前言:一篇好文章的诞生,需要你不断地搜集资料、整理思路,本站小编为你收集了丰富的立春古诗主题范文,仅供参考,欢迎阅读并收藏。
一年前,“春莉”的主人忽然得了重病,没有能力来细心的照料可爱的”春莉”。从那天开始,“春莉”就突然间由“白雪公主”变成了“灰姑娘”一样,没有人去理睬它,关心它。
每天,它都在我们家的院子里孤独的走来走区,身上脏乎乎的,毛色也比以前暗淡了许多,直到傍晚它才趴在主人的家门口,向主人要食物。
它在外面流浪时,常常在一户人家的窗前望来望去,还时不时的汪汪的叫,原来,这户人家的女主人也养了一条狗,叫“珍珍”,“春莉”和它是好朋友,他们在一起玩耍时,从来不打架。“珍珍”的主人非常疼爱“珍珍”,经常的把“珍珍”抱在怀里,这一切,都让“春莉”看在眼里,它的眼中充满了羡慕和祈求,每当我看到这一幕时,让我想起了安徒生童话里的卖火柴的小女孩儿。
前两天北京下起了大雪,我给它做一个雪房子,里面放着它爱吃的食物。我在等它,可是,一连几天也没看到它的影子,雪房子也都化了。我心想:它是不是自己走丢了,还是被人偷走了。我找了几天,还是没有见到“春莉”,邻居对我说:“别找了,不就是一条狗吗?”,我生气的对邻居说:“这也是一条生命啊!”
饶雪漫主笔:漫GIRL第一期
作者:饶雪漫
推荐理由:这本专为女生打造的杂志,汇集了最贴近青春少女真实生活的精彩小说,用最温暖的文字记录最明媚的青春,体现女孩们要求独立、超越平凡的生活态度。相信女生们会从这里获得许多关于生活的感悟,也会知道,其实,每个女孩都不平凡。
青春之惑:飘荡在暑假里的青春荷尔蒙
作者:傅昌尧
推荐理由:这是一个关于成长的故事,写了一个少年青春期的困惑和挣扎,对成人世界的向往。这部小说文笔幽默,叙事流畅,尤其是语言,既有时尚的元素,又能充分体现出作者对成长独特的理解和视角。也许,从这本书里,我们会获得一个不一样的成长计划。
畅享视听
影讯:《舞出我人生》:街舞要登大雅之堂
片名:Step up
主演:钱宁・塔图姆Channing Tatum
珍娜・迪温Jenna Dewan
剧情:底层青年泰勒叛逆,有才华,偶遇芭蕾舞演员诺拉。诺拉正在找一位优秀的合作拍档,参加高级舞蹈大赛。最后两人擦出火花,成为最佳拍档。
推荐理由:影片给了我们一个最重要的启示,人生,需要靠自己舞出来。机遇可遇不可求,但是,美好的梦想却是关键。
《精舞门》:诚意十足的嘻哈街舞秀
片名:精舞门
主演:陈小春、范冰冰、南贤俊
剧情:楚东身怀街舞绝技却不被世人理解,为给妹妹治病,他努力赚钱。一次偶然的机会,楚东的表演被知名DJ TINA看到,她介绍楚东参加世界街舞大赛。最后,楚东克服重重困难,战胜最强对手钟少雄,获得冠军。
推荐理由:同样也是一部以街舞为题材的影片,同样是青春励志片,和《舞出我人生》相比,可能嘻哈风格更强烈。看看不同风格的两部片子,你会更喜欢哪一部呢?
好碟:
专辑名称:一个人的屋顶
演出歌手:蓉儿
发行时间:2008年8月
推荐理由:谁的誓言遗忘了久远的从前?来自心底已经尘封的记忆,最深的感触,用极浅淡的诉说来诠释,歌手蓉儿深情演绎《一个人的屋顶》,唤起我们青春的回忆。
专辑名称:16未成年
演出歌手:BY2
那是一个春天
有一位老人在中国的南海边画了一个圈
神话般地崛起座座城
奇迹般聚起座座金山
春雷啊唤醒了长城内外
春晖啊暖透了大江两岸
啊 中国 啊 中国
你迈开了气壮山河的新步伐
你迈开了气壮山河的新步伐
走进万象更新的春天
1992年
又是一个春天
有一位老人在中国的南海边写下诗篇
天地间荡起滚滚春潮
征途上扬起浩浩风帆
春风啊吹绿了东方神州
春雨啊滋润了华夏故园
啊 中国 啊 中国
你展开了一幅百年的新画卷
你展开了一幅百年的新画卷
捧出万紫千红的春天
是二十四节气中的第一个节气,立春节气在古代的时候又称为岁首。立春一到,人们明显地感觉到白昼长了,太阳暖了,气温增高了,日照延长了,降雨也开始了。以下是和大家分享的资料,提供参考,对你有所帮助,欢迎你的阅读。
二十四节气之立春风俗及传说故事一
1、迎春
迎春是立春的重要活动,事先必须做好准备,进行预演,俗称演春。然后,才能正式迎春,目的是把春天和句(gōu)芒神接回来。
2、祭祀祖先
在许多地区,立春要祭祀祖先。如广东《新安县志》载:“民间以是日有事于祖祠。”立春时供奉祖先的食品也较特殊。河南《汝阳县志》载:“设春宴,啖春饼,荐卜、梨。”
3、咬春
立春时还有自己的食品,主要是春饼、萝卜、五辛盘(用葱、蒜、椒、姜、芥五种辛辣食物调和而成)等,在南方则流行吃春卷。
4、踏春
立春后,人们在春暖花开的日子里,喜欢外出游春,俗称出城探春、踏春,这也是春游的主要形式。
5、戴春鸡
戴春鸡是陕西铜川一带人民的古老风俗。每年立春日,母亲用布制作一个约3厘米长的公鸡,缝在小孩帽子的顶端,表示祝愿“春吉(鸡)”立春日,妇女用线穿豆挂于牛角,或用麻豆撤在牛的身上,认为这样做,可以使幼儿免患麻疹。前者称为“禳儿疹”,后者称为“散疹”。
