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拥挤的音像店里,嘈杂的摇滚声。冲着忙活的老板大喊:“我要《魔杰座》!”然后,耳旁传来一个声音:“我也要一张。”然后是杰迷通常的见面方式,用力握手并使劲摇晃:“亲人啊!”两个人在喧嚣的环境下笑得昏天黑地。
“迷迷蒙蒙,你给的梦。”
走进新班级,看见坐在墙角的她:“哎呦,不错哦!”然后不顾旁人的大笑。这真得太荒谬,我们追求我伦一样的调调。所以在班上树大招风得不像话,许多人看到我们在班上横行霸道的样子心生怒气,想要把我们歼灭了似的。才发现一个人的稀薄,两个人的强大。口沫之战必不可少,凡迎战我们的必退。还记得那个骂杰伦的女生被我们说到哭吗?还记得迎战时我们大笑并大叫的“我伦威武”吗?
我知道不是谁都懂谁谁都能被人懂,可是我们例外。
“出现裂缝,隐隐作痛。”
曾经为了考试制度和成绩对比吵过架。
曾经为了流言蜚语和善意欺骗闹矛盾。
你曾说过爱伦是没有概念的,而我想对你说友情也是没有概念的。盲目的人总是拥有的比较久,而我们都是固执敏感的,没有天长地久。
“我知道你我都没有错,只是忘了怎么退后。”
拥有的越多就失去的越多。你说我永远只存在于个人的世界,不会对任何人敞开心扉。可是,我只是不想把我的难过变成你的心痛而已,因为比起看你痛,我宁愿一人承担。我的生命中有太多照亮不了的漆黑,大部分都是因为你,可是你为什么感受不到我对你的心痛?为什么仅仅因为这个让我如此狼狈。如果说当我的朋友太累,我会选择后退。
“不懂你的黑色幽默。”
我们的遇见,是上帝的阴谋。
我们的悲伤,是上帝想要的结果。
你说你考虑了很久,我们都是刺猬,而两只刺猬在一起绝对不会互相取暖,而是让对方受伤。我躲在房间里一边边告诉自己,“你只是在开玩笑而已,没事的,会好起来的。”耳边,杰伦的歌声让人撕心裂肺。
“想回到过去……”
不会再有了。
看见你和别人幸福,我不忍去打扰。
知道我们间的裂缝,不可能再去修补。
但我总是还在想以前,是我太幼稚了,对不对?
心雨和晴天都让人心痛,就像看到你揽着别人从我身便走过,不管什么天气,我都会很难过。
“我会发着呆,然后忘记你。”
在演唱会上看到你并不意外,只是,当杰伦唱到那句时我看着前排的你忍不住哭了。直到《轨迹》,你回过头看着同样泪流满面的我:“要开始新的一页了!”我咧着嘴笑。我已经遗弃自己太久了,已经放不下太久了,已经固执幼稚了太久了,要开始迎接新的自己了。然后异口同声:“等伦六十岁的演唱会!”
是的,烟花易冷,人事易分。
但,不在意并不代表忘记,但那些冰冷的火花,冰凉的记忆,烟花都忘记了。
混搭的“中国风”不变的古典情怀
方文山告诉笔者:“‘中国风’不是迎合当下音乐利益的曲风,它是混搭的,它的旋律是西方的,它的琴、琵琶等乐器是仿古典、东方的。”
方文山在九朝会播放了他新作《烟花易冷》,并介绍了创作过程:北魏人杨炫之著述的《洛阳伽蓝记》,与《水经注》、《齐民要术》合称北魏百年来三大奇书,阐述了当年洛阳城的辉煌壮丽。《烟花易冷》所描述的正是1500年前,杨炫之笔下那个盛极繁华后倾塌颓圮的千年古都洛阳城中,一名皇家将领的爱情故事。方文山还据此书精心创作了当年的洛阳城模型。
延续其一贯的“中国风”格调,《烟花易冷》中的深情词句,也许正是自己古典情怀的真挚表达“雨纷纷旧故里草木深/我听闻你始终一个人/斑驳的城门盘踞着老树根/石板上回荡的是再等……你仍守着孤城/城郊牧笛声落在那座野村……跟着红尘跟随我浪迹一生/伽蓝寺听雨声盼永恒……”
“文化识别度”是安身立命之本
方文山喜欢出国旅游,因为去别的国家可以感受到另一种文化氛围、看到与本国文化有反差的东西,形成新鲜感。每到一地,他最喜欢看的是建筑,在他看来:建筑是一个民族文化的视觉呈现,高度聚焦了当地的文化特征。一个城市能够凸显其文化视觉度,就增加了旅游,娱乐的吸引力。在这方面,日本的京都给方文山留下了深刻的印象。
他说:“如果有一个唐朝人,坐着时空穿梭机到了日本的京都和中国的西安,他不会认为西安是长安,他会认为京都就是长安。因为西安的建筑模式及建筑外貌,已经跟唐朝距离太遥远,而京都更符合唐人的时空背景。京都的文化设计艺术性很高,城市的风貌会吸引你去旅游,因为它有很强的文化识别度。”
眼前忽然浮现出他的样子。对了,初见他时,也是有着漫天烟火的。
