实习指导计划精选(九篇)

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第1篇：实习指导计划范文

关键词：大学生；职业生涯规划；辅导体系；激励机制

中图分类号：G647 文献标识码：B 收稿日期：2015-12-28

一、加强大学生职业生涯规划辅导体系构建

1.建立大学生职业生涯规划辅导机构

目前，我国大部分高校都没有自己专门的职业生涯规划辅导机构，而是将其纳入就业指导机构中，忽视了职业生涯规划中的深远意义，制约了职业生涯教育发展。高校应该根据学生发展和社会发展的需要，调整工作思路，在就业指导中心的基础之上，建立更为完善的辅导机构体系，并对这些群体和个人进行科学合理的职责划分，开展各项专业职业生涯规划指导。

2.实现大学生职业生涯规划的个性化辅导和全程化辅导

大学生在接受职业生涯规划教育中，会经历从不知道“我想做什么工作”到“我可以做什么工作”再到“什么工作最适合我”的变化过程。在低年级时发展初步职业意识，中年级时开展职业生涯实践活动，到了高年级，需要接受择业指导、求职技能、工作申请等培训。接受职业生涯规划教育，大学生会对自身和职业的认知程度越来越深刻，逐步建立合理知识结构，为将来进入社会工作打好基础。

职业辅导师要对学生的性格特点、思想品德、心理状况进行全方位了解，制订完善的职业生涯规划，帮助学生寻找到适合自身情况的最佳职业发展路径。

3.搭建职业生涯规划教育平台

高校需搭建一个开放的教育平台，积极寻求社会资源，获取政府部门的政策支持，为大学生提供制度保障。多与用人单位建立合作关系，开展实践就业活动，进行毕业生就业情况的跟踪调查。通过平台，聘请社会上职场精英对大学生进行就业指导与分析，研发职业测评工作，培训职业技能，在师资培训上多与外校交流，取长补短，将大学生职业生涯辅导教育工作做得更到位。

二、完善大学生职业生涯规划辅导激励机制

1.精神激励

职业生涯辅导教育的效果和成就与学生的学习能力和方式密切相关，终身教育的理念已经深重于高校师生中。大学职业生涯教育的目标是提升学生的综合素质和全面发展，实现职业成功和人生价值，这与高等教育的目标一致。

学生通过职业规划选择自己接受相关教育的时间和时机，通过辅导者的合理引导和学生的自主探索来实现职业规划的长远目标。与此同时，学校对辅导教师多进行精神鼓励，使其更加重视职业生涯规划辅导工作，激发教师深层次的成就感，进一步提升其责任感。

2.目标激励

高校领导者应以大学生职业生涯规划辅导为主线，制订职业生涯辅导的宏远战略目标，将大学生职业生涯规划的辅导体系任务进行分解，进行责任到人，落到实处，并定期视察工作的进展情况，通过分解任务、设定具体目标来激发广大教育人员的责任感和成就感。

3.物质激励

高校应该加强大学生职业生涯规划辅导的管理制度建设，提供有效的物质保障。一方面，高校要舍得投入，提供开展大学生职业生活规划辅导所需要的物资和资金，如社团活动经费、社会实践基地建设资金、学生素质评价体系基金等；另一方面，对因开展相关工作付出辛勤汗水的一线教育工作者，要为他们提供必要的报酬和津贴。通过加大资金投入，能在很大程度上改善职业生涯规划辅导的作用和效果。

4.考核激励

高校领导者应当完善大学生职业生涯规划教育的考核机制，将职业生涯规划的研究、辅导过程、辅导结果都纳入对教师绩效的考核范畴，其考核结果可以与高校教师职务晋升直接挂钩。

大学生职业生涯规范辅导的意义深远而重大。高校工作者应当制定合理的职业生涯规划辅导体系，完善其激励机制，鞭策落后，奖励先进，促进大学生职业生涯辅导教育工作的有效开展。

参考文献：

[1]吴 坚.大学生职业生涯规划辅导体系及其激励机制[J].教育与职业，2013，（17）.

第2篇：实习指导计划范文

关键词：石化 渠道 树脂

1.渠道的定义及重要性

渠道，在高度发达的商品经济社会，被赋予了深刻的经济含义——营销渠道，是指产品或服务转移所经过的路径，是由参与产品或服务转移活动以使其便于使用或消费的所有组织构成[1]。渠道是营销组合中不可或缺的要素之一。

2.国内石化树脂销售的现状

目前国内石化树脂渠道的特点显著，上游原料的生产供应企业主要是中石化、中石油以及跨国石化销售机构。

中石油及跨国石化销售机构的生产基地与消费地相距较远；产品品种及数量相对较少；运距较长、供货不够及时；人员相对较少，市场开发能力较弱，两者主要依靠中间商建立渠道进行经营。

中石化与前者相比有很大不同，生产企业建在经济发达地区和主要消费市场附近，产品可及时送到用户手中；产量、品种丰富全面，新产品的开发能力强，产品满足建筑、汽车、电器、包装、农业、日用品等行业的需求。凭借地缘优势、产品优势及渠道管理提升，客户群体很完整，大、中、小型贸易商、生产企业均有。

树脂下游应用领域，包装业、建材业、农业、建筑业、电子电器业、日常用品业中，是完全市场竞争状态，几乎没有国有企业存在，更多的是民营企业、股份合资、合作企业、偶尔有国营背景的也是进行股份制改造。

3.影响国内石化树脂渠道的因素

根据专家对营销渠道的见解，结合石化树脂营销的特点，找出影响石化树脂渠道及渠道关系的关键因素。

3.1 外部宏观环境因素

外部宏观环境如同一个巨大的推动机，促使企业不断随其改变，企业只有顺应形势，做出正确的抉择和应对，才能生存并发展。在某种程度上，外部宏观环境是推动企业渠道变革的原动力。通常，外部环境因素主要有：法律法规、经济因素、社会文化因素、技术更新、竞争环境因素[2]等。

3.2 企业营销战略因素

营销渠道是企业4P营销组合的因素之一，从属于企业总体发展战略和企业的营销战略，是在上述战略的指导下完成建立的。外部宏观环境因素，通过各种途径和方式，对企业的总体发展战略和营销战略进行影响，促使企业做出与之相应的反应，调整渠道系统内部机制和关系，进而发生变革并梳理关系，完成渠道更新，最终实现企业的经营飞跃。反之，企业不仅发展受阻，还有一定程度的经济损失。如：2002年，乐华为了减少营销渠道成本过大的状况，砍掉了全国300多个销售中心，改用制销售，只在省级区域设立销售管理中心，引发了乐华长期以来的资金链危机，导致企业面临倒闭，产品几乎完全退出市场。可以说，企业营销战略是企业渠道建设和管理之魂，对企业渠道建设和管理起着指导性和原则性的作用，是总的纲领性的行动方针。

3.3 4P营销组合中其他因素的影响

营销工作是多方面营销战略的组合，渠道策略必须与其他组合变量相匹配，才能发挥出应有的作用；离开其他3P因素（产品因素、价格因素和促销因素）的支持，单一的渠道营销作用微乎其微。4P协同作用，才能发挥竞争优势、收获效益。

先有产品后建渠道，渠道因素从属于产品因素，产品是营销的根基所在，是渠道建设的源头。产品因素主要涉及产品的状况、品牌及生命周期等相关因素。价格因素对渠道稳定性的影响是至关重要的。美国对2000名消费者进行调查，发现64%的消费者认为，价格是购买时最主要的考虑因素，可见价格的重要性[3]。价格的设定是非常困难的,必须和顾客的心理价位相符合,高则会降低客户购买欲，低则会失去应得的利润。渠道持续的顺畅运转，核心就在于渠道成员在运转过程中通过自己那部分功能的实施，得到相应的利益。

3.4 可影响渠道的其他因素

除上因素外，还有一些因素影响着树脂渠道的建立和稳定，如地域情况、人际情况及经营制度等。中国幅员辽阔，各地经济发展不尽一致，地方重视程度也有差别，加之树脂产品种类繁多、用途广泛，生产企业分布不均衡，这些因素共同作用使得合成树脂行业在各地的发展极不平衡。诸多不同无疑对树脂渠道的建立，提出不同的要求，配置的好坏，对渠道的发展和稳定会带来不同结果。

中国社会讲究人际关系，培养良好的人际关系，也就是掌握了不可或缺的资源，掌握了营销主动。

要想实现渠道目标，必须制定并切实执行渠道内部制度。渠道制度的制定是由渠道内占控制地位的成员来制定的，但执行则必须要依赖全体成员共同完成，这就必须考虑渠道的整体利益和个体利益，得到一个各方认可的制度。

4.石化树脂渠道矛盾的根源分析

渠道通常由制造商及其销售机构、批发商、零售商、商及其他辅助机构组成，是一个多成员聚集共同完成营销目标的松散组织。既是组织，就有组织领导和规章制度。渠道成员拥有的资源价值以及获取资源的能力不同，使得成员间的依赖程度不同。拥有的资源越有价值，越是他人所需要，越是难以被替代，存在的价值就越大，被依赖程度也就越高。显然石化树脂渠道中，上游石化厂商的被依赖的程度很大，顺理成章成为渠道的领导者，在制定渠道规章制度方面具有更多的话语权和决定权，从而为自己获得更多的利益分配奠定了基础。

其次，作为石化树脂渠道领导者，石化厂商必须保证渠道成员能够合作顺利进行，这是渠道得以存在的必须条件。由于在当今社会，社会分工专业化和市场交换，使得渠道成员专业于具有相对优势的功能上，这样不仅可以获得规模效益（这是功能专业化的主要动力），同时令渠道成员在功能上相互依赖，只有实现渠道共同目标才能实现自身的目标。渠道作为整体不可分割，但成员间依赖程度不同，决定了拥有权利不同，获得利益也不同。

第三，分析影响石化树脂渠道的因素发生变化，时间的改变、市场形势的发展及渠道成员自身进步等，渠道成员对渠道权力、规章制度以及依赖性的看法也不断变化，并产生新的诉求，渠道矛盾因而出现。

渠道成员在目标、角色、意识和资源的分配等方面存在利益上认知的差异，使得渠道矛盾永远存在，要积极采取预防措施将矛盾控制在无害的水平上，避免激烈冲突。否则，会导致渠道功能的丧失和效率的下降，使营销工作受挫和企业遭受利益损失。

从本质属性看，渠道运转实质上是利益分配的过程。渠道成员根据依赖程度的大小，通过实现自身功能获得相应的利益。但在各种因素的动态影响下，渠道成员会对利益分配提出新的渴望和要求，石化树脂渠道矛盾的根源正在于此。同时，这也是渠道不断向前发展的动力源泉。

5.使用关系营销来控制石化树脂渠道矛盾

调查表明，管理者大约花20％的时间用来处理矛盾及其引发冲突，可见组织中的矛盾是不能避免的。石化树脂渠道矛盾也是如此，当渠道成员感觉到有不利影响侵害自己的利益，就会出现摩擦，当矛盾不能有效控制、持续恶化发展就会导致渠道冲突，沟通不善，渠道效率低下，业务执行无力，甚至合作面临瓦解。

渠道的领导者作为渠道和渠道制度的最大受益方，迫切需要维持渠道稳定顺畅的运行。实际操作中，可以凭借渠道权力使渠道成员之间明确职责、协调分工、解决矛盾与冲突、促成合作、提高渠道效率。渠道权力的使用分为两种基本形式：使用强制性权力与使用非强制性权力。一般讲，使用强制性权力对渠道成员关系有负向的影响，使用非强制性权力有正向影响。由于渠道成员之间功能专业化所带来的“功能性相互依赖”，即：渠道中企业之间合作是基础或根源，因此渠道权力的强制性使用受到很大的局限性。

关系营销是非常好渠道管理方式，它把营销活动看成是一个企业与消费者、供应商、分销商、竞争者、政府机构及其他公共发生互动作用的过程，强调企业要与其交易伙伴以及其他相关群体建立一种互惠互利、相互信赖、长期稳定、共同成长的合作关系，并借此获得可持续的竞争优势。关系营销中的“关系”实质上是一种建立在供需基础上的相互依存、相互作用的和谐共生关系，它更强调“互补性”、“协同性”、“增值性”和“共赢性”[4]。关系营销中，企业通过信任、沟通、承诺、价值共享、同情和互惠等要素建立、维持并发展与交易伙伴的关系，必要时，建立战略联盟，一起从营销渠道中获得可持续的竞争优势。当企业需要交易伙伴做一些事情时，会相对较多地考虑交易伙伴的利益。在对其施加影响时，会较多地采用温和的方式，如奖励、认同、专家和信息等劝说对方接受自己的观点。关系营销有助于减少渠道成员之间的摩擦和冲突，提高合作意愿。

6.国内石化树脂渠道的发展趋势

我国是世界上合成树脂消费增长最快的国家。也是世界上最大的合成树脂进口国[5]。 2010年我国合成树脂产量达到4361万吨， 同比增长21.0%。“十一五”期间年均增长速度达到15.3%， 属于快速发展的行业。随着国内供应的大幅增长，自给率也有了明显提高。“九五”末我国合成树脂自给率为44.1%，“十五”末提高到50.2%，2010年已提高到61.1%。初步统计，2010年我国合成树脂表观消费量达到7136万吨，同比增长13.3%。 “十一五”期间我国合成树脂消费量年均增长速率高达10.8%，我国已长期处于世界上合成树脂生产和消费增长最快的地位。

在世界范围内，石化产品需求重新开始增长。这些增长主要源自新兴经济体，尤其是中国，中国大量进口石化产品拉动了其他地区的需求。全球石化产品的供应增长主要来自中东和亚洲地区，成熟经济体的新增产能很小。发达国家的石化产品生产能力过剩，但产量保持稳定，主要出口到亚洲。目前来看，我国来自周边国家和地区的进口量有所下降，而来自中东、北美等地区的产品大幅增加[6]。

从产品构成来看，国内石化产品仍会以中低端、大路货为主；中高端产品的市场仍依赖进口，很多专用料的国产化尚未实现。从生产成本上看，煤制烯烃技术和天然气、乙烷、页岩气为原料的烯烃工艺企业会不断增加，据分析测算，当国际原油价格高于60～70美元／桶时，煤制烯烃项目具备一定的成本竞争力；而页岩气作为乙烯原料，其原料成本仅是石脑油的30%，这对以石脑油为主的国内石化提出了严重挑战。下游树脂厂商的实力不断加强，年销量在10万吨以上的中间商已比较常见，在5万吨以上的加工企业也不稀奇，其实力和地位已不同日而语。

从发展趋势看，国内石化企业的强势地位，会受到渠道内外各方面因素的挤压，从而会有一定的削弱。面对内外部环境的激烈竞争，重视渠道内成员的合理诉求，积极提升中高端产品，开拓新的客户群体，改善渠道结构和制度，势成必然。以关系营销的理念发展石化树脂渠道，会给国内石化企业带来积极的作用。

参考文献：

[1]庄贵军.中国企业的营销渠道行为研究.北京大学出版社, 2007

[2]王敬斋.营销渠道影响因素及新类型渠道发展分析.现代商贸工业，2010.22

[3]林建煌.营销管理.复旦大学出版社，2011.2

[4]彭建仿.关系营销中的关系取向与演进机制.华东经济管理，2009.8

第3篇：实习指导计划范文

关键词 寝室文化 育人 价值导向

中图分类号：G41 文献标识码：A

尽管新时期大学生价值取向存在复杂性、多样性和不稳定性，但从发展心理学的角度看，青年时期的大学生恰恰处于人生观和价值形成和稳定的关键时期。因此，我们应当充分分析和认识当代大学生价值取向变化和发展的新特点，摸清寝室文化育人的价值导向机理，提炼和创新价值导向下寝室文化建设的思路和模式，促进积极、健康、奋进的寝室文化氛围的形成，切实增强寝室文化在学生思想政治教育，优良学风建设，心理隐患预防和消除方面独特育人功能的实效性。

1主导价值和规范的确立

高校寝室文化育人的主导价值与规范应当与学校人才培养目标紧密结合，以学生的全面发展为基点，以促进学生思想政治教育，促进学生优良学风建设，促进学生心理隐患预防和消除为根本要求，紧密结合社会新时期的人才需要，切实加强从寝室文化到寝室育人的价值传递和功能衔接，为培养思维活跃，基础扎实，具有较强责任和担当意识的高素质人才打好基础。

在此约束下，高校寝室文化育人的主导价值与规范应当包括如下五个方面，（1）在社会责任和担当上做到勇于奉献，敢于担当，能把实现个人理想同社会需要结合起来；（2）在学习态度和成绩上做到勤奋踏实，力争上游，能把学习摆在大学各类事务的首要位置；（3）在课外实践和收获上做到积极投身社会实践，注重自身综合能力培养；（4）在习惯B成和保持上做到生活作息规律，寝室环境优雅；（5）在心智成长和成熟上做到豁达包容、与人为善，能够学会理解和鼓励寝室成员。

同时，值得注意的是，由于当代大学生价值取向多元化的趋势，主导价值和规范应着力于引导而非强制，立足于为学生指明前进的大方向而非必经的道路。这样才能充分调动学生的主观能动性，最大限度地帮助学生发掘适宜自身成长成才个人发展路径。

2价值导向育人的实现原则

2.1要明确学生的价值主体地位

随着我国改革开放的日益深入，以及各类思潮更加自由的相互交叉和传播，当打大学生的价值取向也正在由传统的社会本位转向个人本位。同样，在寝室文化育人过程中，学生的价值主体亦是十分明确的。因此，杜绝对大学生价值取向的替代和价值导向的强行移入是教育学生、引导学生的内在要求。而充分契合当代大学生个性张扬，可塑性强等特点，通过提炼和创新价值导向下寝室文化建设的思路和模式，以主导价值体系为指导，设立价值标准，鼓励学生主动迎接评价将成为寝室文化育人的必然选择。

2.2要利用行为实践来内化价值导向

实践是检验真理的唯一标准，也是检验学生价值取向正确与否的试金石。因为只要价值取向停留在意识中，人们就无法判断它的正确。提炼和创新价值导向下寝室文化建设的思路和模式，离不开行为实践机制的构建，离不开辅导员老师与学生的双向互动，也离不开学生主体切身体验。因此，要想增强寝室文化在学生思想政治教育，优良学风建设，心理隐患预防和消除方面独特育人功能的实效性，就必须坚持行为实践在内化价值导向中的关键作用。

2.3要促使主导价值对多元价值的统摄

由于当代大学生价值取向多元化的趋势，主导价值和规范应着力于引导而非强制，立足于为学生指明前进的大方向而非必经的道路。这样才能充分调动学生的主观能动性，最大限度地帮助学生发掘适宜自身成长成才个人发展路径。但这并非无视学生价值取向的复杂性、多样性及不稳定性，而是要通过主导价值所体现出的“以生为本”，兼容并济的优势，发挥主导价值的统摄功能，把多元的价值取向统摄到主导价值取向上来。

3价值导向下寝室文化的育人机理

3.1标准引导

标准引导旨在通过设立多元化且符合新时期大学生独特需求的不同优秀寝室标准，用主导价值来引导学生的价值取向，通过行为实践，在达到主导价值标准的过程中提升自我能力，为促使学生成长成才做好铺垫。在结果评价中，通过对价值导向下寝室文化建设的思路和模式创新，摆脱原有的事先确立优秀寝室名额的寝室评优机制，改为由学生根据多元化的主导价值标准进行自主申报，只要经过由学生发起的评审委员会审查，确定寝室达到标准，即可获评。充分调动学生的主观能动性，促进学生对主导价值体系的了解，提高学生的自我管理，自我约束的实效性。

3.2过程管理

寝室文化育人的过程管理是以辅导员为主导，成立由学生自主组成的寝室文化建设委员会，做好从寝室文化到寝室育人的价值传递和功能衔接。过程管理以学生自我管理为主体，以辅导员和党员干部带动为两翼，以各层次优秀寝室成员相互参观为指引，同时对寝室卫生以及安全电器的使用进行定期检查与抽查，将经常缺课的学生纳入黑名单进行多频次查课，并做好记录。由寝室文化建设委员每星期公示优秀寝室、进步最快寝室和待提高寝室的寝室号和寝室成员名单，切实形成彰优醒差的良好寝室文化氛围，切实保证过程管理的精准性和实效性，切实发挥过程管理对多元价值取向的引导作用。

3.3承认差异

学生作为德育价值主体，是根据自己的价值需要来确定自己的价值取向的，只有承认学生在价值取向上存在着差异，接受大学生价值取向的复杂性和多样性，才能更好的发挥寝室文化育人的价值导向作用。通过主导价值所体现出的“以生为本”，兼容并济的优势，发挥主导价值的统摄功能，引入主导价值统摄下的多元化标准体系，摆脱单一化的评价标准和优秀寝室层次，逐步把多元的价值取向统一到主导价值上来。

3.4强调合作

我们知道，寝室成员的共同价值观作为寝室文化的价值映射，会影响寝室成员个体的价值取向，对寝室成员个体产生价值导向作用。与此同时，正是寝室成员相互之间所发生的持续交互作用，促成了其对寝室外部主导价值的内化和吸收，强化了寝室文化的主导价值。因此，通过合理的方式将寝室成员的个体成绩进行综合，形成集体成绩，并将集体成绩纳入优秀寝室评价的标准体系，强调集体的合作，树立团结协作的集体意识，促进寝室成员共同价值观对寝室成员个体的影响，让个体在集体的影响下变得更加优秀。

3.5树立典型

当代大学生的价值取向的不稳定性特征，使得其人生价值的选择和判断极易受外界环境的影响。对大多数学生而言，与其频繁的说教，不如用身边的先进和榜样去激励他们，使其价值取向不断向主导价值和规范迈进。因此，通过每学期对申报各类优秀寝室，且达到标准的典型进行表彰，来树立典型；通过组织策划颁奖大会，让各类优秀寝室以视频展示，寝室成员访谈，各寝室长现场交流等形式，来宣传典型。同时，对各类优秀寝室通过颁发奖状、奖品及门贴等形式进行表彰和鼓励，并将优秀寝室称号纳入各类评奖评优的条件要求，从而更加凸显榜样的带动作用，充分发挥典型在价值导向育人中的积极作用。

参考文献

第4篇：实习指导计划范文

摘 要：当代社会是一个以知识经济为主导的社会。在知识经济浪潮的影响下，消费者的需求逐渐开始发生变化。为了能够使市场新产品更好地满足消费者的需求，本文重点对知识经济导向下消费者需求变化趋势进行分析，从而为新产品的研发能有效与消费者需求相结合提供有益的参考。

关键词：知识经济；消费者需求变化因素；趋势分析

引言

随着科学技术的不断发展，计算机网络得到普及，使得世界信息技术经济日益渗透到各个领域和角落。新一轮信息技术革命不仅带来了新的经济增长，而且推动了知识经济的全面崛起。知识经济时代的到来，为社会各方面带来了深刻的影响，消费者需求由此也产生了许多新的变化。基于此，企业要想获得更好的生存和发展，就必须依据消费者的需求变化来调整策略，从而开发出真正适合消费者需求特点的产品和服务。

1.知识经济概述

关于知识经济的内涵，虽说不同的学者有着不同的定义，但其本质上是一致的。大家普遍认可的定义就是：知识经济主要是指以知识为基础的经济，它是建立在知识和信息的生产、分配以及使用上的经济[1]。具体说来，主要有以下几个方面的特征：第一，知识是知识经济的主导资源。在知识经济时代，知识作为一种独特的资源是经济发展的核心，人们更加注重自我素质的全面提升，生活方式也逐步开始走向知识化和智能化，知识和人才备受重视，知识管理的方式盛行。第二，信息是知识经济的主要载体。在知识经济时代，网络技术发展迅速，消费者能够借助网络平台收集产品信息，表达内心的需求。第三，创新是知识经济的核心理念。知识经济时代，科技日新月异，消费者需求随之发生迅速改变，企业必须通过不断的创新才能更加满足消费者的需求。第四，平等与开放是知识经济的重要表现。知识经济时代，网络将世界各地的人们连接成一个整体。通过网络，人们可以交流、娱乐和购物，这一系列的活动都是在一个平等与开放的平台中完成。第五，持续发展是知识经济的主要目标。知识经济时代，人们的思想观念开始发生转变，环保意识不断增强，因此企业需要主动承担社会责任，开发出更多绿色环保的产品来满足人们的需求。

2.知识经济对消费者需求变化因素的影响

2.1环境变化的影响

传统经济时代，物质资料不够丰富，人们为了生计忙于奔波，消费需求单一。而知识经济时代的到来，人们的生活水平不断提高，对生活追求的领域范围不断扩大，为新的消费者需求的产生创造了条件。尤其知识经济以创新为核心理念，各类新技术纷纷涌现，为市场新产品的研发带来了新的挑战和机遇。企业要想获得良好发展，必须顺应时展潮流，进行各类新产品和新技术的开发，这在一定程度上不仅促进了企业经营水平的提高，而且极大地激发了人们的消费欲望。

2.2社会变化的影响

知识经济时代是一个平等开放的时代，尤其是网络的出现使人们的活动范围更加开阔，活动内容也更加丰富多样，社会朝着经济和文化更加多元化的方向发展。知识经济时代的到来一方面使个人对群体的依赖程度逐渐降低，群体对成员的约束也不断放松，为人们追求更加多元和个性化的生活方式创造了条件；另一方面，信息技术的飞速发展使人们日常生活的沟通和交流更加便利，人们开始依据自身的意愿来选择合适的生活方式，归属于一定有形或者无形的群体，从而实现自身个性化的价值观和生活方式的追求[2]。

2.3需要和动机变化的影响

消费者内心的需要和动机是影响消费者需求的根本因素，知识经济时代为消费者需要和动机的变化提供了一定的条件。首先，知识经济时代的到来使得人们心理需要层次不断提高。随着生活水平的不断提高，人们的生活方式日益复杂，在物质得到极大满足的条件下，人们开始追求更高层次的爱与归属以及自我实现的需要等。其次，经济时代，人们消费动机也逐渐呈现多样化。由于人们生活水平需要的不断提高以及生活方式的不断改变，人们的消费心理逐渐趋于成熟，人们经历了一个由一开始对生活必需品的追求上升至消费的差异化和个性化，再到对生活“品味”的消费追求过程，消费者心理需要层次的不断提升以及消费动机的多样化，促使人们的消费行为更加多样化和个性化。

3.消费者需求变化的趋势分析

3.1个性化与多样化

知识经济导向下，人们“求异”的思想更加强烈，对于更加个性、独立和自由的产品和服务的追求趋势更加明显。由此企业要不断进行市场细分，要依据个人的需求来进行新产品和新服务的研发。除此以外，随着人们心理需要层次的不断提升，人们对产品的追求的需要表现出更加复杂和多样化的特点，在精神追求方面更会体现出较大的差异。其主要原因在于：第一，不同的个体对同一种生活行为表现出不同的追求。第二，同一个体为了满足某种生活需要表现出更多的追求。例如，人们为了丰富自身的娱乐生活，可以选择看电影、运动。聚餐等，也可以旅行、购物和唱歌等。第三，同一个体在不同的生活领域其追求也表现出较大的差异。同一个消费者在不同的生活领域会选择不同的消费方式，使得他们的消费需求也呈现出不同和多样。

3.2情感化与感性化

随着心理需要层次的不断提升，人们开始追求更多生活上的精神和情感因素。其主要原因在于：首先，人们物质生活的极大丰富定会产生对精神生活更高层次的追求；其次，人们的社会地位和形象意识逐渐提升；第三，现代社会，人们面临着巨大的生活和工作压力，需要借助一定的精神活动来放松心灵；第四，女性成为引领时尚最广泛的群体，极大的促进了精神领域的消费水平。当今社会，人们注重对精神和情感刺激的追求，例如，人们去咖啡店并非仅仅是为了品尝咖啡，更重要的是去体会环境所带来的愉悦和放松之感。因此，人们对情感的体验和追求极大地促进了感性消费。

3.3健康化和绿色化

知识经济时代，人们追求高质量的生活水平，对自身身心健康的发展极其关注。在食物方面，人们更加注重食品的质量是否营养卫生，是否是绿色环保产品；在衣着方面，人们不仅追求时尚，而且关注衣服的材质和舒适度；在住的方面，人们不仅追求美观，而且注重装修材料的环保、无污染。由此看来，无论是在衣食还是住行方面，质量和健康都成为人们关注的热点，健康安全的消费理念逐渐成为一种时尚。现代社会，随着人们生活节奏的加快，消费者面临的心理压力逐渐增大，心理健康开始受到人们的关注，人们在消费行为上更加注重休闲和娱乐，呈现出健康化和绿色化的特点。

4.结语

知识经济时代的到来，社会技术获得飞速发展，极大地改变了人们的生活方式和生活习惯，带动了人们的消费需求。以知识为基础的知识经济，信息成为知识经济传播的主要载体，创新、平等、开放成为其主要特征。在知识经济的引导下，消费者所处的社会和环境都发生了巨大的变化，在消费需要层次上不断提高，消费的动机也更加多样化。基于此，消费者需求呈现个性化与多样化、情感化与感性化、健康化和绿色化的发展趋势，为此企业要不断适应消费者需求特点的变化，从而在激烈的市场竞争中占据有利地位。