6、佩燕子
佩燕子是长安、关中一带人民的古俗。每年立春日,人们喜欢在胸前佩戴用彩绸剪成的“燕子”,这种风俗起自唐代,现在仍然在农村中流行。因为燕子是报春的使者,也是幸福吉利的象征。所以许多富有人家,都在自己厅房正中或房檐下,修建燕子窝,只要你能在庭房檩条下或房檐的墙壁上,搭上一小页垫板,上写“春燕来朝”四字,燕子就可自己建筑起窝来。燕子是候鸟,春天飞到北方,秋天飞到南方。“不吃你家谷子,不吃你家糜子,只在你家抱一窝儿子。”所以向阳人家都喜欢在自己院落房舍里,招惹燕子繁殖生息。每年立春这天,人们都喜欢佩戴“燕子”,特别是小孩,父母早就给他(她)们准备好了,他们戴在胸前,手之舞之,足之蹈之,兴高采烈,雀跃有余。
7、吊春穗
吊春穗是一种传统的习俗,流传在陕西澄城一带。每年立春日,妇女用各色布绺编成布穗,或用彩色线缠成各种形态的“麦穗”。然后吊在小孩或青年人的身上,也可挂在牲口如驴、马、牛的身上,藉以祝福来年风调雨顺,五谷丰收。
单贴在墙壁上,用来镇压驱杀毒蝎。如写:“谷雨三月中,天师到门庭。手执七星剑,斩杀蝎子精。”白水县人民于谷雨节也有类似的活动,如在黄表上写:“谷雨日,谷雨晨,奉请谷雨大将军。茶三盏,酒三巡,蝎子立刻化为尘。”用以驱除毒蝎。陕西西乡一带人民,每年在谷雨日天刚亮时,用柳枝鞭打四壁,以禳除毒蝎。
立春的风俗活动
燂春
这种立春跨火堆的传统仪式,即是“燂春”。“燂春”是华夏民族十分古老的习俗,据史料记载,早在先秦时期就已经在民间盛行。因立春之日阳气将出地面,燃放爆竹,焚烧樟树枝可祛退阴气,宣达阳气,助阳气生发,有驱邪迎祥之意,而孩童跨火,则更蕴含着平安成长的美好祝愿。“燂春”仪式结束后,孩子们会 吃“春茶”,“春茶”是用红豆、红枣、桂圆、陈皮、桂花、红糖等6种配料烧煮而成的。按照民间的习俗,过了立春,孩子又长了一岁,而吃了“春茶”,在新的 一年里,不仅祈盼生活红红火火,而且也能护佑孩子们健康成长,平安吉祥。
躲春
在传统民俗学上,到了立春这一天就该躲春。因为立春这天气候开始交接,新的气场会对部分人群有不利的影响,更甚者会影响一年的运气,所以躲春的习俗 就出现了。在民间,不同的地方有着不同的风俗与忌讳,也就延伸出各式各样的躲春方法与习俗。传统留下来的习俗,每到立春这一天不能有口舌之争、必须要和和睦睦、心平气和地迎接这一天。更有一些地方习俗里面,躲春这一天不宜搬迁、看望病重患者及参加丧事等,以免招惹晦气,影响一整年的运气。
鞭春牛
鞭春牛,又称鞭土牛,起源较早,后来一直保存下来,但改在春天,盛行于唐、宋两代,尤其是宋仁宗颁布《土牛经》后使鞭土牛风俗传播更广,为民俗文化的重要内容。鞭春牛的意义,不限于送寒气,促春耕,也有一定的巫术意义。山东民间要把土牛打碎,人们争抢春牛土,谓之抢春,以抢得牛头为吉利。塑制春牛时,往往要在肚子里塞上五谷,当牛被打烂时,五谷就流了出来。人们欢笑着拾起谷粒放回自己的仓中,预示仓满粮足。如今很多的农村有这些习俗。
句芒神
句芒为春神,即草木神和生命神。句芒的形象是人面鸟身,执规矩,主春事。在周代就有设东堂迎春之事,说明祭句芒由来已久。清人让廉撰写的《京都风俗 志》中说:“立春之仪前一日……迎春牛芒神入府署中,搭芦棚二,东西各南向,东设芒神,西设春牛,形象彩色,皆按千支,准令男女纵观,至立春时……众役打焚,故谓之打春。”然后,人们将春牛的碎片抢回家,视为吉祥。
立春饮食
春饼
立春吃春饼历史悠久。由于立春时,春回大地,万物复苏,各种蔬菜发出嫩芽,人们尝鲜,古人就用面皮包着时令蔬菜,有荤有素,卷在一起吃,非常美味营养,取名春饼,寓意着五谷丰登,也是春天的象征,并将它互相赠送,取迎春之意。老北京吃春饼还讲究有头有尾,就是吃春饼前用羊角葱丝蘸甜面酱,抹到春饼里,夹上合子菜一卷,从一头吃到另一头,这就叫作“有头有尾”,寓意合家欢乐。
春卷
除了春饼之外,春卷也是立春日人们经常食用的一种节庆美食,流行于中国各地,江南等地尤盛。春卷做法是用烙熟的圆形薄面皮卷裹馅心,成长条形,然后下油锅炸至金黄色浮起而成,馅料可荤可素、可咸可甜,除了表示迎接新春的意思以外,还因为春卷里面通常包含了大量春天新鲜的蔬菜,因此营养价值非常高。
春盘
春盘又称“五辛盘”,是细切五种辛辣的生菜盘装而成。《本草纲目》中说:“五辛菜,乃元旦、立春以葱、蒜、韭、蓼蒿、芥辛嫩之菜杂和食之,取迎新之意。”五辛盘的“辛”与新旧的“新”是谐音,所以有吃“五辛”,迎新春之意。古人还认为,选用辛味食物,对于保证机体健康和季节变化,大有好处。春盘其实挺简单的,它就是以凉拌蔬菜为主的拼盘。江南人家通常把生菜、鲜果和饼饵等拼置盘内食用,而北方民间则多将葱、蒜、韭、芥等辛菜杂和起来吃。
炒和菜
有了春饼,自然少不了和菜。所谓和菜就是用时令蔬菜,如韭黄、豆芽、香干等切成的丝,或拌或炒,讲究的可加海参丝、肚丝、香菇丝、火腿丝,这样就更好吃,清新爽口,寓意又好,希望新年家家金银满堂、幸福平安!
