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【关键词】 Toll样受体4;转录因子-κB;妊娠期高血压疾病
[Abstract] Objective To detect Toll-like receptor 4 and NF-κB in the placenta in order to evaluate the relationship of Toll-like receptor 4 and NF-κB with hypertensive disorder complicating pregnancy.Methods The expression of Toll-like receptor 4 and NF-κB in 20 normal pregnant women(the control group )and 40 hypertensive pregnant women(the study group),encluding 10 patients with gestational hypertension and 30 patients with preeelampsia placenta was detected by immunohistochemistry.Results The Toll-like receptor 4 and NF-κB expression levels in PE group were all significantly higher than those in normal pregnant group (P
[Key words] Toll-like receptor 4; nuclear factor-kappa B; hypertensive disorder complicating pregnancy
妊娠期高血压疾病是影响母儿围生期病率和死亡率重要原因之一,妊娠期高血压疾病的病因及发病机制至今未完全阐明。近年来研究发现妊娠期高血压疾病与炎性细胞因子有关,而Toll样受体(toll like receptors,TRLs)是联系固有免疫与适应性免疫的纽带,是激活相关细胞的NF-κB分泌炎症介质的闸门受体,其中TLR4在这个过程中起着关键的作用[1] 。本文旨在探讨妊娠期高血压疾病胎盘组织中TLR4和NF-κB的表达及意义。
1 资料与方法
1.1 研究对象 选择2006年6月-2007年6月在我院住院分娩的妊娠期高血压疾病患者40例,其中妊娠期高血压10例,子痫前期轻度15例,重度15例。平均年龄(27.9±3.2)岁,平均孕周为(268.3±24.0)天。妊娠期高血压疾病的诊断及分类标准参照乐杰主编《妇产科学》第7版为标准。随机选取同期住院分娩的健康足月孕妇20例为对照组,平均年龄(28.8±1.7)岁,平均孕周为(276.5±5.9)天。各组均无其他产科并发症及妊娠合并症。两组孕妇年龄及孕周比较,差异无显著性(P>0.05)。
1.2 方法 胎盘娩出后,立即取胎盘母体面中央绒毛组织约1.0cm×1.0cm×1.0cm大小、无钙化的胎盘组织。用生理盐水冲掉血液,然后置于4%的多聚甲醛中固定24h,低温石蜡包埋,4μm连续切片,进行免疫组织化学染色(SABC法)。
1.3 试剂 TLR4及NF-κB免疫组化染色试剂盒及DAB染色试剂盒均购自武汉博士德生物工程有限公司,具体操作方法严格按说明书进行。
1.4 结果判定 TLR4及NF-κB以镜下在细胞胞浆出现棕黄色颗粒, 用乳腺癌阳性片做阳性对照,PBS液代替一抗做阴性对照。由两个观察者对切片进行盲式阅片,显微镜下随机选择5个视野,观察所选择的高倍镜视野中的所有滋养细胞,记录阳性染色细胞百分数(%)并计分。阴性:小于5%的胎盘细胞呈阳性或无着色,计0分;弱阳性:5%~10%的胎盘细胞呈阳性,计1分;阳性:11%~50%胎盘细胞呈阳性,计2分;强阳性:大于50%的胎盘细胞呈阳性,计3分。细胞着色强度则以阳性细胞呈现的染色(棕黄色)计分:强着色:着色和已知阳性片同样强度,计3分;浅着色:着色浅,但与阴性对照片有明显区别者,计1分;染色强度在浅着色和强着色之间者为中等着色,计2分;将阳性百分数计分和细胞染色计分相加为免疫组化积分。
1.5 统计学分析 实验数据以均数±标准差表示,分析所有数据输入计算机,用SPSS 11.0统计学软件进行处理。对数据进行正态性检验和方差齐性分析后。临床资料采用t检验P
2 结果
2.1 TLR4及NF-κB在各组胎盘组织中的表达 在正常妊娠组及妊娠期高血压疾病组的胎盘组织中均有一定表达,正常妊娠胎盘组织中的TLR4及NF-κB的阳性染色主要位于合体滋养细胞(见图1及图2); TLR4及NF-κB在妊娠期高血压疾病患者胎盘组织中的表达定位与正常妊娠晚期胎盘组织的表达定位相同(见图3及图4),但在子痫前期轻度、子痫前期重度组与正常妊娠组比较,胎盘组织NF-κB含量逐渐升高,见表1。
2.2 各组胎盘滋养细胞TLR4及TLR4表达的免疫组化积分 见表1。子痫前期轻度组、子痫前期重度组与正常晚期妊娠组比较,差异有显著性(P
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3 讨论
妊娠期高血压疾病是妊娠特有的疾病。妊娠是一种成功的半同种移植现象,其成功有赖于母胎间免疫平衡。大量研究显示,妊娠期高血压疾病的发生与免疫系统的变化关系密切,妊娠期间非特异性免疫功能增强,非特异性免疫是通过炎性细胞因子发挥作用的。Medzhitov等[2]研究发现妊娠期间非特异性免疫反应过度激活可引起PE, PE患者体内存在某种因素激活单核-巨噬细胞,将造成炎性细胞因子的大量释放, 异常的滋养细胞的侵入,损伤血管内皮细胞及肾损害等,研究表明TLR4在这个过程中起着关键的作用。
Toll样受体是参与固有免疫的一类古老的蛋白质家族,TLRs在细胞信号转导中发挥重要的作用,是激活相关细胞分泌炎症介质的闸门受体,是联系固有免疫与适应性免疫的纽带。1997年Medzhitov等[3]发现了第一个存在于人细胞表面的Toll样蛋白,称Toll样受体。目前在人体内已发现10余个Toll样受体家族成员,其中与内毒素信号传导有关的主要为TLR4。TLR4启动的胞内信号转导最终激活NF-κB,诱导单核-巨噬细胞产生前炎性细胞因子,如IL-1b、IL-6、 TNF-α等。尽管PE的发病机制不清,但胎盘来源的炎症性细胞因子导致了PE的血管内皮细胞的损伤,这一结论已经得到公认。Holmlund等[4]对正常足月妊娠胎盘免疫组化研究,证明其中有TLR4的表达。Abrahams等[5]提出TLRs在介导母胎之间天然免疫中起重要作用。2005年Kim等[6]用免疫组化法研究了胎盘中的TLR4的结果相似,这一结果证实了TLR4与PE关系密切。
本研究采用免疫组化法检测妊娠期高血压疾病患者和正常妊娠晚期妇女胎盘组织中TLR4及NF-κB蛋白表达情况,结果提示TLR4及 NF-κB在PE胎盘组织合体滋养细胞中表达与正常胎盘组织相比明显升高,且随疾病的进展,表达渐增高,而妊娠期高血压患者比较虽有增高,但无统计学意义。这一结果证实了TLR4与PE的关系,可见作为引发PE的关键部位,胎盘组织中TLR4表达的变化可能PE发生的关键环节之一,并影响疾病的发展。从这一结果推测可能存在某些内源性因素刺激胎盘组织TLR4,进而激活NF-κB,引发TNF-α、IL-6的释放,表明PE时胎盘组织中TLR4表达与IL-6、TNF-α分泌之间可能存在相关性,但激活TLR4的这些内源性因素及TLR4和炎性细胞因子之间的相关性有待深入研究。
综上所述, PE患者胎盘中TLR4及NF-κB表达增加可能是PE发病机制中的关键环节之一,寻找TLR4的内源性配体是探讨子痫间前期发病机制的重要内容之一,为我们进一步探讨天然免疫对PE的影响提出新课题。
【参考文献】
1 Visser N, vanRijn BB, Rijkers GT, et al. Inflammatory changes in preeclampsia: current understanding of the maternal innate and adaptive immune response. Obstet Gynecol Surv, 2007,62(3): 191-201.
2 Medzhitov R, Janeway CA.Decoding the patterns of selfand non-self by the innate immune system. Science, 2002, 296(5566): 298-300.
3 Medzhitov R, Preston-Hurlburt P, Janeway CA. A human homo-logue of the drosophila Toll protein signals activation of adaptiveimmunity. Nature, 1997, 388(6640): 394-397.
4 Holmlund U, Cebers G, Dahlfors AR, et al. Expression and reg-ulation of the pattern recognition receptors Toll-like receptor-2 and Toll-like receptor-4 in the human placenta. Immunology,2002, 107(1): 145-151.
5 Abrahams VM,Mor G. Toll-like receptors and their role in thetrophoblast. Placenta, 2005, 26(7): 540-547.
水肿,与喝水有关吗?
一般而言,准妈妈每天都要保证摄入适当的水分,这可以有效地减少便秘和泌尿道感染的发生。因此,建议准妈妈每天应摄取至少2000毫升的水分,且最好是纯净的白开水,而非含糖饮料、果汁、咖啡或者茶。如果准妈妈不喜欢白开水,也可以在水中泡上一片柠檬、薄荷叶等等。
可是,如果在进入孕中后期后,准妈妈突然发现自己好像出现了疑似水肿的现象。那么,这会和喝水有关吗?
从生理角度讲,为了适应胎宝宝的生长发育需要,在激素及神经内分泌的影响下,准妈妈体内各个系统会发生一系列适应性的变化,这些可能会导致水肿的出现。比如子宫增大,压迫静脉,引起静脉血液循环不畅(常见于下半身),从而导致水分不能及时地排出体外等等;从病理角度讲,许多产科并发疾病,妊娠合并内外科疾病,如严重贫血、妊娠高血压、子痫前期、子痫、妊娠合并心脏病、妊娠合并慢性肾炎等都可能会引起水肿。因此,科学饮水并不是导致水肿的直接原因。不过,一些不良的饮食习惯,的确可能会导致问题的发生。
如何判断水肿情况?
妊娠期水肿大多从踝部开始显现,逐渐向上发展,按照范围和程度可分为四级,以“+”表示:水肿局限于膝盖以下为“+”;延及大腿为“++”;延及外阴及腹壁为“+++”;全身水肿或伴有腹水时为“++++”。此外,它最初的表现也可能仅仅是体重的异常增加,一般来说,若怀孕期间体重增加每周超过0.5千克,或每月增加2.7千克,则提示可能有隐性水肿。生理性水肿与病理性水肿的区别,可以通过下表初步判断。
水肿了,要限制喝水吗?
对于水肿的准妈妈来说,她们一定会有这样的疑问:我现在还可以喝水吗?其实答案很简单,即使水肿也不用刻意减少喝水的量,相反,必要的水分可以帮助体内钠的排出。而且只要通过适当休息和适当调整饮食结构和生活习惯,水肿情况大多可以得到改善。
选择利尿食物:
首先,治疗孕期水肿一般不主张使用利尿剂,因为利尿剂可能会给准妈妈和胎宝宝带来一些不必要的副作用。在饮食方面,建议少摄取高糖或精制的碳水化合物类的食物,多摄取有利尿作用的食物,例如:冬瓜、菠萝、葡萄、红豆水、绿叶蔬菜、芦笋、洋葱、大蒜、南瓜等,可以帮助消肿。此外,还可以吃一些中医认为有助于利尿的食物,如淡豆浆、冬瓜茶、玉米须煎水等,代替水来饮用。在食谱中,煮赤小豆鲤鱼汤、扁豆薏苡仁粥等药食同源的药膳也有较好的利尿效果。
保持饮食清淡:
孕期的水肿问题,还可能与准妈妈一日三餐喜欢加盐、加辣、加酸菜的重口味,而导致身体的钠含量过高有关。因此,准妈妈应该低盐饮食,包括限制酱油、腌制食物如咸肉、咸菜等,以及盐分过多的话梅类的零食、重口味的薯片、辣条等膨化食品和碱制点心。但不必刻意过分忌讳食盐,因为没有咸味,会降低食欲,影响胎宝宝的营养供给。
吃足量蔬菜水果:
蔬菜水果中含有人体必需的多种维生素和微量元素,这些成分可以提高身体抵抗力,加强新陈代谢,还具有解毒利尿等作用,比如西瓜就有利于水分排出。
多摄取蛋白质与维生素: