免疫学防治精选(九篇)

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第1篇：免疫学防治范文

【关键词】 免疫学技术 免疫血清 抗原

［ABSTRACT］ObjectiveTo explore the method of fast-preparing antiserum and its effect. MethodsUsing short-range immunization， rabbits were immunized with E. coli， sheep erythrocyte antigen (SEA) and yolk antigen after multiple inoculations， the antiserum was collected and its potency detected.ResultsThe potency of antiserum immunized by E. coli antigen， SEA and yolk antigen reached 1∶10 240， 1∶1 200 and 1∶10 240; respectively. ConclusionThe antiserum prepared by this technique is time-saving， high-potency and high-affinity， which is applicable to teaching of experiment.

［KEY WORDS］Immunology technique; Immune serum; Antigen

免疫血清是经过抗原免疫的动物血清，含有特异性免疫球蛋白(Ig)，可直接应用于病原体的诊断或感染性疾病的紧急预防和治疗，也可通过进一步纯化血清中的Ig，用于多种疾病的诊断和治疗，是一种非常重要的生物制品。制备免疫血清成为学生必需具备的实验技术。在以往的免疫血清制备实验课中，制备高效价免疫血清基本采用大剂量长程免疫法，该方法具有产物效价高、亲和力强的优点，但耗时过长，给研究造成一定的影响。为了探索快速制备免疫血清的新方法，本研究选取大肠杆菌抗原和绵羊红细胞(SRBC)抗原作为颗粒性抗原，选取鸡蛋黄抗原作为可溶性抗原［1］，采用小剂量短程免疫法制备免疫血清，以探讨该方法的可行性。

1 材料和方法

1.1 试剂与器材

1.1.1 抗原 大肠杆菌（泰山医学院临床微生物学教研室保存），SRBC，新鲜鸡蛋。

1.1.2 实验动物 健康家兔32只，雄性，体质量2.0～2.5 kg，无免疫史，由泰山医学院实验动物中心提供。随机分成大肠杆菌抗原组、SRBC抗原组、鸡蛋黄抗原组、生理盐水对照组，每组8只。

1.1.3 器材与试剂 紫外线分光光度计；摇床恒温水浴箱；离心机；振荡器；灭菌大试管；LB液体培养基或肉汤培养基；麦氏比浊管；体积分数0.05石炭酸溶液；磷酸盐缓冲液；盐酸溶液；HRP-Ab等。所有实验用材料均经灭菌处理。

1.2 抗原的制备

1.2.1 大肠杆菌抗原的制备 将大肠杆菌接种到营养琼脂培养皿上，37 ℃培养18~24 h，取单菌落接种于LB液体培养基或肉汤培养基中，37 ℃培养18~24 h，按照1%的比例转种于LB液体培养基或肉汤培养基中，37 ℃培养18~24 h，收集培养液。沸水浴1 h后3 000 r/min离心10 min，弃去上清。麦氏比浊法鉴定大肠杆菌，用石炭酸生理盐水稀释其含量至1012/L，取少许做无菌实验，其余菌悬液放冰箱保存。

1.2.2 SRBC抗原制备 无菌抗凝绵羊血2 000 r/min离心5 min，吸去上清，加入等量无菌生理盐水混匀，再次2 000 r/min离心5 min，吸去上清，如此连续洗3次，最后1次离心10 min以使红细胞密集管底，直至上清液透明无色再吸去上清液，留密集红细胞备用。用无菌生理盐水将红细胞配成体积分数0.20的SRBC悬液，即为实验用SRBC悬液。

1.2.3 鸡蛋黄抗原的制备 取新鲜鸡蛋1个，用体积分数0.75乙醇消毒，在无菌条件下，于气室一端击一小孔，用无菌吸管将蛋清吸出后，将蛋黄倒入一装有玻璃珠的无菌锥形瓶内摇匀，用生理盐水进行1∶5稀释，置4 ℃冰箱保存备用。

1.3 免疫方案［1，2］

1.3.1 大肠杆菌抗原组 首先在颈背部多点皮下接种大肠杆菌菌液抗原1.0 mL，第2天在颈背部多点皮下接种菌液抗原0.5 mL，第3、4天每天于耳静脉注入菌液0.5 mL，第5天于耳静脉注入菌液抗原1.0 mL。

1.3.2 SRBC抗原组 首先在颈背部多点皮下接种体积分数0.20的SRBC抗原2.0 mL，第2天在颈背部多点皮下接种体积分数0.20的SRBC抗原1.0 mL，第3~5天每天于耳静脉注入体积分数0.20的SRBC抗原1.0 mL。

1.3.3 鸡蛋黄抗原组 首先在颈背部多点皮下接种1∶5稀释鸡蛋黄抗原1.0 mL，第2~4天每天于耳静脉接种1∶5稀释鸡蛋黄抗原0.5 mL，第5天于耳静脉注入1∶5稀释鸡蛋黄抗原1.0 mL。

1.3.4 生理盐水对照组 首先在颈背部多点皮下接种生理盐水2.0 mL，第2天在颈背部多点皮下接种生理盐水1.0 mL，第3~5天每天于耳静脉注入生理盐水1.0 mL。

1.4 试血

末次免疫后第3天，耳动脉采血2 mL，37 ℃温育1 h后，2 000 r/min离心10 min，吸取离心后上清液0.2 mL于无菌试管中，再加入0.8 mL生理盐水，作 1∶5 稀释。采用试管凝集试验方法测定大肠杆菌及SRBC抗原免疫血清效价，琼脂凝胶双向扩散试验方法测定蛋黄抗原免疫血清效价。

转贴于

1.5 采集免疫血清

末次免疫后第6天，心脏采血法［3］采取20 mL家兔血液于离心管中，37 ℃温箱自然凝固，出现血凝块后3 000 r/min离心20 min，将上清液转移到洁净试管中，-20 ℃冰箱保存。

1.6 免疫血清终效价鉴定

采用ELISA法分别鉴定大肠杆菌、蛋黄免疫血清终效价［1，4］，补体溶血试验鉴定SRBC免疫血清终效价。

2 结

果

2.1 免疫血清的初步效价

经大肠杆菌抗原、SRBC抗原、鸡蛋黄抗原免疫后的免疫血清初步效价分别达1∶1 280、1∶640、1∶32。

2.2 抗血清的终效价

经大肠杆菌抗原、鸡蛋黄抗原、SRBC抗原免疫后的免疫血清终效价分别达1∶10 240、1∶10 240和1∶1 200。

3 讨

论

目前，高效价免疫血清的制备基本采用长程免疫法，免疫血清的制备过程需要耗时1个多月。虽然长程免疫法制备的抗血清具有效价高、亲和力强等优点，但是其操作过程较长，期间可能有动物死亡等不利因素。因此，缩短免疫时间来制备抗血清的方法和效果是值得探讨的［5］。

本研究选择大肠杆菌抗原和SRBC抗原代表颗粒性抗原，选择鸡蛋黄抗原代表可溶性抗原，采用短程免疫法，5 d内分组连续免疫家兔，末次免疫后第3天试血，大肠杆菌抗原和SRBC抗原免疫血清的效价已分别达到1∶1 280和1∶640，而鸡蛋黄抗原抗血清的效价仅达到 1∶32，这与抗原的种类及物理性状对免疫原性的影响有关［6］。大肠杆菌抗原及SRBC抗原为颗粒性抗原，鸡蛋黄抗原为可溶性抗原，颗粒性抗原的免疫原性较可溶性抗原强，故试血时效价前者高于后者。但是末次免疫后第6天采血，用补体溶血试验测得SRBC免疫动物的抗血清(溶血素) 效价达1∶1 200，用特异度和灵敏度均较高的 ELISA 间接法测定，大肠杆菌抗原和SRBC抗原免疫血清的效价均达到1∶10 240。由此可见，短程免疫法不仅缩短了免疫期限，而且具有较好的免疫效果，可制备出高效价、高亲和力的免疫血清。

参考文献

［1］ 朱振久，张冉，杨惠军，等. 短程免疫法制备高效价抗血清研究［J］. 湖南师范大学学报， 2006，3（1）：42-43. ［2］ 覃艳春，陆金兰，陆吉利，等. 免疫血清制备方法改良初探［J］. 右江民族医学院学报， 2005，27（6）：892.

［3］ 王娅，王全勇，王淑兰. 伤寒、副伤寒免疫血清的制备［J］. 数理医药学杂志， 2005，18（2）：178-179.