萝卜
《明宫史·饮食好尚》记载:“立春之时,无贵贱皆嚼萝卜,名曰‘咬春’。”“咬春”就是立春时吃生萝卜,以脆嫩的青萝卜为上。立春吃萝卜还可以解春困,大家都知道,春季人们总爱犯困,因此吃萝卜解困是个很好的方式。立春后,气温逐渐升高,人之阳气步步升发,此时选定了具有辛甘发散之特质的食物,以让身体顺应天时。
二十四节气之立春风俗及传说故事二
每当春节期间,农村中到处能听到“咚咚旰”、“咚咚旰”的春锣春鼓声,并还伴有节拍的唱词,原来是有人在打春。
传说,在明朝年间,有个知府,在上任的头一年的春天,气候非常寒冷,而且时间也冷得很长,虽说立春已有个把月了,花草树木都未看见发芽。知府心想这不是一个好兆头,他急于想见到树草花木发的芽。于是,他立即下令,要百姓去寻找发了芽的树枝送到知府里。如谁送得早,就有奖赏。次日,便有一个姓吴的和一个姓周的两个人,找到了几枝发了芽的杨木,送到了知府的衙门。知府见了,心里自然大喜,认为是送来了吉祥。吴、周两人得到了知府的重赏。知府又要他们两人明年更早些来报春。恰巧,第二年因冬季比较暖和,正月初一立春,周、吴两人手持发了芽的杨柳,各入还拿了一面小锣半边特制的鼓,一齐来到知府衙门报春。他们一边敲锣,一边唱起自己编的一些好听的吉利奉承话。知府格外高兴,又给了周、吴二人双倍的奖赏。这样一来,周、吴受赏的消息传到了其他老百姓那里。来年,其他百姓也仿照着周、吴二人的样,成群结队地上衙门报春。知府见到这样多的百姓都来了,他再也不拿出自己的银钱赏给百姓。知府便对大众说:“报春是件大喜事,一年之计在于春,春回大地早,是万民之福。你们可以拜吴、周二人为师,到各地村庄的乡亲们家里去报春。本府从今后,在立春时节办个盛大的迎春大会,与民同乐。”自从那时候起,各地都形成了打春的风俗。
二十四节气之立春风俗及传说故事三
中国各地农村人总是把立春叫打春,而打春这天,乡人又有一个习俗,就是在立春时刻,不论大人、小孩都要啃吃几口萝卜,这习俗叫啃春。要说这啃春习俗的来历,还有个神奇的传说。
有一年的立春前,当人们准备热热闹闹迎接立春时,不料,瘟疫四起,使得所有人都传染上了一种说不出的疾病。这种病很怪,那模样真像喝醉了酒似的,个个都是头重脚轻,连抬抬手的力气也没有。
立春前一天,一个老道打扮的人来到了一个村庄。他见村庄里静得听不到鸡鸣狗叫,更不见有人走动,觉得奇怪万分。他来到了村边的一户人家敲门.道人连呼几声没人应,后来他看到一个中年人,连声问究竟,中年人抬了一下眼皮,合着眼用微弱的声音,断断续续地说:“全村人都得了一种像我这样的病。”
道人一连闯了几家,情形都是一样。道人也莫名其妙。于是,他来到村东头的一棵古树下,面南盘坐,挑起单掌,合眼静坐,口中念念有词。原来,他向南海的观世音菩萨祈求医治瘟疫的方法。约摸过了三个时辰,道人长嘘一口,猛然站起来,飞快地跑回观院,抡镐便刨,他刨出一袋贮藏的萝卜,又飞快地跑到了村庄。这时候,已是第二天大清早了,道人从村中一家找到一只芦花大公鸡,拔下几根鸡毛,扎在了地上。
道人合眼祈告着,脑海中又出现了静坐时与观音菩萨对话的场面:观音菩萨告诉他,等地气通时,让乡人百姓每人啃吃几口萝卜,瘟疫便可自动解开。过了约莫有一袋烟的功夫,扎在地上的鸡毛突然动了起来,道人惊喜万分,他喊着:“地气通了,地气通了。”奔向了村庄的每家每户,让人们啃吃萝卜。结果,还真灵验,人们吃了萝卜之后,全都好了。
人们纷纷给道人跪下,谢他的救命之恩。道人说:“大伙请起,别谢我,应该感谢观音菩萨。不过,大伙现在应该去救别人。我的观院里还有许多萝卜,大伙带着快去邻近村庄救人吧!”乡人听后,带着萝卜奔向了十里八村。
鸡蛋里的胆固醇含量大概是200至250毫克每枚。
胆固醇又称胆甾醇。一种环戊烷多氢菲的衍生物。早在18世纪人们已从胆石中发现了胆固醇,1816年化学家本歇尔将这种具脂类性质的物质命名为胆固醇。胆固醇广泛存在于动物体内,尤以脑及神经组织中最为丰富,在肾、脾、皮肤、肝和胆汁中含量也高。其溶解性与脂肪类似,不溶于水,易溶于乙醚、氯仿等溶剂。胆固醇是动物组织细胞所不可缺少的重要物质,它不仅参与形成细胞膜,而且是合成胆汁酸,维生素D以及甾体激素的原料。
(来源:文章屋网 )
县令自幼家贫,但却天资聪颖,善养鱼虫,其中尤以养蟋蟀为最,他也好斗蟋蟀,从小就被人成为“蟋蟀王”。
自从当上县令以后,他勤于政事,忙于公务,难得再斗上一场。
