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2019年6月24日下午，江苏省高校招生委员会召开会议，审议通过了2019年我省普通高校招生第一阶段各批次省录取最低控制分数线。会后，省教育厅召开了新闻会，通报了今年我省普通高校招生第一阶段各批次省录取最低控制分数线以及今年高考志愿填报等有关情况。
一、关于今年普通高校招生第一阶段各批次省录取最低控制分数线及高考成绩通知方式
第一阶段省录取最低控制分数线主要包括文科类、理科类的本一线、本二线，以及体育类、艺术类本科（公办、民办）线。为了有利于高校选拔人才，同时尽可能减少上线考生落榜，综合考虑划定各批次省录取最低控制分数线。
今年考生可以通过多种渠道获知高考成绩。6月24日20:00以后，考生可凭考生号和动态口令卡通过省教育考试院专设的网站（jseea.cn或gkcx.jseea.cn）、省教育考试院官方微信“江苏招生考试”(微信号：jszsksb)、“江苏招考”APP、“江苏政务服务”APP免费查询高考成绩，也可通过拨打声讯电话16887799查询成绩。
6月25日起，考生可凭考生号、身份证号、密码、动态口令卡登录省教育考试院门户网（jseea.cn）自行打印成绩通知单；不具备条件的考生也可至市、县（市、区）招生考试机构打印成绩通知单。
凡达到第一阶段填报志愿资格线的考生，可访问省教育考试院门户网，查阅“逐分段统计表”，可获知本人的成绩排名情况。
二、关于填报高考志愿工作
1．填报志愿时间
我省将在通知考生高考成绩、学业水平测试等级，公布符合各阶段填报志愿要求的逐分段考生人数、各批省录取最低控制分数线（仅限第一阶段填报批次）和填报志愿资格线后，分两个阶段填报高考志愿。
第一阶段填报志愿工作于6月27日至7月2日进行（截止时间7月2日下午17:00），填报本科院校志愿。具体包括：文科类、理科类提前录取本科院校（含军事、公安政法、航海、地方专项计划、乡村教师计划、其他院校），体育类、艺术类提前录取本科院校，文科类、理科类第一、二批本科院校志愿。其中，艺术类提前录取本科第1小批院校志愿须在6月29日17：00前完成填报。
另外，我省还专门设立了“自主招生、高校专项计划、综合评价录取”志愿填报专栏，其中南京师范大学等12所院校综合评价录取入选考生须按相关文件规定填报志愿。
第二阶段填报志愿工作于7月27日至28日进行（截止时间7月28日下午17:00），填报高职（专科）院校志愿。凡第一阶段未被录取且符合第二阶段填报志愿条件的考生均可填报。具体包括：文科类、理科类、体育类、艺术类高职（专科）院校志愿。
在每批次平行院校志愿（艺术类含传统志愿）录取结束后，未被录取且符合相应批次填报征求（平行）院校志愿条件的考生，须在规定的时间内自行上网填报征求（平行）院校志愿。
考生须在规定时间内凭考生号、身份证号、密码和动态口令卡网上填报平行院校志愿（艺术类含传统志愿）和征求（平行）院校志愿，并对自己所填报信息的准确性和安全性负责，不需要现场签字确认志愿信息。
2．填报第一阶段高考志愿的资格线
为加强对高考志愿填报工作的管理，提高工作效率，根据省各批次录取最低控制分数线，同时考虑到有关艰苦行业或专业、有关院校在省控线上生源不足可能降分录取等因素，确定我省第一阶段填报志愿资格线。
达到我省第一阶段填报志愿资格线的考生，应根据本人高考成绩和省招委会划定的各批次录取最低控制分数线等情况，准确把握高校及专业对考生选考科目等级和体检等方面的要求，结合本人报考意向和家庭经济状况等情况，慎重填好各批次高考志愿，考生填报高考志愿的有关要求已在今年的《江苏招生考试》（招生计划专刊）上公布，请考生注意查阅。
三、关于录取工作时间安排
关 键 词：运动生物化学；骨骼肌细胞；棕榈酸；胰岛素抵抗；电刺激；糖代谢；小鼠
中图分类号：G804.7 文献标志码：A 文章编号：1006-7116（2016）06-0129-06
Effects of electric stimulation on lipid rich insulin resisting the
