坚持的故事精选(九篇)

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第1篇：坚持的故事范文

做股票就是这样，讲究随机应变，还有很多朋友在讲一件事，就是拿不住票，比如咱们之前提示的002362汉王科技，该股是上周四提示低吸的，到现在涨幅都38%，但是出局较早盈利也不多。

对于趋势股应该怎么办，这里简单的讲一下，如果是趋势股的二次起涨点，比如汉王科技，低吸在十日线区域，理论上只要不跌破十日线就可以拿一拿，如果股价继续收盘在五日线上方，则表示该股仍然很强，则可以继续持股不动。

什么时候出局，首要条件就是滞涨就走，或者是连续大阳线后股价脱离短期均线较远则考虑出局，比如该股上周五再次涨停后今日上攻就具备了高抛的条件。

其实做趋势股很简单，大家掌握几个要点就行了，由于本人还需要实时带盘，所以对于每一只个股的跟踪恐怕不会很及时，所以有时候还需要大家自己把握下。

总之，咱们要求的是低吸在起涨的位置，止损位也就设在咱们的进场点。

说了这么多，明白了举手下。

神农基因：获自然人曹欧劼举牌

神农基因公告，截至8月31日收盘，股东曹欧劼通过集中竞价、大宗交易方式，合计增持公司股份5120.81万股，持股比例达到5%，触及举牌线，并存在继续增持的可能。

丰林集团：实控人的一致行动人增持公司股份

丰林集团（601996）公告，公司实际控制人刘一川之一致行动人刘一暐8月31日通过集中竞价交易增持了2万股，占公司总股本的0.0021%。

第2篇：坚持的故事范文

长期盘整的股票不买

长期盘整、不随大盘涨跌，意味着无庄家或撤庄后的股票。这种股票往往前一阶段历史有放天量暴涨的情况，正因为该股无人照顾，只能长期盘整。对于这类比较难对付的庄股，投资者宁可放弃一千，不可进入一个，应该适当回避。

二、权个股坚决不买。

除权是市场主力逃离的另一个机会，比如一只股从3元炒到20元，很少有人去接盘，但它10送10除权后只有10元，价格低了一半造成了价格低的错觉，人们喜欢贪便宜买低价，一旦散户进场接盘，市场主力却逃得干干净净。如果大除权后又遇到天量，更是绝不可以碰。

三、利好公开的股票坚决不买

利好公开的股票公开的股票高不可攀，价格坐上火箭。庄家的投资机构见所有散户进去，便立刻反向操作，大规模洗盘，砸到散户割肉出局为止。

公开利好几乎没有一次使个股和大盘上涨。不管大盘还是个股，听到利好出现或传闻的利好兑现，不要犹豫不决，先退为主。

四、基金重仓的个股坚决不买。

因为基金账户不能隐瞒，一季度公布一次。基金不坐庄，有盈利就跑。当然这个理论有时间性。牛市一般可以忽略不计，牛市个股普涨，基金不会抛售。熊市里基金溜之大吉，散户全部被套，所以熊市时基金重仓坚决不买。

五、放过天量的股票不要买

天量往往是做庄机构用利好消息在一天之内把所有或大部分筹码一天派发给听到消息的散户，有句话为“天量见天价，见了天价回老家”，非常形象。另外股市高手往往都是“天不怕地不怕，就怕成交量放大”。放天量一般是市场主力开始逃离的信号。如果投资者确实对放天量的股票感兴趣，也应该等一等，可以在放天量当天的收盘价上画一条直线，如果以后的价格碰到这条线，倒是可以考虑买进的。

六、有大问题的个股坚决不买。

受管理层严肃处理的先不进去，先观望一下再说。问题股如果出现大幅上涨，则可以肯定地认为是机构在炒作。但是，这些股票或者面临监管，或者会出现资金链断裂，风险巨大，散户股民驾驭不了，不值得去冒险。

第3篇：坚持的故事范文

员工持股一般可以分为投资型、激励型、福利型三种。在我国，员工持股本应是以完善企业治理结构为目的，通过企业股权结构的改变，使企业绩效得到提高，这是符合企业股东利益的。也就是说应以激励型导向为主建立员工持股计划。而实际实行的员工持股计划，一般是以配送或低价出售的方式转让给企业内部职工，因此有过分的福利化倾向。“广洒胡椒面”起不到应有的作用。

2　股权分散或股权过于集中的情况依旧存在

在有些实行合作制的企业里，平等出资，共同经营，“人人拥有平等的投票权”，常会使企业的决策权相对分散。难以有效地做出决策，起不到激励和约束作用。有一家苏州企业在改制过程中实施了员工持股，全院200余名职工全部拥有股份，并且差距不大，改制的推进很顺乱但是几个月后就出现了决策不畅，甚至达到了几乎没有决策就可以通过的地步。

另一个极端是员工持股比例过高，又会强化“内部人控制”，并对外部股东形成歧视。内部股东利用“内部人”拥有企业大量信息的优势，为自己牟取好处。造成内部股东的道德风险。同时员工过度持股会再次形成企业封闭的产权体系，严重时会导致企业产权凝滞，影响企业的长期发展。常州某改制民营企业，股权集中在初始改制企业元老的36人中，这对于股权而言还不算非常集中的情况，但是一样有企业股东群体与非股东群体自然形成对立的局面，因为非股东群体常常对决策层的“高压内部人控制”表示不满，从而严重影响了生产经营。

3　出资能力不足与认股资金来源问题普遍存在

我国员工工资普遍偏低，员工积存资金有限，难以一次性支付认股资金，导致很多企业在实施员工持股计划时不断退缩与妥协，员工持股范围不断缩小，客观上起不到集资、激励的作用。美国为推行员工持股计划采用了贷款扶持等多种手段，而在我国通过向银行贷款缴纳认股资金却有一定的困难。主要原因是银行要考虑贷款风险，许多企业经营前景不明，不符合贷款条件。

在实践中经常遇到员工想持股却买不起的尴尬。广州市某设计院属于国内高端设计院，员工500余名。固定资产存量也比较多。在改制过程中，办公大楼评估价值很高，因为该办公地点对该院而言具有多年积累下来的品牌价值，所以，不能因为改制而搬迁或者上缴。在增资扩股过程中，仅仅因为购买办公大楼而产生的持股职工人均指数就达到数万元以上，出现过导致改制暂时停滞。

第4篇：坚持的故事范文

渴望暴富

女白领迷上炒股

2012年6月，女白领林曼随闺蜜贾玲玲去澳大利亚墨尔本度假，她俩住在贾玲玲的私人别墅里：前后大花园，桂花、玉兰、玫瑰花连成片，花团锦簇中还有秋千架、游泳池。林曼一边参观一边啧啧赞叹，羡慕不已。贾玲玲告诉她在墨尔本200多万就能买一套200平米的独立别墅，而且还不像国内限定房屋的使用权年限，劝林曼也在国外买套房子，自住、投资两不误……

旅行结束，林曼的心也彻底乱了：虽然自己也过上了有车有房的生活，但和闺蜜比起来还是差了一大截！一种强烈的冲动撞击着她的五脏六腑，她实在也渴望过过闺蜜的那种优质生活！时年30岁的林曼是四川邛崃人，父母都是普通工人，林曼在成都一家外企上班，薪水优厚。她的丈夫苏兴东在成都经营火锅店，是重庆人。婚后两年，两人在成都市中心按揭了一套120平米的房子，购置了一辆北京现代，儿子房子车子都有了，林曼一度觉得自己过得还算幸福，但自从见识了闺蜜的优质生活，林曼的心态发生了变化。

林曼每月工资有七八千，苏兴东的火锅店每月平均也能进账两万多，虽然两人收入还不错，但是每月开销也很大，还有房贷的压力。而她和苏兴东的收入几乎是固定的，两边的家庭也帮不上什么忙，要实现在国外购置别墅的愿望，除非有别的进钱的道儿！为多挣钱，林曼努力工作，还利用业余时间去做兼职，但这种赚钱方式对于动辄几百万的别墅来说无异于杯水车薪！

2012年7月初的一天，林曼听身边的朋友说有人靠炒股赚了好几百万，正为找不到发财捷径的林曼动心了。7月18日，此前从未涉足股市的林曼也去证券公司开了户，并购买了厚厚一沓炒股的书籍，恶补理论知识，一有时间就在财经频道追看专家股评。不仅如此，林曼还加了好几个炒股QQ群，在QQ群里，林曼称自己是个炒股新手，希望群里的高手能多多指点自己这个“菜鸟”。最初，她比较谨慎，只拿出两三万元试水。一次，林曼在一个群友的指点下买了一支药业股票，赚了1万多元。尝到甜头后，林曼的心渐渐不安分了，胆子也大了起来，开始十万八万地炒。

自从迷上炒股后，林曼几乎到了“走火入魔”的地步。早上醒来不刷牙、不洗脸，第一件事就是把电脑打开，看看股票行情，午睡都不敢休息，一直盯着屏幕，几乎从开盘到收盘，都没离开过电脑。为了炒股方便，林曼干脆把四岁的儿子送到邛崃给父母照看。每天晚上10点多，苏兴东从火锅店回到家里，发现林曼还趴在电脑桌前，看股票走势，开口就向他抱怨自己买的股票又跌了多少。

掉进陷阱

200万被蚕食殆尽

或许是运气不太好，林曼虽然有赚有赔，但赔的总是比赚的多。每次炒股亏了，林曼总会在群里跟群友们抱怨，说自己按照炒股书籍的理论操作，买的都是行业内规模数一数二、净资产优良，财务报表上盈利能力都很强的企业股票，怎么还是不挣钱？苏兴东见妻子因为股票整天唉声叹气，安慰她没有炒股的命，劝她不要再炒股。

就在林曼因为股票郁闷之际，2014年5月的一天，有个网名叫“炒股高手”的主动找林曼私聊，“炒股高手”自称叫王鸿飞，已有十多年的炒股历史，靠炒股从草根变成了千万富翁。王鸿飞还向林曼透露，说自己一开始炒股也跟她一样，10次炒股9次都是赔，直到后来购买了一款名叫“金宏点金”的炒股软件，靠着这款炒股软件，他在股市开始一路高歌，最终跻身千万富翁的行列。

林曼半信半疑，问王鸿飞：“什么炒股软件这么神奇啊？”王鸿飞介绍道：“‘金宏点金’炒股软件是利用金宏证券行情分析系统选出的股票，可分析股票K线图，并预测何时买入、何时抛出，这款软件不同于其他的炒股软件，可享受导师实盘指导，一周内获利30%以上，所以这款软件又被广大股民们称为‘炒股神器’。”王鸿飞还将自己在别墅里的生活起居和开奔驰的一系列照片发给林曼看，说别墅和奔驰都是靠炒股软件赚来的。王鸿飞还建议林曼先进公司的炒股群了解一下情况再决定是否购买。林曼决定看看效果是否真如王鸿飞说的那样神奇，于是加入了王鸿飞推荐的炒股QQ群。

加入群里后，林曼看到这个群每天早上都会推荐若干支股票，群主声称都是利用“金宏证券行情分析系统”选出的股票，而这些股票短线都表现不错，甚至接连有股票冲上涨停，再加上群主经常统计“某某股票自推荐来累计上涨50%……”通过一段时间的观察，再加上之前有王鸿飞的现身说法，虽然这款炒股软件的价格高达1.98万每年，林曼还是掏钱购买了。

买了炒股软件之后，销售人员让林曼加公司的一位导师为好友，导师接连向林曼推荐了几支股票，林曼按导师的建议买进一支科技股，仅隔几天，就赚了5000多。2014年7月的一天，林曼跟导师商量，说自己在2013年购买了3万股“xx重工”的股票，在九块多的价位刚买入，价位就不断走低，一直跌到现在的五块多，她有点熬不住了，想抛掉。导师预测股市即将回暖，建议她再观望一阵子。

2014年8月初，股市行情一改连续多年的颓势，上证指数就上涨了10%，不少个股上涨幅度超过20%，林曼发现她购买的那支股票正在持续上涨，她更是庆幸听了王鸿飞的建议购买了炒股软件，不然这次就亏大了，于是对王鸿飞说了一箩筐感谢的话。然而，此后林曼按照导师推荐的买了几支股票，不但没有获得巨额盈利，反而因为推荐的股票多数下跌而出现大幅亏损。林曼跟王鸿飞吐槽，王鸿飞劝林曼再多花点钱，可以换一位更高级的“导师”。于是林曼又花了两万元，换了一个更高级别的导师。

2014年10月初，导师推荐给林曼一个名叫“创投金融网”的炒股网站，称这是一家香港公司，提供远程开户的服务，开户后可以炒A股所有的股票。和真实股票不同的是，这种在网上平台炒股，可以买涨赚钱，也可以买跌赚钱（做空），同时可以像股指期货那样T+0交易，还可以像期货那样采用保证金交易的方法，实现以小博大的杠杆获利，资金杠杆最高可达到100倍。同时，这家网站还提供“模拟盘”供投资者先熟悉一下操作方法。林曼决定尝试一番，并用模拟账户试验了一个多月，发现确实很容易获利，于是拿出5万元开了真实账户。

2014年12月的一天，林曼和王鸿飞在网上聊股票的事情，王鸿飞告诉林曼自己新近根据导师的建议，在网上投了200万元购买“创投金融网”的“虚拟股票”，没想到仅仅一个多月就翻番赚了200万，并将盈利截图发给林曼看。见王鸿飞一个多月居然赚了200万，林曼眼红急了。王鸿飞分析2014年的股市有史无前例24个连续涨的“超级大牛”，8月底出现六连阳盛况，11月28日的深沪两市交易额超过7000亿人民币，创下人类有股票市场以来的一个最高纪录，牛市开启已无任何悬念，可能还有一涨行情！

王鸿飞的分析让林曼又重新看到了希望，她决定也投200万购买“虚拟股票”，到时就能赚一倍，这样她在国外买别墅的梦想就能实现了。然而，200万不是小数目，林曼手里的全部积蓄加起来也不过30万元，于是，林曼鼓动老公想办法去借钱，却遭到苏兴东的坚决反对。

事已至此，林曼只好将手里仅有的30万元全部买了“虚拟股票”，投资半个多月，30万元变成了40万元，净赚10万元。眼巴巴看着“虚拟股票”一路飘红，林曼心急如焚，只好自己硬着头皮想办法筹措资金。此后，林曼瞒着丈夫向大姐、二姐、同事以及闺蜜借款70万元，透支了30万元的信用卡，又借了30万元的高利贷，还向做药材生意的表哥借了40万元，许诺两个月之内本利归还其50万元，再加上之前的30万元，一共200万元全部用来购买“虚拟股票”。