第2篇：免疫学防治范文

 

一、亚里士多德——欧洲美学思想的奠基人

 

亚里士多德(公元前384—322年)，他一生勤奋，是第一个以独立体系阐明美学概念的人，他的这个感念雄霸了两千余年。《诗学》和《修辞学》是在希腊文艺已达到高峰而转趋衰败的时代，他用科学的方法替希腊文化的辉煌成就作了精细的分析和扼要的总结，因而写成了这两部有科学系统的关于美学思想的专著。

 

(一)、摹仿的艺术对现实的关系

 

亚里士多德不仅肯定艺术的真实性，而且肯定艺术比现象世界更为真实，艺术所摩仿得决不是柏拉图所说的只是现实世界的外形(现象)，而是现实世界所具有的必然性和普遍性即它的内在本质和规律。一幅画不能只是摩仿偶然性的现象而是要揭示现象的本质和规律，要在个别人物事迹中见出必然性与普遍性。这正是“典型人物”的最精微的意义。如文艺复兴盛期的拉斐尔创作的《西斯廷圣母》，他笔下的圣母是美丽的平民妇女的形象，在她们身上体现出慈爱、善良、温顺的高尚品质是普遍性的，而画出的圣母是个别的。

 

亚里士多德论诗与其它艺术，经常着重有机整体的观念。这也是和他对文艺与现实关系的基本看法分不开的：形式上的有机整体其实就是内容上内在发展规律的反映。整体是部分的组合，组合所应根据的原则就是个部分之间的内在联系。零散的东西不免具有偶然性，彼此之间见不出必然的互相因依关系，偶然的就要抛开，剩下来的因素彼此之间就要见出必然的互相应依的关系。这样，一个整体里一切都是必然的，合理的，没有任何偶然的和不合理的东西夹杂在内，因为一件东西既然可有可无，就不是整体的真正部分。这就引出了他在美学思想中“和谐“的概念。它是建立在有机整体的概念上的：各部分的安排见出大小比例和秩序，形成融贯的整体，才能看出和谐。这在绘画中就特别强调构图和造型了。它们体现了形式和内容的统一。在大自然中汲取材料，经过理性的分割、组合、抛弃等一系列的分析，以致达到心中所想的理想化作品。就像20世纪初出现的立体主义画派，它主要追求一种几何形体的美，追求形式的排列组合所产生的美感。

 

(二)、文艺的心理基础和社会作用

 

在文艺功用问题上，亚里士多德主要表现在伦理学方面。他的理想的人格是全面和谐发展的人格。本能、情感、欲望之类心理功能既是人性中所固有的，就有要求满足的权利，给它们以适当的满足，对性格就会发生健康的影响。就是从这种伦理思想出发，他对诗和艺术进行辩护：文艺满足人的一些自然要求，因而使人得到健康的发展，所以它对于社会是有益的。欧洲文艺界有一个长久争辩的问题：文艺的目的是什么?，教益，还是兼教益?就亚里士多德来看，他是第一个设法把美学理论和伦理理论分开的人。根据《诗学》里的一句话“正确性在诗学里和在政治里是不相同的，正如它在诗里和在任何其它艺术里不相同一样” 。其实亚里士多德在这里至多不过说艺术标准和政治标准不完全是一回事，并没有说二者不可统一或互相排斥。作为一个逻辑学者，他要在不同事物中找出不同所在，以便见出每种事物的特质。同理，他指出了艺术标准和政治标准的不同，但是这也不能就使人得出二者互不相容的结论。即产生了艺术标准—审美。一般地说，一件艺术作品既合道德标准(亦即政治标准)，又合逻辑标准(亦即现实标准)，在他看来，他就已符合艺术标准了。也就是说，一件艺术作品，一方面要靠它本身的特质，一方面也要靠观众的认识能力。这一点与中国伟大的儒学家孔子的观点相似。

 

二、孔子论艺术在社会生活中的作用

 

孔子(公元前551—479)是肯定审美和艺术的。他的思想核心是“仁” 。按照这个思想，孔子认为，审美和艺术对于人的精神的影响特别深刻有力，所以审美和艺术在人们为达到“仁”的精神境界而进行的主观休养中就能起到一种特殊的作用。

 

他所提倡的观点和亚里士多德的是不相同的。他没有把各学科分类，不善于观察，没有清晰的逻辑思维，他主张体悟式和启发式教学。

 

他也提出了“和” ，他所说的是“礼之用，和为贵。”他的着重点不在于音调本身的和谐，而在于音乐表现的情感要受到“礼”的节制，要适度。在绘画上同上，不仅要构图和谐，作品所表达的感情是符合“礼”的。

 

孔子也谈及了“审美”一词。用“兴” 、“观” 、“群” 、“怨”这四个词来概括。他提出的这对范畴，对于艺术欣赏的心理特点作了深刻的分析。

 

兴” 、“观” 、“群” 、“怨”这四者并不是互相割裂的。他们是互相紧密联系在一起的。孔子强调诗歌对人的精神的感发作用，从而把握住了艺术欣赏活动的一个最重要的特点。他把 “兴”放在第一位，并不是偶然的。这表明孔子对“兴”这种作用的特别重视。所谓“兴” ，就是诗歌对人的灵魂起一种净化的作用(“荡涤其浊心” )，也就是对人的精神从总体上起一种感发、激励、升华的作用，使人摆脱昏庸猥琐的境地，变成一个有志气、有见识、有作为的朝气蓬勃的人，从而上升到豪杰、圣贤的境界。这是“兴”的心理内容、心理特点，也是“兴”的社会功能。他把“兴”摆在“兴” 、“观”/、“群” 、“怨”的首位，这表明，在他看来，艺术欣赏作为一种美感活动，它的最重要的心理内容和心理特点，就在于艺术作品对人的精神从总体上产生一种感发、激励、净化、升华的作用。在孔子这一思想影响下，后世的美术家、文学家、艺术家在谈到艺术欣赏的时候，总是首先强调人的精神从总体上产生的感发、激励、净化和升华，而不是首先强调某一局部的心理因素和社会功能。

 

三、结论

 

中西方知识立场的差异导致艺术差异，不同的年代、时期所产生的文化也有差异。从他们的哲学范畴来看，亚里士多德的哲学观点是徘徊于唯心主义与唯物主义之间的，但是对于文艺与现实关系的问题，他的看法却基本上是唯物主义的，现实主义的。而孔子提出的“美” 、“大” 、“兴” 、“观” 、“群” 、“怨” ，一系列范畴是在于人领悟后，启发人们这么做。他的理论是中国古典美学的一部分，同时也是他们的哲学体系的一部分。

第3篇：免疫学防治范文

地方高校是高校力量的主力军。近年来随着高校扩招,重点高校对地方高校的冲击越来越大。地方高校要生存,质量是关键。高校办学质量主要以教学质量来衡量,而要提高教学质量,就要狠抓教风、学风。

一、加强教风、学风建设的重要意义

优良的教风、学风是提高地方高校教学质量的保证。高校是培养专业人才的地方,提高教学质量是高等教育永恒的主题。作为教师,是这一主题的执行者和实践者;作为学生,是参与者和代表者。加强教风、学风建设,才能创建积极向上的氛围,使教师和学生的积极性、主动性、创造性得到充分的发挥,使集体的凝聚力、向心力、战斗力得到增强。优良的教风给人以启迪,优良的学风给人以熏陶。优良的教风引导优良的学风,优良的学风促进优良的教风。

优良的教风、学风是地方高校生存与发展的基础。随着高等教育的全球化、市场化,高校招生、就业竞争日益激烈。如何招足招好学生,确保高等教育质量,提高学生竞争力,成为大家关注的焦点,这就对地方高校的教风、学风建设提出了更高的要求。如果地方高校的教风、学风差,必然导致教学质量下降,削弱所培养的人才的竞争力,影响学生就业,从而危及学校地位,影响招生数量和质量、办学规模和效益。地方高校本身和重点名校存在很大的差距,在优胜劣汰的竞争过程中,地方高校的生存更是岌岌可危。因而优良的教风、学风不但是地方高校提高教学质量的根本保证,而且是其生存与发展的基础和前提。

二、当前教风、学风建设的现状及问题

高校教风、学风建设是一个基础性、系统性、长期性的工程,关系到学校的方方面面。虽然各地方高校想尽一切办法,促进教风、学风建设,但是当前的教风、学风建设还是存在认识上的、操作上的诸多误区。

1.认为教学质量问题是学风问题,忽视教风建设。在实际的操作过程当中,有相当一部分老师认为教学质量主要是学生的因素、学风的缘故,从而忽视对自身的严格要求。教学效果如何,往往通过学生成绩来检验,由于生源质量、学生学习态度的差异,有相当一部分学生需要补考甚至重修。学生成绩差、科研水平低,作为管理部门、管理者普遍认为是学生自身的问题,而忽视过程的管理与职责。

2.认为抓学风问题是思政部门的事,忽视教师的关键作用。学风建设离不开思政部门的教育和管理,但又不仅仅是思政部门的事。从职能部门看,学风建设既有思政工作系统,又有教学管理系统;从实践人员看,既有专门的教育管理部门,又有全体教职员工;从涉及的领域看,既有全体校园人的因素,又有校园文化、环境等物的因素。所有的因素中,人的因素是最主要也是最关键的因素;而人的因素中,教师的因素是最主要的。