一日邻县一同样好斗蟋蟀的县令前来拜访,两人谈到蟋蟀甚是兴奋,县令便拿出他那战无不胜的叫“青子”的蟋蟀与对方的蟋蟀斗了一场,并叫县衙众人前来观战。没想到半个回合,青子便将对方打败。此时那些阿谀奉承的捕快、杂役们便大呼“老爷神勇,青子无敌”,县令日日公务缠身,好久没有这般开心,便赏了小的们一些银子让他们散去了。县尉看在眼里记在心里,四处寻找斗蟋蟀的高手前来与县令比赛。县令起初总以有要事在身为由拒绝,但县尉三番五次找人来,也不好总拒绝。县尉找来的这些人的蟋蟀自然不是“青子”的对手,每次比赛县令不光可赢得比赛,更能得到众人一番赞赏。日子久了,县令几日不斗一场便觉得有些不自在,审案办公也觉得很难熬。好在他有一位能干的县丞,县丞除了处理文书、仓库等事物外,还帮助县令处理其他一些公务。
县尉自从开始为县令找斗蟋蟀之人,自然也得到县令的不少恩惠,为此他精心的定期为县令安排比赛。终于在被赞誉的虚荣与天生爱好的驱使下,县令渐渐荒诞政务,并在县衙设立了个“聚闲堂”专门用来斗蟋蟀。日常政务都交与县丞来处理,县丞看在眼里,急在心里,几次劝说都无功而返,反而遭受阿谀奉承者们的打击和嘲讽。但为了挽救县令他想尽了各种办法阻止县令斗蟋蟀,对县令说劝谏阻,对与县令比赛者围追堵截,甚至有几次与县令挣得面红耳赤,大呼自己赤胆却被冷落委屈,咒骂这些奸佞小人,却被人围攻陷害。
最终县丞心灰意冷,告病还乡,临行前,他与新到任的县丞语重心长的长谈一夜。但新县丞让他尽可放心,并保证必能将县令从斗场拉回来。
上任头一天,新县丞特意托人从外地买来一只好斗、能斗的蟋蟀,个大,触粗,腰细,腿长。但他并不是要把这只蟋蟀送给县令作为见面礼,而是要让其与县令的“青子”进行比赛。
这只蟋蟀与“青子”的实力也确实不相上下,县丞隔三岔五的与县令斗上一场,但每次斗至焦灼之时,县丞总是以处理公务为由离开,弄得县令心里直痒痒,虽然很想分出胜负,但面对上级新派来的助手也不好强求。
一日两只蟋蟀激斗正酣,衙役跑来报告,说有二人因一头牛的事情闹上堂来,请县令前去断案,衙役话音未落,县丞便说:“今天这两只蟋蟀一定要争出个胜负”。见县令面露难色,衙役又说:“那小的下去叫二人候着”。未等县令开口,县丞又说:“拉下去各打三十大板问题自然解决”。此话一出来让县令与衙役四目相对,县令欲言又止,县丞却指手画脚的大呼:“打他,打他”,县令低头,只见“青子”被县丞的蟋蟀打的节节败退,衙役见县令未作指令,便领了县丞“打他”的命下去了。
一场恶战,两个蟋蟀两败俱伤,却仍未决出胜负,两个评理之人也在三十大板的“伺候”下各自回去了。
第二日,一大早县丞带着自己的蟋蟀请县令大人也带着他的“青子”到街上找个人多的地方再战一场,以决胜负。县令见跟随自己多年的“青子”被打的遍体鳞伤,再看看县丞那蟋蟀也臂折触伤,话也没多讲便一同前往。
二人在街上找着人多的地方,行至街角,见众人围着门对门的两户人家,吵吵嚷嚷,他们走上前,看见北边一家被烧的断壁残垣,南边一家门口有一大滩血,县令便打探出了何事。
原来,这两家的男人都是好赌之徒,前日住在南边的张三在赌场上输给了住在北边的李四,张三没钱便用自家的牛来顶赌帐。李四去牵牛的时候,张三的老婆死活不给,李四便找人打了张三,为此二人前去县衙评理,没想到二人在县衙被各打三十大板,事后没出了气的李四的弟弟到张三家大闹,拿起刀子杀死了张三家的牛,在门前留下一大滩血迹,张三老婆见自家仅有的一头牛被杀,气急败坏冲到李四家放火烧了李四的房。而此时被打的不能动弹的张三和李四都躺在郎中的家里。
县令听罢正欲上前,县丞问道:“大人,依您看这二人的这场赌博谁才是赢家?”正在这时一个小孩子从二人身边挤过,撞掉了县丞手上装蟋蟀的小笼子,小笼子的小门被撞开,蟋蟀托着断臂跑了出来,刚出笼子便被拥挤的人群踩死。
小孩感觉撞到了东西便回头看,看到是县令,在拥挤的人群中唱起了童谣:“草鞋包公是草包,不办案来不上朝,蟋蟀青子赛牛刀,聚贤堂里烧民膏”
县令看着手中的小笼子,低头不语,弯下腰打开了小门,“青子”蹦向一堆青草。
县令突然想到县衙堂上的那块“青天明镜”的漆木牌子也该重漆了……
冯光春论道: 在企业的经营管理过程中,中高层管理干部面对一个存在明显缺点的老板应该怎么办呢?有的人会选择随波逐流,投其所好,阿谀奉承;有的人会刚直不阿,敢言直谏,宁碎不折,此处不留爷自有留爷处;有的人会循循善诱,去引导,去启发。