然而，林曼没想到，真实账户的交易速度极慢。有时候，林曼看准某支股票要涨，下单后却迟迟不能成交，等到成交时，价格和当初看见的相去甚远，再加上杠杆放大效应，不到一个月，林曼的噩梦来临了。她惊骇地发现自己购买的200万元只剩下5万多元，林曼气坏了，想找向自己推荐股票的导师理论，却发现自己被对方拉黑了。当初极力向她推荐“炒股软件”的王鸿飞也退出了炒股群，也把她拉黑了，而“创投金融网”的网站也已经打不开了，林曼这才意识到自己陷入了一个可怕的骗局，赶紧报了警。事已至此，林曼只得硬着头皮将自己被骗200万的事情告诉丈夫，听说妻子因为炒股被骗去200万，苏兴东险些当场晕倒！

彻底沉沦

劫杀富婆无归路

随后，警方介入调查。原来，林曼陷入了一场连环骗局。由骗子公司先派出一个人混入炒股QQ群寻找目标，然后利用对方发财心切的心理伺机引诱对方购买所谓的“炒股神器”，再一步步设下圈套让目标购买“虚拟股票”。而这种“虚拟股票T+0”交易平台，其实是一种违法的骗术，投资者炒的股票根本没有到达沪深交易所，而是被网站的后台公司截走，形成公司和投资人之间对赌涨跌。投资人亏钱就意味着这家公司赚钱，而这样的公司通常会采用“延迟下单指令”、“误导交易走势”等方法，故意导致投资人亏损，钱就流入了这些公司手中。警方还无奈地表示由于犯罪分子隐藏得很深，因此维权困难……

自知理亏的林曼以不愿连累丈夫为由，向苏兴东提出离婚。虽然很气恼妻子的鬼迷心窍，苏兴东还是决定和妻子共同面对。之后，苏兴东变卖了车子和家里所有值钱的东西，并将火锅店盘了出去用于还债，然而，这只是杯水车薪。面对不停上门讨债的债主，夫妻俩除了哀求宽限束手无策。

2015年2月的一天，不堪重压的林曼提出到停有好车且没有摄像头的地方绑架有钱人，勒索巨额财物，然后想办法移民到外国去。起初，苏兴东坚决不同意，林曼却表示只有这样才能为如今鸡飞狗跳的人生止损。经不住妻子一再劝说，苏兴东最终同意了。打定主意后，两人准备了一圈红色纤维绳、两副墨镜、一把仿制手枪等作案工具。随后，两人开始在成都一些富婆和款姐出没的美容院、别墅等场合寻找抢劫对象。

3月2日晚上9点左右，在春熙路一家高档美容院踩点的林曼发现一个打扮时尚的女子驾驶奥迪Q7越野汽车来到美容店消费。两人决定等候该女子出来。晚上11点，停车场上只剩下了女子的越野车，林曼觉得这简直就是天赐良机！没多久，女子一个人从美容店出来后，用遥控钥匙打开车门，刚上车还未来得及锁门，假装打电话的苏兴东迅速靠近车并顶住驾驶位车门阻止女子下车。随后，苏兴东持手枪制服女子，威胁女子从驾驶位爬到后座上，林曼则进入驾驶位置负责开车，并戴上墨镜以防摄像头拍到。

在此期间，女子多次表示可以给所有财物，恳求林曼、苏兴东不要加害自己，途经加油站、收费站时，由于苏兴东持枪威胁，女子一直没有任何反抗或呼救。途经银行时，林曼检验了女子说出的密码完全正确，并发现卡内竟然有300万元巨款，但ATM机每天最多只能取两万元，担心放走女子她会报警并冻结存款，林曼和苏兴东决定将其杀害。

待车辆行驶到简阳的一处僻静路段时，苏兴东取出事先准备的纤维绳将女子双手反绑在身后，然后和林曼一起用皮带将女子勒死。勒死女子后，由林曼继续开车逃跑。也许是女子临死前怒目圆睁的样子让林曼感到恐慌，由于情绪不稳操作失误，车子开出没多远就与撞到了路旁的马路牙子上，随后，两人仓皇弃车而逃。

2015年3月8日，警方在苏兴东重庆乡下的老家将苏兴东和林曼抓获。据警方调查，被苏兴东、林曼杀害的女子名叫汪雅娴，现年35岁，成都人，是一家服装公司的CEO。目前，此案正在进一步审理中。

（文中人物均为化名）

第5篇：坚持的故事范文

    根据《证券法》的规定，投资者持有一个上市公司已发行的股份的百分之五后，通过证券交易所的证券交易，其所持该上市公司已发行的股份比例每增加或者减少百分之五，应当依照规定进行报告和公告。

    首先，这里的“持股”包括直接持有和间接持有。间接持有包括以亲属名义或者以合伙的名义的购买的股票的持有和两个有控股关系的投资者合计持有。

    1、公告时间。投资者持有一个上市公司已发行的股份的百分之五后，通过证券交易所的交易，其所持该上市公司已发行的股份比例每增加或者减少百分之五时起三日内，向国务院证券监督管理机构、证券交易所作出书面报告，通知该上市公司，并予以公告。

    2、禁止行为。在报告期限内和作出报告、公告后二日内，不得再行买卖该上市公司的股票。这里的“二日”为公告后二日，因此，在自公告之日起五日内都不得从事该上市公司股票的买卖。

 

第6篇：坚持的故事范文

一、我国上市公司国有股减持的实践

面对国有股减持、全流通这一历史性难题，众多学者提出了上千种减持方案，证券监管部门与其它有关部委联合制定了减持方案，但并未得到市场认可。

1999年，中国嘉陵和黔轮胎两家上市公司进行国有股减持试点，两家上市公司按平均每股收益的10倍市盈率计价进行配售，但市场认为配售价格偏高，导致二级市场的股价大幅下挫，管理层迫于市场压力不得不停止了这一方式。

从2001年7月24日正式实施按市价减持国有股到10月22日被叫停，上证指数从2245点下降到1500以下，国有股套现不足10亿元，但股市市场跌了3000亿元，由于交易清淡，使得2001年前9月股票交易印花税比2000年同期减少100多亿元。此次以市价减持国有股筹资弥补社保资金的缺口有如“竹篮打水，一场空”。

实际上，国有股的减持存在配售、折股流通和回购等方式。其中国有股配售、折股流通牵涉到资产定价问题，处理失当将对二级市场造成巨大的冲击。而应用股份回购理论，上市公司回购控股股东所持本公司的国有股，然后予以注销，可达到减持的目的。

二、股份回购的概念及其在国有股减持中的积极作用

股份回购是指上市公司利用盈余所得后的积累资金或债务融资，以一定价格购回公司已经发行在外的普通股，以作为库藏股或进行注销的一种方法。在西方成熟的资本市场，上市公司进行股份回购的主要目的有：（1）巩固控股权或转移公司控股权；（2）稳定和提高公司股价；（3）优化资本结构，提高财务杠杆效果；（4）抵御外来收购威胁；（5）有利于经营者股权激励机制的建立。正是由于股份回购的上述优点，20世纪80年代以来，股份回购得到迅猛发展，比如：可口可乐公司在1984年到1993年间共回购了5.7亿股，总值58亿美元；1999年在纽约股票交易所上市的公司中，股份回购总金额约为1810亿美元；2002年4月份，日本上市公司宣布股份回购的总值达4.2万亿日元。

由于我国证券市场的特殊性，使得我国还不具备西方国家应用股份回购所产生的种种功能，比如我国《公司法》第149条规定：“公司不得收购本公司的股票，但为减少公司资本而注销股份或者与持有本公司股票的其它公司合并除外。公司依照前款规定收购本公司股票后，必须在10日内注销该部分股份。”因此，我国不允许通过股票回购实施经营者股权激励。再比如，由于国家股占上市公司绝对控股地位，我国无法把股份回购作为反收购措施。

然而，我国实践证明，股份回购在减持国有股方面具有特殊意义。

1.通过股份回购减持国有股，有助于国有资本的战略性转移，提高国有资本运营效率。国有大型上市公司由于国家股的高比例和低流通性使得巨额国有资本沉淀在公司的长期资产中。通过股份回购，将国有股权从实物形态转化现金或其他流动资产，可实现国有资产的保值增值。同时，股份回购有利于国有资产有计划有步骤的退出竞争性领域，并加强能源、交通等基础设施建设。

2.通过股份回购减持国有股能平衡各方利益。在众多的国有股减持方案中，牵涉到国家、上市公司、社会公众股东等多元利益主体，如何平衡各方主体的利益，是国有股减持方案的关键，更是设计国有股减持方案的难点。近几年我国的证券市场显示了国有股减持与全流通是一项复杂的系统工程，到目前为止尚未找到一条万全之策。而以回购方式减持国有股可避免对股市造成较大冲击，将回购的国有股注销，可提高每股收益，提升公司内在价值。

3.上市公司进行股份回购是优化公司治理结构的一种理性选择。在我国，国有股及国有法人股占绝对优势，部分股东大会流于形式；董事会缺乏独立性，监事会的功能弱化，缺乏权威。导致公司治理中的“内部人控制”和对中小股东的利益歧视。通过回购部分国有股作为库藏股还有助于建立股票期权制度，激励经营者减少败德行为和逆向选择，优化股权结构，完善公司治理结构。

4.上市公司进行股份回购是解决国家股、国有法人股等历史遗留问题的一种有益尝试。我国证券市场的普通股划分为国家股、国有法人股和社会公众股，对国家股和法人股进行回购能部分消除中国股市国股不同权，股权分割等怪异现象和隐患。

5.有利于推动我国上市公司的实质重组。近年来，大股东占用上市公司巨额资金，使一些上市公司成为“空壳”。据统计，目前至少有100家左右的上市公司存在大股东欠款情况，平均每家占用的资金将近4亿元。如果允许上市公司回购大股东所持股份并注销，用回购款来抵销大股东所欠款项，可以缩减股本规模，改善财务状况，为重组创造条件。

三、上市公司运用股份回购减持国有股的应注意的几个问题

1.股份回购方式及其定价问题

中国的证监会颁步的《上市公司章程指引》中明确规定了上市公司股份回购的方式：一是向全体股东发出要约；二是通过公开交易方式购回；三是法律、行政法规和国务院证券主管部门批准的其它情况。全体要约回购主要适用于短期大规模回购公司股份，由于我国上市公司股权结构特殊，短期内这种方法不适合我国上市公司。公开交易方式主要运用于小规模流通股的回购，其价格由市价决定，上市公司回购流通股的成本过高。我国的股份回购主要采用第三种方式，其特点在于与大股东协议回购国有股。

由于国有股的不可流通性，其回购价格不能参照上市公司的市价，否则国有股东原始1至2元的投资以数倍数十倍的价格收回，对公众股东极不公平。国有资产管理委员会2003年12月15日公布的《关于规范国有企业改制工作的意见》明确指出，上市公司国有股转让价格在不低于每股净资产的基础上，参考上市公司盈利能力和市场表现合理定价。1999年，云天化按照每股净资产2.83元回购大股东所持有的20000万股国有股。长春高新于2000年12月以每股净资产3.40元为基础，按每股3.44元回购大股东所持有的7000万股国有股。这说明，以每股净资产或加上一定限度溢价、采用协议回购方式是比较合适的。

2.上市公司股份回购的条件和范围

第一，国有股比例过高或流通股比例达不到法定要求

按照《公司法》所规定的上市条件：社会公众股应占总股本的25%以上；总股本超过4亿元的，流通股应在15%以上。在我国深沪两市还有相当公司达不到这样的要求，同时，对于处于竞争性行业且国有股比例过高的上市公司，应优先考虑回购国有股。

第二，允许大股东以所持上市公司股权偿还对上市公司的债务。从2002年申报公布的情况来看，大股东欠款超过1个亿的上市公司有五六十家之多，上市公司以每股净资产值回购大股东所持股份，然后注销或向拟收购的新股东定向增发流通股。

第三，为了降低财务风险，保证上市公司的可持续发展，只有主业经营状况良好，收益稳定，有足够的现金或较高变现能力的上市公司，方可进行股份回购。

3.对社会法人股东、债权人和社会公众股东利益的保障问题

第一，目前我国实施的股份回购都是发生在上市公司与其国有大股东之间，如果在回购时把社会法人股被排斥在外，这无疑违背了同股同权与公平待遇原则，容易引起社会法人股东的不满。

第7篇：坚持的故事范文

关键词 以人为本 安全 预防

中图分类号：G647 文献标识码：A

2006年4月28日，国务委员陈至立在全国高校辅导员队伍建设工作会议上指出：根据新形势发展要求，着力建设一支高素质、高质量、高水平的辅导员队伍。这支队伍真正做到“政治强、业务精、纪律严、作风正”，永葆生机和活力。这就客观上要求高职院校辅导员必须坚持“以人为本”的教育理论，以尊重学生、研究学生、服务学生、发展学生为目标，积极地引导学生，让学生们在校安心、乐学、会学，使社会放心、家长放心。

然而，学校是人群集聚的地方，同时一些学校实行的是寄宿制，客观上发生安全事故的可能性会大大增加。近几年来，一些学校发生的重大安全事故：2008年11月14日6时10分许发生在上海商学院一学生宿舍出现学生使用“热得快”电器故障，并引燃周围可燃物发生火灾，并有4名女生情急之下跳楼死亡；2013年3月27日华南理工大学广州学院一名学生被发现猝死于宿舍中，根据初步尸检报告，该生死于心脏病发。这些事情的发生，客观上学校将面临一个问题――如何预防校内学生人身安全事故的发生，杜绝人身伤害的出现，坚持“以人为本”的教育理论。笔者认为可以采取以下预防措施：

1 积极预防是应对突发事件的前提

掌握学生动态是有效预防突发事件的前提条件，是辅导员开展思想政治教育工作的基础。实践证明，只有构建畅通的信息交流和信息反馈渠道，才能使辅导员及时准确掌握学生学习、生活和思想各方面动态。学校可以通过组织辅导员培训、学生干部会议、党支部会议等多种途径，从关心、帮助同学的角度出发，向广大辅导员和学生阐明汇报意识在预防处理突发事件工作中的积极意义，从而引导学生干部、党员，甚至是普通同学在学生当中出现异常情况时能从大局出发，以主人翁的意识及时向辅导员汇报情况，从而使辅导员能随时掌握学生动态，把握主动，及时开展思想政治教育工作，进而有效预防突发事件的发生，做到“早发现、早汇报、早预防”，将不安全因素消灭在萌芽状态中。

2 适当的急救知识培训

每年开学的时候，总有极少部分患有诸如心脏病、癫痫等疾病的学生到校报到，而这些疾病由于受天气、自身情绪、人际关系等因素的影响随时都可能复发，这时就需要其身边有一些懂得急救知识的同学在其旁边进行急救。因此，在新生入校前进行适当的急救知识的培训，让每一位新生都了解适当的急救知识，才能在遇到突发疾病的时候，有一部分学生能在医生没有到来之前进行自我救助，争取救治时间，一部分学生则联系校医、120急救中心和辅导员，大家分工合作完成救治，减少意外的发生。

3 认真排查校园安全隐患，特别是不易察觉的地方

为了避免校园内人身安全事故的发生，学校保卫处应结合本校实际情况对全校存在的安全隐患进行经常性的全面的排查，对发现安全隐患的地段，应树立“此处危险，不得靠近”的醒目字样，对楼道的电灯应保持明亮，同时安装应急照明灯，以便在停电时照明。定期检查各种安全设施，并指定专人负责。另外，对存在安全隐患的地方要派人经常巡查，并做好巡查记录，发现问题及时上报。

4 准备必要的室内军训训练场地

由于军训是大学生进入高校的第一堂必修课，而军训期间是最容易发生人生伤亡事故。因为大学军训一般都安排在每年开学的九月上中旬，这时正是夏末秋初，立秋以后，还有秋老虎，天气还比较炎热。不仅新生的身体素质参差不齐，而且站军姿、走正步的动作不停的重复几百次，强度很大，不可避免会发生一些新生极其不适应在炎热天气下训练，甚至发生意外伤亡事故。为此，各个高校应准备必要的室内训练场地，在天气较热时在室内训练，避免因发生意外事件。

5 积极开展校园安全疏散模拟演练

由于学校是人口集聚的场所，一旦发生安全事故，容易造成人员伤亡，客观上就要求学校开展适当的安全疏散模拟演练。通过开展模拟疏散演练，让学生们熟悉疏散的各个通道，具备事故发生时所具有的镇定心态。这样，当事故发生时，学生们才能保持镇定的心态，才能做到有条不紊的疏散，才能避免踩踏而导致更多人员伤害的发生。

总之，安全无小事，辅导员始终坚持“以人为本”的教育理论，时刻将学生的利益装在心里，让学生们在校安全、安心、乐学、会学，使社会放心、家长放心。

参考文献

[1] 李建刚，黄爱明.高职学生工作“精细化”工程及相关问题探究[J].学校党建与思想教育，2010（11）.

第8篇：坚持的故事范文

 

关键词：国有股减持　公司治理　完善辩证关系

国有股减持时下已成为国人关注的焦点，也成为证券市场上烫手的山芋。只要一谈国有股减持股民就色变。只要一谈国有股减持股市就风声鹤峡，股市就成灾。但国有股减持势在必行也已成为国人的共识。完善上市公司治理结构是国人关注的另一个焦点，上市公司造假，信息披露不及时，缺乏诚信等都与公司治理结构不完善有关。能不能双管齐下，合二为一寻找一种方案化解两大矛盾?本文便试图从分析国有股减持与完善上市公司治理结构的辨证关系人手作些探讨。

    一、我国国有上市公司的股权结构对上市公司的治理结构的刚性制约

    股权结构是指在一个上市公司所有的股东组成中各种所有制主体所持股票数量的比例。一般而言，把某种所有制占股权比例大数上市公司称为该所有制的上市公司。而这个大数一般而言是按绝对控股比例简单半数以上。如国有股占半数以上便称为国有上市公司，否则便是非国有上市公司。如果是法人股占多数便称法人上市公司，而我国国有上市公司便属于国有股权比例占半数以上这种情况。造成这种状况与我国股份制改造时的初衷相一致。当我们进行股份制改造时，为了维持国有经济在国民经济中的主导地位，那么国有股在各个股份公司就应当相应地居于主导地位，在公司的经营管理体制方面居于绝对的控股地位，所以在股权结构的设计方面，自然是国有股包括(国有法人股)，占绝对控股的51%以上。这是下限，而那些关系国计民生的庞大的钢铁、石油等支柱产业中国有股的比例更高达80%-90%以上。

    所有制是产权制度的基础，产权制度则是所有制的法律表现。上市公司的股权结构决定了上市公司体现出控股地位股权所有制体制，又由于所有制决定产权制度，而产权制度又是制约企业所有权最主要的因素。这种因素是经济方面的因素起到基础性作用，我们称为刚性因素。而且企业的所有权安排的是对企业的剩余控制权，在企业内部规定谁享有剩余索取权，谁控制剩余控制权，这种制度安排就是公司治理结构。股权结构对公司治理结构具有刚性制约作用，也就是说我国上市公司股权结构对我国上市公司的治理结构具有刚性制约作用。

    从历史和世界的范围看，所有制相同的国家，但股权结构可以不同，公司的治理结构也可以不同。如英、美、德、日四国都是资本主义所有制，但他们无论公司股权结构，还是治理结构均不相同。公司股权结构相同的国家，其公司治理结构也惊人相似或近似如英、美之间。两国都具有高度分散的股权结构，而两国都采取市场导向型治理结构。而德国和日本两国都高度集中的股权结构，因而两国都采取网络导向型治理结构。不仅如此，随着股权结构的变化，公司治理结构也随之变化，两者之间保持高度的同步性。如随着英美机构投资者的兴起，在英美公司的股权结构中机构投资者占主导地位。伴随着这一股权结构的变化，英美两国的公司治理结构也发生了相应变化。英美也改变一直沿用的市场导向治理结构而改用德日的网络导向型治理结构，发挥内部治理的作用。从历史和世界范围用实证的分析法验证股权结构和治理结构高度的一致性，进一步证明了股权结构对治理结构的刚性制约。

    二、国有股减持对完善国有上市公司法人治理结构必要性和可行性

    国有产权一般特征即国有产权的主体是国家或全体公民;国有产权的安排采取多级委托方式;国有产权具有不可转让性和排他性。从国有产权的特征看，国有产权是残缺不全的，存在严重的弊端主要表现为:

    一是国有产权主体残缺，导致所有者缺失。

    二是国有产权制度的多级委托关系，导致公司治理结构中内部人控制现象严重。

    三是国有产权的不可转让性，导致政企不分，成本过高。

    因此，只要上市公司中国有股权仍占主导地位，国有股产权性质就必然产生影响，国有上市公司治理结构就永远无法完善，所以要完善上市公司治理结构，就必须降低上市公司的国有股比重，要降低上市公司国有股比重，就必须对国有股进行减持。

    根据许小年和王燕对我国上市公司1993-1995年的A股权结构与公司业绩的实证研究发现:国家股所占比重与公司业绩有负的相关关系，且在ROE和ROA的回归中显著。法人股所占比重与公司业绩正相关，T比率ROE和ROA的回归中较高。

    由此可见，机构投资者，尤其是法人机构是国有股最理想的减持对象，机构投资者，尤其是法人机构的存在，对完善公司治理结构有非同寻常的意义，上有国外的经验和实证研究加以辅证。

 三、国有股减持对促进国有上市公司完善法人治理结构的效应分析

    国有股减持有利于建立使公司治理机制发挥作用的内外部一揽子制度条件。产品市场的激烈竞争给企业经营者形成了很大的压力，尽管由于其他因素的限制，这种压力的作用没有充分发挥;对于股票市场的发展则由于上市公司的数量还不是很多，且由于占总股本极大比例的国有股还不能上市交易，因此尚不足以形成对上市公司经营者较强的有效约束。由此也可说明，我国目前急需通过国有股减持等方式实现国有股的流通，以发挥股票市场在公司治理中的作用。

    市场经济的核心原则是优胜劣汰，股票市场也不例外。如果没有优胜劣汰机制的话，市场是没有发展前途的，即使不实施破产，也得寻求某种方式让一些公司退出现有市场，即形成必要的退出机制，而要形成股票市场优胜劣汰的进人与退出机制，除了要通过国有股减持等方式形成合理的股权结构外，还需要加快培育股票市场。

    如果我国的投资基金和社会保障基金能够按规范方式建立和运营，则大量的居民银行存款更可以通过它们而较安全地投资于股票市场，而经理人员市场，公司控制权市场等，在通过国有股减持使上市公司股权结构多元化以后，也可以发挥其应有的作用，这与日本、德国等网络导向型体制国家目前正在扩大市场机制在其公司治理中的作用这一世界性潮流是相一致的，可见“一揽子内部和外部的监督手段”在我国的公司治理结构中同样可以发挥作用尽管其各自作用的力度会有差别。

第9篇：坚持的故事范文

【摘要】 【目的】 探讨白细胞分化抗原40配体免疫球蛋白(CD40LIg)基因修饰骨髓间充质干细胞(MSC)对异种胰岛移植排斥反应的抑制作用?【方法】 建立Wistar-SD大鼠异种胰岛移植模型，用携带分泌型CD40LIg基因的重组腺病毒感染的MSC进行干预治疗?取糖尿病大鼠45只，随机分为3组(每组15只):对照组植入胰岛细胞;单纯MSC组植入MSC和胰岛细胞;基因转染MSC组植入CD40LIg基因转染的MSC和胰岛细胞?观察糖尿病大鼠胰岛移植后生存情况?血糖变化和移植物病理形态学改变，检测移植物CD40LIg和胰岛素的表达以及移植大鼠细胞因子水平变化?【结果】 ①糖尿病大鼠血糖平均在移植后2 d恢复正常，对照组血糖平均在移植后7 d升高，单纯MSC组和基因转染MSC组血糖分别在20 d和47 d升高?②对照组?单纯MSC组和基因转染MSC组，移植物存活时间分别为(9.5 ± 3.2)d?(25.2 ± 5.3)d和(53.6 ± 7.5) d，各组间比较具有显著差异(F=5.362，P < 0.05);移植糖尿病大鼠生存时间分别为(24.1 ± 6.8)d?(51.7 ± 7.9)d?(95.2 ± 12.7)d，各组间比较差异具有显著性(F=6.821，P < 0.05)?③对照组在胰岛移植后7 d内，IL-2和TNF-α的水平均急剧上升，IL-4和IL-10的水平较移植前显著下降(P < 0.01)?④两个治疗组移植物内均可见成片的胰岛细胞团，未见淋巴细胞浸润，转染MSC组移植物内可见CD40LIg和胰岛素的表达?【结论】 CD40LIg基因修饰骨髓间充质干细胞可以延长胰岛移植物的存活时间，抑制大鼠异种胰岛移植的排斥反应?

【关键词】 骨髓间充质干细胞; CD40LIg; 胰岛移植; 糖尿病

Abstract: 【Objective】 To investigate the effects of cluster of differentiation 40 ligand immunoglobulin (CD40LIg) modified bone marrow mesenchymal stem cells (MSC) on the rejection of rat islet xenografts. 【Methods】 The islet xenografts model was established with islet cells of Wistar rat transplant under the left kidney capsule of diabetic SD rat. MSC were infected with the recombinant adenoviruses containing CD40LIg gene as intervention treatment. Forty-five modeled diabetic rats were randomly pided into three groups with 15 in each: only islet cells were transplanted to rats in control group (A)， islet cells and MSC were transplanted to rats in MSC group (B) and islet cells and MSC infected with CD40LIg gene were transplanted to rats in transfected MSC group (C). The blood sugar and the survival of transplantation rats and grafts were observed after transplantation. The morphological changes of grafts were observed. Expression of CD40LIg and insulin were detected by immunohistochemical staining and cytokines were quantified by ELISA. 【Results】 (1) The blood sugar of transplantation rats decreased to normal level on day 2 after transplantation. The average level blood glucose of control group (A)， MSC group (B)， transfected MSC group(C) increased on day 7，20，47， after transplantation respectively. (2) The grafts of group A， B， and C survived for (9.5 ± 3.2)， (25.2 ± 5.3)， and(53.6 ± 7.5) days， respectively. There are significant deviation of the grafts survival among group A， B and C(F=6.821，P < 0.05). The survival of transplantation rats were (24.1 ± 6.8)，(51.7 ± 7.9)，and(95.2 ± 12.7) days in group A， B， and C， respectively. The survival of transplantation rats compared each other were same as the survival of grafts (F=6.821，P < 0.05).(3)In group A， Serum IL-2 and TNF-α concentration were elevated to a high level within seven days post-transplantation and significantly increased compared with that pre-transplantation(P

Key words: islet xenografts; diabetes mellitus; bone marrow mesenchymal stem cells; CD40LIg

动脉粥样硬化(atherosclerosis，AS)是一种慢性心血管疾病，严重威胁人类健康?尽管动脉粥样硬化是一个多因素参与的复杂病理过程，但血液中的单核细胞迁移至内皮下分化为巨噬细胞后吞噬脂质，特别是氧化型低密度脂蛋白(oxidized low density lipoprotein， ox-LDL)，进而形成泡沫细胞仍然是关键环节?巨噬细胞吞噬脂质主要通过细胞膜上的清道受体(scavenger receptors， SRs)完成?其中，A类清道夫受体(scavenger receptor A，SR-A)和B型清道夫受体CD36(cluster of differentiation36，CD36)在巨噬细胞摄取各种修饰型低密度脂蛋白(low density lipoprotein，LDL)过程中发挥了重要作用[1]?近年来研究表明，微小RNA(microRNA) 参与调控了心血管系统的多种功能， 其表达异常与多种心血管疾病的发生和发展密切相关[2]?MicroRNA-155(miR-155)是一个典型的多功能microRNA，已有资料表明，miR-155在免疫反应?炎症?肿瘤发生等过程中发挥了重要的作用[3]?最近的研究显示miR-155在巨噬细胞泡沫化过程中表达上调[4]，但其对巨噬细胞泡沫化和动脉粥样硬化形成的作用尚不清楚?本研究探讨了miR-155对THP-1巨噬细胞泡沫化过程的影响及其可能机制，以评估miR-155是否可作为防治动脉粥样硬化的新靶点?

1 材料与方法

1.1 试剂与仪器

人类单核细胞株THP-1细胞(中国科学院上海细胞生物学研究所);RPMI1640 细胞培养基?胎牛血清?青/链双抗(GIBCOBRL公司);佛波酯(PMA)?油红O?Hoechst33258?蛋白酶抑制剂cocktail(Sigma公司);SR-A和CD36抗体(R&D公司);HRP标记的驴抗山羊IgG(Santa Cruz公司);l，l’-dioctadecyl-3，3，3’，3’-tetramethyl-indocarbocyanine perchlorate(DiI)荧光探针(Probe公司);其余试剂均为进口或国产分析纯产品?

CO2培养箱(美国Precision公司);SW-CJ-IF超净工作台(江苏苏净集团苏州安泰空气技术有限公司);pH计(瑞士Mettler Toledo公司);倒置显微镜(重庆光学仪器厂);激光扫描共聚焦显微镜(日本Olympus公司);超速离心机(美国Beckman公司);酶联免疫仪(美国MJ RESEARCH公司);小型垂直电泳和电转装置?荧光定量PCR仪(美国Bio-Rad公司)?

1.2 Ad-miR-155和Ad-anti-miR-155腺病毒载体构建

腺病毒载体的构建参照文献报道的方法[5]?Ad-miR-155(5′-TCGAGCCCCTATCACGATTAGCA TTAATTCAAGAGATTAATGCTAATCGTGATAGGGGA-3′)和Ad-anti-miR-155(5′-CTAGTCCCCTATC ACGATTAGCATTAATCTCTTGAATTAATGCTAATCGTGATAGGGGC-3′)的制备按照 AdMax(Microbix)和pSilencerTM adeno 1.0-CMV (Ambion) systems说明书进行?病毒经HEK293A细胞进行包装?扩增后，CsCl纯化，含100 mL/L甘油的20 mmol/L Tris缓冲液透析，于-70 ℃保存?腺病毒滴度测定按照Adeno-X Rapid Titer kit (BD Biosciences Clontech， Palo Alto， CA， USA) 试剂盒说明书进行?实验中以Ad-LacZ转染组作为对照?

1.3 Ox-LDL和DiI-oxLDL的制备

Ox-LDL的制备按文献报道的方法[6]，采用硫酸铜氧化法，简述如下:健康人血浆购自中山大学附属第一医院血液科，采用密度梯度离心的方法，制备LDL?将LDL于4℃透析24 h，期间换液3次?在37℃下用终浓度为5 μmol/L 的CuSO4氧化24 h?接着分别用含200 μmol/L EDTA和不含EDTA的PBS 4 ℃下分别透析24 h和48 h?用Bradford法测定蛋白含量?在无菌条件下采用0.45 μm滤膜过滤除菌，4 ℃避光保存，一周内用完?

DiI-oxLDL(1，1′-dioctadecyl-3，3，3′3′-tetra-methy-lindocyanide percholorate (DiI)-labeled oxLDL)的制备方法如下[7-9]，采用密度梯度离心的方法，制备LDL，用一定量的无脂蛋白血清调节LDL浓度至1 mg/mL，每毫升LDL中加入5 μL浓度为30 mg/mL的DiI储存液，37 ℃避光孵育18 h，使LDL转变为Dil-LDL?经密度梯度离心提取DiI-LDL，PBS透析48 h，期间换液3次?加入终浓度为5 μmol/L的CuSO4，37 ℃氧化24 h，然后分别用含200 μmol/L EDTA和不含EDTA的PBS分别透析24?48 h?采用0.45 μm滤膜过滤除菌，4 ℃避光保存，一周内用完?

1.4 细胞培养和实验分组

THP-1细胞株由中国科学院上海细胞生物学研究所提供，用含100 mL/L小牛血清，1%双抗的RMPI1640培养基，置于体积分数5% CO2，37 ℃的细胞培养箱内培养?将细胞按1×106密度接种于35 mm培养皿中，以100 ng/mL的PMA刺激THP-1细胞48 h后诱导其分化成巨噬细胞?实验分组如下:在观察过表达miR-155对巨噬细胞的影响时分为6组:空白对照组?Ad-LacZ组?ox-LDL+Ad-LacZ组?ox-LDL+Ad-miR-155(25 MOI)组?ox-LDL+Ad-miR-155(50 MOI)组?ox-LDL+Ad-miR-155(100 MOI)组;在观察抑制miR-155对巨噬细胞的影响时分为4组:Ad-LacZ组?Ad-anti-miR-155(50 MOI)组?ox-LDL+Ad-LacZ组?ox-LDL+Ad-anti-miR-155(50 MOI)组?

1.5 实时定量PCR检测ox-LDL对miR-155表达的影响

参照操作手册，用Trizol法抽提总RNA?2 μg总RNA逆转录至终体积为20 μL，采用SYBR Green实时荧光PCR方法检测miR-155的表达?用miR-155特异性的具有茎环样结构的引物5’-GTCGTATCCAGTGCAGGGTC-CGAGGTATTCGCAC TGGATACGACCCCCTA-3’合成互补的DNA，检测miR-155的表达?定量多聚酶链反应(qPCR)引物设计，正向引物:5’-CTGTTAATGCTAATCGTGAT AG-3’;反向引物5’-GCAGGGTCCGAGGT-3’?核内小分子RNA U6作为内参，引物设计如下，正向引物:5’-CTCGCTTCGGCAGCACA-3’;反向引物:5’-AACGCTTCACGAATTTGCGT-3’?PCR反应体系包括:1 μL RT逆转录产物，10 μL SYBR Green PCR Master Mix和500 nmol/L正向以及反向引物?反应采用MyiQ单色实时PCR检测系统(Bio-Rad)，先95 ℃孵育30 min，然后进行40个循环(95 ℃10 s， 60 ℃ 30 min)?U6做为内参，采用2-CT法分析基因相对表达量?

1.6 Western Blot检测 SR-A 和CD36蛋白表达情况

总蛋白的提取:用冰浴的PBS洗涤细胞3遍，加入RIPA裂解液100 μL，冰上裂解30 min?刮下并收集细胞，4 ℃，12 000 r/min(r=9.5 cm)离心10 min，吸取上清液，用BCA法进行蛋白质定量，-80℃保存?Western Blot检测SR-A和CD36蛋白表达:以 60 μg蛋白每泳道上样，经8% SDS-PAGE 电泳分离，电转移蛋白至PVDF膜，5% 脱脂牛奶室温封闭1 h 后，一抗(SR-A，1∶4 000;CD36，1∶1 000)，4 ℃孵育过夜; TBST洗涤3次，每次5 min，二抗(HRP标记的驴抗山羊IgG 1∶4 000;1∶2 000)，室温孵育1 h，TBST 洗涤3次，每次10 min?ECL化学发光法检测蛋白表达，以β-actin为内参，计算蛋白表达的相对变化?

1.7 激光共聚焦显微镜观察miR-155对巨噬细胞结合?摄取DiI-oxLDL能力的影响

按文献报道的方法进行[10]，主要步骤简述如下:病毒转染24 h后，加入ox-LDL处理细胞48 h?随后各组分别加入终浓度为10 μg/mL的DiI-oxLDL，于4 ℃下孵育细胞2 h(反映巨噬细胞结合DiI-oxLDL能力)或37 ℃下孵育细胞4 h(反映巨噬细胞摄取DiI-oxLDL能力)，经40 g/L多聚甲醛固定10 min后，加入终浓度5 mg/L的Hoechst33258避光染色5 min，PBS洗涤3次后，激光共聚焦显微镜下(600×)观察拍摄?各组随机选取5个视野，运用confocal自带Fluorescence View软件测定视野内所有细胞的细胞内平均荧光强度并计算平均值?

1.8 数据分析和统计

所有实验结果用均数±标准差(x ± s)表示?采用SPSS 13.0进行统计学分析，多组资料比较采用方差分析，两两比较采用t检验，P

2 结 果

2.1 Ox-LDL诱导巨噬细胞miR-155表达上调

实时定量PCR结果显示，在THP-1细胞，80 μg/mL的ox-LDL可以诱导miR-155的表达上调?Ox-LDL作用后2 h，miR-155表达开始增加，6 h达到最高?尽管8 h开始有所降低，但ox-LDL作用后一直到72 h，miR-155表达仍维持在较高表达水平(图1)?

2.2 过表达miR-155抑制巨噬细胞结合?摄取DiI-oxLDL

为明确ox-LDL诱导miR-155表达上调的功能，我们观察了腺病毒转染miR-155(Ad-miR-155)后对巨噬细胞结合和摄取DiI-oxLDL的影响?结果显示，与对照组相比，ox-LDL处理细胞48 h后，巨噬细胞摄取DiI-oxLDL的能力明显增加?Ox-LDL处理后细胞内的平均荧光强度从对照组的262±25增加至433 ± 29(n=6， P < 0.05)?Ad-miR-155转染可明显抑制巨噬细胞摄取DiI-oxLDL的能力?Ad-miR-155不同滴度(25 MOI，50 MOI，100 MOI)转染后，细胞内平均荧光强度分别降至353 ± 22(n=6，P < 0.05)，285 ± 11(n=5， P < 0.01)和247 ± 12(n=6，P < 0.01)?而Ad-LacZ转染无作用(图2A)?

同时我们观察到，ox-LDL处理细胞48 h后，巨噬细胞结合DiI-oxLDL的能力亦明显增加?Ox-LDL处理后细胞内的平均荧光强度从对照组的84 ± 6增加至221 ± 12(n=6， P < 0.05)?Ad-miR-155转染(50 MOI)可明显抑制巨噬细胞与DiI-oxLDL的结合，Ad-miR-155转染使细胞内的平均荧光强度降至146 ± 16(n=6， P < 0.01)(图2B)?

2.3 抑制miR-155促进巨噬细胞结合?摄取DiI-oxLDL

为进一步明确miR-155对巨噬细胞结合和摄取DiI-oxLDL的影响?我们研究了腺病毒转染反义-miR-155(Ad-anti-miR-155)的作用?图3A显示，Ad-anti-miR-155转染(50 MOI)后，基础状态和ox-LDL刺激后的巨噬细胞摄取DiI-oxLDL的能力均明显增强?Ad-anti-miR-155作用后，基础状态下，细胞内的平均荧光强度从Ad-LacZ转染组的292 ± 26增加至明显增加402 ± 34(n=5，P < 0.05)?Ox-LDL处理后，细胞内平均荧光强度较对照组增加(481 ± 33 vs. 292 ± 26， n=5，P < 0.05)?Ad-anti-miR-155转染可进一步增强oxLDL的作用，使细胞内平均荧光强度增加至559 ± 34(n=5， P < 0.05)?另一方面，巨噬细胞结合DiI-LDL的能力也明显增加?在基础状态下和和ox-LDL刺激后，Ad-anti-miR155转染分别使巨噬细胞内的平均荧光强度从142 ± 7增加至 190 ± 10(n=5，P

转贴于

2.4过表达miR-155降低了SR-A和CD36的表达

由于巨噬细胞摄取脂质主要通过膜上的清道夫受体完成，因此，我们进一步分析了腺病毒转染miR-155(Ad-miR-155)后对巨噬细胞SR-A和CD36表达的影响?结果发现，随Ad-miR-155转染滴度的增加，SR-A和CD36的表达逐渐降低?MiR-155不仅抑制基础状态下SR-A和CD36的表达，而且逆转ox-LDL诱导的SR-A和CD36蛋白表达的上调(图4A，图4B)?

2.5 抑制miR-155上调SR-A和CD36的表达

进一步我们观察了抑制miR-155对巨噬细胞清道夫受体表达的影响?Western Blot结果显示，与对照组相比，转染Ad-anti-miR155(50 MOI)可显著增加基础状态下巨噬细胞中SR-A和CD36的表达，差异具有统计学意义(n=6，P < 0.05)(图5A)?加入ox-LDL刺激巨噬细胞后，SR-A和CD36的表达上调?预先转染Ad-anti-miR155 (50 MOI)，可进一步增加SR-A和CD36的表达上调(n=6，P < 0.05)(图5B)?

3 讨 论

MicroRNA 是一类长约 18~24 个核苷酸的非编码小分子RNA，通过与特异性靶基因 mRNA的3′-UTR 区结合，抑制其翻译或使其降解，从而调控目的基因的表达?MicroRNA在细胞增殖?凋亡?分化，胚胎发育和免疫应答等过程中发挥着重要的作用，与机体多种疾病尤其是心血管疾病的发生发展密切相关[11]?如在心血管组织异性高表达的miR-1?miR-133 和 miR-208等，其表达异常均可导致心脏发育缺陷[12]?

动脉粥样硬化是一种慢性炎症性疾病，其发生发展过程中，是否也受到了microRNA的调控，成为近年来的研究热点[13]?MiR-155位于非编码基因Bic内，在血液细胞中高表达?已有研究表明miR-155参与调控T淋巴细胞?B淋巴细胞和树突状细胞的分化，从而影响机体的免疫功能?在单核巨噬细胞，一些促炎因子如TNFα，LPS等可通过NF-κB信号通路上调miR-155的表达?提示miR-155可能参与调控了机体的炎症反应过程?已往研究发现，在ox-LDL刺激的巨噬细胞中，miR-125a-5p?miR-146和miR-155等的表达上调[4]?但miR-155是否影响巨噬泡沫细胞的形成，尚不清楚?

最近，Huang等[14]发现ox-LDL诱导miR-155上调可能参与了巨噬泡沫细胞的形成，抑制miR-155表达可抑制巨噬细胞内脂质的聚集?该作用与LOX-1，CD36和CD68的表达上调有关?但miR-155对细胞膜上清道夫受体的功能以及对基础状态下巨噬细胞摄取脂质的影响，尚不明了?为了进一步阐明miR-155在巨噬泡沫细胞形成中的作用，本研究中，我们从过表达和下调miR-155表达两个不同的角度，探讨了miR-155对基础状态下和ox-LDL处理后的巨噬细胞结合和摄取脂质的能力以及细胞膜上清道夫受体表达的影响?我们发现ox-LDL可以诱导巨噬细胞miR-155表达上调?由于巨噬细胞吞噬大量脂质形成泡沫细胞是动脉粥样硬化形成的关键环节，因此我们通过转染miR-155和反义miR-155病毒，上调或抑制巨噬细胞上miR-155的表达，观察其对细胞结合和摄取DiI-oxLDL能力的影响?结果发现，无论是基础状态还是ox-LDL处理后，过表达miR-155均可明显抑制巨噬细胞对DiI-oxLDL的结合和摄取;而抑制miR-155则促进巨噬细胞结合和摄取DiI-oxLDL?这些结果说明miR-155表达的上调可抑制巨噬泡沫细胞的形成?已知巨噬细胞对脂质的结合和摄取主要是通过膜上的清道夫受体SR-A和CD36等实现的，所以我们进一步分析了miR-155对SR-A和CD36蛋白表达的影响?我们的结果显示过表达miR-155，不仅抑制基础状态下SR-A和CD36的表达，而且逆转了ox-LDL诱导的 SR-A和CD36的表达上调;而抑制miR-155则明显上调SR-A和CD36的表达?这些结果表明miR-155通过下调SR-A和CD36的表达，影响巨噬细胞对脂质的结合?摄取，从而抑制巨噬细胞泡沫化过程?但miR-155影响SR-A和CD36表达的具体机制，尚不清楚?我们的资料提示ox-LDL作用于巨噬细胞，一方面通过激活氧化应激系统等信号通路，促进巨噬泡沫细胞的形成?同时亦可激活抑制泡沫化形成的机制(如上调miR-155表达等)?ox-LDL最终影响巨噬细胞泡沫化形成取决于上述两种因素的相互作用?

总之，本研究发现miR-155可通过下调巨噬细胞上清道夫受体如SR-A和CD36等的表达，抑制巨噬泡沫细胞的形成?提示miR-155可能是防治巨噬细胞泡沫化，进而防治动脉粥样硬化的新靶点?

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