3.重视以学风促进教风,忽视教风对学风的推动作用。多数高校由于在师资水平上参差不齐,而且学生的授课教师来自不同的二级学院,二级学院在抓学风、教风的时候客观上有一定难度,所以存在以抓学风来促进教风的思想和行为,其结果是可想而知的。

4.教师自身的问题。教师的学识水平、学术能力、道德品质、组织教学能力、教学方式方法等都直接影响教风和学风建设,特别是师德师风中存在许多问题。如一些教师思想不稳定、工作不安心、工作责任心不强,在教学中对学生的考勤、纪律放任不管,不虚心接受学生提出改进教学方法的意见,只教书、不育人。这样的师德师风严重影响优良教风的形成。

5.学生自身的问题。大多学生由于没有了压力、管理与监督,缺乏自我学习的习惯,不可避免地放任自己,沉溺于网络、情感世界,学习成了一种负担,出现厌学、逃学现象,放松对自己的要求和修养。上课时迟到、旷课、收发短信、接打电话、讲空话、甚至谈恋爱已经屡见不鲜,考试作弊禁而不止。由于大量的扩招导致生源质量严重下降,学风日益削弱,教学质量滑坡等一系列的恶性循环。

三、切实加强教风、学风建设,全面提高教学质量

1.要理顺教风与学风关系,多管齐下。教风和学风构成了一个学校的校风,教风与学风之间既相互制约又密不可分。无论教风还是学风都要受到社会大环境中各种因素的影响,但就教学本身来说,学风主要是受教风的影响,所以在日常的教学管理中,不能只抓学风不抓教风,或者希望通过抓学风建设来促进教风建设。作为学校管理部门必须理顺教风与学风关系,认识到教风与学风的互动性。我们要切实加强教风与学风建设,提高教师风范,树立教学相长、教风带学风的观念。教风和学风建设不仅仅是教务部门和学工部门的事情,它涉及学校党、政、工、团、学、后勤等所有的部门,只有各部门齐心协力,相互配合,多管齐下,做好教风、学风建设的工作,才能切实加强教风、学风建设,从而提高教学质量和办学效益。

2.要以教风推动学风,发挥教师的主体作用。学风主要是受教风影响,教师与学生的接触,主要集中于课堂,而在教的过程中,教师是主体,起着重要作用。在教育过程中教师的教能够加速或延缓学生心理发展的进程,能不断调节教育外因与学生心理发展内因之间的关系。教师是整个教学活动的设计者、组织者和领导者。学生是认识的客体,主要是受教师的学识、教师的人格和教学内容的影响,在教风、学风建设中要充分发挥教师的积极作用。教风在一定程度上决定着学风的好坏,好的学风是由好的教风带出来的。

3.要严格管理,加强制度建设。地方高校要坚持教学工作在各项工作中的中心地位,坚持教学改革在各项改革中的核心地位,要建立健全教学质量监控体系,不断构建和完善各项规章管理制度,并严格执行这些制度。对教师要严格整个教学过程,加强监督,特别强化课堂组织与管理,加强考勤。学院、学校教务部门、督导要及时检查、反馈对教师的检查评估信息,合理制定学生评教指标,合理利用学生评教结果。对学生严肃校规校纪,加强考纪考风,提高学生严守纪律、努力成才的自觉性。

4.教师要加强自身修养。教师要以高尚的品德感染学生,以良好的形象影响学生,以精湛的技能带动学生,以渊博的知识激励学生。加强师德师风建设,真正做到教书与育人的统一。教师要提高教学水平、文化层次,加强科学研究,提高学术水平,促进学生提高分析问题、解决问题的能力。学校要建立相关制度,增加教师进修学习的机会。如有些高校实行的青年教师导师制,作为具有教学、科研高水平的导师要尽心尽力指导青年教师,真正起到传帮带的作用,不要流于形式;作为受指导的青年教师要珍惜机会,多倾听、探讨导师的教学经验,虚心接受导师的指导,不仅提高教学技能,更提升科研水平,完善人格。

5.学生要提升自身素质。学生要加强自觉性,学会自主学习,增加责任感。大学时代是人生自我意识发展的关键时期,要对学生进行理想信念、人生观、价值观的教育,而这恰好是学风建设中最核心的本质和内涵。要努力激发学生的全面发展观和自我成才观,培养学生自觉学习的习惯。大学生要勇于面对纷繁多变的社会,敢于接受市场经济的各种冲击,提高自身的综合素质,以自己的力量建设良好的学风。

参考文献:

[1]宋改敏,吴仁艳.论高校教风的成因及建设[J].陕西师范大学学报(哲学社会科学版),2005(34):309-311.

[2]熊友华,钟丽萍.高校大学生学风建设刍议[J].黑龙江教育(高教研究与评估),2007(5):28-29.

[3]刘燕.以人为本科学管理推动地方高校的教风、学风建设[J].经济师,2006(4):99-100.

第4篇：免疫学防治范文

[关键词] BrdU；免疫组织化学染色；胰酶抑制剂；牛血清白蛋白；漂片法

[中图分类号] R392-33 [文献标识码] A [文章编号] 1673-7210（2012）02（b）-0016-03

Improvement in technique of BrdU immunohistochemical staining by bleach section

GUO Jingjing1 SHAN Lidong2 WU Gang3

1.Department of General Surgery, Huashan Hospital Baoshan Branch of Fudan University, Shanghai 200431, China;

2.Department of Neurobiology and Medical Psychology, School of Preclinical Medicine and Biological Sciences,Medical School of Suzhou University, Jiangsu Province, Suzhou 215123, China;3.Department of General Surgery, Huashan Hospital Affiliated to Fudan University, Shanghai 200040, China

[Abstract] Objective To reduce the tissue slice breakage, explore the technique of 5-bromo-2-deoxyuridine (BrdU) immunohistochemical staining by blocking buffer in bleach section. Methods BrdU, which was detected by ABC immunohistochemistry on bleach section of brain slides, was used to incorporate the new born cells which were promoted proliferation by motor-driven wheel running. The different blocking effects of Goat serum, trypsin inhibitor and bovine serum albumin were compared in the process of immunohistochemistry. Results In the group of motor-driven wheel running in the dentate gyrus of the hippocampus in rats, the number of BrdU-positive cells was more than the control group. The breaking rate of slides was reduced obviously, especially in the groups with bovine serum albumin and trypsin inhibitor, after being added different blocking reagents. But cells in trypsin inhibitor group were appeared without specific staining. Conclusion Bovine serum albumin is preferable blocking buffer.

[Key words] BrdU; Immunohistochemical staining; Trypsin inhibitor; Bovine serum albumin; Bleach section

5-溴-2-脱氧尿嘧啶核苷（5-bromo-2-deoxyuridine, BrdU）是胸腺嘧啶核苷的类似物，在细胞周期的S期掺入到增殖或分裂细胞的核内，只要细胞不消亡，BrdU 将永久地存留在胞核DNA 中，且在体或离体都能通过免疫组织化学的方法检测到，可用于标记BrdU暴露期间进行DNA合成的细胞[1]。故BrdU阳性细胞可被看作是具有增殖活性的细胞。

1 材料与方法

1.1 材料

动物：SD大鼠，雌雄不拘，体重220~230 g，苏州大学实验动物中心提供。试剂：BrdU（ Roche Diagnostic Co.）。

1.2 分组

踏转轮运动对成年大鼠海马齿状回细胞增殖的影响。实验分两组，①踏转轮运动组：转轮速度为10 m/min，每天训练2次（09:00，15:00），每次训练30 min，连续6 d；②对照组：动物置于转轮中，速度为0。放置次数与时间同运动组。在染色过程中每一组又分为三个亚组，分别为加入羊血清组、胰酶抑制剂组和牛血清白蛋白组。

1.3 BrdU标记

踏转轮运动的第4天开始给药，于每次运动前1 h腹腔注射BrdU（50 mg/kg，美国ROCHE公司），2次/d，连续3 d。末次给药后24 h处死动物，从前囟后3.3~5.1 mm作连续冰冻切片，进行BrdU染色。

1.4 BrdU免疫组织化学

切片经2 mol/L HCl（室温30 min）变性， 用0.01 mol/L PBS 充分漂洗后转入0.1%胰酶中（37℃ 15 min）消化后，0.01 mol/L PBS漂洗（5 min×3次），分别加入羊血清组、胰酶抑制剂组和牛血清白蛋白组，室温下30 min, 然后加入小鼠抗BrdU单克隆抗体（1∶200，Biosource）室温孵育16 h，0.01 mol/L PBS漂洗（5 min×3次），转入羊抗小鼠二抗（1∶200，Vector）室温孵育2 h，再用0.01 mol/L PBS漂洗（5 min×3次），移入亲和素生物素试剂（avidin-biotin complex，ABC，1∶200）室温孵育2 h，最后用含0.03% H2O2的0.05% DAB显色3~5 min， 0.01 mol/L PBS终止显色。常规脱水、透明、封片。镜检BrdU阳性细胞计数。

1.5 统计学方法

随机选取每只大鼠位置相同的5张不连续切片，光学显微镜下（×200）计数每张切片双侧海马齿状回颗粒细胞层（granular cell layer，GCL）免疫反应阳性细胞数。阳性细胞的均数作为统计数据，以均数±标准差（x±s）表示。用SPSS 10.0软件作方差分析（one-way ANOVA）检测组间差异性。

2 结果

2.1 踏转轮运动对成年大鼠齿状回细胞增殖的作用

经过6 d的踏转轮运动训练后，各组BrdU阳性细胞见图1。免疫组织化学结果显示，海马齿状回BrdU阳性细胞数，对照组为（22.55±1.91）个/切片，踏转轮组为（57.89±1.90）个/切片，两组相比差异有高度统计学意义（P < 0.001）。由此可见，踏转轮运动可增加BrdU阳性细胞，促进齿状回细胞增殖。

a、a′为对照组， b、b′ 为踏转轮组。a、b分别是a′、b′的高倍视野

图1 踏转轮运动6 d后海马齿状回BrdU阳性细胞数

2.2 不同的封闭液对组织片染色效果的影响

末次给药后24 h处死动物，从前囟后3.3~5.1 mm作连续冰冻切片，将切片随机分成三组。在染色过程中，这三组分别加入羊血清、胰酶抑制剂和牛血清白蛋白作为封闭液和终止胰酶作用的抑制剂。各组BrdU阳性细胞如图2所示。免疫组织化学结果显示，三种方法均能使BrdU着色，但各组的本底颜色和非特异性着色程度不同：羊血清组中虽然阳性细胞与非特异性着色细胞有明显区别，但非特异性着色细胞显色度较深，且遍布整个视野。胰酶抑制剂组阳性细胞与非特异性着色细胞也有明显差异，而且非特异性着色细胞显色度较浅，整个本底相对较为干净、清爽。牛血清白蛋白组几乎见不到非特异性着色细胞，本底颜色非常淡。

除了本底颜色和非特异着色的观察外，笔者还重点观察了组织切片的破损情况。实验结果显示：牛血清白蛋白和胰酶抑制剂组无切片破损，而羊血清组有少部分脑片破损。细胞计数显示：羊血清组为（23.22±2.38）个/切片，胰酶抑制剂组为（22.54±2.12）个/切片，牛血清白蛋白组为（23.14±3.12）个/切片，各组间差异无统计学意义（P > 0.05）。

3 讨论

自从20世纪末神经干细胞发现以来，其目前已经成为神经科学研究的热点之一。而研究在体或移植后的神经干细胞的增殖、迁移、分化中常用的标记新生细胞的方法有BrdU、3H、Ki-67、 PCNA（proliferating cell nuclear antige）[2-3]，前两者在细胞增殖时整合入细胞以后，即使在细胞静止期仍能表达；后两者是细胞增殖过程中表达的内源性蛋白，当细胞处于静止期时，它们并不表达。因此，BrdU和3H是常用的追踪细胞的标记物，而BrdU的检测又较3H更为方便、简单，所以BrdU是最为常用的标记细胞增殖的标记物。

丰富环境对神经发生有影响，而在各种环境因素中，运动对其影响较为显著[4-5]。本课题的前期研究建立了踏转轮运动的模型[6]，并发现运动对神经发生的作用具有强度依赖性，这早于国内外的相关报道[7-8] 。故本课题选用运动作为促进细胞增殖的方法，观察了不同的染色方法对切片及结果的影响。

组织切片BrdU染色时，常用的方法有贴片法和漂片法。漂片法与贴片法相比有一定的优点：前者能使抗体从两侧渗透，更有利于抗体与抗原充分反应，相应的在洗片时，也能使未结合的抗体充分漂洗干净；漂片法比贴片法所使用的抗体数量少，而且必要时抗体还可以回收，重复利用。标本量大时，漂片法比贴片法更省时、省力。但是，用漂片法进行BrdU染色时，由于在加入抗体前要用盐酸和胰酶对脑片进行预处理，经过处理（尤其是胰酶处理）后，进行染色的脑片极易破损，从而导致整个染色过程无法正常完成，或最终所得到的脑片极少。因此，在本实验中针对胰酶的消化作用，笔者分别选用了与二抗同源的羊血清、牛血清的主要成分白蛋白（牛血清白蛋白）及胰酶抑制剂来抑制（或终止）胰酶的消化作用。

羊血清是免疫组织化学中常用的封闭液，但是，在本实验中并未取得预期的成果，虽然羊血清能终止胰酶的消化作用，但并未能有效地封闭非特异性染色。其原因目前仍不清楚，有待进一步研究。胰酶抑制剂（取自火鸡蛋清）组和牛血清白蛋白组非特异性染色较少，尤其是牛血清白蛋白组。其原因可能是二者的成分单一，纯度较高。

[参考文献]

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第5篇：免疫学防治范文

【关键词】口腔学；自治；标准；规章；质量；权利保护；卫生；私人口腔机构；检验；监督

自治职业经营（自治机构）在世界上很多国家都证明了自己在很多个方面可以提高口腔医疗服务质量的效率。如今在俄罗斯已经形成了实行这些机构的法律平台。下列有益前提是其成功实行的必要因素：

1私人自治机构的优势

1.1口腔学业对国家和市政府职能机构伙伴关系发展，和对口腔医疗服务质量提升和文明市场形成中结构监督的利害关系。

1.2俄罗斯联邦法律法规允许自治职业在口腔学实践中实现快速发展。

1.3患者权益诉讼前保护机构发展的客观必然性。

1.4需要形成口腔医疗服务质量保障的统一方法。

1.5建立人才持续储备系统的要求和形成满足口腔医生相关需求的必要性。

另外，建立口腔学自治对于所有参与者方都有自己的优点：患者，国家，私人医疗机构，医疗教学机构。

2我们来看一下自治机构的建立对所有口腔学卫生组成部分的最大好处

口腔学自治机构的建立对国家机构的好处包括下列几点。

2.1在私人卫生机构出现了通过强制性标准规范来实行国家政策的手段。

2.2在私人卫生机构通过自治机构形成了原则上新的自行检验机制，没有这个机制，任何内部检验的方式都不能有效实施。

2.3扩大对私人经济监督检验的可能性。

2.4出现了在无国家资金投入的情况下保护生产者和收货人利益的补充手段。

2.5通过自治机构出现了对口腔学提供服务的范围和质量的分析的可能性。

3建立口腔学自治机构对患者利益如下所示

3.1花了自己的钱，患者能够得到更高质量的服务，这是最重要的。

3.2建立其利益的预审防御系统：提供服务的标准和规范，自治机构本身的内部检查，仲裁法院，提供服务的质量财产责任。

4建立口腔学自治机构对于医学教育机构的利益如下所示

同自治机构的相互关系在培养干部和在口腔学领域具有很大的机会。自治机构（自调机构）在卫生保健上承担部分国家在卫生保健领域的调节和监管功能，成为医生职业资格保证。同自调机构的合作将促进培养新的医学技术和新标准专家的短期形式的积极使用。除此之外，自调机构是推行和推进智力活动成果的教育和科学机构的有益平台。

对于民营医疗机构在口腔学领域参加自调节机构的利益如下所示。

4.1建立专业兴趣的保护系统，它包括：

①具有职业性活动的标准和规则，因此标准和规则在区别国家的标准和规则将不以是否有预算资金为标准，而是质量，这毫无疑问是利润；②服务生产商利益预审防御机构（仲裁法庭、财产责任）；③职业活动自调机构的合格证；④选择和使用医学技术只能允许在规定的法律规范内应用。

4.2出现自治机构成员灵活学习那些必须在这里，并且马上需要掌握的事情。

4.3出现国家（市政府）机构对自治机构法律所规定的那些后者其他涉及职业经营种类主体的影响。

4.4集中（通过自治机构）有效的得到必要的适用于职业经营特点的法律规范的信息和其注解的可能性。

4.5所有上述内容可以促进所提供的服务质量的提高。而质量的提高首先保证有利的竞争优势，并永远对业务进行有利的影响。

在俄罗斯，这样的机构现在已经积极地形成，创造发展医疗自治新模式的条件，来保障居民口腔医疗服务质量的提高。

参考文献

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第6篇：免疫学防治范文

关键词：前蛋白转化酶枯草杆菌蛋白酶9抑制剂；高胆固醇血症；低密度脂蛋白；低密度脂蛋白受体

1 高胆固醇血症概况

高LDL在美国人群中较为常见，美国心脏协会2015年的报告显示其比例高达人口总数的31.7%。10月24日，《中国成人血脂异常防治指南（2016年修订版）》：中国成人血脂异常总体患病率高达40.4%；我国居民血脂异常患病率持续升高，冠心病死亡率快速增加，专家预测随着人群血清胆固醇水平持续升高，可能导致2010～2030年我国心血管病事件增加约920万[1]。随着生活水平的不断提高，当今社会人们的饮食普遍超标，并且缺乏足够的体育锻炼，因此导致胆固醇水平尤其是低密度脂蛋白胆固醇水平升高从而引起很多健康问题。另一方面，目前单纯依靠饮食控制、有规律的体育锻炼以及戒烟等生活方式的改变已经不足以有效控制胆固醇水平。因此，美国最新的胆固醇指南建议动脉粥样硬化性心血管疾病（Arteriosclerotic Cardiovascular Disease，ASCVD）特定高危人群应适当服用药物进行预防和治疗[2]。