/01/不知从什么时候开始,沉默,成为了一种习惯。
十几岁的年纪,独自一人,从一个不起眼的地方踏入了无尽繁华,却成为了繁华中的那一抹孤独。
身后,是吵闹的走廊,不小心撞到人之后匆忙的“对不起”,眼前,是无尽的深邃的夜空,无星无月,倒映在眼底,波澜不惊。
转身,白炽灯的光突兀的刺入了双眼,突如其来的刺痛阻碍了视力,你静静的倚在教室门口,看着里面祥和欢乐的人群,蓦地发现自己是那个多余的存在,没有人在意你在不在教室里,也没有人关心你在哪,你就这样成为了透明的存在,只能静静的走回座位,拿出作业,努力让自己融入空气。
下课的铃声响起,这是你过去数十年无比期待的声音,如今你却希望它不要响。只有这样,你才可以借着繁重的任务压下自己的情绪,压下漂泊异乡的辛酸与无人理解,压下残存的希望和满身的伤痕。
/02/
带着憧憬而来,满载伤痕而归。你曾抱着沉重的练习册靠在昏暗的走廊痛哭失声,曾为了一份成绩单难过到歇斯底里却无一滴眼泪,只能发泄完强撑着站起,踉踉跄跄的前进。不是没想过回头,奈何身后毫无退路,只能负伤奔跑。
夜深人静,白日里积攒的所有负面情绪尽数爆发,你蜷缩在墙角,冰冷的触感透过衣服侵入肌肤,逐渐麻木。
走廊的灯依旧亮着,室友均匀的呼吸声在身边环绕,而你的眼前只有白日里发生的一件件事,化为文字于你的日记本上。笔尖与纸张摩擦发出的“沙沙”声勾起了你所有的难过与委屈。
同学的无视,难题的较量,仿佛没有存在感一般的自己,让你痛恨,委屈。双手不自觉的撕扯着被子,指甲掐进掌心仿佛都没有感觉,眼眶干涩的发疼却没有泪水,作为一个高中生的难过在这一刻尽数流淌进无边的黑暗,被无尽的夜色吞没。
不知从什么时候开始,你的言语逐渐减少,情绪不再起伏不定,脸上的笑意愈发稀少,曾经亮光闪动的双眸里不再有星星,披着青年的皮囊,一颗心却已经步入老年。
不会再因为一个笑话而开怀大笑,也不会因为一个男孩子而怦然心动。青春的那份青涩、悸动不知什么时候悄悄离去,留下的,只有无人诉说的孤独。支撑着你前进的,应该只有家人的期待,和你心底那残存的希望。
偶尔情绪没有起伏,你听着衡中的学霸励志的演讲,开始思考自己的现在,内心不经意间翻起了一丝波澜,眼眶悄悄湿润,终有一天,你会站上金色的舞台,故事中的主人公变成了自己,你也找到了一个供灵魂栖息的地方,不再独自一人飘摇不定,所有的孤独和伤痛都有地方接纳,供你发泄。
关键词:甲烷古菌; Hungate除氧系统; 富集; 滚管分离; 纯培养
中图分类号:Q939文献标识码:A 文章编号:1006-3315(2014)04-170-003
厌氧微生物的分离是黔南民族师范学院微生物课程开放性实验项目之一。目前国内高校多数实验室对严格厌氧菌分离纯化主要采用焦性没食子酸法、厌养罐法、厌养培养箱法等[1]。焦性没食子酸法进行厌养菌分离培养,由于其方法简单,操作容易,在大专院校微生物实验教学中仍广泛使用,但操作过程厌氧条件不易控制,特别是对严格厌氧的甲烷古菌分离效果差。厌养罐法能够为厌氧菌生长提供严格厌氧的环境,但不能为整个分离纯化操作过程提供厌氧环境,使用受到限制。厌养培养箱法虽然能为厌氧菌分离培养提供严格厌氧环境,需要特制设备,在厌氧箱中操作也不方便,由于价格昂贵,因而其应用受到一定限制。为此,为了改进厌氧细菌的分离纯化方法,结合对厌氧消化器中甲烷古菌的分离与纯化开放性实验,借助Hungate除氧系统进行稀释滚管分离,收到了很好的效果,现将有关技术介绍如下。
一、材料用具
1.接种物
取自黔南民族师范学院微生物实验室厌氧发酵缸(厌氧消化器)底部的沉积物。
2.仪器用具
2.1Hungate除氧系统。Hungate除氧系统由高纯氢气、高纯氮气,铜柱,加热套,不锈钢分支管,橡皮胶管,注射器及9号针头等组成。铜柱结构直径30~50mm、长300~500mm的石英玻璃管,两端加工成漏斗状,便于连接胶管,玻璃管中装入碎铜丝(长10~20mm,直径0.5mm),压紧,铜丝下面垫上玻璃纤维以防止碎铜丝散落,上端留出50mm左右的空间。铜柱外缠绕加热带,铜柱顶端用胶管与具有分支的不锈钢通气总管连接。不锈钢总管下的各分支管用橡皮胶管连接,橡皮胶管的另一端连接1mL塑料质注射器,注射器再与9号针头连接(图1)。
图1Hungate厌氧操作系统示意图