sugar metabolism of skeletal muscle cells
PAN Hong-ying1，XU Xiao-yang1，JIA Zhang-zhi2
（1.School of Physical Education，South China Normal University，Guangzhou 510006，China；
2. Sports Science Research Institute of Guangdong Province，Guangzhou 510100，China）
Abstract： By using palmitic acid to incubate C2C12 cells， the authors established a model of lipid rich insulin resisting skeletal muscle cells， so as to observe the effects of contraction triggered by a certain intensity of electric stimulation on the cells’ sugar metabolism. The authors used different gradient concentrations of palmitic acid to incubate 5d differentiated C2C12 cells for 16h， measured glucose remaining amount and cell activity in the cell culture fluid of various groups， selected an appropriate palmitic acid concentration to establish a model of insulin resisting the cells， which was induced by such a concentration， then divided the experiment into 4 groups： a control group （C）， an electric stimulation group （EPS）， a palmitic acid group （PA）， and an electric stimulation + palmitic acid group （EPS+PA ）， applied an intensity of （15 V， 30 ms， 2 Hz） of electric stimulation for 60min， collected the samples and measured glucose remaining amount， AMPK-α2 mRNA and GLUT4 protein expression levels in the cell culture fluid， and revealed the following findings： 1） Comparing the group incubated with 0.5 mmol/L palmitic acid for 16 h with group C， LDH and MTT had no significant change （P>0.05）， glucose remaining amount increased significantly （P0.05）； 2） Comparing group PA with group C， glucose remaining amount increased significantly （P
Key words： sports biochemistry；skeletal muscle cell；palmitic acid；insulin resistance；electric stimulation；glucose metabolism；mouse