那日和双儿去逛庙会,天上正放着烟火,双儿甚是兴奋地指着天:“小姐你看,这烟火真漂亮!”“是啊。”我应了一声。那烟火委实好看,可不知为何,此刻我却鬼使神差地一侧目。
惊鸿一瞥,我看见了他。
他身着月白色长袍,手执折扇身边的小厮不知与他说了什么,他淡淡地笑着。
只一眼便沉沦,那漫天的烟火好似都成了他笑容的陪衬。
人群突然骚动起来,争相往前涌去。在推搡中,我被挤到一条小巷中。待我稳住了身形,环视四周,哪还有双儿的影子?“双儿,你在哪?”我着急的冲人群叫喊,却没有回音。
“这位姑娘是要找谁啊?”一只大手伴着戏谑的声音搭在我肩上。我一惊,连忙躲开。眼前的男人满脸胡渣,正色迷迷地看着我。我怒道:“你是何人,胆敢如此放肆。”“呵,还有几分脾气,小爷我喜欢。”他脸上堆起恶心的笑,作势要向我扑来。看来今日是遇上登徒子了。我暗叫不好。往旁一躲,堪堪避过,却不小心摔倒在地。“哟,还敢躲。”他搓着手向我逼近,神情猥琐,“小娘子,还是乖乖跟我回家吧。”
我吓得腿都软了,几乎要哭出来。正当这时,上方突然跳下一个月白色的身影,挡在我面前,而后一拳打在那登徒子的胸口,将他打得连连后退,嘴角流血。好厉害!我在心中惊叹。只见那登徒子捂着胸口,撂下一句“你们给我等着”,便狼狈逃走了。
“这世上竟还有这般之徒。”男子喃喃自语。
我见那登徒子跑了,心中的不安也渐渐散去。想要站起来,却发现自己失了力气。
“姑娘,无恙否?”温润的声音自上方传来。我抬起头,映入眼底的是一抹淡淡的笑。
我突然愣住了。是他。
直到耳边飘来一句“失礼了”,我才回过神来,而此时我已被他拉了起来。
我低下头,看着左手腕,那里还残留着他握过的温柔。我不禁红了脸,更深的埋下头掩饰尴尬。
“无碍,心然多谢公子相救。敢问,”我顿了顿,紧张的问道,“敢问公子尊姓大名?”我从未如此急于知道一个男子的姓名,这有失体统。可是今天这是怎么了?
正暗自懊恼着就听得他说:“在下洛原,姑娘可要小心些,别再被这些登徒子缠上了。”
“小姐,小姐……”洛原话音刚落,不远处就传来双儿的叫喊声,她正向这边跑来。
洛原看了一眼双儿的方向,转而又看向我,微微一笑,抱拳道:“在下告辞,后会有期。”话落,还未等我答话,便飞身上屋顶离开了。
我望着他离去了方向,不知从何而来的失落涌上心头。双儿此刻已跑至我身旁,对我说着什么,我却无心再听了。
回府后,我几乎召集了所有人寻他,可他却像是人间蒸发了一般,一直杳无音信。心下不禁一阵怅然。我总是忽然想起他,想起他的样子,想起他的笑。双儿见我如此魂不守舍的样子,便调侃道:“小姐莫不是喜欢他,害了相思病了?”
我,喜欢洛原?
也许吧,也许自那惊鸿一瞥起,他便已深深地印在我心中,令我无法忘怀了。
洛原,洛原。
……
我收回了飘远的神思,望向窗外。窗外的烟火已终了,没有在空中留下一星半点的痕迹。
“后会有期。”我轻轻地念着他曾说过的话,悠悠的叹了口气。
自那日起,我再没见过洛原。也许,与他而言,我只是他生命中的一个过客,也许,他早已不记得我了。
心中忍不住划过一丝悲伤。唉,罢了,罢了。
近年来,国内低酰基结冷胶性能大部分已达到美国Kelco水平,而对高酰基结冷胶研究较少[4],高酰基结冷胶生产工艺研究方面,仅有张士楚等[5]、张禹等[6]、王学刚等[7]专利3篇。笔者通过对结冷胶发酵配方的优化改进,筛选出一种适合生产高酰基结冷胶的发酵配方,为其规模化生产奠定了一定的基础。
1材料与方法
1.1试验材料与仪器
1.1.1供试材料。菌种:结冷胶菌种G11.3-9(实验室保藏)。试剂:豆粉(自制)、牛肉膏、蔗糖、鱼蛋白胨、葡萄糖,乳糖,KH2PO4,KCl,MgSO4·7H2O,FeSO4·4H2O,CaCO3,CaCl2,CaSO4·2H2O,试剂均为分析纯。种子培养基:葡萄糖1.0%,NaCl 0.5%,鱼蛋白胨0.6%,牛肉膏0.3%,pH值为7.0~7.2。发酵培养基:蔗糖2.75%,鱼蛋白胨0.25%,磷酸盐0.10%。
1.1.2供试仪器。HIQ-150型生物摇床,武汉江城生物科技有限公司生产;微生物发酵罐,江苏科海生产;LS-30型立式压力蒸汽灭菌器,上海博讯实业有限公司医疗设备厂生产;DV-Ⅱ型粘度计,美国Brookfield公司生产;电子显微镜,CX21FS1,日本OLYMPUS公司生产;精确到0.001 g的电子天平;精密酸度计,PHS-3C型,上海大普仪器有限公司生产;均质机;质构仪,BROOKFIELD CT3型。