2.2其它器具。高压灭菌锅,恒温水浴锅,恒温培养箱,荧光显微镜,厌氧管(16×160mm),厌氧瓶(100mL),光波炉,3000 mL三角瓶,各种规格的注射器(1mL、2mL、5mL)等。
二、方法
1.获取无氧N2、H2、CO2气体
甲烷菌是严格厌氧微生物,都能利用H2和CO2合成CH4,一般分离甲烷菌都用H2和CO2作为营养。其分离过程需要人工保持一个无氧环境进行操作和供其生长繁殖。用于分离严格厌氧微生物使用的气体虽然是高纯气体(99.999%),但仍然含有微量的O2,利用Hungate铜柱除氧系统可除掉这些微量的O2,提供和保持无氧环境。
2.铜柱除氧与还原
铜柱除氧原理:实验使用的高纯气体(N2、H2、CO2)中含有微量的O2,当气体经过铜柱时,这些气体中的微量O2与Cu反应生成CuO(O2+CuCuO),从而流出铜柱的气体则为无O2气体。
铜柱还原:铜柱使用后,里边的Cu被氧化为CuO不能继续与O2发生化合反应,失去除氧能力。此时,关掉其它气体,通入H2,同时使铜柱升温(达350℃),当H2通过高温铜柱时,铜柱内CuO与H2反应(CuO+H2Cu+H2O)生成单质Cu,CuO在加热条件下(350℃)被H2还原为Cu,铜柱恢复除氧能力可反复使用。
操作步骤:打开Hungate铜柱除氧系统通气橡皮管的通气开关(止水夹),开启H2钢瓶,H2气流通过铜柱,从铜柱里流出的H2用橡皮管引出室外。此时接通电热套电源,铜柱升温,温度达到350℃左右,20~30min后,铜柱内的碎铜丝被H2还原,由黄黑色变为纯铜铮亮色,当铜柱里面的水蒸气被排出完全后,关闭H2钢瓶,铜柱还原结束。
3.获取无氧N2、H2和CO2气体
无氧N2用于厌氧菌分离操作和培养过程中驱赶空气,保证局部无氧环境。在铜柱还原结束后,立即打开N2钢瓶,气流大小控制以针头对准操作者手背5cm距离明显感觉到气流为宜,并随时注意控制气流的大小。此时铜柱内的碎铜丝处于还原状态的单质铜,当通入高纯N2(99.999%)时,其中所含的极微量氧与单质铜反应,氧被固定下来(形成CuO),流出铜柱的则是无氧N2。利用无氧N2气流驱赶厌氧管、血清瓶等培养容器和培养基中的空气,以及挑菌时保证无氧环境。使用完毕后,先关紧N2钢瓶,接着用止水夹封闭所有橡皮管。无氧H2、CO2的获取方法操作步骤相同。
2.制备无氧培养基
2.1培养基配方(详见表1)
表1培养基配方表[2]
注:微量元素溶液配制时先溶解氨三乙酸,NaOH调pH于6.5左右。依次溶解其它化合物,最后调pH于7.0。
3.制备方法
按照配方称取药品置于事先放有适量蒸馏水的三角瓶中溶解后,加入1mL的1‰刃天青液(W/V),0.4g的盐酸半胱氨酸,用NaOH调节pH值,加足需要水量,用记号笔在三角瓶外壁标上记号,加入一定量的蒸馏水作蒸发量后,置于光波炉加热煮沸10min后,通入无氧N2(驱赶空气,保持培养基为无氧状态)煮沸至培养基颜色变白后再煮10min左右进行分装。用9号针头连接的橡皮管,将无氧N2引入待装培养基的厌氧管和厌氧瓶(16×160mm厌氧管、100mL厌氧瓶)洗管、瓶(用无氧N2换出瓶中空气,使容器中无氧分子存在),用培养基分液器进行分装,厌氧管装4.5mL,厌氧瓶装45mL,待装好培养基后取出N2管塞上橡胶塞,旋紧盖子。转好培养基的厌氧试管用专用布袋装好与厌氧瓶一起置121℃,0.1MPa灭菌20min待用。(厌氧瓶内的培养基使用前加入无菌无氧1%Na2S溶液0.1mL和10%NaHCO30.1mL,厌氧管内培养基使用前加入1%Na2S溶液0.02mL和10%NaHCO30.02mL)。
4.甲烷菌富集
用水样取样器取沼气底泥5克于上述装有45mL培养基的厌氧瓶中,利用Hungate厌氧系统,按H2/CO2体积比为40/10的比例分别加入H280mL、CO220mL,置30℃恒温培养30天,用化学吸收法[3]检测厌氧瓶是否有甲烷气体产生,在甲烷菌生长对数增长中期,从产甲烷气体的富集瓶中取样进行滚管分离。
5.滚管分离和纯化培养