（作者单位：山西财经大学）

参考文献：

[1] （美）帕梅拉・N.丹齐格著，冯铁为，张媛，庞靓译.人们为什么要买不需要的东西[M].中国社会科学出版社，2006

[2] （英）约翰・西蒙斯（JohnSimmons）著，乔晓芳译.情迷星巴克[M].中信出版社，2005

[3] 高汝熹，张洁著.知识服务业[M].上海交通大学出版社，2004

第5篇：实习指导计划范文

【关键词】插秧技术水稻种植机械化

水稻机械化插秧技术有自己独特的特点，这些特点决定了机械化插秧技术和传统的手工插秧相比，具有一定的优越性，要使机械化插秧技术在农业中发挥很大的效益还必须掌握好机械化插秧技术的要领，做好相应的工作。这种技术对于促进农村种植业的机械化发展将起到一个表率的作用，同时也将带动除水稻种植以外，其他作物种植的机械化发展。

一 、水稻机械化插秧技术的特征

水稻机械化插秧技术与传统的手工插秧相比有自己的独特特征。

1.可以量化调节水稻栽插深度、株距和基本苗

水稻插秧机可以灵活地调节插秧的深度和株距。基本苗是由每亩水稻所插的密度和每个穴里所插的水稻株树所决定的。

2.液压仿形系统，能够避免损害已插秧苗

水稻插秧机具有液压仿形系统，能够随着水田表面和硬底层的起伏，不断调整水稻机械的状态，保持机械平衡与秧苗深度一致。与此同时，水稻插秧机还能随着土壤表面土质硬软的不同，保持机械般板一定的接地压力，避免产生强烈的壅泥排水，从而保护幼小的已插秧苗。

3.实行自动控制，机电一体化程度高

水稻插秧技术可以进行自动控制，采用的是机电一体化技术，具有可靠性、适应性和操作灵活性。

二 、采用水稻机械化插秧技术的优越性

水稻机械化插秧技术对农业的增产，农民的增收有很大的作用，它比起手工插秧，有着很大的进步和优越性。

1.大大改进了育秧方式

利用水稻机械进行插秧，采用塑料的软盘插秧，其中，当遇到比较小的秧苗时，可以带土进行移栽。秧本比可达到1:100，这样就大大减少了秧田。在播种时，育秧所用的秧盘是平底的，这使得农民或技术人员更加容易掌握播种的数量以及播种的深度。机械化水稻秧的播种用工少、成本低、效率高，更加适合大规模产业化经营。此外，机械化水稻秧还具有种苗质量好，操作较简便的特点。

2.大大提高了栽插质量

由于水稻机械化插秧技术可以量化调节水稻的基本苗、株距和深度，因此为实现水稻群体质量栽培控制奠定了良好的基础。此外，水稻插秧机械还具有液压仿形系统，可以随大田表面上下起伏，避免由于壅泥排水对秧苗的伤害，从而大大提高了插秧的质量，缩短了缓苗期，使发苗早，发苗快。

3.大大提高了种植水稻的效益

使用水稻机械插秧大大减少了育苗所用的田地，从而减少了用来浇灌田地的灌溉用水。并且，也大大地减少了用种量，减少了秧盘、营养土和地膜。最重要的是，它使农民减少了工作量，减轻了水稻插秧的工作强度。据统计，采用水稻机械插秧技术的农民，每亩可以平均增收50元以上，这样就大大提高了水稻种植的效益。

4.加快了农村多余劳动力的转移

水稻机械化插秧技术的应用，使得水稻作业的性能、作业的质量和作业速度都有很大的提高，因此减少了水稻种植对于劳动力数量的需求，因此，一部分农村劳动力可以转移到其他的行业。

三、水稻机械化插秧技术的要求

好的技术如果运用得当就能促进增收，如果不当则会带来很大的损失。要利用好水稻机械化插秧技术，必须做好以下几点。

1.做好前期育秧准备

做好前期的育秧准备，包括选择优质、高产、抗虫病害性强的水稻品种，做好选中、晒种、脱芒、药剂浸种、催芽、脱湿的处理。然后，做好充分的苗床准备，选择排灌性能好、运秧方便、便于管理的田地做水稻秧田。

2.做好播种准备

农民应该根据秧龄，参照当地的常规插秧时间，推算出适宜的播种期。铺放好育秧载体，然后在育秧载体上铺放床土，使床土水分达到饱和状态。最后根据水稻品种和当地农艺的要求选择适宜的播种量进行播种、覆土和覆膜工作。

3.做好种苗管理工作

在立苗期做好保湿工作，在遇到大雨时，要及时排水，避免苗床积水。在炼苗期，当秧苗达到2厘米左右时，要按时接膜炼苗。在秧苗三叶期以前，保持盘土或床土湿润不发白，做好水肥管理工作。并且做好病虫害防治工作，经常拔除杂株和杂草，保证秧苗纯度，以确保秧苗符合机械化插秧。

4.做好大田质量化要求和秧块准备

要将田块弄平整、田面弄整洁，做到上细下粗、上烂不实、泥浆沉实、水层适中。同时将秧块切成适合机械的标准秧块。

5.做好插秧作业

在插秧作业前，对机械进行前面检查调试，将空秧箱移动到导轨的一侧，再装秧苗。秧块要紧贴秧箱，不拱起，两片秧块接头处要对齐，不留间隙。插秧时做到深浅适宜，选择适宜的栽插行走路线。

四 、种植机械发展趋势

实现种植机械发展正在成为农业机械的一种趋势，我国目前正处于使用种植机械的初始阶段，半自动化种植机械将是我们今后关注的重点。当然目前种植机械也存在一些问题，比如说，种植的经济效益问题，这是制约我国种植机械化的核心问题。此外，育苗、栽培模式和种植机械的配合问题也是制约我国种植业机械发展的重要因素。我国必须加强对种植机械化的经济效益分析，寻找实现种植机械化的重要突破口，建立好育苗好、栽培和机械标准，向专业化研发与生产方向发展。

五、总结

水稻机械化插秧技术在农村的推广大大地提高了水稻的种植经济效益，提高了农民种植的积极性，农民需根据水稻机械化插秧技术的特点，做好插秧技术的准备，从而充分实现插秧技术的优越性。水稻插秧技术的推广使用带动了我国种植机械的发展，我国的种植业也将走向机械半自动化的方向。

参考文献：

第6篇：实习指导计划范文

刚才，*、*和*同志，分别传达了*、*、*等领导同志来唐调研时的重要讲话和*同志在市领导干部会议上的讲话精神。下面，我就学习贯彻中央和省、市领导讲话精神，讲三点意见。

一、要深入学习领会中央和省、市领导讲话精神，进一步坚定建设科学发展示范区的信心和决心

*同志于4月8日、9日在我市视察指导工作，深入到*和*线材有限公司、扣庄乡寺后村进行了走访，视察了迁安的城市建设，听取了河北省委和*市委的工作汇报，召开了有市委组织部、迁安市和市工商局等单位参加的座谈会。*同志对我市的建设发展以及前段科学发展观学习教育活动给予了充分肯定，并对我市开展深入学习实践科学发展观活动试点工作提出了更高要求。*同志离开*以后，*同志、*同志又分别到京唐港、乐亭县等地进行了考察调研，对*的工作都给予了高度肯定，对下一步*的发展提出了明确要求。刚才大家认真听取了中央和省领导的传达文件，从这几位领导同志的讲话来看，一方面对*非常重视、非常关心，另一方面也对*未来发展寄予了厚望，也就是说*“潜力无穷、前景无限、开拓创新、任重道远”。*同志对学习实践活动试点工作提了三个方面的要求，一要进一步确立建设科学发展示范区的理念，二要始终紧扣本地区本单位科学发展的具体实践，三要积极创新促进科学发展的机制。这三个方面的要求，非常准确，非常切合实际，是对我市开展深入学习实践科学发展观活动的一个更高定位，也是我们今后的努力方向。我们要按照这样的要求，切实提高对学习实践活动的认识，进一步明确责任，完善学习实践活动方案，通过开展学习实践活动，理念上要有新提高，实践上要有新突破，机制上要有新发展。同时，按照中央和省市领导的要求，市直机关要深入组织动员，抓紧把今天的几个文件精神传达到每个机关党员干部，为更好地开展下步活动打好基础。

二、要认真落实中央和省、市领导的讲话精神，在学习实践活动中起带头、做表率

市直机关是*科学发展的组织者、推动者，也是实践者，要把*建成科学发展示范区，市直机关承担着重大责任，要起带头表率作用。当前，发挥好带头和表率作用就是要体现在按照市委的总体部署和实施方案的具体要求，不折不扣地组织好深入学习实践科学发展观活动。一是深入学习要带头。要认真学好“三本书”、开展“三个五”等活动，努力做到先学一步，学深一层。二是分析检查要带头。通过分析检查，总结我们过去有哪些有利于科学发展的做法，还有哪些缺陷和问题，要认真分析，找出症结，找到解决问题的办法。三是解决突出问题要带头。要坚持从我做起，把解决问题贯穿于整个活动的全过程，针对各种突出问题，抓住关键、突出重点，一抓到底、抓出实效。四是健全体制机制要带头。工商局在前一阶段学习教育活动中，制订了一系列面向全民创业的政策、制度，得到了上级领导的高度肯定。完善体制机制主体责任在市直各个部门，特别是管理部门，执法部门，在这方面我们大有可为，也应该有新的作为。五是测评总结要带头。要在发动群众，依靠群众，充分调动群众的积极性上下功夫，认真研究，采取措施，更广泛地征求和听取群众意见，积极欢迎和自觉接受群众监督。六是创建活动要带头。市委已经下发了文件，号召全市各级各部门广泛开展创建科学发展示范单位活动。对于市直机关来讲，开展创建科学发展示范单位是一个重要的载体和平台，这也是我们践行科学发展观的一项重要活动，市直机关在这方面应该做表率。希望大家结合这项活动，把学习实践试点工作做得更深、更实，每个党小组，每个党支部、每个党委，都要把创建示范单位活动抓深抓实。

三、要切实按照中央和省、市领导的讲话要求，加强对学习实践活动的组织领导

第7篇：实习指导计划范文

【关键词】地铁车辆 制动设备 模块化设计

1前言

随着社会经济不断发展，交通运输行业发展水平快速提高，城市发展离不开交通。城市轨道交通基于运行速度快，方便快捷基础上，成为人们穿梭于城市间的交通工具之一。当下，模块化设计理念不断成熟，逐渐被使用于城市轨道交通车辆的设计中。一般而言，模块化水平高低直接体现出一个公司的设计能力，设计水平。在我国使用模块化设计时间不长，积累的经验也不多，在欧美等发达国家城市轨道交通车辆使用模块化设计已经很普遍。在发展过程中，我们应该不断创新研究，不断借鉴其他国家的成功经验，在总结经验基础上，不断优化模块化设计，使得设计水平提高，保障我国城市轨道交通运输水平。

2模块化设计的定义及意义

2.1模块化设计的定义

一般而言，模块化设计指的是将一些特定的组件，根据一定的原理和规律将其集合，并且可以成功的安装在一起。模块是一个标准或通用单元，模块结构具有典型性，通用互换性，兼容性，往往可以构成系列。就产品结构而言，模块化设计是特征尺寸模块化，结构典型化，部件通用化，参数系列化，装配组合化。模块化设计可以简化设计工作，提高工作效率，缩短设计周期，提高设计质量，简化制造过程，提高生产效率，降低生产成本。然而，我国模块化设计起步时间比较短，没有太多经验，但是在经济全球化的当下，各国经济联系紧密，这个时候就应该吸收技术，更新自我。

2.2制动设备模块化设计的意义

城市轨道交通车辆的制动设备安装在车下，空间狭小，安装不便，特别是业主的要求不同，不同城轨项目有不同的设备配置。经过了模块化设计，将制动系统中的主要设备部件、各类阀件进行局部集成，以提高设计的通用性，不断提升设计整体性水平，使得设计效益提高。在生产中，降低了安装工人的工作强度，提高了生产效率，降低了生产成本，保证了制造的精确性。模块化设计可以使单独的部件进行独立维修，大大缩短了维修的工作量，使维修工作简单化，减少维修占用时间。这相对于一些分散的安装而言，在不需要考虑配重的条件下，保障版块可以实现任意组成。通过该方式实现设置最优化。

3制动设备模块化设计的总体思路

车下制动设备模块化设计以车型及具体设计结构为依托，依据模块化、标准化的接口资料，设计适用不同接口资料的大部件同族产品。一般主要分成三个模块。第一个模块是风源模块。将安装支架、空气压缩机、空气干燥机、安全阀等集成为一个模块。第二个模块是制动控制模块。将制动控制装置、止回阀、截断塞门、压力开关等各类阀件集成在气路集成板上，成为一个模块。第三个模块是辅助控制模块。将副风缸、空气弹簧风缸、空气弹簧供风控制系统以及停放制动控制系统等组建成辅助控制模块。

4制动设备的模块化设计

4.1风源模块的设计

风源模块是一种融合模块，将空气压缩机、空气干燥机、油水过滤器、压力开关等供给和控制保护装置安装在支架上，形成集成的供风模块，给包括空气制动在内的所有需要压缩空气驱动的系统提供清洁干燥的压缩空气。该模块是通过 四个安装座固定在车体底架上，这样使空间布置更为紧凑且安装维修方便。

4.2制动控制模块的设计

制动控制模块是将制动控制装置、止回阀、截断塞门、测试点、压力开关等各类阀件以铝制气路集成板为基础，集成为一个模块。

制动控制模块的关键在于气路集成板。气路集成板是将原有管路连接改为在气路集成板上板式连接，将之前平置安放的元件变成立体中间安置，该安置方式能够节省空间。进行气路板设计时，要控制好设计要点：在气路板外侧，加装镶嵌了一层橡胶的箱盖，以满足防水的需要，保证气路板的密封。为了保障气路板洁净，需要防止异物进入气路板内。因为一旦有异物进入就会导致气路板内部气路堵塞，导致设备无法发挥出实际作用。因此，可以在气路板后侧安装上过滤器。在选择连接材质时，由于铝板的材质比较软，不能选择螺纹进行连接，这个时候的螺纹连接方式都是选择钢套嵌装方式，将攻好丝的钢套嵌装在气路板的出入口。

4.3辅助控制模块

辅助控制模块指的是将空气弹簧供风控制系统、停放制动控制系统和副风缸、空气弹簧风缸以及管路连接所需的截断塞门、过滤器、止回阀、双向阀、溢流阀、测试点等元件集成在一起安装在构架上，形成一个辅助控制模块，最后吊装在车体底架上。该模块设计要注意以下要点：（1）整个构架支撑强度必须得到保障。（2）辅助控制模块的安装是在构架角钢上开出安装孔，并通过紧固件安装在底架上，这样就可以方便后续的检查和维修。（3）如果辅助控制模块的构架为方钢，为了安装的方便，需在安装孔的侧面开工艺孔，以便于紧固件的安装。（4）为了方便维护检修，所有阀件应安装在车体的外侧，并考虑防石击，在阀件两侧加装防护板的措施。

5制动设备的模块化设计的优点

（1）通过模块化设计，压缩了制动设备间的安装检修空间，模块体积小，节省了车下空间，重量轻，减少了车辆自重。

（2）将日常检修操作的阀件安装在车体外侧易接近处，增强了设计的通用性，方便了日常的检修维护。

（3）制动设备模块为车下提前预装，由之前的仰视安装改为俯视安装，方便工人施工，改善了工作条件，提高了工作效率。

6结语

模块优化设计是当前发展一大趋势，也是很多设计公司正努力前往的发展方向。当前，我国国内有很多城轨项目的制动设备模块化设计都取得了一定成果，在研究发展过程中已经取得了良好成效。但还有一些缺陷存在，与国际先进企业例如日本川崎重工的发达水平还存在一定的差距，因此需要不断进行创新探索。

参考文献

[1] 殳企平.城市轨道交通车辆制动技术[M].北京：中国水利水电出版社，2011.

第8篇：实习指导计划范文

刚才，*、*和*同志，分别传达了*、*、*等领导同志来唐调研时的重要讲话和*同志在市领导干部会议上的讲话精神。下面，我就学习贯彻中央和省、市领导讲话精神，讲三点意见。

一、要深入学习领会中央和省、市领导讲话精神，进一步坚定建设科学发展示范区的信心和决心

*同志于4月8日、9日在我市视察指导工作，深入到*和*线材有限公司、扣庄乡寺后村进行了走访，视察了迁安的城市建设，听取了河北省委和*市委的工作汇报，召开了有市委组织部、迁安市和市工商局等单位参加的座谈会。*同志对我市的建设发展以及前段科学发展观学习教育活动给予了充分肯定，并对我市开展深入学习实践科学发展观活动试点工作提出了更高要求。*同志离开*以后，*同志、*同志又分别到京唐港、乐亭县等地进行了考察调研，对*的工作都给予了高度肯定，对下一步*的发展提出了明确要求。刚才大家认真听取了中央和省领导的传达文件，从这几位领导同志的讲话来看，一方面对*非常重视、非常关心，另一方面也对*未来发展寄予了厚望，也就是说*“潜力无穷、前景无限、开拓创新、任重道远”。*同志对学习实践活动试点工作提了三个方面的要求，一要进一步确立建设科学发展示范区的理念，二要始终紧扣本地区本单位科学发展的具体实践，三要积极创新促进科学发展的机制。这三个方面的要求，非常准确，非常切合实际，是对我市开展深入学习实践科学发展观活动的一个更高定位，也是我们今后的努力方向。我们要按照这样的要求，切实提高对学习实践活动的认识，进一步明确责任，完善学习实践活动方案，通过开展学习实践活动，理念上要有新提高，实践上要有新突破，机制上要有新发展。同时，按照中央和省市领导的要求，市直机关要深入组织动员，抓紧把今天的几个文件精神传达到每个机关党员干部，为更好地开展下步活动打好基础。

二、要认真落实中央和省、市领导的讲话精神，在学习实践活动中起带头、做表率

市直机关是*科学发展的组织者、推动者，也是实践者，要把*建成科学发展示范区，市直机关承担着重大责任，要起带头表率作用。当前，发挥好带头和表率作用就是要体现在按照市委的总体部署和实施方案的具体要求，不折不扣地组织好深入学习实践科学发展观活动。一是深入学习要带头。要认真学好“三本书”、开展“三个五”等活动，努力做到先学一步，学深一层。二是分析检查要带头。通过分析检查，总结我们过去有哪些有利于科学发展的做法，还有哪些缺陷和问题，要认真分析，找出症结，找到解决问题的办法。三是解决突出问题要带头。要坚持从我做起，把解决问题贯穿于整个活动的全过程，针对各种突出问题，抓住关键、突出重点，一抓到底、抓出实效。四是健全体制机制要带头。工商局在前一阶段学习教育活动中，制订了一系列面向全民创业的政策、制度，得到了上级领导的高度肯定。完善体制机制主体责任在市直各个部门，特别是管理部门，执法部门，在这方面我们大有可为，也应该有新的作为。五是测评总结要带头。要在发动群众，依靠群众，充分调动群众的积极性上下功夫，认真研究，采取措施，更广泛地征求和听取群众意见，积极欢迎和自觉接受群众监督。六是创建活动要带头。市委已经下发了文件，号召全市各级各部门广泛开展创建科学发展示范单位活动。对于市直机关来讲，开展创建科学发展示范单位是一个重要的载体和平台，这也是我们践行科学发展观的一项重要活动，市直机关在这方面应该做表率。希望大家结合这项活动，把学习实践试点工作做得更深、更实，每个党小组，每个党支部、每个党委，都要把创建示范单位活动抓深抓实。

三、要切实按照中央和省、市领导的讲话要求，加强对学习实践活动的组织领导

第9篇：实习指导计划范文

[关键词]脂肪干细胞;血管平滑肌细胞;血小板衍生生长因子;转化生长因子β1

[中图分类号]Q813.1 R622.4 [文献标识码]A [文章编号]1008-6455(2010)02-0215-03

Experiments of adscs induced into vascular smooth muscle cells

JIANG Wei1,CAO Qiang1,WANG Ji-hua2,FENG Xing-hua1

(1.Department of Oral and Maxillofacial Surgery,School of Stomatology,Fourth Military Medical University,Xi'an 710032,Shaanxi,China; 2. Department of Plastic Surgery,the Second Affiliated Hospital of Kunming Medical College, Kunming 650101,Yunnan,China)

Abstract:ObjectiveTo investigate the feasibility of ADSCs differentiating into VSMCs in vitro and to find the new source of seeding cells in constructing the tissue-engineered vessels.MethodsTo separate the cells from the original adipose stem cells by MACS and culture 14 days with PDGF-BB and TGF-β1.ResultsThe cells show "peak and valley" growth pattern specified as mature VSMCs and express the VSMC's markers.ConclusionADSCs were induced in vitro in specific environment,the cells show the significant characteristics of VSMCs and have the potentiality being seeding cells of construct the tissue-engineered vessels.

Key words: adipose-derived stem cells; vascular smooth muscle cells; platelet derived growth factor BB; transforming growth factor beta

脂肪干细胞由中胚层分化发育而来,具有类似于骨髓间充质干细胞的干细胞特性[1],可以向脂肪细胞、软骨细胞、肌肉细胞和成骨细胞分化[2],而且脂肪干细胞取材更方便、更容易获取。研究发现:体外培养ADSCs可表达肌源性标志物MyoD1 和肌球蛋白重链[3],体内实验也证明其表达α- 肌动蛋白[4]。本实验观察研究了脂肪干细胞在特定的诱导环境下,向血管平滑肌细胞分化的情况。

1材料和方法

1.1 主要试剂与仪器:FBS、M-199 培养基(Gibco公司,美国);TGF-β1(transforming growth factor, TGF-β1)、PDGF-BB(platelet derives growth factor-BB, PDGF-BB)(Sigma公司,美国);单克隆鼠抗人α平滑肌肌动蛋白(α-SMA,Dako Cytomation公司,美国);单克隆鼠抗人平滑肌肌球蛋白重链(SM-MHC,Chemicon公司,加拿大);单克隆鼠抗人Calponin、单克隆羊抗人SM22α(Abcam公司,美国);倒置相差显微镜(Olympus公司,日本);LSN-510 激光共聚焦显微镜(Zeiss公司,德国)。

1.2 ADSCs 分离培养与传代:脂肪组织由脂肪抽吸术获得,37℃摇床中0.075%Ⅰ型胶原酶消化PBS清洗的脂肪,60min,加入同体积含10% FBS的M-199 培养液终止消化。300×g离心10min,去上清,100目滤网过滤,加入10%M199培养液吹打均匀接种,恒温培养24h后PBS去除未贴壁的细胞。

1.3 免疫磁珠(MACS)细胞分选:胰酶消化法收集生长至融合的原代细胞,离心去除上清,加入5%BSA/PBS吹打均匀,200目滤网过滤后离心去除上清,加入CD34b和CD34fc,比例为100μl/108cells,4°C避光30min,加入5%BSA洗除未结合抗体,离心去除上清,加入5%BSA进行免疫磁珠分选,得到CD34+的细胞。

1.4 实验分组:分选出的CD34+细胞生长至融合后,酶消化法收集细胞,以2×104个/cm2接种于培养皿,实验组用加入含2.5ngTGFβ1、50 ng/ml PDGF-BB的5% M199培养液培养,对照组以5%M199培养液培养。

1.5 检测指标

1.5.1 常规培养并隔日换培养液每日观察细胞生长情况和形态特征变化。

1.5.2 免疫荧光检测:培养14天后,收集两组细胞,用乙醇及冰醋酸以99:1 比例固定15min,PBS漂洗,10%羊血清封闭30min,加入以0.1% BSA稀释的1:100 抗体:α-SMA、SM-MHC和Calponin,4℃过夜,PBS漂洗,滴加FITC标记相应二抗,37℃孵育30min,PBS漂洗,碘化丙啶衬核后,荧光显微镜下观察。胞浆内绿色荧光为阳性表达,细胞核为红色荧光。

2结果

2.1形态学:原代培养的脂肪干细胞贴壁后呈纺锤形或梭形,类成纤维细胞生长(图1A);MACS分选获得的脂肪干细胞生长呈纺锤形(图1B),诱导48h后,形态较对照组有所增大并有一定方向性(图1C),7天后呈现血管平滑肌细胞所特有的“峰-谷”样生长(图1D);对照组细胞形态呈梭形或纺锤形,类成纤维样生长,约5～6天可生长至融合。

2.2 免疫荧光检测(图2):分别取诱导生长14天的实验组和对照组细胞,制作爬片后进行免疫荧光检测,结果显示实验组表达血管平滑肌细胞特有的表面抗原标记物α-SMA、Calponin、SM22α和SM-MHC,对照组无阳性表达,IgG为不加一抗,只加FITC二抗的自发光图片。绿色为阳性表达,红色为衬染的细胞核。

3讨论

组织工程是目前对组织缺损修复的研究热点,但其种子细胞的来源一直是所要解决的关键技术问题。脂肪干细胞来源广泛、取材培养简单方便,并具有多向分化潜能,是组织工程目前研究的热点之一。原代及传代后的ADSCs均有较高的干细胞相关抗原表达,经过传代后,造血系和内皮系细胞的污染迅速降低,细胞成分得以相对纯化,此实验我们又通过MACS分选的方法分离出CD34+的细胞,使获得的ADSCs得到进一步的纯化。

在胚胎血管发生过程中,首先通过血管发生或血管生成的方式,内皮细胞延伸形成内皮细胞索,继而形成血管内皮细胞管,构成脉管系统的基本框架。随后,内皮细胞释放募集因子,募集周围间充质细胞向内皮细胞靠拢、贴附,包绕在管腔表面,形成最初的周细胞,然后在其它生长因子以及细胞间接触作用下,周细胞分化形成血管平滑肌细胞并增殖为多层细胞,管壁不断增厚,管腔逐渐延伸。在其过程中内皮细胞通过分泌PDGF-BB招募壁细胞前体细胞,PDGF-BB是间充质细胞强烈的有丝分裂原,促进其增殖[5-7];而TGF-β1是影响VSMCs 分化的最重要因子,此过程中分泌的TGF-β1加速了未分化的间充质细胞的增殖并向VSMCs的转化,具有抑制细胞增殖作用,并促进周细胞向VSMCs 分化的作用[7],因此我们选择了在诱导液中加入这两种生长因子。

血管平滑肌特异的细胞内标记物为α-SMA、Calponin、SM-MHC 和SM-22α[9]。Hirschi [10]认为,任何细胞的标记物都不是单一的存在于某种细胞,在其它种类细胞中都可能存在,某个单一的标记物表达不足以证实细胞向平滑肌细胞分化,如果同时检测多种标记物的表达,该细胞可基本认定为平滑肌细胞。

我们对实验组细胞进行了细胞形态、免疫荧光的检测,诱导后的脂肪干细胞表现出平滑肌细胞所特有的峰谷生长模式;表达平滑肌细胞的标记物α-SMA、Calponin、SM22α和SM-MHC,可以初步认定脂肪干细胞在模拟体内血管平滑肌细胞生长的环境下,向血管平滑肌细胞表型转化,为寻找新的组织工程种子细胞提供了新的思路。当然我们还需继续检测ADSCs分化的得到细胞是否具有血管平滑肌细胞的功能,为构建组织工程化血管提供新方法。

[参考文献]

[1]Zuk PA, Zhu M, Ashjian P, et al. Human adipose tissue is a source of multipotent stem cells[J].Mol Biol Cell,2002,13: 4279-4295.

[2]Daniele Peroni,Ilaria Scambi,Annalisa,et al. Stem molecular signature of adipose-derived stromal cells[J]. Experimental cell research,2008,314:603-615.

[3]Mizuno H,Zuk PA,Zhu M,et al .Myogentic differentiation by human processed lipoaspirate cells[J]. Plast Reconstr Surg,2002,109(1):199 -209. [4]Jack GS, Almeida FG, Zhang R, et al. Processed lipoaspirate cells for tissue engineering of the lower urinary tract: implications for the treatment of stress urinary incontinence and bladder reconstruction[J]. Urol, 2005, 174 (5): 2041- 2045.

[5]Hirschi KK,Rohovsky SA,D'Amore PA. PDGF,TGF-β,and heterotypic cell-cell interactions mediate endothelial cell-induced recruitment of 10T1/2 cells, and their differentiation to a smooth muscle fate[J]. Cell Biol,1998,141: 805-814.

[6]Lindahl P,Johansson BR,Leveen P,et al. Pericyte Loss and Microaneurysm Formation in PDGF-B_Deficient Mice[J]. Science,1997,277: 242-245.

[7]Hirschi KK,Rohovsky SA,Beck LH,et al. Endothelial Cells Modulate the Proliferation of Mural Cell Precursors via Platelet-Derived Growth Factor-BB and Heterotypic Cell Contact[J]. Circ Res,1999,84: 298-305.

[8]Grainger DJ,Metcalfe JC,Grace AA,et al. Transforming growth factorbeta dynamically regulates vascular smooth muscle diff erentiation in vivo[J]. Cell Sci,1998,111(Pt 19): 2977-2988.

[9]Kashiwakura Y,Katoh Y,Tamayose K,et al. Isolation of bone marrow stromal cell-derived smooth muscle cells by a human SM22 alpha promoter: in vitro diff erentiation of putative smooth muscle progenitor cells of bone marrow[J]. Circulation,2003,107(16): 2078 -2081.