2 高胆固醇血症的治疗方法

目前用于治疗高胆固醇血症的药物包括他汀、选择性胆固醇吸收抑制剂、胆汁酸螯合剂、贝特类、烟碱酸、Omega-3脂肪酸等，其中他汀是世界公认的支柱药物。根据2013年美国心脏病学会和美国心脏协会的成人降低ASCVD风险的血胆固醇治疗指南，大量证据表明他汀可以预防和治疗ASCVD以及除心衰患者心功能NYHAⅡ-Ⅲ级和正在接受透析治疗之外的所有高风险个体。另外，这些指南建议如果他汀治疗无效、有禁忌或因副作用不能耐受时前述的非他汀类降胆固醇治疗药物可以作为单药治疗或者联合治疗的选择，这表明他汀不耐受患者及他汀治疗无效患者需要合适的药物来替代他汀。

3 PCSK-9抑制剂

3.1 PCSK-9基因及PCSK-9蛋白 PCSK-9基因是研究人员在家族性高胆固醇血症（Familial Hypercholesterolemia，FH）的患者中发现的，该基因具有高度多态性[3]，它可以导致常染色体显性遗传的表型，PCSK-9的功能获得和功能缺失型突变可以分别导致高胆固醇血症和低胆固醇血症的发生，突变导致FH及该人群中血脂的代谢过程陆续被发现[4]。PCSK-9是除LDLR和APOB外第三个与FH有关的基因，其位于染色体lp3.32，DN段大小为3617bp，该基因编码的PCSK-9前蛋白共有692个氨基酸，大小为72kD，属于不具有活性的糖蛋白，该前蛋白在内质网中可进行自身催化，并裂解产生成熟的PCSK-9蛋白（62kD）[5]、前结构域和C-末端结构域等片段。自身催化裂解过程对于PCSK-9蛋白极为重要，是其从细胞内排出并发挥正常功能的必要条件[6]。正常情况下低密度脂蛋白受体（Low Density Lipoprotein Receptor，LDL-R）与LDL颗粒可以结合并通过内吞进入肝细胞，LDL颗粒在溶酶体内降解，而LDL-R则回到细胞表面并继续结合另外的LDL颗粒[7]，但LDL-R与PCSK-9结合后其也成了降解的目标。肝细胞表面LDL-R具有表皮生长因子样重复结构域A（Epidermal Growth Factor Like Repeat Domain A，EGF-A），成熟的PCSK-9蛋白可以与EGF-A结合成复合体，并通过细胞胞饮作用转运至内涵体/溶酶体，从而导致LDL-R降解[7，8]。因此，LDL-R可以避免返回细胞膜表面循环利用降解LDL，从而抑制了循环血LDL的分解代谢[4]。如果PCSK-9基因发生获得突变，其高活性可以使LDL-R过度的降解，进而减少了LDL在血中的移动，因此增加了LDL水平[9]，这一过程受体内PH、性别、日夜、空腹饱腹等因素影响。如果突变是PCSK-9基因外显子中的鸟苷酸变为胞苷酸P1位点处出现前PCSK-9蛋白原氨基酸，其可以抑制PCSK-9前蛋白在内质网中的自身催化裂解，因此PCSK-9成熟、分泌减少，从而导致肝细胞表面的LDL-R降解减少，LDL水平降低[10]。另外，PCSK-9蛋白与极低密度脂蛋白受体、载脂蛋白受体结合也可参与影响极低密度脂蛋白和载脂蛋白地降解[11]。LDL-R与PCSK-9的作用很弱，几乎只发生在肾上腺和大脑区域，因此不会通过上述途径剥夺胆固醇；目前动物实验和体内试验研究表明PCSK-9超表达以及敲低表达都会对胆固醇的含量产生影响[12，13]。

3.2 PCSK-9抑制剂作用机制和现状 PCSK-9蛋白属于肝脏内前蛋白转换酶家族，内源性的PCSK-9原则上是在小肠和肝内合成的，其作为神经细胞凋亡调节转化酶可以通过细胞内自催化转化分裂，并进入血循环中与LDL-R结合，形成受体复合物进入细胞；该复合物可以在内涵体或溶酶体内被降解，因此可以直接影响血浆LDL浓度。相反，如果PCSK-9蛋白酶缺失，则受体在与血胆固醇结合后会被运回质膜，从而增加循环血LDL-R的转运，加速LDL降解，PCSK-9表达下降会使LDL-R活性增高从而导致LDL降低。因此，PCSK-9抑制剂可以通过LDL-R分解脂蛋白来降低病人体内的LDL水平[4]，干扰PCSK-9的活性即这类新药的关键作用机制。目前市面上的PCSK-9抑制剂有小干扰RNA、反义寡核苷酸和单克隆抗体三类[14]，前两类也合称RNA干扰技术，均是通过与PCSK-9的信使RNA结合使其沉默或者干扰其活动从而导致LDL浓度降低；目前研究比较多的 PCSK-9抑制剂是主要目标为PCSK-9基因的单克隆抗体，此类药在不抑制肝细胞摄取循环中LDL颗粒的基础上，主要和PCSK-9蛋白内部结构中可以与LDL-R作用的相邻的重要区域结合，阻止与LDL-R结合，从而降低血液中PCSK-9的活性，以此来达到降脂和抗动脉粥样硬化的作用。FDA批准的这两种结构的药物均是皮下注射剂型，而单克隆抗体可能引起点反应、过敏反应或关于注射执行部位的区域毒性[15]，但目前正在进行的临床试验表明它们均有相对良好的耐受。这类药物启动时的目标指向FH，不过大量临床试验表明PCSK-9抑制剂可以作为他汀不耐受或对他汀有不良反应的患者的替代选择。PCSK-9抑制剂是近年FDA批准的降低血胆固醇治疗药物中极引人注目的一类，因其潜在的良好药效极有可能超过或改变目前胆固醇的治疗模式。2015年7月24日FDA批准了世界上第一个PCSK-9抑制剂，即赛诺菲公司的Alirocumab（Praluent）。Alirocumab被FDA批准表明除了饮食和最大可耐受剂量的他汀外，杂合型FH或临床ASCVD成年患者有了降胆固醇治疗的辅助治疗手段。2015年8月27日FDA批准了第二个PCSK-9抑制剂Evolocumab（Repatha）。Rephtha被FDA批准用于成人杂合子FH、纯合子FH或临床ASCVD疾病除饮食及最大可耐受剂量他汀治疗的联合治疗。

3.3临床试验 PCSK-9抑制剂正在进行很多Ⅱ期和Ⅲ期试验，目前的试验主要针对Evolocumab和Alirocumab，临床试验涉及Alirocumab的包括ODYSSEY COMBO Ⅱ、ODYSSEY FH和单药治疗Ⅲ期试验；涉及Evolocumab的包括GAUSS-2试验、OSLER试验和RUTHERFORD试验，研究已经对其在短和长期效果和安全性方面做出了评价。

3.3.1 Alirocumab

3.3.1.1 ODYSSEY COMBOⅡ COMBOⅡ是欧洲、美洲、韩国等126个中心参与的为期104 w的双盲、双哑、活性控制、平行组试验，该试验主要是比较有心血管高风险的高胆固醇血症患者在最大可耐受剂量他汀治疗仍控制不佳时Alirocumab和依折麦布作为辅助治疗的效果[16]。患者被随机分成2：1，两组同时接受最大可耐受他汀治疗的情况下每2 w皮下注射Alirocumab75 mg同时口服安慰剂或口服依折麦布同时皮下注射安慰剂。试验的初级目标是计算从基线到第24 w低密度脂蛋白胆固醇（Low Density Lipoprotein-cholesterol，LDL-C）变化的百分比，Alirocumab组为-50.6±1.4%，依折麦布组为-20.7±1.9%，其差距达到-29.8（P

试验结论是Alirocumab被证明比目前标准治疗药物依折麦布具有更有效的降低LDL-C效果，且Alirocumab在患者中耐受良好，因此提供了与依折麦布类似的干净描述[16]。

3.3.1.2 Alirocumab单药治疗 这个Ⅲ期、随机、双盲、双哑研究评估了对于有中等心血管风险的高胆固醇血症患者且此前没有接受他汀或其他降脂治疗，在接受Alirocumab与依折麦布治疗后的有效性和安全性的对比[17]。患者每天口服依折麦布10 mg或每2 w皮下注射Alirocumab75 mg且假设第8wLDL-C≥70 mg/dL，在第12 w时将滴定剂量增加到每2 w皮下注射Alirocumab150 mg。试验初级终点是Alirocumab与依折麦布组从基线水平到第24 w平均LDL改变的百分比，Alirocumab在24 w时可以比依折麦布降低更多的载脂蛋白B、总胆固醇、非高密度脂蛋白胆固醇。Alirocumab组有69%的患者经历了治疗紧急不良事件而依折麦布组的比例为78%， 每组各有1例患者出现严重治疗紧急不良事件但他们最后都康复而且完成了试验。结果显示在24 w时间内，Alirocumab比依折麦布有优势。适当心血管风险患者中，每2 w皮下注射Alirocumab75 mg对于超过50%患者在降低LDL水平方面都是有效的。Alirocumab表现了与依折麦布相当的可耐受性和安全性，因此可以替代依折麦布成为他汀不能耐受患者的备选药物[17]。

3.3.1.3 ODYSSEY FH STUDIES ODYSSEY研究是一个由三个试验（FH1、FH2、HIGH FH）组成的汇编，该研究是随机、双盲、安慰剂控制的，目的是评估Alirocumab治疗FH的效果，试验对象选取在最大可耐受剂量他汀稳定治疗≥4 w仍不能控制血脂水平伴或者不伴其他降脂治疗的患者[18]， 患者被随机分成2：1皮下注射Alirocumab或安慰剂。初级效果终点为从基线到第24 w计算得出的LDL百分比改变，这些研究目前仍在进行，将会评估Alirocumab在治疗FH方面的有效性和长期有效性[18]。

3.3.2 Evolocumab

3.3.2.1 GAUSS-2试验 该试验为随机并通过安慰剂控制的Ⅲ期临床试验，在不能耐受他汀治疗的高胆固醇血症患者身上比较了皮下注射Evolocumab和口服依折麦布的效果。GAUSS-2表明elovocumab在10～12 w和12 w时有LDL水平突出的降低，即使用Evolocumab治疗的患者较依折麦布更容易达到LDL-C目标水平。肌痛作为治疗过程的主要副作用在约8%的患者中发生，但同时肌痛普遍发生在服用低剂量他汀的患者身上（他汀和非他汀比例为17%与6%）。最后数据分析表明Evolocumab在他汀不耐受患者中可以明显降低LDL的水平，且在高风险患者中经Evolocumab治疗的患者超过75%可以达到低于100 mg/dL的水平，依折麦布组则低于10%。

Evolocumab试验证明大约96%的患者可以耐受该药。另外，Evolocumab治疗收益可以作为LDL水平明显上升而他汀不耐受的患者潜在的替代治疗手段，同时也许会在胆固醇管理方面替代依折麦布等药物[19]。

3.3.2.2 OSLER 该试验比较了Evolocumab与标准治疗（Standard Of Care，SOC）在降LDL水平方面的长期效果。参与者被随机以2：1样式分成两个治疗组，并接受每四周注射一次Evolocumab420 mg和SOC（736例）或单独接受SOC（368例），接受Evolocumab治疗较基线水平相比LDL-C有持久稳固的降低。试验结果表明肌氨酸激酶和转移酶升高并不明显，患者多出现头痛、头晕、失眠、背痛等症状，并且有一例患者在Evolocumab及SOC组试验期间死亡，但是这位患者有明确的冠心病病史；另外，在持续5个月的OSLER试验中发现一例心室动脉瘤患者[20]。总之，该试验表明持续52周的试验可以观察到LDL水平明显降低，Evolocumab和SOC配合使用治疗高胆固醇血症比单独使用SOC更有效。

3.3.2.3 RUTHERFORD 试验属于多中心的Ⅱ期临床试验，其属于双盲、安慰剂控制，涉及全世界20多个血脂诊所，试验主要比较患者接受每4 w一次皮下注射Evolocumab350mg或420 mg或者安慰剂总共观察12 w时间。研究结果表明两种Evolocumab剂量都比安慰剂在降低LDL-C方面有效，每4 w一次Evolocumab 350 mg和420 mg降低LDL-C的百分比分别为43%和55%，而安慰剂只降低LDL-C水平3%（P

总之，Evolocumab治疗组较安慰剂可以更有效的降低LDL-C水平[21]。这个研究表明在伴他汀治疗，伴或不伴依折麦布条件下，Evolocumab均可成为降低杂合子FH患者LDL-C水平的有效辅助手段。

4 结论

高胆固醇血症影响广泛，目前多使用他汀进行治疗，但是仍有很高比例的患者因为他汀不耐受等没有接受合适的胆固醇管理。新批准的PCSK-9抑制剂已经被许多试验证明其有效性和安全性，这类药的临床研究目前多在临床Ⅲ期，其中Alirocumab和Evolocumab最近已经被FDA批准，这也意味着其他PCSK-9抑制剂在胆固醇治疗方面具有很大的潜力。PCSK-9抑制剂将为目前不适合他汀治疗的高胆固醇血症患者提供有效的治疗手段。另外，有研究表明小鼠肝细胞内PCSK-9诱发的LDL-R退化与MMP-2相关[22]，还有待进一步临床前试验深入研究。

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第7篇：免疫学防治范文

【关键词】 凝血四项；检测；妊娠；分娩；预防；出血

凝血四项指标包括血浆凝血酶原时间（PT）、凝血酶时间（TT）、活化部分血活酶时间（APTT）、血浆纤维蛋白原（Fib），是目前临床上特别是基层医院判断出血性疾病应用最广泛的一组检验指标。本文通过对125例临产孕妇的凝血四项指标检测以及与正常育龄期非孕妇女比较分析，旨在探讨凝血四项指标检测对预防临产孕妇分娩及产后出血的价值。现报告如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 125例正常待产孕妇均系2011年1月～2013年1月我院收治，年龄22岁～41岁，平均（25.0±3.5）岁，孕龄38～41周，平均（39.0±1.5）周。112例对照试验者均为在我院门诊同期进行体检的正常育龄期非孕妇女，年龄21岁～43岁，平均（25.8±3.4）岁。排除心、脑、肝、肾等疾病，两组年龄、病史等一般资料差异无统计学意义（P>0.05）。

1.2 仪器和试剂 采用山东省济南美医林电子血凝仪，型号MEN-N，所用试剂、定标血浆和质控品均由美国Instrumentation Laboratory Company提供，凝血四项各测试项目每日质控高、中、低值均符合要求，仪器测试结果重复性良好。

1.3 方 法 采集临产孕妇和正常育龄期非孕妇女肘静脉血1.8ml入含109mmol/L枸橼酸钠0.2ml的抗凝管中，轻轻颠倒数次混匀， 3000r/min离心15min，分离血浆， 上机检测凝血四项（说明：所入组的受试者血浆均排除高脂、高胆红素、溶血标本）。

1.4 统计学处理 采用SPSS17.0分析软件进行统计学分析，检验结果用均数（x±s）标准差表示，数据用t检验进行处理。

2 结 果

125例临产孕妇（孕妇组）和112例正常育龄期非孕妇女（对照组），凝血四项检测结果见表1。

表1 两组凝血4项指标检验结果

注：两组PT、APTT指标检测结果差异无统计学意义（P>0.05）；孕妇组的TT明显缩短，与对照组比较有显著差异（P

3 讨 论

妊娠和分娩是一个特殊的、复杂的生理时期，妊娠期间凝血因子Ⅱ、Ⅴ、Ⅶ、Ⅷ、Ⅸ、Ⅹ均增加，使孕妇血液处于高凝状态。据国内有关研究[1～3]显示：孕前纤维蛋白含量约为3g/L，孕晚期增加40%～50%，妊娠晚期凝血酶原时间、部分孕妇凝血活酶时间以及凝血时间将会发生一定的改变，这些改变对产后迅速止血至关重要。本文检测结果表明，待产孕妇组的TT明显缩短， 与对照组比较差异有统计学意义（P

APTT反映内源性凝血因子Ⅷ Ⅸ、Ⅺ、Ⅻ等的水平，APTT延长多见于因子Ⅱ、Ⅴ、Ⅶ、Ⅹ Ⅺ、Ⅻ和Fib缺乏，缩短多见于DIC、血栓前状态及血栓性疾病。PT可反映外源性凝血因子Ⅱ、Ⅴ、Ⅶ Ⅹ和Fib的水平，缩短多见于弥漫性血管内凝血早期和血栓性疾病。TT是Fib转变成纤维蛋白所需要的时间，可反映血浆中有没有足够量的Fib，还有纤维蛋白的结构是不是符合正常凝血指标的要求，而纤维蛋白原（Fib）是一种由肝脏合成的一种Ⅱ类血浆蛋白，为人体急性时相反应蛋白之一，主要参与人体的凝血、PLT聚集及纤溶过程，从多个侧面调节血液循环，发挥止血功能[4]，且有研究也显示FIB含量与凝血酶活性有关[5]，因此其含量是提示机体高凝状态的一个重要指标。

孕产妇适度的高凝状态可以保证分娩后胎盘剥离的创面能迅速愈合，防止大出血的发生。但高凝者易发展为妊高症，甚至DIC，危及母婴生命，此外孕妇在分娩过程中，有时会有一些意外发生如羊水栓塞、胎盘早剥等造成组织损伤释放组织因子，继发性激活纤溶系统，引起产科DIC。总之，在这个过程中，机体常处于高凝状态，对临产孕妇进行凝血四项（PT、APTT、TT及Fib）的动态监测，及时掌握凝血功能的动态变化，对预防和治疗产妇分娩及异常出血，减少产科意外发生，有重要临产价值。

参考文献

[1] 包广杰.凝血四项检测在预防妊娠晚期孕妇产后出血的临床价值[J].医学信息，2011，24（8）：5392-5393.

[2] 唐淑稳.妊娠期血液高凝并发症的研究进展[J].医学综述，2007，13（1）：60-61.

[3] 张春荣.临产妇凝血四项指标的变化及临床意义[J].微循环学杂志，2004，14（4）：77.

第8篇：免疫学防治范文

关键词：咳嗽变异性哮喘；嗜酸性粒细胞；免疫球蛋白e；风咳方

doi：10.3969/j.issn.1005-5304.2013.06.003

中图分类号：r256.11 文献标识码：a 文章编号：1005-5304（2013）06-0005-03

咳嗽变异性哮喘（cough variant asthma，cva）又称隐匿型哮喘，是指以慢性咳嗽为主要或唯一临床表现的一种特殊类型哮喘，无明显喘息、气促等症状或体征，但有与哮喘发病机理相

基金项目：首都医学科技发展基金（sf-2009-i-07）

通讯作者：王雪京，e-mail：xuejing_wang123@sina.com

同的气道高反应（bronchial hyperresponsiveness，bhr）。cva是成人慢性咳嗽最为常见的病因之一，临床表现为刺激性干咳，症状持续时间长，达8周以上，且咳嗽比较剧烈，夜间咳嗽为其重要特征。感冒、冷空气、灰尘、油烟等容易诱发或加重咳嗽[1]。笔者以疏风解痉的风咳方治疗风邪犯肺型cva 89例，观察其对患者血嗜酸性粒细胞、免疫球蛋白e（ige）的影响。现报道如下。

1 临床资料

1.1 诊断标准

西医诊断标准参考中华医学会呼吸病学分会哮喘学组2009年修订的《咳嗽的诊断与治疗指南》[1]中cva的诊断标准：①慢性咳嗽，常见有明显的夜间刺激性咳嗽；②支气管激发试验阳性，或呼气峰流速日间变异率>20%，或支气管舒张试验阳性；③支气管舒张剂治疗有效。

中医辨证标准参照《中药新药临床研究指导原则（试行）》[2]61辨证为风邪犯肺型cva。主症：咳嗽，主要包括咳嗽次数、咳嗽程度、咳嗽性质；次症：咽痒，气急，咯痰；舌象：舌苔薄白；脉象：脉浮，或紧，或弦。具备主症及次症中2项，同时参考舌象、脉象可诊断。

1.2 纳入标准

①符合cva西医诊断标准及中医辨证为风邪犯肺证；②年龄16～70岁；③受试者知情并签署知情同意书；④对药物研究意义有正确认识，对研究人员的观察和评价有良好依从性。

1.3 排除标准

①其他器质性肺系疾病患者（上下呼吸道感染及慢性阻塞性肺疾病、肺癌、支气管扩张、肺结核等）；②妊娠或哺乳期妇女，或准备妊娠的妇女；③对本研究处方中药物有过敏史者；④合并有心血管、肝、肾和造血系统等严重原发性疾病；⑤精神病患者；⑥正在参加其他新药临床试验者。

1.4 一般资料

89例研究病例来源于2011年7月-2012年8月本院门诊及住院患者。采用sas6.12统计软件包的proc plan过程语句，给定种子数，产生89例受试者所接受处理的随机分配表，按随机分配表将患者分为治疗组59例和对照组30例。治疗组男21例，女38例；年龄21～70岁，平均（45.2±13.2）岁；平均病程（5.37±2.17）年。对照组男8例，女22例；年龄26～68岁，平均（48.4±11.7）岁；平均病程（5.11±2.53）年。2组患者一般资料比较，差异无统计学意义（p>0.05），具有可比性。

2 方法

2.1 治疗方法

治疗组予风咳方（炙麻黄8 g，前胡12 g，蝉蜕8 g，地龙lo g，牛蒡子1o g，五味子1o g，炙枇杷叶1o g，紫苏子、紫苏叶各12 g）口服，每日1剂，每日2次，每次100 ml，疗程4周。

对照组予舒利迭（沙美特罗/替卡松50 ?g/250 ?g，英国葛兰素史克中国公司生产，批号r580377）每日吸入2次，每次1吸，吸后漱口，疗程4周。

患者用药前需有

2 d药物洗脱期，即开始试验用药前2 d停止服用相关用药；试验期间禁止使用治疗cva的其他药物与疗法。

2.2 观察指标与方法

2.2.1 疗效性指标 中医证候积分根据《中医病证诊断疗效标准》[3]，按照等级变量观察方法，制定半定量计分标准。（1）咳嗽。①咳嗽次数：无咳嗽为0分；咳嗽间歇、短暂发作为3分；经常咳嗽，呈阵发性为6分；频繁阵发性咳嗽为9分。②咳嗽程度：无咳嗽为0分；偶尔咳嗽，多在夜晚或清晨发作，不影响睡眠和工作为3分；咳嗽常作，多在夜晚或清晨发作，轻微影响睡眠和工作为6分；持续性、痉挛性阵咳，昼夜均有发作，影响睡眠和工作为9分。③咳嗽性质：无咳嗽为0分；干咳为3分；呛咳为6分；痉挛性咳为9分。（2）咽痒：无咽痒为0分；轻微咽痒，不引起咳嗽为1分；咽痒较重，忍不住咳嗽为2分；咽痒严重，痒即咳嗽为3分。（3）气急：无气急为0分；咳嗽时偶有气急的感觉为1分；咳嗽时经常有气急的感觉为2分；咳嗽时气急胸憋，影响休息和工作为3分。（4）咯痰：无痰为0分；痰少，痰易咯出为1分；有少量痰，咳后尚易咯出为2分；痰黏，咳后仍不能咯出为3分。治疗前后进行血中嗜酸性粒细胞、血清ige计数，检测肺功能及支气管激发试验。性指标 ①一般体检项目，包括体温、呼吸、心率、血压等；②血常规、尿常规、大便常规（含潜血）、肝功能（谷氨酸氨基转移酶）、肾功能（肌酐、尿素氮）、心电图；③不良事件。

2.3 疗效标准

2.3.1 咳嗽总疗效标准 临床治愈：咳嗽症状完全缓解，主症分值为零；显效：主症分值同时下降2个等级；有效：主症分值同时下降1个等级，或1项主症下降2个等级，1项下降1个等级；无效：咳嗽减轻不明显或咳嗽加重。

2.3.2 中医证候疗效标准 参考《中药新药临床研究指导原则（试行）》[2]380制定。临床治愈：临床症状、体征消失或基本消失，证候积分减少≥95%；显效：临床症状、体征明显改善，证候积分减少≥70%；有效：临床症状、体征均有好转，证候积分减少≥30%；无效：临床症状、体征均无明显改善，甚或加重，证候积分减少<30%。计算公式（尼莫地平法）：（疗前积分-疗后积分）/疗前积分×100%。

2.4 统计学方法

采用spss18.0统计软件进行统计分析。计量资料采用t检验、配对t检验，计数资料采用卡方检验，等级资料采用ridit分析。p<0.05表示差异有统计学意义。

3 结果

3.1 2组咳嗽总疗效比较

治疗组愈显率、总有效率分别为49.2%和91.5%，对照组愈显率、总有效率分别为40.0%和70.7%。2组愈显率和总有效率比较，差异均无统计学意义（p>0.05）。说明治疗组与对照组疗效相当。见表1。

3.2 2组中医证候总疗效比较

治疗组愈显率、总有效率分别为44.1%和89.8%，对照组愈显率、总有效率分别为36.7%和76.7%。2组愈显率、总有效率比较差异均无统计学意义（p>0.05）。说明治疗组与对照组疗效相当。见表2。

3.3 2组中医证候总积分比较

2组患者治疗前中医证候总积分比较差异无统计学意义（p>0.05），具有可比性。治疗后2组中医证候总积分均较前明显下降，组间分比较差异无统计学意义（p>0.05）。见表3。

3.4 2组外周血嗜酸性粒细胞计数比较

2组治疗前嗜酸性粒细胞计数比较差异无统计学意义（p>0.05）。治疗后治疗组嗜酸性粒细胞计数降低（p<0.05），对照组较治疗前无明显变化（p>0.05）。治疗后组间比较，差异有统计学意义（p<0.05）。见表4。

3.5 2组血清ige计数比较

2组治疗前血清ige计数比较差异无统计学意义（p>0.05）。治疗后治疗组血清ige计数降低（p<0.05），对照组较治疗前无明显变化（p>0.05）。治疗后组间比较，差异有统计学意义（p<0.05）。见表5。

3.6 支气管激发试验结果

2组治疗前支气管激发试验均为阳性，治疗后治疗组支气管激发试验转阴率为30.51%，对照组转阴率23.33%，经统计学处理，2组转阴率差异无统计学意义（p>0.05）。见表6。

3.7 安全性分析

血常规、尿常规、便常规、肝功能、肾功能及心电图等安全性指标，治疗后2组均有部分正常转异常，经临床研究者逐例分析，均与药物无关。试验组无不良事件发生。对照组出现1例不良事件：患者在应用治疗药物10 d后出现口腔溃疡，持续约1周后症状消失，

能确定是否与治疗药物有关。

4 讨论

临床研究认为，过敏是cva疾病发生发展过程中一个很重要的因素，ige介导的ⅰ型变态反应在cva病理方面起重要作用，与典型哮喘相似，cva的呼吸道改变表现为炎性细胞浸润，小血管充血、渗出，支气管轴膜下肥大细胞活化，引起嗜酸性粒细胞聚集和支气管轴膜上皮损伤，上皮损伤后上皮细胞脱落，部分基膜增厚[4]。

cva西医治疗原则与哮喘相同，大多数患者吸入小剂量糖皮质激素加β受体激动剂即可，很少需要口服糖皮质激素治疗。治疗时间不少于6～8周[5]。虽然大部分患者可在短时间内见效，但停止用药后，咳嗽又会出现。

晁恩祥教授在临床中观察到，cva患者临床表现为咳嗽反复阵作，喉痒呛咳，发作性喷嚏，气道痒感，鼻塞、鼻痒，时发时止，符合中医所述风邪“风善行数变”、“风为百病之长”、“其性轻扬”、“风盛则挛急”及“风邪为患可致瘙痒”等特性，有“风咳”之状，认为可采取从风论治的方法，提出了“风咳”理论[6]。有人通过对265例cva患者系统的临床证候学观察与分析，初步总结出了cva核心症状表现为咳嗽阵作、咽痒则咳、剧则气促、无痰或痰少难咯、苔白、脉浮，表明cva患者主要因风邪犯肺，肺失宣发肃降，气道挛急所致，从临床的角度验证了“风咳”理论[7]。

晁教授在从风论治cva的基础上，提出了“疏风宣肺、解痉止咳”的治疗大法[8]，基于李东垣“凡药之所用，皆以气味为主”，“气薄者为阳中之阴，气厚者为阳中之阳，味薄者为阴中之阳，味厚者为阴中之阴”的理论，建立风咳方，取麻黄、紫苏子、前胡、蝉蜕、紫苏叶、牛蒡子、枇杷叶疏散风邪，发病之因得除，疾病方可逐渐缓解；取地龙入络祛风之效，以解深伏之风，使病因尽解；以五味子解拘急，除挛缩，缓缓发力，致气机调畅，急势得解。

本研究采用风咳方治疗cva，疗效与沙美特罗/替卡松相当，且能明显降低患者血嗜酸性粒细胞、ige，提示风咳方治疗cva的机理可能与降低ige介导的过敏反应和减少酸性粒细胞的聚集有关。

参考文献：

[1] 中华医学会呼吸病学分会哮喘学组.咳嗽的诊断与治疗指南[j].全科医学临床与教育，2009，9（7）：453-456.

[2] .中药新药临床研究指导原则（试行）[s].北京：中国医药科技出版社，2002.

[3] 国家中医药管理局.中医病证诊断疗效标准[s].南京：南京大学出版社，1994：1.

[4] 赵一菊，肖正伦.咳嗽变异性哮喘的研究进展[j].医学综述，2012， 18（7）：2067-2069.

[5] 全国儿科哮喘病协作组.儿童哮喘诊断标准和治疗常规[j].中华儿科杂志，1993，31（4）：222.

[6] 晁恩祥.咳嗽变异型哮喘证治[j].世界中医药，2006，1（1）：39.

第9篇：免疫学防治范文

在二/外语学习者运用目标语进行写作时，被动语态的使用是一个重要的方面。本论文应用语料库语言学方法对本国英语学习者语料库（2009EFL）和美国报纸语料库（Los-Angeles， NYT， washpost）之间的不同差异进行研究。本论文所使用的工具是WordSmith4和Antconc。

通过对数据的收集、分析，结果表明本国英语学习者语料库（2009EFL）和美国报纸语料库（Los-Angeles， NYT， washpost） 在被动语态的使用上具有显著差异。

二、文献回顾

被动语态是英语中一个很重要的语法项目，对中国学习者而言是一个难点。到目前为止，针对中国英语学习者被动语态习得的研究并不多。国内关于被动语态的研究大多只在理论层面上，或只在研究作格动词时有所涉及。具体来说，国内研究多是对英、汉被动语态进行对比分析，以找出两者的相似和不同，而使用语料库的研究方法来对中国学习者的被动语态的习得情况的研究仍很欠缺，陈万霞（2002）曾使用中国学习者语料库对中国学习者的被动语态的习得做过研究，但是没有与本土语料库进行对比研究。

国外研究以汉语为母语的英语学者被动语态习得的极少，如Yip（1995），但他研究的只是假被动式（pseudo-passives），且研究对象只限于台湾学生。

三、理论框架

本文的理论框架是二语习得理论，该理论强调外在环境因素对语言习得效果的重要性，同时否认先天因素的影响。但作者认为先天因素也是应该考虑的影响语言习得效果的因素之一，只不过在大多数语言习得者中，先天差异微乎其微，所以环境论主要是在不考虑先天差异的前提下，强调注意学习者的外部环境的变化对语言习得的影响，分析各种外部环境变量对习得成果的起作用的大小。起初，在“行为主义”的刺激―反应理论的基础之上，环境论的观点是，一种语言就是一套独立的行为习惯，学习掌握某种语言的过程就是培养一种特定的行为习惯的过程。习得第二语言的过程就是在培养新的语言习惯（即第二语言），在形成新习惯的同时要摆脱和避免旧的语言习惯（即母语）的干扰。最近，“文化迁移模式”是环境论队伍里提出的一个新观点。该理论的观点是，学习者在语言学习过程中会受心理上和社会文化同本族语者之间的差异距离的影响。社会距离的概念是学习者作为一种社会群体中的一员与操另一种语言的社会群体的接触，心理距离是指学习者作为个体所受到新的一种语言文化对自身心理或情感的影响。这些被看作是影响第二语言习得的社会和心理因素形成了“文化迁移”的内容，即学习者在学习一种新的语言的同时也接受了一种新的语言文化的过程。文化迁移还有许多内容，第二语言习得只是其中的一个方面，学习者第二语言习得的熟练程度取决于他们向目的语迁移的幅度。

四、研究方法

本论文用了两个语料库，分别是本国英语学习者语料库（2009EFL）和美国报纸语料库（Los-Angeles， NYT， washpost）。本论文所使用的研究工具是WordSmith4和Antconc。

关于被动语态的使用，首先使用Antconc的正则表达式计算美国报纸的语料库中被动语态使用的频数，结果为689次，再用同样的方法计算英语学习者语料库中被动语态的使用频数，结果为434次。然后用Wordsmith的Wordlist工具，计算美国报纸语料库的总的形符数，结果为202507个。再用同样的方法计算英语学习者语料库总的形符数，结果为176328个。最后再使用卡方检验，计算出P值，看结果是否具有显著性差异。

五、数据分析

由上表可知，美国报纸语料库和英语学习者语料库在被动语态的使用方面，计算得出的卡方值约为27.76，由此得出的P值

六、结语

本论文从被动语态的使用情况着手，对美国报纸语料库和英语学习者语料库之间的不同差异进行研究。运用Wordsmith和Antconc工具以及卡方检验，最后结果表明这一个维度的差异具有显著性，美国报纸语料库和英语学习者语料库的语料构成也存在明显不同。同时表明，中国学习者在进行写作训练时被动语态使用不足。希望本研究也能给英语的教与学提供一定的启迪和建议，从而让学习者更好地学习英语，也让英语教师更好地从事教学工作。