5.1滚管分离培养。对检测有甲烷菌存在的富集处理,进行第1次滚管分离。在分离培养基中补加琼脂粉(20g/L),分装于厌氧试管(16 mm×160mm,4.5mL培养基/管),灭菌。灭菌后置55℃水浴中保持液态,每支厌氧管中分别加入1%Na2S溶液0.02mL和10%NaHCO30.02mL。用1mL无菌无氧注射器取富集的样品液0.5mL,作10-1~10-9梯度稀释,重复3次,每支试管上下倒2~3次(注意不要产生气泡),使样品与培养基充分混匀并立即将稀释管置于装有4℃以下冰水的磁盘中迅速滚管,使培养基与样品均匀光滑无气泡凝固于管壁上。
将滚管分离样品的厌氧管置于试管架上,按H2/CO2体积比为40/10的比例分别加入H240mL、CO210mL,置30℃恒温培养30天,在管壁的培养基上有明显的菌落出现,用化学吸收法检测是否有甲烷气体产生。对有甲烷气体产生的管子,置于荧光显微镜下观察菌落,对有荧光反应的菌落用记号笔画圈作出记号,待进一步分离培养。
5.2甲烷菌纯化。纯化过程是多次挑取单菌落、稀释滚管培养的过程。截取细玻璃管(内径0.5cm、外径0.8cm,长15cm),两端塞上脱脂棉,在酒精灯的火焰上加热并拉成毛细管,高温灭菌并烘干。在无氧条件下挑菌:将有荧光反应菌落的管子置于铁架台上固定,打开管口,用无氧N2吹入管中,使管内保持无氧状态。取毛细管一端与橡胶管连接(橡胶管一端用夹子封住,含在口中),另一端(2mm左右处)在酒精灯火焰上加热并使之弯成约90℃,用它的弯头接触到有荧光记号的菌落,轻吸一口气,使菌落进入毛细管,移出毛细管并快速放入有4.5mL培养基的无氧管子中,迅速塞上胶塞的同时折断毛细管并旋上外盖。按H2/CO2体积比为40/10的比例分别加入H240mL、CO210mL,置30℃恒温培养30天,在管壁的培养基上有明显的菌落出现,用化学吸收法检测是否有甲烷气体产生。
通过单菌落分离获取的菌液经培养后底部有沉淀出现,用吸收法检测管中有无甲烷气体产生。对有甲烷气体的菌管,用上述方法再进行2次滚管分离,则可获得甲烷菌的纯培养。挑取纯培养菌落进行液体培养30d后,置4℃条件下进行保藏,同时进行鉴定。
6.甲烷菌鉴定
6.1菌落荧光反应检测。利用产甲烷古菌在特定波长(420nm)激发下能产生特有的蓝绿荧光,对分离到的样品管进行菌落荧光反应检测,有荧光反应的样品管证明其有甲烷菌存在。
6.2产甲烷气体检测。利用甲烷菌能产生甲烷气体的特性,将有荧光反应的样品管用气相色谱仪或化学吸收法进行产甲烷气体检测,有甲烷气体产生的样品管,再一次证明样品中有甲烷菌存在。
6.3产甲烷菌纯度检测。用1mL注射器抽取有荧光反应的样品液置荧光显微镜下观察,菌体有荧光产生,物气体杂菌,则为甲烷菌纯菌,并将置常温冰箱4℃保藏,待进一步研究或应用。
三、结果与小结
1.结果
1.1利用稀释滚管分离法从厌氧消化器中分离获得99支甲烷古菌纯培养,经产甲烷气体和荧光反应鉴定证明是甲烷菌(图2)。
甲烷杆菌属甲烷短杆菌属甲烷球菌属甲烷微球菌属
Methanobacterium Methanobrevibacter Methanococcus Methanobacterium
(1000×) (1000×)(1000×)(1000×)
图2采用稀释滚管分离纯化法得到的甲烷菌图片
1.2甲烷菌分离纯化技术流程
经上述试验,归纳建立甲烷菌分离纯化技术,其流程如下:
第一次滚管分离
第二次滚管分离
第三次滚管分离
1.3小结
采用Hungate厌氧操作系统清除氧气彻底,操作过程能及时发现和控制无氧环境。培养基中加入对氧气敏感的刃天青指示剂,能及时观察操作过程的无氧状态,使整个操作过程和培养都在无氧状态,满足严格厌氧的要求。建立的稀释滚管分离法操作简便、利用荧光显微镜观察,菌落易于辨认,易挑取,操作过程不易污染,分离效率高等优点。只要满足厌氧微生物的营养需求,样品中的厌氧微生物都能分离出来。
基金项目:黔教高发[2012]426号;黔南民族师范学院微生物学重点学科[2011.6];黔南民族师范学院教学质量工程项目院教发[2011]5号。
参考文献:
[1]庞德公,杨红建.产甲烷菌的分离纯化培养及其培养基对于菌株的选择作用[J]中国畜牧兽医,2010,37(6):32―35