1.2试验方法
1.2.1培养方法。①种子液制备。取实验室保藏的结冷胶菌种菌悬液0.5 mL,接入装有100 mL种子培养基的250 mL三角瓶中,置恒温摇床培养,转速260 r/min,温度(30±1)℃。②发酵摇瓶培养。取5 mL活化好的种子液,接入装有100 mL发酵培养基的500 mL三角瓶中,转速为260 r/min,温度为(30±1)℃,于摇床中培养。③发酵罐培养。装培养基40 L于50 L发酵罐,温度(30±1)℃,pH值7.0~7.2,接种量5%(v/v),调节空气流量和转速控制溶氧,为控制pH值,过程添加20%NaOH溶液。
1.2.2测定方法。①发酵液粘度测定。除有说明外,在25 ℃,4号转子,30 r/min条件下测定;②还原糖测定(GB50097-85);③胶体收率测定。采用乙醇沉淀法。④胶体纯度测定参见GB 25535-2010[8]胶体性能测其悬浮性能以及弹性。
1.2.3单因素试验。①碳源。分别用葡萄糖、麦芽糖、乳糖、蔗糖、可溶性淀粉作为碳源,其他组分相同,制成发酵培养基进行摇瓶发酵培养,60 h后测定发酵液粘度、胶体收率、胶体性能,确定最佳碳源。②氮源。分别用豆粉、豆饼粉、鱼蛋白胨、玉米浆、鱼蛋白胨作为氮源,其他组分相同,制成发酵培养基进行摇瓶发酵培养,60 h后测定发酵液粘度、胶体收率、胶体性能,确定最佳氮源。③无机盐。分别用KH2PO4、MgSO4·7H2O、FeSO4·4H2O、KCl、Na2HPO4作为无机盐,其他组分相同,制成发酵培养基进行摇瓶发酵培养,60 h后测定发酵液粘度、胶体收率、胶体性能,确定最佳无机盐。④钙盐。分别用CaCO3、CaCl2、CaSO4·2H2O、Ca(NO3)2·4H2O作为钙盐,其他组分相同,制成发酵培养基进行摇瓶发酵培养,60 h后测定发酵液粘度、胶体收率、胶体性能,确定最佳钙盐。
1.2.4正交试验。根据高酰基结冷胶发酵条件单因素优化试验结果,选出最佳的碳源、氮源、无机盐、钙盐,设计4因素3水平正交试验,选用L9(34)正交表进行正交试验(表1)。
2结果与分析
2.1发酵培养及优化
2.1.1碳源。如表2所示,以蔗糖、葡萄糖作为碳源,结冷胶的发酵粘度均较高,分别达到17 300、15 300 cp,粗胶收率均较高,分别达到1.65%和1.59%,说明蔗糖是结冷胶发酵的最佳碳源,葡萄糖次之。
2.1.2氮源。结冷胶产生菌在以鱼蛋白胨作为氮源时,如表3所示,其胶体的发酵粘度及粗胶收率明显高于其他氮源,故结冷胶发酵最佳氮源为鱼蛋白胨。
2.1.3无机盐。KH2PO4作为无机盐时,如表4所示,结冷胶的发酵粘度及粗胶收率均最高,分别达到18 000 cp和1.64%,其次是MgSO4·7H2O。
2.1.4钙盐。在结冷胶发酵培养基中加入各种钙盐,结果如表5所示,以加入CaCO3的效果最好,粗胶收率和发酵粘度均最高,分别达到1.52%和15 900 cp。
2.1.5正交试验。正交试验结果如表6所示。由表6可知,影响结冷胶发酵因素的顺序为B>A>D>C。得出的结冷胶发酵最佳配方为:A2B3C3D1,即鱼蛋白胨0.25%,蔗糖2.75%,CaCO3 0.12%,KH2PO4 0.10%。
2.2发酵罐试验
利用摇瓶优化得到的发酵配方在50 L发酵罐中发酵生产结冷胶,发酵罐温度30 ℃,搅拌速度(120~250)r/min,pH值控制在7.0~7.2,如有必要,加入氢氧化钠溶液调整;发酵结果如表7所示。
利用50 L发酵罐中的发酵液酸沉乙醇一次脱色均质调整pH值均质过滤乙醇二次脱色过滤烘干,胶体收率比粗胶收率普遍低0.15%~0.20%,但纯度、悬浮性能、胶体弹性均能达到要求标准。
3结论
通过高酰基结冷胶发酵生产工艺优化研究,试验得到的高酰基结冷胶最佳发酵培养基配方为:氮源为鱼蛋白胨0.25%,碳源为蔗糖2.75%,无机盐为KH2PO4 0.10%,钙盐为CaCO3 0.12%,粗胶收率可以达到1.75%,胶体纯收率可达1.55%,理化指标、微生物指标、悬浮性能、胶体弹性[9-13]均能达到相关要求标准。
4参考文献
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[3] 孟岳成,邱蓉.高酰基结冷胶(HA)特性的研究进展[J].中国食品添加剂,2008(5):45-49.
