过小孤山大孤山精选(九篇)

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第1篇：过小孤山大孤山范文

[关键词] 天麻素；氯化钴；皮质神经元损伤；神经保护；缺血缺氧性脑损伤

[中图分类号] R332 [文献标识码] A [文章编号] 1673-7210（2016）05（b）-0017-04

[Abstract] Objective To study the repair effect of gastrodin on hypoxic brain neurons damage induced by cobalt chloride in rats， and provide an experimental reference for clinical treatment of ischemic and hypoxic brain damage. Methods Cerebral cortex nerve cells of SD rats were selected for study. The original generation after 7 d， they were numbered according to the culture dish. Primary cells were divided into blank control group， model group， gastrodin group and gastrodin control group by using random number table method， and corresponding treatment was implemented. Cell morphology， neurons relative vigor， lactate dehydrogenase （LDH） release quantity， EphA4 expression difference among four groups were observed. Results The relative activity of neurons in blank control group was significantly higher than that in other groups， the relative activity of neurons in model group was significantly lower than that in gastrodin group and gastrodin control group， the relative activity of neurons in gastrodin group was significantly lower than that in gastrodin control group （P < 0.01）. The neurons LDH activity of model group was significantly higher than that of other groups， the neurons LDH activity of gastrodin group and gastrodin control group were significantly higher than those of blank control group （P < 0.01）. The average neurons IOD of model group was higher than that of other groups， the average neurons IOD of blank control group was lower than that of other groups （P < 0.01）. Conclusion Gastrodin can reduce the expression level of EphA4 in the injured neuron， inhibit the activity of LDH in neuronal cells， and enhance the cell relative viability， has a positive effect on the protection of rat cortical neuronal injury， is worthy of further study.

[Key words] Gastrodin； Cobalt chloride； Cortical neuron injury； Nerve protection； Hypoxic ischemic brain damage

缺血缺氧性脑损伤的病理过程包括能量代谢障碍、细胞内钙超载、兴奋性氨基酸分泌过多及一氧化氮蓄积等，上述病理反应引发的级联细胞毒作用是诱发神经元损伤的主要原因[1]。目前已有大量西药相继应用于神经元损伤的预防及治疗，其临床效果得到了一定认可，但伴随而来的明显副作用大大限制了其应用前景[2]。天麻素的强效镇痛、镇静、心血管功能改善、抗炎及抗自由基作用已被广泛证实，研究表明，天麻素还具有增强血管顺应性作用，有望改善脏器缺血缺氧状态、发挥脑保护作用[3]。本研究就天麻素对神经元损伤的影响进行实验分析。

1 材料与方法

1.1 实验材料

实验动物：出生24 h内健康新生SPF级SD大鼠，由郑州大学医学院动物实验中心提供，动物合格证号：120000KXWQR08001。

主要药品：天麻素（昆明制药集团药物研究所生产，100 g/瓶，批号：20130115，分析纯），纯度99.5%，分子量286.27，其化学结构式如图1所示。

主要试剂：Neurobasal培养基（美国Gibco公司生产）、B27试剂（斯百汇生物科技有限公司，规格：10 mL）、胎牛血清（美国Gibco公司生产，规格：500 mL）、胰蛋白酶（苏州亚科科技股份有限公司，型号：9002-07-7）、多聚赖氨酸（上海宝曼生物科技公司，浓缩液，25 mg/瓶）、氯化钴（CoCl2，山东淄博润兴化工厂生产，分析纯）、3-（4，5-二甲基噻唑-2）-2、5-二苯基四氮唑溴盐（MTT）（美国Sigma公司，分析纯）、乳酸脱氢酶（LDH）定量检测试剂盒（美国罗氏公司）、抗鼠人肝癌细胞系A4（EphA4）多克隆抗体（美国Santa Cruz公司）、CY3荧光试剂盒（武汉博士得生物制品公司），其他试剂均为进口分析纯。

1.2 处理方法

1.2.1 大鼠皮质神经元细胞原代培养 使用75%乙醇消毒实验大鼠，在严格无菌条件下，行神经元细胞原代培养[4]，持续7 d。

1.2.2 细胞分组及处理 将原代培养7 d后的细胞按照培养皿编号，使用随机数字表法分为空白对照组、模型组、天麻素组及天麻素对照组，以125 μmol/L CoCl2溶液处理模型组及天麻素组细胞4 h，然后以25 mg/L天麻素处理天麻素组、天麻素对照组细胞24 h[5]。

1.3 观察指标

1.3.1 神经元形态观察 于倒置显微镜下，对各组细胞神经元形态变化进行拍照、观察，并比较。

1.3.2 细胞相对活力检测 采用MTT法，对各组细胞相对活力进行检测[6]，使用全自动酶标仪，检测其570 nm波长处吸光度（OD）值。

1.3.3 LDH活性检测 LDH活性检测采用速率法[7]，检测其440 nm波长处OD值。

1.3.4 EphA4表达量检测 采用细胞荧光化学法，对各组细胞EphA4表达量进行检测[8]，红色荧光即为免疫阳性细胞。使用Image-Pro Plus 6.0软件，对各实验组的荧光图片单个细胞的累积吸光度（IOD）值和平均IOD值进行分析并比较。

1.4 统计学方法

采用SPSS 18.0统计软件对数据进行分析和处理，计量资料以均数±标准差（x±s）表示，多组间比较采用方差分析，组间两两比较采用LSD-t检验，以P < 0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 神经元形态

倒置显微镜观察结果示，空白对照组神经元形态均匀一致，大小相仿，胞体饱满，呈光滑的椭圆形或锥形，神经元的突起广泛分枝，相互交叉，折光性强；模型组神经元形态发生明显改变，细胞折光性下降，胞体萎缩，出现颗粒，轴突变细变短，形状僵硬，分枝减少；天麻素组神经元形态较模型组有所改善，胞体萎缩减轻，轴突保留较多，但仍有少数细胞坏死；天麻素对照组形态较对照组稍差。见图2。

2.2 细胞相对活力

空白对照组神经元细胞相对活力显著高于其他各组，模型组神经元细胞相对活力显著低于天麻素组、天麻素对照组，天麻素组神经元细胞相对活力显著低于天麻素对照组，差异有高度统计学意义（P < 0.01）。见图3。

2.3 LDH活性

模型组神经元细胞LDH活性显著高于其他各组，天麻素组、天麻素对照组神经元细胞LDH活性显著高于空白对照组，差异有高度统计学意义（P < 0.01）。见图4。

2.4 EphA4表达

荧光显微镜观察结果示，各组神经元胞体、突起均可见红色荧光显示，但各组荧光强度存在一定差异。模型组神经元平均IOD值显著高于其他各组，空白对照组神经元平均IOD值显著低于其他各组，差异有高度统计学意义（P < 0.01）。见图5和图6。

3 讨论

缺血缺氧性脑病存活患者病残率高达75%，这与脑组织缺血缺氧引发的神经细胞死亡，继而导致的神经功能缺损具有密切关联[9-10]。因此，临床亟需一种能够有效保护神经元功能、避免神经元损伤的药物。

天麻素是我国传统中药材天麻中的主要有效成分，已有大量研究证实，天麻素具有恢复大脑皮质兴奋与抑制过程间平衡失调等作用[11]。研究表明，天麻素还可通过抑制兴奋性氨基酸诱导的细胞凋亡过程，在清除自由基、对抗自由基诱导的细胞损伤、神经保护等方面发挥积极效果[12]。本研究结果示，经CoCl2处理后，模型组、天麻素组神经元细胞均出现了不同程度的形态学变化，以胞体萎缩、细胞坏死为主，说明天麻素具有一定的神经保护作用。

在天麻素神经保护作用机制的研究中发现，模型组神经元细胞相对活力最低，但其LDH活性最高，说明模型组神经元细胞存在明显损伤，而天麻素在一定程度上使CoCl2诱导的化学性损伤得到抑制，考虑与天麻素在对抗兴奋毒性、双向调节一氧化氮和一氧化氮合酶、促进胶质细胞产生营养因子、稳定胞膜、抗细胞氧化等方面发挥的积极作用有关[13]。大量LDH的漏出表明，神经细胞膜完整性受损，且Cai等[14]研究证实，LDH活性与神经细胞损伤程度呈正比，故本研究结果示，天麻素处理后神经细胞LDH漏出量显著降低，提示天麻素对细胞膜完整性的维持亦具有一定作用。

此外，本研究发现，经CoCl2处理后，模型组细胞EphA4表达水平显著升高，而天麻素可使细胞EphA4表达水平得到明显控制，与何保丽等[15]研究结论一致。作为一种具有影响突触可塑性的基因，EphA4广泛分布于大脑各个区域，并集中于海马锥体细胞树突棘部位，研究表明，配体Ephrin-A3可激活EphA4，诱发下游信号转导级联瀑布，导致树突棘瓦解，使成熟大脑突出的重构能力得以保存[16-18]，因此，EphA4在缺血缺氧损伤后神经元的损伤中扮演了重要角色。本研究天麻素组细胞EphA4表达得到有效抑制，说明经天麻素处理后，EphA4参与的CoCl2诱导神经元损伤过程得到了有效控制，细胞自我保护现象有所降低，神经元重构能力得以保存，从而有效延缓了神经元损伤过程[19-20]。

综上所述，天麻素能够有效抑制CoCl2诱导的大鼠皮质神经元损伤，其保护作用可能与EphA4表达抑制有关，为缺血缺氧性脑损伤的临床治疗开拓了新的研究方向，但其具体作用机制有待进一步深入观察。

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第2篇：过小孤山大孤山范文

一、把握课堂教学机会，组织学生参与口语训练

在高中语文人教版的教材中，有很多的篇目都是非常好的口语训练教材，这就要求我们要注重挖掘整合教材中的信息，充分利用好教材。语文课本中有许多古代诗歌散文欣赏、先秦诸子选读等，教师应根据各个不同单元的内容，在教学设计的过程中充分考虑到口语训练的因素，进行形式多样的口语交际训练活动。

《沁园春·长沙》这首词呈现出一种色彩斑斓、生机勃勃的美，一种催人奋发、给人以力量的美。在教学过程中，我们就可以把口语训练融入到课文教学中来。首先，强调课文朗读。播放电视剧的视频——励志电视剧《恰同学少年》中的片段，创设情境，引导学生找出词中抒发作者情感的句子，带着感情大声朗读，体会青年所具有的革命英雄气概，胸怀着激浊扬清、改天换地的鸿鹄之志。其次，读词说话。以作者的情感态度是通过哪些景物体现出来、景物是如何体现情感、组成了一幅怎样的画面为内容互相回答。这样既教给了学生鉴赏诗歌的基本方法，又提高了学生的口头表达能力。再次，我思我想。诗人通过远眺、近观、仰望、俯视看到的红叶、绿水、蓝天、白帆、雄鹰、游鱼，给我们描绘了一幅生机盎然，色彩绚丽壮美的秋景图，体现了巍峨、博大、壮阔的崇高美表现出了诗人宽广的胸襟。那么，我们呢？哪些风景也曾深深地拨动过我们的心弦？作为高一的新生，感受着年轻词人不畏惊涛骇浪、力挽狂澜的英雄气概的同时，我们能做什么呢？把课堂内容和生活融为一体，串起学生的过去和未来。

在单独篇目的教学设计要注重口语训练的同时，我们也要善于整合教材，把课文按某个主题做个归纳，进行口语教学。如《过小孤山大孤山》《游褒禅山记》《滕王阁序》《兰亭集序》《项脊轩志》等都可以根据课文内容客串导游作为介绍景点的形式来进行；《过秦论》《六国论》《阿房宫赋》《小狗包弟》等以辩论的形式来进行；《记梁任公先生的一次演讲》《我有一个梦想》《热爱生命》《乐民之乐忧民之忧》等以演讲的形式来进行；《荷塘月色》《春江花月夜》《登建康赏心亭》《登岳阳楼》《蜀道难》《将进酒》等朗诵比赛的形式来进行。这些都是很好的口头训练材料。我们在教学的时候充分地利用，一定能起到意想不到的效果。

二、创设特定的氛围，寓教于“乐”，激趣，锻炼学生的口语

学生的口语能力训练需要一些特定的环境，让学生处于这种环境中去学习、练习，要让学生有话可说，有感而发，这就要求教师要为口语训练创设情境。学生一般都有一种好奇心，教师可以利用这种心理来举办一些活动，来训练学生的口语表达能力，通过活动来培养学生口语表达的准确性和思维的敏捷性，让学生在游戏活动中得到锻炼。如，成语“口蜜腹剑”，我在黑板上写成“心蜜腹剑”，学生发现应该是把“心”改为“口”，并总结成另一个成语“口是心非”来表达原成语的错误所在。这种游戏活动，学生的参与率高，人人有机会，课堂气氛空前高涨，自己没有能总结出的成语，听了其他同学的总结，既提高了成语的积累又锻炼了口语表达能力。为了培养学生吐词清楚、归音正确，还可以不定期的举办绕口令比赛，先让学生课后找到一些比较有兴趣的绕口令，再给学生一定的时间进行练习，最后在课内进行绕口令比赛，这种方法对帮助学生练习吐词、归音很有作用。

演讲也是训练学生口语交际能力的一种有力的手段，演讲过程中有叙述的部分也有议论的部分，逻辑性比较强。在最初准备演讲稿的时候，如何让意思表达更加清晰，往往需要在心脑中酝酿很久，有时还需要在心中默默的朗诵几遍。演讲的内容可以是学生针对某些社会热点进行演讲，如《学生为什么不可以上网吧》《我被老师批评错了怎么办》《学生就是只要成绩好就行了吗》《学生用手机的危害》等。也可结合课本中学习的文章进行。如，学习了《我有一个梦想》《记梁任公先生的一次演讲》等课文之后，可让学生模拟课文内容进行演讲练习。这些内容在学习之后，学生的理解比较到位，所以表演起来比较形象，学生的兴趣也高，对于学生来说还是比较受欢迎的。