杨宇特别指出,牛市提升了风险偏好,已经成为驱动牛市的最主要的原因。但遗憾的是,在这轮牛市中,个人投资者却没有分享到市场上涨带来的回报。因为无论是大涨、大反弹等特点各异的牛市行情中,绝大多数主动管理投资的业绩表现都难以超越指数。以沪深300为例,其指数估值与发达国家和历史平均水平相比,仍处于较低位置。此外,增量资金的入市和沪港通带来的资金流入,都将对其形成利好。而从历史数据来看,无论是从2014年全年,还是从2006年最低点以来,以及2014年最低点行情启动7月21日市场上涨以来,包括当下这一轮从10月21日降息以来的几个维度进行统计,能够跑赢嘉实沪深300指数型基金的基金均不足10%。此外,嘉实基本面50指数型基金,作为2014年所有指数型基金中宽基指数当中表现最好,同时也可作为国企改革主题基金,同样值得关注。
与杨宇对于蓝筹指数基金的推荐不谋而合,对于春节前的走势,接受采访的众多公募基金表示,短线融资融券杠杆下的指数宽幅震荡会成为新常态,操作上不宜追高前期升幅巨大的个股。但由于1月份因年报披露公司数量少,市场整体走势将较为平稳;且2月份交易日为春节假期前后,按照以往的规律,春节前市场走势都不会太差,再加上“两会”期间可能有一些改革方案出台,所以这个阶段国企主题将受到资金青睐。食品饮料等消费类板块逆袭是大概率事件,包括一些中低档白酒类股票,比如顺鑫农业等。而从目前的中小市值市场来看,虽然估值比较合理,但却面临着年报和业绩的兑现期,调整还远未结束,短期内不是很适合投资小市值公司。
南方基金:股市将由快牛转为慢牛
南方基金日前表示,股市将由快牛行情转为慢牛行情,结构上应更加均衡,偏好PEG具有较大吸引力的白马成长以及极低估值的大盘蓝筹:货币政策将继续放松,但幅度和速度可能减慢,因此流动性仍保持小幅改善的趋势。
博时基金:
期权推出或放大股市上涨趋势
博时基金日前表示,上证50ETF期权推出可能放大股市上涨的趋势。配置上,建议重点关注通信、环保及公用事业、非银金融、建筑建材、旅游以及零售六个行业。主题上维持京津冀、蓝筹行业轮动主题。
上投摩根:
上证50ETF期权短期受空方关注
上投摩根基金日前表示,股票期权后期有望增加蓝筹股流动性溢价,利好其继续估值修复。但由于前期已累积较大涨幅,短期上证50ETF期权可能更受空方关注,或使蓝筹股短期波动性进一步加大。
建信基金:新兴蓝筹价值回归
建信基金经理许杰日前表示,虽然中国经济目前处于新常态的结构调整期,但其实现在已进入了一个短周期、小复苏的过程。其中房地产基本面的改善起到拉动作用,未来还会持续向好,传统蓝筹仍有上涨机会,新兴蓝筹也值得关注。
长城基金:低估值蓝筹仍是投资主流
长城基金日前表示,目前的宏观经济状况并不理想,但这是新常态下市场必须要适应的。经济基本面并不是牛市的必要条件,这一轮牛市是改革、流动性等一系列因素推动形成的。目前的投资主流仍然是低估值的大盘蓝筹股。
华泰柏瑞:改革将带来三大投资机会
华泰柏瑞基金经理张慧日前表示,2015年改革将给A股带来三大投资机会:一是国企改革,包括资产证券化、战略转型和管理改革;二是区域改革与振兴计划,目前公布的计划包括一带一路、自贸区、跨省市经济区等;三是体制改革,包括土地制度变革、电力体制改革、医疗改革、体育改革等。
海富通基金:
券商正步入黄金发展周期
海富通基金日前表示,券商板块短期调整,但估值属于合理范围,未来存在T+0放开预期,若证券市场产品放开,券商或将成为最有潜力的行业。券商正步入黄金发展周期,其不断尝试与国际接轨,从而在一定程度上盘活证券市场。
泰达宏利:期权推出短期支撑股价
泰达宏利基金日前表示,行政审批权下放、国企改革加速推进、政策相对转向为宽松,均对经济有一定的托底作用。虽然期权的推出长期来看不会改变股票的价值,但是短期会活跃标的权重蓝筹股的交易,对股价也有一定的支撑作用。
长信基金:
中小市值公司投资价值凸显
长信基金金融工程部总监胡倩日前表示,在经历了板块的整体大幅回调后,部分中小市值公司,特别是业绩优异的中小市值公司的投资价值将逐步凸显。中小盘走势日益分化,获取业绩主要依赖于选股能力,而量化投资在这一方面较占优势。
汇丰晋信:看好国企改革主题价值股
汇丰晋信基金日前表示,看好“国企改革”主题的价值股和“产业升级”主题的成长股。看好的行业主要有:金融(互联网金融)、核电、化工、医药、消费、环保和TMT行业。
信达澳银:
券商保险地产将有阶段性表现
信达澳银基金日前表示,2015年的投资机会比较全面,价值和成长的界限不会太明显,大小盘股票的差距也不会太大,主要的机会还是在基本面景气、估值有弹性的行业或板块。在经济没有起色之前,券商、保险和地产仍然会阶段性有好的表现。
德邦基金: