发生的潜在因素，ε4等位基因频率上升是CHD的重要标志。

hsCRP作为一项心血管病变和CHD发生独立的危险度预测因子， 已受到临床越来越多的重视，hsCRP是由肝细胞产生的一种炎症和组织损伤急性期反应的非常敏感的标志物，动脉硬化是一系列病因所致炎症反应引发炎性细胞和介质造成动脉壁损坏所引起。hsCRP可诱导单核细胞表达组织因子，激活凝血系统和补体系统导致机体凝血、纤溶机制失衡，从而增加心血管事件的危险〔11〕。报道证实，hsCRP高浓度的患者将来发生心肌梗死或心脏致死的危险性超过正常人的3倍〔12〕。 联合监测ApoE基因频率和血清hsCRP浓度是目前进行CHD危险评估的最佳型〔13〕。本研究发现，对照组及CHD组ApoE各等位基因（ε2、ε3和ε4）之间的hsCRP含量没有明显差异，说明ApoE基因多态性与hsCRP含量没有直接关联，但两者均与CHD有直接关联。因此，联合监测ApoE基因多态性及血清hsCRP含量，对心血管疾病危险性的预测是一个具有新意和敏感的指标。

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第5篇：基因多态性研究范文

关键词：肾病综合征；肾素-血管紧张素；系统基因多态性；ACE基因I/D基因型

肾病综合征分为原发性、继发性与遗传性3大类，其中原发性肾病综合征属于原发性肾小球疾病[1]。肾病综合征的病因有许多种，大多都会引起肾小球基膜通透性的上升，临床主要表现为蛋白尿、低蛋白血症、高脂血症以及高度水肿。目前，用于治疗肾病综合征的方法尚没有较为统一的标准，不过血管紧张素转化酶抑制剂与血管紧张素受体阻断剂在治疗肾病综合征方面具有较为显著的疗效[2]。为了了解肾病综合征患者其系统基因多态性，我院进行了相关的研究：

1 资料与方法

1.1 一般资料 对我院2012年2月～2013年1月收治的肾病综合征患者临床治疗病例进行抽样，对40例肾病综合征患者临床治疗病例进行回顾性研究。将40例肾病综合征患者列为观察组，选取40例我院健康检查结果良好的人作为对照组。经过医院伦理委员会审核通过、患者及其家属同意后进行临床药物治疗研究。观察组肾病综合征患者年龄21～45岁，平均（33.64±4.75）岁，男24例，女16例；对照组健康人年龄22～47岁，平均（32.98±4.21）岁，男20例，女20例。患者在一般资料上不存在较大的差异性，不具备统计学意义（P>0.05）。

1.2 方法

1.2.1 DNA提取 采集观察组40例肾病综合征患者静脉血样3ml，然后进行抗凝处理，使用乙二胺四乙烟酸（EDTA-K2）浸泡血样，然后利用改良碘化钠法提取血样中白细胞基因组的DNA，将之置于-86℃冰箱中储存。

1.2.2 多态性检测 采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态技术对患者血样进行检测，聚合酶链反应引物序列为A1166C-F：5′-CTCATCCACCAAAGAAGCCT-3′，A1166-R：5′-AGAAAAGTCGGTTCAGTCCA-3′。准备各种引物各2μL，加入反应体系，保温58℃，持续30s。

1.3统计学方法 应用SPSS17.0统计学软件对上述治疗进行数据分析，计量资料采用均数±标准差表示，进行t检验，计数资料进行χ2检验，P

2 结果

2.1基因型频率 根据多态性研究分析，得出AT1R基因A1166C、ACE基因I/D、AGT基因M235T基因型的频率基本符合遗传平衡定律（HARDY-WEINBERG），具有较强的群体代表性，值得进行多态性研究。

2.2基因型分布 对照组与观察组ACE基因I/D基因型的分布有着明显差异，差异具有统计学意义（P0.05），见表1。

3 结论

肾病综合征分为原发性、继发性与遗传性三大类，其中原发性肾病综合征属于原发性肾小球疾病。目前用于治疗肾病综合征的方法尚没有较为统一的标准，不过血管紧张素转化酶抑制剂与血管紧张素受体阻断剂在治疗肾病综合征方面具有较为显著的疗效。

ACE的主要功能是将血管紧张素转化为效应肽血管紧张素，保证肾脏的基本功能，调节人体电解质的平衡。ACE基因处于染色体17q23，整个ACE基因编码区长度在21kb左右，有25个内含子与26个外显子，其中第16个内含子存在I/D基因型的多态性。通过研究我们可以直观的发现，肾病综合征患者体内ACE基因I/D基因型与正常健康人的基因型分布存在显著的差异，即可将ACE基因I/D基因型的分布作为判断患者肾病综合征的重要依据。

AT1R分布与人体血管、肝脏、肾脏等主要器官，是维持人体血压水准的重要受体。一般会随着血管平滑肌细胞迁移与增值，不过根据研究，发现正常人与肾病综合征患者AT1R基因型无明显差异性。

ACE基因I/D基因型分布的多态性与肾病综合征的发生有着直接的关联，DD基因与D等位基因是引发肾病综合征的主要原因。

参考文献：

第6篇：基因多态性研究范文

[关键词] 哮喘；血管紧张素转换酶；多态性

[中图分类号] R725.6 [文献标识码] A [文章编号] 1673-7210（2012）01（c）-0023-02

Preliminary study on gene polymorphism of angiotensin converting enzyme in asthma children

CHEN Xin ZHOU Lin ZHONG Weida

Department of Pediatrics, Hainan Provincial Gynecology and Obstetrics Hospital, Hainan Province, Haikou 570105, China

[Abstract] Objective To explore gene polymorphism of the angiotensin converting enzyme (ACE) in asthmatic children. Methods A total of 87 asthmatic children (experiment group) and 58 normal children (control group) were involved in this study, and the peripheral blood genomic DNA was extracted from each subject for detection of ACE genotype with PCR. Results There were 38 cases with DD genotype, 19 cases with ID genotype and 30 cases with II genotype in the experiment group, while 9 cases with DD genotype, 18 cases with ID genotype and 31 case with II genotype in the control group, which were significantly different (P < 0.05). The frequency of allele D and I in ACE gene were 54.59% and 45.41% in the experiment group, which were 31.03% and 68.97% in the control group, and statistical difference was observed between the two groups (P < 0.05). Conclusion It is concluded that DD in ACE gene should be the main genotype for children with asthma and ACE gene polymorphism should be related to asthmatic susceptibility.

[Key words] Asthma; Angiotensin converting enzyme; Polymorphism

哮喘是一种严重危害小儿身体健康的常见呼吸道疾病，其发病率较高、病程较长且反复发作[1]。研究表明，儿童哮喘是遗传和环境因素共同作用的多基因遗传性疾病，故与哮喘的相关或易感基因的多态性越来越受到重视[2]。本研究通过检测哮喘患儿血管紧张素转换酶（angiotensin converting enzyme，ACE）基因型及其分布，探讨ACE多态性和儿童哮喘的关系。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取2009年6月~2010年7月我院儿科收治的87例哮喘患儿为实验组，其中，男43例，女44例；年龄3~9岁，中位年龄6岁；诊断按全国儿科防治协作组制定的儿童哮喘诊断标准[3]进行。本院健康体检合格儿童58例为对照组，其中，男32例，女26例；年龄3~10岁，中位年龄6岁；对照组儿童均无哮喘病史及哮喘家族史，无食物和药物过敏史。两组性别、年龄比较，差异无统计学意义（P > 0.05），具有可比性。

1.2 ACE基因型检测方法

所有病例采集静脉血2 mL，使用Axygene全血基因组DNA抽提试剂盒（批号：QC30061104）抽提基因组DNA；ACE的聚合酶链式反应（polymerase chain reaction，PCR）试剂盒购自大连宝生物公司，其正向引物序列为5'-CTGGAGACCACTCCCA-3'，反向引物序列为5'-GATGTGGCCATCACATTCGCAGAT-3'，PCR反应体系包括基因组DNA 2 μL、10×PCR buffer 5 μL、dNTP 25 mmol/L 3 μL、Taq DNA 聚合酶0.5 μL （2.5 U），MgCl2 3 μL（25 mmol/L），正向引物1 μL、反向引物1 μL、加水至50 μL。PCR反应条件：94℃预变性10 min、94℃ 45 s、58℃ 45 s、72℃ 90 s，30个循环周期，72℃延长10 min。取反应产物5 μL加上样缓冲液1 μL，在2%的琼脂糖凝胶电泳30 min，在紫外灯下观察结果并且摄影。

1.3 统计学方法

采用SPSS 13.0统计软件进行处理，计数资料采用χ2检验，P < 0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 ACE基因型结果判定

PCR产物的仅有长度为190 bp的条带，说明该产物287 bp插入片段缺失，其基因型为缺失型纯合子DD型；PCR产物仅有长度为490 bp的条带，表明该产物中存在287 bp的插入片段，其基因型为插入型纯合子II型，PCR产物有190 bp、490 bp两条条带，该产物的基因型为杂合子ID型，见图1。

2.2 两组ACE各基因型频率和等位基因频率比较

实验组中，38例基因型为缺失型纯合子DD型，19例基因型为杂合子ID型，30例基因型为插入型纯合子II型；在对照组中，9例基因型为缺失型纯合子DD型，18例基因型为杂合子ID型，31例基因型为插入型纯合子II型；将两组基因型进行χ2检验，结果发现实验组和对照组三种基因型的构成差异有统计学意义（χ2=12.64，P < 0.05），见表1。实验组等位基因D和I频率依次为54.59%和45.41%，对照组等位基因D和I频率依次为31.03%和68.97%，差异有统计学意义（χ2=15.60，P < 0.05），见表2。

表1 哮喘患儿ACE基因型检测结果[n（%）]

表2 哮喘患儿ACE等位基因频率[n（%）]

3 讨论

在肾素-血管紧张素系统（renin-angiotensin system，RAS）或肾素-血管紧张素-醛固酮系统（renin-angiotensin-aldosterone system，RAAS）中，血浆中的肾素底物（即血管紧张素原），在肾素的作用下水解，产生一个十肽，为血管紧张素Ⅰ。血管紧张素Ⅰ本身没有生物学活性，但在肺循环血管内皮表面的ACE的作用下，血管紧张素Ⅰ水解为有活性的血管紧张素Ⅱ。研究发现，在哮喘发作时，其肾素和血管紧张素Ⅱ在血浆内的浓度明显升高[4]。血管紧张素Ⅱ在哮喘中的作用主要表现在以下2个方面[5]：首先血管紧张素Ⅱ能够导致呼吸道平滑肌收缩，引发哮喘的发作；其次，血管紧张素Ⅱ能够激活炎症因子如缓激肽、P物质等炎症因子，加快哮喘的发生和发展。

ACE基因全长21 kb，由26个外显子和25个内含子组成[6]。目前对ACE的基因多态性的研究表明，ACE第16个内含子中可以存在一段287 bp插入片段（insertion，I），也有个体缺失此片段（deletion，D），根据个体等位基因是否存在这一插入片段，ACE基因存在着DD，ID和II三种基因型[7]。研究表明，由于不同基因型，ACE的活性并不相同，DD型的ACE活性最强，ID型次之，II型最弱[8]。

笔者对ACE基因型检测结果表明，哮喘患儿缺失型纯合子（DD基因型）的比例明显高于正常儿童，哮喘患儿的D等位基因频率明显的高于正常儿童，因此推测ACE基因型为缺失型纯合子的儿童可能更加容易发生哮喘，这也提示ACE基因中是否存在插入片段可能和哮喘的发生有关。国外对成人ACE多态性和哮喘之间的研究也同样表明，ACE基因型为缺失型纯合子发生哮喘的可能性更高[4]。

[参考文献]

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[3] 何云，谢晓虹，邓昱，等.哮喘儿童吸入丙酸氟替卡松后外周血单个核细胞Foxp3和磷酸化STAT5的变化[J].临床儿科杂志：英文版，2011，29（1）：1-7.