[4] 李龙伟,朱姝宾,李锦,等.高酰基结冷胶工艺研究[J].现代农业科技,2011(18):352-355.
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[6] 张禹,张国沛.高酰基结冷胶的后提取方法[P].中国,200510012415. 1.2005-03-25.
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关键词:深冷脱氮;天然气;液化;优化
1 前言
近年来,开发和利用天然气是当今世界能源发展的主流。天然气由于具有高效、洁净、方便等方面的优势,从而在化工行业中得到广泛的应用。天然气的主要成分是烃类,也含有少量的非烃类,如氮气等。当天然气中含氮量较高时,不仅热值低、在集输过程中能耗较大。根据相关资料,不同气源中含氮量一般在0.1%~14.26%(摩尔分数),个别甚至大于20%,脱除其中的氮气,是提高天然气综合利用价值的重要途径。对目前来说,深冷脱氮工艺具有处理量大、氮气脱除率高、节约能源等优势,成为液化工艺中脱氮的主要方法。
2 脱氮液化工艺原理
目前,根据国外标准(EN1160-96),LNG 产品中的N2含量(摩尔分数)应小于5%,而经验表明,只要控制LNG中氮气含量小于1%,并加强蒸发气的监测,就可以有效避免LNG储运过程中的翻滚现象。实际上,在目前LNG产品中氮气的含量小于5%即可以满足一般产品规格。在模拟过程中,设定氮气含量为3%,预留设备一定的操作弹性,保证最终产品中的氮气含量能够达标。
深冷脱氮工艺通常是将具有一定压力的天然气在有制冷剂提供冷量的条件下经过预冷、冷凝、脱氮、过冷,从而使天然气液化的过程。常用的制冷方法有氮气循环制冷、混合冷剂制冷和N2-CH4膨胀制冷。本文讨论的液化工艺由纯氮气和氮甲烷分别作为制冷剂。工艺流程图如图1。
如上图,制冷剂经过压缩机和膨胀机增压端增压、冷却器冷却后进入冷箱。在冷箱中经过预冷后,一部分进入膨胀机膨胀做功,降温降压,进入主换热器作为主要的冷源。另一部分制冷剂在主换热器中过冷后经过节流降温,作为精馏脱氮塔上部冷却器的冷源净化天然气进入预冷换热器预冷至约-50℃,引出分离重烃后作为精馏脱氮塔塔底再沸器的热源,温度继续降低,从精馏塔再沸器出来后,进入主换热器换热至天然气全部液化,然后经过节流进入精馏塔脱氮,脱氮过程要求生产LNG中的氮气含量约为3%,甲烷回收率为95%。脱氮后的饱和LNG从塔底流出,经过节流降温过冷,进入储罐,生成的少量BOG去换热器复热作为燃料去其他单元。
3 模拟过程与结果
进入液化单元原料气的成分如表2所示。
模拟采用过程系统软件HYSYS,液化规模为每天处理气量4.08×104Nm3。
3.1 混合制冷剂操作条件的影响
图2显示了进入冷箱前制冷剂的温度和压力与液化单元能耗的关系,散点为各条件下液化单元功耗,细实线为回归拟合曲线。从图2(a)中可以看到,当制冷剂的循环温度逐渐增大时,液化单元功耗在不断地减小。对相同处理规模来说,制冷剂提供的冷量相同(两端温差),也即制冷剂进出口温度均升高,这意味着膨胀机出口的低温制冷剂温度升高,膨胀机绝热效率不变,则进入膨胀机的制冷剂压力降低,也即压缩机压缩制冷剂功耗就降低。当制冷剂循环温度不变,压力变化时,从图2(b)中可以看出,液化单元功耗随着压力的增大以显著的幂函数逐渐降低。
3.2 原料天然气操作条件的影响
图3显示了原料天然气操作温度和压力变化时对液化单元功耗的影响。由图3(a)可知,当原料天然气的操作温度增大时,液化单元功耗在呈明显地线性增长。对相同的处理规模来说,其进入冷箱的温度增大而出口温度不变,需要的冷量也增加,能耗就增加。图3(b)中显示当原料气的温度不变时,液化单元功耗随着压力的增高液化单元功耗先减小后增大,最佳操作压力约为2.6MpaG。当原料天然气的压力升高时,液化温度升高,需要的冷量减少,出主换热器后的温度升高,节流后进入精馏塔的温度升高,如果精馏塔的操作条件和脱氮要求不变,塔顶冷凝器需提供的冷量增大,假定预冷换热器和主换热器需要提供的冷量不变,则制冷剂总流量增大,压缩机功耗增大。如果制冷剂总量不变,则需要增大膨胀比,使膨胀后的温度降低,因膨胀后压力不变,就需要提高膨胀前的进气压力,这需要分成两部分分析。如果透平膨胀机的增压端能够提供增加的压力,则不必耗费压缩机功耗,甚至可以降低压缩机功耗,否则也相应要增大压缩机压缩比,增大功耗。前者对应于随着压力的增大,功耗减小的情况,后者对应于随着压力增大,液化单元功耗增大的情况。
3.3 制冷剂配比的影响
当氮气和甲烷作为混合制冷剂时,两者之间的配比变化影响了液化单元的功耗。图4显示了氮气在混合制冷剂中所占比例(摩尔分数)从0.5到1.0过程中液化单元功耗的变化情况。随着氮气所占比例的增大,液化单元功耗在逐步增大。这是因为氮气比例增大时,制冷剂降低温度需要的功耗增大对于相同流量的制冷剂,如果膨胀机绝热效率与进出口压力、进口温度不变时,氮气比例大的制冷剂的出口温度较高,所能提供的冷量较少。要提供冷量,必须增大进气压力和进出口压力差,也就相应增大了压缩机的功耗。氮气比例与制冷剂露点关系见图5。
3.4 精馏塔操作条件的变化
图6表示在 0.6~1.0MPaG 操作压力范围内,当精馏塔压力增大时,要达到相同的分馏要求,塔顶需要提供更多的冷量,制冷剂冷量也增大,导致液化单元的功耗增大。
4 结论
综上所述,深冷脱氮工艺在液化单元的能耗会受到制冷剂组成、循环压力、原料天然气的温度和精馏塔操作压力等因素的影响。本例中整个液化单元功耗最小时对应的制冷剂循环压力和温度为0.4MPaG和35℃,原料天然气压力和温度分别为2.6MPaG和20℃,精馏塔压力为0.6MPaG,此时功耗为0.527kW/Nm3。当其他操作条件不变时,利用氮甲烷制冷剂比纯氮气降低了液化单元的能耗,功耗减少了约10%。因此,本工艺在化工行业中应用中取得了良好的经济效益,应值得推广与应用。
参考文献:
[关键词]波棱素;脂质体;制备工艺;处方优化
波棱瓜子系葫芦科波棱瓜属植物波棱瓜Herpetospermum caudigerum Wall.的干燥成熟种子[1]。它是常用的藏药,主治肝炎、胆囊炎等疾病,亦有治疗消化不良、清热解毒之功效[2-3]。波棱素(herpetin, HPT)是波棱瓜子中的木脂素分离出来的活性单体成分,药理学活性研究表明,其具有抗肝损伤、保肝降酶、抑制乙型肝炎病毒复制的作用[4]。HPT在水中的溶解度很低(≈0.1 g・L-1),为了增加HPT溶解度并提高其肝脏靶向性,本研究将HPT制成脂质体并优化了制备工艺,为后期研究奠定基础。
1 材料
Acquity型超高效液相色谱(美国Waters公司);JEM-100CX透射电子显微镜(日本JEOL公司);Zetasizer Nano ZS90型激光粒度及电位分析仪(英国Malvern公司);BS210S电子天平(德国Sartorius公司)。波棱素对照品(自制,纯度98.59%);波棱素结晶(自制,纯度>95%);大豆卵磷脂,蛋黄卵磷脂(德国Lipoid公司);胆固醇(美国Sigma公司);0.5 mL超滤离心管(10 kDa)(Millpore公司);乙腈为色谱纯,其他试剂均为分析纯,水为重蒸水。
2 方法与结果
2.1 HPT脂质体包封率的测定
2.1.1 色谱条件 采用UPLC测定样品HPT的含量,计算脂质体的包封率。色谱条件如下:采用C18 BEH色谱柱(2.1 mm×50 mm,1.7 μm),流动相乙腈-2%冰醋酸(24∶76)[5],流速0.6 mL・min-1,柱温30 ℃,检测波长280 nm,进样体积5 μL。色谱图见图1。
2.1.2 线性范围 精密称取HPT对照品适量,加入甲醇超声溶解,定容得到1.00 g・L-1的对照品储备液。精密量取储备液适量,分别置于量瓶中,用流动相稀释至刻度,摇匀,配置得到质量浓度分别为2.0,4.0,10.0,20.0,40.0,100.0 mg・L-1的工作液,采用UPLC分析,测定峰面积值。将峰面积(Y)和浓度(X)进行回归,得到回归方程Y=10 976X-22 391,r=0.999 9,HPT在2.0~100.0 mg・L-1线性关系良好。
2.1.3 回收率及精密度试验 精密量取已知含量的样品溶液9份,分别加入高、中、低3种浓度的HPT对照品溶液,经过测定,平均回收率分别为102%,99.5%,96.8%,日内精密度RSD 2.3%,日间精密度RSD 4.6%。
2.2 超滤法测定包封率
2.2.1 超滤法对空白脂质体的回收率 取空白脂质体溶液适量,经超滤离心后收集滤液,用定磷法测定磷含量。结果未检测到磷,说明脂质体全部被截留。
2.2.2 超滤法对游离药物的回收率 分别取HPT对照品溶液4.0,20.0,80.0 mL经超滤离心后,测定滤液中的HPT含量,计算回收率。结果显示回收率均大于95%,说明超滤膜对HPT几乎无吸附作用。
2.2.3 超滤法测定脂质体包封率 量取HPT脂质体溶液0.5 mL,置于Millpore超滤管中,4 000 r・min-1离心10 min后收集滤液,按2.1.1项下方法测定峰面积,用外标一点法计算HPT含量,记为W1;另精密量取HPT脂质体溶液0.5 mL,加入甲醇超声10 min后定容,摇匀,同法测定HPT含量,计为W2,根据下列公式计算包封率:包封率(EE)=(1-W1/W2)×100%。
2.3 HPT脂质体制备方法的选择
以HPT脂质体的稳定性、粒径大小及包封率为指标,按照相同的处方量,分别按照薄膜分散法、注入法、逆相蒸发法制备脂质体,筛选适宜的制备方法。结果见表1,综合考虑HPT脂质体的稳定性、粒径大小及包封率,最终选择薄膜分散法制备HPT脂质体。
2.4 均匀设计优选HPT脂质体膜材处方
处方以大豆磷脂、胆固醇、HPT 3种成分组成,以三者在其变量范围内的百分含量作自变量,分别设为X1,X2和X3,以HPT脂质体的包封率为指标,采用带约束的混料均匀设计,进行处方优化。以预实验结果为参考,制定如下约束条件:①60%≤X1≤89%,10%≤X2≤20%,1%≤X3≤20%;②X1+X2+X3=100%。采用UD3.0均匀设计软件,设计U9(93)表进行试验,见表2。
对实验结果进行分析,得到方程Y=67.2-16.5X1X1+184.96X1X2+506.25X1X3-436.81X2X3-2 784.6X3X3,显著性水平α=0.05,检验值Ft=29.37,临界值F(5,3)=9.01,回归方程显著。根据回归方程,得出优化实验处方为:大豆磷脂用量78.05%,胆固醇19.51%,HPT 2.44%。
2.5 HPT脂质体的制备
根据上述筛选条件,采用薄膜分散法制备HPT。按照均匀设计优选的处方比例,称取HPT 24.4 mg,大豆磷脂780.5 mg和胆固醇195.1 mg,溶于100 mL氯仿中,转入1 L磨口圆底烧瓶中,30 ℃水浴减压除去氯仿,使成膜材料在瓶底部形成一均匀类脂膜。然后加入一定浓度的F68溶液50 mL,在50 ℃下旋转蒸发仪转动洗膜30 min,将类脂膜洗脱并水合成脂质体初悬液,水浴超声,过0.22 μm滤膜,即得HPT脂质体。
2.5.1 普流尼克(F68)用量对脂质体包封率的影响 按2.4项下方法制备HPT脂质体,固定其他辅料用量,考察不同F68用量对HPT脂质体包封率的影响。分别选择F68溶液浓度为0.2%,0.5%,1.0%,2.0%进行试验。结果见表3,随着F68溶液浓度增加到0.5%时,HPT脂质体包封率达到稳定,故选用0.5% F68溶液进行水合。
2.5.2 超声时间对脂质体包封率的影响 按2.4项下方法制备HPT脂质体,考察不同超声时间对HPT脂质体包封率的影响。分别选择水浴超声5,10,20,30 min进行试验。结果见表4,随着水浴超声时间延长,HPT脂质体包封率逐渐增加,水浴超声20 min后,包封率无显著增加,故选用水浴超声20 min。
2.5.3 优化的制备工艺 称取HPT,大豆磷脂和胆固醇,溶于100 mL氯仿中,转入1 L磨口圆底烧瓶中,30 ℃水浴减压除去氯仿,使成膜材料在瓶底部形成一均匀类脂膜。然后加入0.5% F68溶液50 mL,在50 ℃下旋转蒸发仪转动洗膜30 min,将类脂膜洗脱并水合成脂质体初悬液,水浴超声20 min,过0.22 μm滤膜,即得HPT脂质体。3批HPT脂质体的平均包封率为(94.50±2.15)%,平均粒径为(119.2±10.7)nm,多分散系数为0.156±0.075。
2.5.4 脂质体的形态观察 取优化工艺条件下制备的HPT脂质体溶液,将稀释到一定浓度的脂质体溶液滴至专用铜网上,用4%磷钨酸溶液负染30 s[6],自然晾干后,用透射电子显微镜观察粒子的形态,见图2。所制备的HPT脂质体为近球状小囊泡,形态圆整。
3 讨论
目前国内对波棱素的研究仍处于起步阶段,相关的波棱素制剂研究更是鲜有报道。本研究首次报道了波棱素脂质体制备方法,并系统研究了影响波棱素脂质体包封率的主要因素:①制备方法的选择较为关键,为了得到粒径较小、包封率高、分散均一的脂质体,筛选结果显示薄膜分散法能获得预期的效果;②带约束的混料均匀设计是常用的处方优化实验方法,每个因素的贡献被表示为其在处方中所占配比,并进行边界约束,所有因素总和为100%,通过试验求出可以计算和推测最佳混料比[6-7],从本研究的均匀设计结果可知,HPT用量以及大豆磷脂用量是比较关键的,直接影响脂质体的包封率高低,胆固醇用量的影响并不显著;③在脂质体制备中,脱膜和水合过程中加入0.5% F68水溶液,有利于脂质体的稳定及提高包封率,F68结构中的高分子链自由舒展,可在油水界面与磷脂形成复合凝聚膜,增加界面膜的柔韧性,同时,其亲水性良好的聚氧乙烯链可部分吸附在乳滴表面,产生较大的空间位阻,阻止乳滴的聚合,使脂质体更加稳定[8]。本研究也尝试过仅加入PBS溶液或者蒸馏水进行脱膜和水合,均不如F68水溶液的效果理想。本研究通过制备波棱素脂质体,大幅地提高了波棱素的溶解性,为后续研究奠定了基础。今后的研究中将着重考察波棱素脂质体的体内肝靶向性以及药效作用。
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Study on preparation process and formulation
optimization of herpetin liposomes
ZHANG Xin TAN Rui GU Jian HE Li-li FAN Li-na NAN Xing-mei1
(1.Ethinic Medicine Research Institute, Southwest University for Nationalities, Chengdu 610041, China;
2.Life Science and Engineering College, Southwest Jiaotong University, Chengdu 610031, China)
[Abstract] Herpetin (HPT) is an active monomer constituent isolated from lignanoid in seeds of Herpetospermum caudigerum. HPT shows inhibitory effects in hepatic injury and HBV-DNA and the replication. In the study, we successfully prepare herpetin liposomes by film dispersion method for the first time. The prescription process was optimized, with the entrapment efficiency as the index. According to the optimized prescription, the mass ratio of HPT: phospholipids: cholesterol was 2.44∶78.05∶19.51, the hydration and de-molding process was performed with 0.5% F68 solution at 50 ℃, and the water-bath ultrasonic time was 20 min. The HPT liposomes prepared by this method showed an average entrapment efficiency of (94.50±2.15)% and a particle size of (119.2±10.7) nm, which was consistent with the trial expectations and will lay a solid foundation for the hepatic targeting delivery system in future.
烟花易冷,人难依旧,短短一叶扁舟,载不动许多愁,恰似苏州城外的微笑,如今却没有为谁而留,前年流传的钟声,是否还能优雅到客船,残月望不尽,思绪独凌乱,那一年,烟花易冷,人难依旧!
繁花似锦,残叶纷飞,古寺的箫声,让人倍感凄冷,照亮万物的是沧海落月,莹亮不绝,独自散步于苏州城外,朦胧的月,泛舟于江渚之外,寒来袖间,风不减,吹袭一夜,寒意四溅,忘步于苏州城外,那灿烂的烟花,只为你一个人开放,那一年,我在城外,望着城内!
江南三月烟花笑,风雨飘零雪花谣,江南的气息浓厚的蕴藏整个天堂,彩虹的微笑,只因风太招摇,落叶的寒秋淡忘不了漫天的思念,而我至今仍在这江南的一方望着塞北的荒野,不经回忆那年“江南夜色下的小桥屋檐,却永远读不懂塞北的荒野”那一年,我在江南,望着塞北!
雪花零零散散的缀下,泛起一阵红尘,只因那时年少,总把承诺说的太早,只因那时年少,总把爱情想得太好。漫漫红尘路,唯盼叠影成双,似是明月照影归,那一年,我曾期盼,塞北能给江南回忆!
月色下的荷塘,是苏州城外寂静的珍藏,风土人情的吝啬总把零星点点的星色荡漾于水中月之中,人生犹如临月照花,临水望月,触之咫尺,望之天涯!那一年,你离我越远,回忆离我越近!
雨点泼墨着渐离的江南水乡,朦胧了园林里抬不起的望眼,模糊了天平山若隐的金秋红叶。雨点敲打着窗子,行走在夜里的车儿没了片刻的住脚,只是游离着过往的景致,只是奔跑着来往的红尘。丝丝的冷意钻进了怀中,他不经意打了个寒颤,微睁了双眼,却不知行到了哪里,闭目深思,应该过了南京,应该到了合肥,应该……
一睁开眼,好熟悉的街道。天已经蒙蒙亮了,细雨中撑伞的人们赶早儿买着菜,车只得缓缓地行着。“干扣面”,——当这三个明晃晃的招牌字映入眼帘的时候,飘浮着的二月终于落了地,漂泊着的二月终于上了岸,他也跟着匆忙下了车。寒风里,妈已经守在了门口,行李一件件地被搬到了屋子里。
在楼上,远望这平和而安静的世界,在旧日的足迹中,他重拾了心底的某些渴望,在彼此的言谈里,他找到了昔日家的感觉。二月,原来二月一直是这样的。当自己还没有远行,从小就盼着在外的父亲早点归来,渐大了就盼着出远门的哥哥能早日归来。如今,他自己倒成了漂泊在外的人,想想妈也该有着这种盼吧!
二月,其实一切的牵挂都在这个时候被放大,继而变得沉重。如果旅途被搁浅,如果思念被阻隔,如果远方的雪下得深了,如果……嘴角边微露出一丝笑意,他忽然觉得很庆幸,庆幸自己及时归来,庆幸这忽至的团圆,庆幸这家本该的温暖。
窗外,天渐渐暗淡了下来。回家的第一晚,也在那一刻变得清晰。“撒盐拟可把”,盐粒如雨般飘落,打得屋檐啪啪,打得枝头惊惊,打得心头凉凉。偌大的院落,就只剩下他一个人,还有妈临别时的交待,——“饭菜都在壁橱里放着,别忘了热着吃”。走出厨房,缕缕炊烟已无声无息地远去,甬路不甚长,墙角边的层层绿意尚在,客厅的灯光有些耀眼,按灭后就只剩下耳房,没有好看的节目索性电视也关了,坐在书桌前,听着哗哗的声音,不知他们从姥姥家回来了没有,看看窗外,盐粒依旧下得是急促。就在这时,电话铃响了,是大姐的声音,——“怎么,不回来了。那好吧,我会的!”
二月的夜晚似乎冷了下来,他蜷缩着身子,想着自己也在远方,也在那个已经剥落了思念的村子里。
二月的烟花依旧绽放在耳畔,二月的烟花凋零后冷在了角落,二月的烟花并没有在那晚的梦里出现。
这个二月按着它旧时的模样行走着,游离着。访亲会友,打扫房屋,蒸上馒头,贴好楹联,而鞭炮早一骨禄炸开了眼。新年也在谈笑间到来了,他赶着早儿给爷爷磕了个响头,赶着早儿东串串西逛逛,赶着早儿到奶奶坟前烧了些纸,赶着早儿为哥哥写下了《新年,只想为你拜年》。
当然,最令他欢喜的,还是一家人能够围坐着,边包饺子边看除夕夜的春晚。些许的暖意冲淡了窗外渐冷的烟花,些许的暖意散发了开来,揪着过往更添了几分的热闹。想想那时,提着自制的灯笼挨家挨户地串着门子,确实令人向往与怀念;想想那时,和童年的伙伴围着堆好的雪人又唱又跳至晚方归,该是件多么难忘的事。
雪花赶着巧儿地飘落了,又在夜里铺着二月的床缛,等着月儿来安歇,盼着它圆了的面孔再次酣入梦中。然而,雪花儿终是空欢喜了一场,它哪里晓得细雨会和自己相伴着出现,停留的乌云更是早将厌烦着的玉盘躲避,冷清的夜色渐渐暗淡了今年的元宵。
他和一位在家的好友本还打算着望月思远,谁承望空留了奢望。然而,若是久别重逢,自有一股暖流汇心而来。好友已经复读了一年,但愿再次的备战高考,可以喜上眉梢,那他即便身在远方,也会满心的欢喜。简单地邀着好友吃了顿妈亲手煮的元宵,便一起步着细雨入了人群。广场依旧聚集着些儿望眼,或盼着乌云散,或盼着细雨停,他们只是静静地望着满天易散的烟花,听着雪花缤纷的细语。
我想,在每个人的回忆里,都会有一段,难忘的情感,一份刻骨铭心,在每个人的心里,都会有一笔,难以勾勒的清颜,那么,属于我的那一笔,那一份呢?
昨晚,独自坐在房檐上,看满城烟花尽放,好美啊,看来明天又是好日子,见证幸福长久的一天,望着月儿,双手合并,默默祈求上苍,请,许【她】他不离不弃,莫失莫忘的誓言,平平淡淡,相濡以沫的生活吧,永如初见般,续写千年爱的华章。
都说烟花最美,是啊,烟花虽美,可烟花即燃成烟,随风而散,如此美丽,绚烂,短暂的烟花,为什么尘世间,还要以它为爱的主题,那可是一辈子,一生一世啊,为什么,谁能解与我听?烟花易冷,月儿易缺,更何况是,俗世情深呢?
细想来,也许是我把自己的不辛驾驭到,我讨厌的尘世吧,现实的残酷,难舍的红尘,让我一点一点,渐渐的陷入你为我设下的圈套里,无法自拔,痛彻心扉,即使是遍体鳞伤,你永远都是我的天地人间。
原以为自己很坚强,可以克服一切,不想,事事不是我所愿,不是我所想,好累,试着放下吧,放下一切,收拾行囊,抛开世事,远离红尘,寻一处青山碧水,吟一曲云水禅心,品一杯前尘过往,执一卷素墨丹青,抒一怀淡淡情思。