胰岛素抵抗（IR）是指胰岛素的外周靶组织对胰岛素的敏感性和反应性降低，导致生理剂量的胰岛素产生低于正常值的一种病理状态[1]。IR与葡萄糖代谢异常密切相关，因此改善胰岛素抵抗及葡萄糖代谢紊乱，是防治2型糖尿病及相关代谢性疾病的重要途径。骨骼肌作为机体最大的胰岛素靶器官和葡萄糖利用的主要外周组织，是IR发生的主要场所。研究发现，长期高脂饮食或短期脂肪酸大量输入，以及机体因增龄引起的退化，均可引起骨骼肌脂肪含量增加，导致出现富脂性胰岛素抵抗[2-3]。
电刺激是运动生理中常用的刺激方法，目前己广泛应用到与骨骼肌收缩有关的疾病预防和治疗中。电刺激对已发生胰岛素抵抗的骨骼肌细胞的作用如何，国内外相关的研究很少。因此，本研究以C2C12小鼠骨骼肌细胞为研究对象，利用饱和脂肪酸棕榈酸（PA）孵育诱导建立富脂性胰岛素抵抗细胞模型，电刺激引起骨骼肌细胞收缩，观察收缩对富脂性胰岛素抵抗的C2C12肌管的糖转运能力的影响，为下一步深入开展骨骼肌细胞胰岛素抵抗电刺激方面的研究提供参考。
1 材料与方法
1.1 C2C12细胞培养、分化
小鼠骨骼肌肌母细胞系C2C12细胞购自南方医科大学，DMEM高糖培养基（含10%胎牛血清），37 ℃、体积分数5% CO2培养箱中培养，细胞生长密度达70%～80%时将所有细胞用0.25%胰蛋白酶消化后，以2×105/mL密度种到6孔培养板中，待细胞单层覆盖培养板底面密度达95%左右，换成分化培养基（高糖DMEM，2%马血清，质量分数1%青霉素/链霉素）开始进行分化培养，每天换液，并从加入分化培养基开始计算分化天数。
1.2 PA孵育建立IR骨骼肌细胞模型
细胞分化5 d后，换成1%BSA的低糖无血清培养液孵育12 h（饥饿处理）。培养板每孔分别加入0、0.25、0.5、0.75、1.0 mmol/L浓度的棕榈酸（PA），孵育16 h，收取细胞和培养上清液。选取适当参数，建立IR细胞模型。
油红O染色：PA孵育后，加入质量分数10%中性甲醛固定30 min，PBS冲洗3次，每孔加入新鲜配制的油红O染液1 mL，室温孵育2 h，观察脂滴形成情况。弃去染色液，每孔加入1 mL质量分数4%的NP-40的异丙醇，反复吹打后每孔取出150 μL，按照南京建成生物工程研究所提供的脂质形成检测试剂盒说明测定脂质含量。试剂盒由普利莱基因技术有限公司提供。
1.3 实验分组和电刺激方案
饥饿处理后的肌管随机分为4组，对照组（C组）、电刺激组（EPS组）、棕榈酸组（PA组）、电刺激+棕榈酸组（EPS+PA组）。C组和EPS组用分化培养基培养16 h，PA组和EPS+PA组用PA孵育16 h成IR肌管。 随后分别对EPS组和EPS+PA组进行电刺激，强度设为15 V、30 ms、2 Hz，时间60 min，刺激结束立即收样；C组和PA组直接收样。测定相关指标。
1.4 细胞活性测定
细胞活力检测试剂盒（MTT法）测定细胞活性，用酶联免疫检测仪（美国，BIO-RAD公司）570 nm处测定其光密度值，计算细胞存活率。乳酸脱氢酶（LDH）活性定量检测试剂盒测定细胞膜完整性，440 nm波长处测光密度值，通过公式计算各组LDH浓度。试剂盒由南京建成生物工程研究所提供。
1.5 细胞培养液葡萄糖（G）剩余量测定
葡萄糖氧化酶-过氧化物酶法检测上清液中剩余葡萄糖浓度，酶标仪测定550 nm处光密度值，通过公式计算葡萄糖含量。在棕榈酸孵育结束前30 min加入100 nm的胰岛素（Ins）溶液或加入同溶剂的胰岛素对照品（除了不含胰岛素，其他溶液成分一样）刺激。
1.6 腺苷酸活化蛋白激酶α2（AMPK-α2）mRNA的测定
采用实时定量PCR方法测定C2C12肌管中AMPK-a2 mRNA水平，引物由上海生工生物有限公司设计，抗体由北京博奥森生物技术有限公司提供。Trizol法提取肌管总RNA，mRNA反转录合成cDNA，然后进行逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）。AMPK-α2上游引物5’-TCCAAAGTCAGCTATCTTAGCGTT-3’，下游引物5’-CGTGGATTACTGTCACAGGCATAT -3’。内参上游引物5’-TGATGTCACGCACGATTTCC-3’，下游引物5’-ACACTGTGCCCATCTACGAGG-3’。在管中加20 μL反应体系，Hema3200基因扩增仪上反应。以GAPDH为内参，计算目的基因的相对表达量。
1.7 Western Blotting 测定葡萄糖转运蛋白4（GLUT4）蛋白表达
收集细胞，加入裂解液，离心提取胞浆和胞膜蛋白。按照GLUT4蛋白检测试剂盒说明书和检测目的条带大小来配制一定浓度的分离胶和5%浓缩胶。兔抗GLUT4，AMPK，一抗、二抗孵育后，TBST洗涤膜。使用ECL试剂盒发光，显影，X线胶片压片曝光，扫描定量各条带的相对灰度值，β-actin为内参蛋白，“目的蛋白相对含量=目的蛋白灰度值/β-actin内参蛋白灰度值”。试剂盒由北京博奥森生物技术有限公司提供。
1.8 数据统计处理
SPSS17.0统计学软件进行处理。所有数据以“ ±s”表示，单因素方差分析检验各组数据间差异的显著性，P
2 结果及分析
2.1 不同浓度PA孵育后细胞活性和LDH活性变化
MTT法是检测活细胞的数量和代谢活力的经典方法，MTT值下降，提示活细胞数量减少，细胞生长受抑制。表1所示：低浓度（0、0.25、0.5 mmol/L）PA孵育16 h，细胞活性均增加，与0 mmol/L PA孵育相比，0.25、0.5 mmol/L孵育后MTT值虽有降低，却无显著性差异（P>0.05），0.75、1.0 mmol/L孵育后，MTT值降低显著（P
2.2 不同浓度PA孵育后C2C12肌管糖剩余量和脂质含量的比较
表2所示：16 h的PA孵育，浓度0.50、0.75和1.0 mmol/L上清中葡萄糖剩余量G与0 mmol/L相比显著增加（P
2.3 电刺激IR肌管后葡萄糖剩余量、LDH活性、AMPK-a2 mRNA的变化
表3结果显示：EPS组肌管培养液中葡萄糖剩余量明显低于对照组（P
2.4 电刺激IR肌管，引起GLUT4蛋白表达的变化
图2结果显示：与C组相比，PA组膜GLUT4蛋白和总蛋白表达显著性降低（P
3 讨论
3.1 富脂性胰岛素抵抗细胞模型的建立
研究骨骼肌富脂性胰岛素抵抗发生机制，建立相关的胰岛素抵抗模型尤为重要。分化后具有收缩功能的C2C12细胞，常被用做离体骨骼肌功能的研究。动物和人体实验表明[2]，无论是通过脂质灌注还是慢性的高脂饮食，引起血中游离脂肪酸升高，均可导致骨骼肌出现富脂性胰岛素抵抗。老年人易发生的胰岛素抵抗也与骨骼肌线粒体功能异常，产生肥胖和脂质堆积有关[3]。在引起胰岛素抵抗的脂肪酸中，又以长链饱和脂肪酸棕榈酸最为典型[4]，且不同浓度的棕榈酸对细胞的影响不同。在C2C12和L6细胞诱导分化前加入棕榈酸孵育，可影响肌细胞分化，但分化后再加入棕榈酸则不影响分化程度[5]。浓度为0.2～0.8 mmol/L的棕榈酸孵育L6骨骼肌细胞8 h，细胞活性不变，但对棕榈酸的吸收随浓度增加[6]。而0.8、1.0 mmol/L浓度的棕榈酸分别孵育到24和36 h，细胞活性出现降低[7]。也有研究发现0.75 mmol/L 棕榈酸处理分化4 d的C2C12肌管16 h，GLUT4 mRNA水平和糖摄入均降低[8]。
本研究选取1 mmol/L以下的4个浓度梯度，孵育分化5 d的C2C12肌管16 h，发现，高浓度（0.75、1 mmol/L）的棕榈酸孵育后，细胞活性明显降低，低浓度（0.25、0.5 mmol/L）的棕榈酸孵育不会引起细胞活性下降和膜损伤。各组上清中葡萄糖剩余量与对照组相比均显著性增加。在PA孵育结束前30 min加入100 nmol/L胰岛素溶液刺激后，低浓度（0.25 mmol/L） PA孵育的肌管葡萄糖剩余量与同浓度不加胰岛素刺激的PA组相比显著减少（P
3.2 电刺激对富脂性IR骨骼肌细胞葡萄糖代谢的改善作用
骨骼肌的收缩水平是底物代谢及转录事件的重要调节因子。不同的电刺激条件及强度会对骨骼肌细胞产生不同的影响[9]。Nedachi[10]认为40 V、60 mmol/L、2 ms、1 Hz的强度较适合研究C2C12肌管收缩反应时的代谢改变。Marotta[11]等以50 V、100 mmol/L、30 ms、3 Hz的强度电刺激C2C12 肌管90 min，发现肌管中糖原分解增加，糖原代谢相关酶活性改变。本研究前期研究发现，15 V、60 mmol/L、30 ms，3 Hz的强度刺激分化5 d的C2C12肌管120 min，细胞膜没有明显损伤，且能通过AMPK途径增加肌管糖摄入和糖转运[12]。因此，本研究仍采取同样的强度，观察电刺激对富脂性IR肌管的影响。
结果显示：电刺激60 min后，各组间细胞活性和细胞膜完整性无显著性差异（P>0.05），即此强度不会对细胞造成损伤，适合对富脂性IR细胞的研究。但电刺激IR组肌管培养液中的葡萄糖剩余量明显低于对照组（P
3.3 电刺激对富脂性IR骨骼肌细胞糖代谢相关因子的调控
GLUT4是骨骼肌葡萄糖转运的主要转运因子，其在细胞膜上载体的数量与细胞葡萄糖最大转运能力呈正相关关系[13]。胰岛素和收缩作用均可以促进GLUT4 从细胞囊泡内向细胞膜的转运。然而，两者调节葡萄糖转运则是通过不同的信号途径完成的[14-15]。在本研究中，胰岛素抵抗组GLUT4膜蛋白和总蛋白表达量都明显下降，电刺激组总GLUT4蛋白表达量变化不大，但肌膜GLUT4蛋白表达量却显著性增加，提示胰岛素抵抗时，骨骼肌肌管GLUT4 膜蛋白转位减少，导致细胞内总 GLUT4蛋白贮存量降低。电刺激诱导的收缩可以促使骨骼肌细胞 GLUT4转位，使骨骼肌细胞膜上转运蛋白含量增加，从而增加机体转运葡萄糖能力。在体研究也发现，当机体处于胰岛素抵抗或2型糖尿病状态时，骨骼肌中GLUT4蛋白表达明显低于正常大鼠，而GLUT4的过表达则可以明显改善胰岛素抵抗的症状[16-17]。这与本研究的结果相吻合，其机制可能与运动激活细胞内的能量开关分子――腺苷酸活化蛋白激酶（AMPK），后者进而促进GLUT4转位有关。
为探讨收缩运动对胰岛素介导的葡萄糖摄取的变化，本研究检测了骨骼肌收缩中对能量变化最敏感也最易被激活的AMPK-α2亚基。发现胰岛素抵抗组AMPK-α2基因表达下降，而电刺激可引起其表达上升，提示适当的电刺激改善了胰岛素抵抗造成的AMPK-α2表达下降。近来有关 AMPK在骨骼肌葡萄糖转运中的机制仍未明了。有研究认为，无论低强度或是高强度运动，AMPK-α2基因的缺失并不影响GLUT4 的转位[18]。也有研究认为，AMPK-α2是胰岛素刺激下肌糖原合成的重要因子[19]，运动训练激活AMPK-α2表达，可明显改善高脂饮食导致的胰岛素抵抗[20]。结合本研究实验结果，可以表明，不论是动物实验还是细胞研究，收缩运动均可激活胰岛素抵抗骨骼肌AMPK-α2表达，调节糖代谢。但是阻断AMPK-α2的表达，电刺激胰岛素抵抗的骨骼肌细胞，是否影响GLUT4的糖转运，尚需进一步实验验证。
棕榈酸（0.5 mmol/L）孵育分化5 d的C2C12细胞16 h，可诱导其胰岛素抵抗的发生。15 V、30 ms、2 Hz的强度电刺激60 min，可以提高富脂性IR骨骼肌对葡萄糖的吸收，增加AMPK-α2mRNA和GLUT4蛋白的表达，有助于改善富脂性IR骨骼肌细胞的糖代谢。
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培养对学科的兴趣，因为，对感兴趣的东西，很自然会觉得有吸引力，就自然会保持注意力的高度集中，而兴趣产生于需要。因此，要端正学习的态度，明确学习的目的，使自己有较强的求知欲，那么，对不感兴趣的东西，除了去努力培养兴趣外，关键是发挥意志力的作用。
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此前，我的左手正护着一堆摇摇欲坠的课本，右手使劲地向后拽住课桌一角，企图越过一级该死的台阶，结果这笨重的课桌却因为我一脚绊在讲台下而与我做着方向相反的功。显然我单薄的力量无法驯服这桀骜不驯、一意孤行的课桌，我眼睁睁地看着它向讲台英勇地扑去，仿佛听到它扑通栽倒的声音，仿佛看到书本哗啦啦飞满一地的场景，我的脑子里忽然闪过一句古文：“共工怒而触不周之山，天柱折，地维绝，天倾西北……”这，这，这……后果太严重了！说时迟那时快，我怀着飞蛾扑火般壮烈的心情扑向了课桌……于是一个滑稽怪异的画面出现了：我身体呈90度趴在一脚悬空的课桌上，双手紧紧抱住桌肚，下巴死死抵住像泥鳅般想挣脱的课本，脸涨成绛紫色，眼神哀怨，神情凄苦，嘴里微弱地嗫嚅着：“帮帮忙。帮帮忙……”几个同学冲上来帮我解了围。我立马谄笑道：“谢谢啊，真是太感谢了！”
你以为这是在拍苦情戏吗？NO，我们只是在换座位罢了。老师说，为了照顾同学们的眼睛，每个周末晚自习后要换座位，一组一组换，从右往左轮过去。老师耍我们搬桌子之前先搬书，可大家是能偷懒则偷懒，不能偷懒创造条件也要偷懒，于是就发明了连书带桌一起搬的方法。只见全班同学吭哧吭哧地搬课桌，而我看起来却像是被课桌搬。
人搬到哪，桌子也搬到哪，不离不弃，相追相随。于是，大伙都对自己的课桌产生了浓厚的革命感情。课桌就像我们的另一半，不论它是平整光滑如新。还是疤痕交错沧桑古旧，我们在开学时跟了它，就只能一直跟着它。用一句话来说：我愿意它成为我的课桌。从今天开始相互拥有、相互扶持，无论是好是坏，富裕或贫穷，疾病还是健康都彼此相爱、珍惜，直到毕业才能将我们分开……
我们每个周末带着课桌从教室这一隅泅渡到那一隅，每天趴在它上面浴血奋战、东征西讨，只为与题目决个高下，或者偶尔趴在它上面睡得昼夜颠倒，留下一摊口水……它们知道我们的秘密，理解我们的悲喜，目睹我们的晨昏，也忍受我们的寂寥。
正因为对课桌有了感情，于是课桌就被我们同化了，即有什么样的桌子就有什么样的主人。比如：
周妞妞在自己的桌面上用铅笔写了满满一桌的蝇头小楷“顾小北顾小北顾小北……”她是小四的忠实书迷。曾经花两百多块买了一本珍藏版的《爵迹》。她还经常没事写一些忧伤的诗，精致倒是精致，我却是看不懂的。
小芳的桌子上写了高考倒计时。我笑她：“咱们还有一年才高考，你急什么？”她正气凛然地说：“我们离高三的日子，不远了！”她的桌上还写了几行让我触目惊心的话：“做人要对得起自己的良心。你到这里来读书，没读好，就是对不起自己的良心！”坐在她旁边，看着她看完一本又一本参考书，做了一本又一本笔记，背完一个又一个知识点。我每天只能忏悔：“良心啊良心，我对不住你……”
溜溜的课桌是一个典型的兼容并包的神奇地方：课本、草稿纸、牛奶盒、废纸巾、瓜子壳等，什么都有。我觉得如果她在桌肚里铺上一个窝，就可以给老鼠接生养宝宝了。
Shopping在桌角堆了一堆小山似的书，每天就躲在书堆下面疯狂地做数学题，导致她的地理分数连她数学分数的零头都没有。她在课桌另一角贴了一张花了一节地理课手绘的湖南地图，这是她一心想要在毕业后去的地方，目的是去吃那里的臭豆腐。我对她的胸无大志感到无话可说。
辰辰的课桌右边贴了一张课程表。每当我问：“下节什么课？”她总会温婉地告诉我答案。她的课桌常年整整齐齐，井然有序，纤尘不染，就如她的人，细腻柔和，典型的江南女子。
而我的课桌，可谓是容貌常新。
记得刚开学时，我命中注定的这张桌子上贴着一张纸条，上面写着一句话：人生就像刷牙，左手杯具右手洗具。我当时感慨万千：坐这张桌子的前辈该是经历了多少凄风苦雨。才能写出这么有深度的话啊！可是，他已是苦媳妇熬成婆了，而我们这一批人，还得慢慢熬啊熬……
对自己的高中生活哀悼一番后，我撕去前人的痕迹，准备留下自己的专属印记。我用铅笔精雕细琢了两个字：许嵩。再画一个爱心，就对着它傻笑了大半节课。《宿敌》刚出来时，我在课桌上写歌词，一个字一个字，满满的都是欢喜。有时看小说看到精彩处，我也会随手在课桌上记下美丽的诗句：“陌上人如玉，公子世无双”“轻风凉夏闲笔意，风流风华皆是他”“自能窥宋玉，何必恨王昌”……