[4] Prieto MC，Gonzalez-Villalobos RA，Botros FT，et al. Reciprocal changes in renal ACE/ANG II and ACE2/ANG 1-7 are associated with enhanced collecting duct renin in Goldblatt hypertensive rats[J]. Am J Physiol Renal Physiol，2011，300（3）：F749-755.

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[7] Kim TH，Chang HS，Park SM，et al. Association of angiotensin Ⅰ-converting enzyme gene polymorphisms with aspirin intolerance in asthmatics [J]. Clin Exp Allergy，2008，38（11）：1727-1737.

第7篇：基因多态性研究范文

1 资料与方法

1.1 一般资料

1.1.1 观察组 选自2005年10月至2010年10月我院收治的过敏性紫癜患儿78例，其中男42例，女36例，年龄1～16岁，平均6岁，诊断标准参照［1］。

1.1.2 对照组 选自同期健康儿童78例，男41例，女37例，年龄5～13岁，平均9岁。

1.2 方法

1.2.1 标本采集 空腹抽取过敏性紫癜患儿外周静脉血2 ml,健康对照组抽取外周静脉血2 ml,枸橼酸钠抗凝，室温下离心分离血浆及血细胞成分。

1.2.2 基因组DNA提取 应用酚,氯法，从血细胞中提取基因组DNA，于,20℃保存。

1.2.3 基因多态性分析 PCR引物序列参考文献［2］(由北京赛百胜公司合成)，Fg β,455上游引物5′,ATAGAATAGGGTATGAATTTG,3′，下游引物5′,TTTACTATTTTACCAAGTCGG,3′，PCR产物用限制性内切酶HaeⅢ酶切，A等位基因仅有一条446bp片段，G等位基因被切为348bp、98bp两个片段。AA型纯合子仅有一条446bp片段，GG型纯合子有348bp、98bp两条片段，GA型杂合子有446bp、348bp、98bp三条片段；

1.2.4 血浆纤维蛋白原水平检测 应用CA530全自动凝血分析仪检测。

1.3 统计学方法 采用SPSS 13.0统计软件，两组间基因型及基因频率采用直接计数法,差异比较采用χ2检验。血浆蛋白原水平采用均数±标准差(x±s)表示，采用t检验。P

2 结果

2.1 基因扩增片段酶切后电泳结果见图1。

2.2 Bβ,455 g/A基因型与等位基因频率分布 观察组GG基因型和G等位基因频率高，与对照组比较有统计学意义，见表1。

3 讨论

过敏性紫癜是侵犯皮肤或其他器官的毛细血管及小动脉的一种过敏性血管炎，可出现血管壁灶性坏死，纤维素沉积，血管内血小板血栓形成，血管通透性增加［3］。纤维蛋白原是由肝脏合成、分泌的一种糖基化蛋白，其在凝血机制中占有重要地位，血浆纤维蛋白原的升高是血栓形成的危险因素，其升高促进血液高凝状态，进而形成血栓。一般认为，血浆Fg升高是遗传和环境因素的共同作用，某些基因位点多态性被认为与血浆Fg水平相关，位于纤维蛋白原Bβ基因5′端启动子区,455bp位点处的G/A,455是倍受关注的一个多态性位点，,455 gG纯合子与,455 gA杂合子与,455AA纯合子相比，GG型个体的血浆Fg水平最低，GA次之，AA型最高［4］，人群中A等位基因频率较低。目前国内外关于人纤维蛋白原,455 g/A基因多态性与冠心病、高血压 、狼疮性肾炎、肺栓塞和深静脉血栓等诸多疾病的相关性已有报道，但与小儿过敏性紫癜的相关性国内外均没见报道，本文对过敏性紫癜患儿FG水平与β纤维蛋白原,455 g/A基因多态性的关系进行分析，结果显示Bβ,455 g/A位点GG基因型血浆FG水平明显低于AA+GA基因型血浆FG水平； Bβ,455 g/A位点观察组GG基因型和G等位基因频率高，与对照组比较有统计学意义(P

本文通过对过敏性紫癜患儿纤维蛋白原Bβ,455 g/A基因多态性及纤维蛋白原水平进行了研究，结果显示过敏性紫癜的发病与纤维蛋白原Bβ,455 g/A基因多态性具有相关性。过敏性紫癜患儿急性期其血浆纤维蛋白原升高，恢复期下降和健康对照组儿童无差异，血浆纤维蛋白原作为一种急性蛋白参与了过敏性紫癜的发病。

参 考 文 献

［1］ 诸福棠.实用儿科学.第7版.人民卫生出版社,2002:450,454.

［2］ Thomas AE, Green FR, Kelleher CH,et al. Variation in the promoter region of theβ fibrinogen levels in smokers and non smokers. Thromb Haemost,1991,65:487,490.

第8篇：基因多态性研究范文

结核病目前已成为21世纪严重危机人类健康的疾病之一，我国是全球22个结核病高负担国家之一。虽然全球约有1/3的人感染结核杆菌，但其中不到1/10发展为结核病，这是因为发展为结核病需要受许多因素影响，其中，遗传因素（基因多态性）与环境因素的共同作用在肺结核的发病中起了较大作用。目前，遗传因素（基因多态性）与肺结核发病相关性的研究已成为研究肺结核发病机制的又一基点，现综述如下。

HLA基因多态性与肺结核易感性的关系

HLA基因的结构：HLA基因位于第6号染色体短臂上，是人体免疫功能的调控基因之一，它具有与免疫反应相关的四大功能，即疾病相关性、调节免疫反应、抗原呈递和T细胞库选择性的发生。根据各位点基因编码产物的结构组织分布及功能不同，将HLA基因复合体分为Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ3个区域。HLA-Ⅰ类基因位于染色体短臂远端，主要包括A、B、C 3个等基因位点。HLA-Ⅱ基因接近染色体着丝点，主要包括DR、DQ、DP等亚区。HLA-Ⅲ类位于两者之间，编码的蛋白有些参与补体途径和TNF-α和β基因，以及一些非免疫相关基因如热休克蛋白等。

HLA-Ⅰ类基因与肺结核：国内外的许多研究发现肺结核与HLA-Ⅰ类基因有相关性，但存在着地区或人种的差异。

2004年Vasilca V等［1］以罗马尼亚东北部肺结核病人为对象研究发现，HLA-B18可能是当地肺结核的易感基因，而HLA-B7和HLA-B61（40）可能是保护基因。刘丽红等［2］研究发现HLA-B27、B35，尤其B35可能就是我国汉族人结核病的易感基因之一，而HLA-A可能是该病的抗性基因或称预防性基因。

HLA-Ⅱ类基因与肺结核：因HLA-Ⅱ类基因呈高度多态性，国内外对肺结核与HLA-Ⅱ类基因易感性相关的报道较多。Ravikumar等［3］报道DRB1*1501-DQB1*0601与印度南部涂片阳性肺结核易感性相关；Kim等［4］还发现韩国的肺结核发病除与HLA-DRB1*0803有关外，还对HLA-DQB1*0601高度易感。在国内，Ⅱ类基因与肺结核的相关研究也陆续开展。郭淑琴等［5］发现HLA-DR8基因与中国北方汉族人群中结核病的易感性相关；而王敬慧等［6］则研究认为HLA-DRB1*15可能是我国北方汉族肺结核病的易感基因，与肺结核的临床特征有一定相关性。

HLA-Ⅲ类基因与肺结核：Ⅲ类基因易感性与肺结核相关性的研究报道相对较少。Bikmaeva AR等［7］的研究报道，TNF-α-308基因型在别克斯坦人肺结核患者中高表达，认为该基因与肺结核易感性或干扰免疫应答有关；我国纪春梅等［8］研究认为TNF-β基因突变型可能是中国北方汉族肺结核发病的易感基因型，TNF-α-238基因型则与肺结核发病无明显相关性；而王春梅等［9］的研究认为，HLA-C4BQO基因可能是我国汉族人结核病的抗性基因。因此，HLA基因多态性与肺结核发病的相关性还有待进一步研究。

非HLA基因多态性与肺结核易感性的关系

人类自然抵抗相关巨噬细胞蛋白1（NRAMP1）基因多态性与结核病发病的相关性：NRAMP1基因位于静息巨噬细胞晚期胞腔内，可通过改变吞噬溶酶体内环境，限制胞内病原体的繁殖。NRAMP1基因中存在多个多态性位点，其不同的基因型可能影响宿主对结核分支杆菌的抵抗力。Bellamy等［10］的研究结果显示，NRAMP1基因的INT4、D543N及3'UTR三个多态性位点与非洲人肺结核发病均有显著相关性，并且基因型分布频率存在人种差异。安雅臣等［11］报道NRAMP1基因3'UTR位点多态性可能是中国北方汉族成人肺结核的易感因素，而INT4多态性可能与肺结核的病变性质有关系。

雄激素D受体（VDR）基因多态性与肺结核易感性：维生素D除了能调节钙代谢和骨密度外，还是重要的免疫调节因子，可抑制被吞噬的结核分枝杆菌在巨嗜细胞内的存活。1，25-二羟维生素D3是维生素D的活性形式，它可能参与了机体对结核分枝杆菌的宿主免疫反应，而这些生物学活性主要由维生素D受体（VDR）介导。VDR基因多态性分别对应多个内切酶酶切位点，不同区域的多态性位点对VDR基因表达产生的影响不同。2003年刘玮等［12］观察到多态性位点VDR-Foki不同的基因型别在肺结核和健康人群中的分布有显著性差异，其中VDR-Foki基因型可能是肺结核的易感基因。此外，他还认为VDR基因中C/T多态性位点处的ff基因型与肺结核发病有显著性关联［13］，可能也是肺结核的易感基因。陈雪融等［14］研究认为VDR基因中具有Fok1与Taql多态性，且此两种多态性与痰结核杆菌培养及抗酸染色之间的关系，认为VDR-ff基因型可能是中国藏族菌阳性肺结核病人的易感基因型。

其他：甘露糖结合蛋白（MBP）是由肝脏分泌的钙离子依赖性凝集素，在宿主的抗感染免疫中发挥重要的作用。冯福民等［15，16］研究认为，总MBP、MBP-52和MBP-54位点G/A突变型等位基因可能与肺结核发病有关；刘玮等［17］则研究认为，甘露糖结合凝集素（MBL）基因多态性可能与汉族人群肺结核发生的易感性相关；刘相东等［18］以98例肺结核患者与65例健康对照者为研究对象，结论是IL-1B-31是肺结核病人的易感基因，而IL-1B-511位点各基因型和等位基因频率在结核病和对照组中的分布差异没有统计学意义，提示与结核易感性无关。

研究基因多态性与肺结核发病的相关性，是为了更好地了解宿主遗传因素对肺结核发病的影响及其作用机制。目前大多数研究认为，人类肺结核易感性与基因多态性有关联性，但地域、人种或种族间存在着差异。随着研究的进一步深入，人们还会揭示更多肺结核发生、发展的易感基因，并逐渐分析出这些基因多态性与肺结核的病情轻重、治疗效果、耐药及复发频率的关系，最终为临床对结核病的诊断、治疗及进行流行病学研究服务。

参考文献

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4 Kim HS,Park MH,Song EY,et al.Association of HLA-DR and HLA-DQ gens with susceptibility to pulmonary tuberculosis in Koreans:preliminary evidence of associations with drug resistance,disease severity,and disease recurrence［J］.Hum Immunol,2005,66（10）:1074-1081.

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第9篇：基因多态性研究范文

[关键词]白癜风；维生素D受体；多态性

[中图分类号]R758.41　[文献标识码]A　[文章编号]1008－6455(2007)03－0302－03

白癜风是一种以色素脱失为特征的皮肤病，本病影响容貌，治疗困难。既往研究表明本病是一种多基因遗传病，属于自身免疫病的范畴，由免疫功能异常所导致的黑素细胞的破坏是本病发生的主要机制。维生素D受体(vitamin D Receptor，VDR)是细胞核激素受体，属于类固醇激素/甲状腺受体超家族的成员，维生素D及其衍生物通过VDR发挥重要的生物学功能。以往研究证实VDR不仅参与骨骼的生长发育，而且与T细胞的功能调节以及黑素细胞的生物学功能明显相关，在白癜风患者VDR表达水平降低，这些结果都表明VDR与白癜风有密切的关系。VDR基因存在单核苷酸多态性，这些单核苷酸多态性与多种疾病的易感性有重要的关系，但是在白癜风患者人群VDR基因多态性的意义尚不明确。本研究采用聚合酶链反应和限制性片段长度多态性方法研究了中国汉族人群VDR基因多态性与白癜风的相关性。

1 研究对象和方法

1．1　研究对象：白癜风患者组，随机选取本院门诊白癜风患者749例，男性414例，女性335例，均为汉族，年龄2～95岁(平均24.9±13.9岁)。正常对照组来自同地区763例无血缘关系的健康人员，男性413例，女性350例，均为汉族，年龄1～75岁(平均26.2±13.7岁)。

1．2　实验方法

1．2．1　基因组DNA提取：取外周抗凝血1ml，用基因组提取试剂盒(天根生公司)提取基因组DNA。

1．2．2　PCR扩增及酶切：取基因组DNA约50ng进行PeR反应，反应体积为20μl。取PCR反应产物3μl进行酶切，酶切总体积为10μl。具体PCR及酶切反应条件见表1。

1．2．3　VDR多态性分析：分别用限制性内切酶FokI、BsmI、ApaI、TaqI(NEB公司)对不同的PCR扩增产物进行酶切，3％的琼脂糖凝胶电泳分离酶切产物，EB染色及紫外线投射仪下观察结果。分别以4种限制性内切酶第一个字母的大写F、B、A、T表示缺乏相应的多态性位点，以小写字母f、b、a、t表示存在相应的多态性位点，f、b、a、t突变位点经酶切后分别释放如下大小的片断。f:196bp和69 bp，b:177bp和182 bp，a:280bp和210bp，t:290bp和200 bp。

1．3　统计学处理：分别统计病例组和对照组基因型和等位基因的分布频率。数据经Hardy－Weinberg遗传平衡检验后，用SPSS10.0统计软件分析。采用卡方检验，比较白癜风患者组和对照组VDR基因型分布上的差异，并分析VDR基因型与白癜风的相关性。

2　结果

2．1　Hardy－Weinberg遗传平衡检验：对白癜风组及对照组VDR基因型分布进行检验。结果白癜风组及对照组均符合Hardy－Weinberg遗传平衡(表2)。

2．2　VDR基因型分布：白癜风患者VDR BsmI、ApaI、TaqI位点基因型的分布情况与正常对照组有显著性差异bb、aa、tt、基因型在白癜风患者中频率较高，FokI位点基因型的分布与正常对照组无显著性差异(表3)。

2．3　单倍体分析：结果显示FokI位点和BsmI位点之间，kpaI位点、TaqaI位点和BsmI位点两两之间均存在较强的连锁不平衡(表4)，白癜风患者中fbAT、FbAT和FbaT单倍体型的频率显著高于对照组，提示7DR基因型为fbAT、FbAT和FbaT的个体患白癜风的危险性较大(表5)。

3　讨论

维生素D受体是甲状腺激素受体超家族成员，是介导维生素D类活性物质1，25－(OH)2D3发挥生物学效应的核内大分子，1，25－(OH)2D3不仅参与正常的骨质代谢功能，而且还具有其他多方面的作用。临床研究不仅观察到白癜风患者存在VDR的低表达，而且发现维生素D衍生物对白癜风具有治疗作用。维生素D在白癜风中的作用主要有两方面：其一是对免疫系统的调节功能，其二是对黑素细胞生物学功能的影响。

VDR基因存在多个单核苷酸多态性位点，这些单核苷酸多态性位点不同程度地影响维生素D的生物学功能的发挥。研究表明VDR基因多态性与多种自身免疫性疾病以及肿瘤有密切的关系。李春英。等发现VDR基因多态性与黑素瘤有明显相关性，Bitlea等在一小样本研究中也表明VDR基因多态性与白癜风相关，基于这些研究结果以及VDR的生物学特性，我们认为VDR基因多态性可能与白癜风有着密切的关系。