妊娠高血压基因检测精选(九篇)

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第1篇：妊娠高血压基因检测范文

【摘要】 目的 初步探讨同型半胱氨酸（Hcy）代谢相关酶胱硫醚β合酶(CBS)基因C572T基因突变频率在广西河池地区妊娠期高血压疾病(HDP)发病中的作用。 方法 采用等位基因特异性扩增(ASA)技术检测63例HDP患者（观察组）和32例孕期经过顺利的正常孕妇(对照组)CBS基因 C572T基因型。结果 HDP组CBS基因C572T T/T、C/T和C/C基因型频率分别为4.76%、84.13%和11.11%;对照组分别为3.13%、87.50%和9.37%;HDP组C等位基因频率为53.17%、T等位基因频率为46.83%，对照组分别为53.13%和46.87%，二者比较，差异无统计学意义(P＞0.05)。结论 CBS C572T基因突变频率与HDP发病无明显相关性，其基因突变频率可能不足以构成广西河池地区HDP发病的独立遗传危险因素。

【关键词】 妊娠期高血压疾病;胱硫醚β合酶;同型半胱氨酸;基因频率

【Abstract】Objective To study the effect of mutation frequency of cystathionine βsynthase(CBS) in patients with hypertensive disorder complication pregnancy(HDP).Methods 63 patients with HDP and 32 healthy pregnant women were pided into HDP group and control group. their C572T genotypes were detected by the technique of Allelespecific amplification (ASA).Results The frequency of CBS gene type T/T，C/T and C/C were 4.76%，84.13% and 11.11% respectively in HDP group，while the control group were 3.13%， 87.50%，9.37% respectively. The frequency of C alleles and T alleles were 53.17% and 46.83% in HDP group，while the control group were 53.13% and 46.87%.there was no significant difference between the two groups(P＞0.05). Conclusion There was not significant correlation between C572T and hypertensive disorder complication pregnancy，its mutation frequency may not be independent risk factor for hypertensive disorder complication in He Chi population.

【Key words】 Hypertensive disorder complication pregnancy;Cystathionine βsynthase；Homocysteine；gene frequency

妊娠期高血压疾病(Hypertensive disorder complication pregnancy，HDP)是威胁孕产妇健康的重要疾病，与产后出血、感染、妊娠合并心脏病一起构成孕产妇死亡的四大原因，其发病率为7%～10%，是导致孕产妇和围生儿发病率和死亡率增高的重要原因［1］。HDP的发病机制至今尚未完全阐明，临床观察发现其发生率在有HDP家族史的妇女明显高于无家族史者，认为遗传因素在HDP发病中有重要作用。近年来的研究认为HDP的发病与高同型半胱氨酸血症（Hyperhomocyseinemia，HHcy）存在相关性［2，3］。胱硫醚β合酶(Cystathionine βsynthase，CBS)为同型半胱氨酸（Homocysteine，Hcy）代谢途径中的关键酶，其编码基因CBS基因突变可引起该酶活性的改变，从而影响Hcy代谢。本课题通过对广西河池地区HDP患者CBS基因突变频率检测，探讨其在HDP发病机制中的作用。

资料和方法

1.研究对象

选取2007年5月至2008年9月在我院定期产前检查并住院分娩的HDP患者63例（观察组），其中妊娠期高血压18例， 轻度子痫前期30例，重度子痫前期15例，诊断及分类标准参照乐杰主编的《妇产科学》第6版，孕妇年龄20～37岁，平均年龄24岁，孕周32～40周，平均37周。同时随机选取同期来我院住院分娩的、无妊娠并发症及合并症、孕期经过顺利的正常孕妇32例作为对照组，年龄22～35岁，平均25岁，孕周33～40周，平均36周。所有孕妇均为广西河池地区人氏，均无原发性高血压、糖尿病、慢性肾炎、心脏病等病史， 各组孕妇年龄及孕周比较差异无统计学意义(P＞0.05)，具有可比性。

2.研究方法

（1）标本的采集和处理

受试者清晨空腹抽取外周静脉血4 ml，2%EDTA抗凝，3000 r/min离心5 min，分离白细胞后采用酚/氯仿法提取人基因组DNA，并用8 g/L琼脂糖凝胶电泳检查基因组的完整性，紫外分光光度计检测DNA含量和纯度。

（2）CBS C572T基因型检测

采用等位基因特异性扩增（ASA）技术检测CBS 基因型。PCR反应试剂购于TaKaRa公司，琼脂糖为Biowest Agarose，溴化乙锭购于华美生物工程公司，凝胶成像系统及QuantityOne软件、PCR仪为Biorad公司。PCR引物反应体系及程序:野生正向引物(DNA位置6696～6714):5′GGG CTGAGA TTG TGAGGA C3′，突变正向引物:5′GGG CTG AGA TTG TGA GGA T3′， 反向引物(DNA位置7030～7045):5′ACA CTC CCA GGC AGC C3′，由上海生工合成。产物大小350 bp。PCR反应体系50 μl，包括DNA模板0.2 μg，10 μmol/L dNTPS1 μl，10 μmol/L引物各2 μl，10×PCR缓冲液5 μl，Taq聚合酶1.25/U，25 mMol/L MgCl 23 μl。PCR反应扩增程序:95℃预变性2 min，然后95℃30 s，55℃30 s，72℃30 s，共35个循环，最后延伸72℃ 7 min。将PCR产物于15 g/L琼脂糖凝胶， 80 V电压下电泳35 min，溴化已锭染色，以DL2000为DNAMarker，凝胶成像系统观察带型并照相。

3.统计学方法

用SPSS11.5软件包处理数据。计量资料以均数±标准差（-±s）表示，组间比较采用两独立样本t检验，并计算比值比(Odds Ratio，OR)及95%的可信区间(CI)，以此估计基因突变频率对疾病发生的相关危险度。检测水平取双侧0.05，P＜0.05表示有统计学意义。

结 果

1.基因型的确定

扩增产物大小为350 bp，产生三种基因型:野生型C/C、杂合突变型C/T和纯合突变型T/T，见图1。

2.基因突变频率分析

HDP组基因型C/C、C/T、T/T和T等位基因频率与对照组比较，差异无统计学意义（P＞0.05，表1）。C/T型对HDP组OR为0.76(95%CI为0.22～2.63)，T/T型对 HDP组OR为1.55(95%CI为0.16～15.53)，提示C572T与HDP无明显相关性。

表1 两组C572T基因突变频率及等位基因频率分布例数（略）注： 与对照组基因型频率及等位基因频率比较，P＞0.05

讨 论

高同型半胱氨酸血症(HHcy)作为心血管疾病的一个独立危险因素近年来已得到广泛的认可。同时，HDP与HHcy发病的相关性研究近年来也见诸多报道［2～4］，兼有HHcy血症孕妇发生HDP的危险度是非HHcy血症孕妇的7.7倍，妊娠期Hcy水平可作为早期预测和诊断妊娠期高血压疾病的重要指标［4～6］。

胱硫醚β合酶（CBS）是体内Hcy转硫代谢途径的关键酶。在以吡哆醛磷酸(pyidoxalphosphate，PLP)为辅酶参与下，CBS催化β置换反应，使Hcy与丝氨酸缩合生成胱硫醚，后者在胱硫醚γ酶作用下进一步转变成半胱氨酸和α丁酮酸。体内约53%的Hcy被CBS和胱硫醚γ酶不可逆转化为半胱氨酸，可见CBS在维持Hcy正常代谢，避免血浆Hcy异常升高方面起重要作用。人CBS基因定位于21号染色体靠近端粒的位置，全长25～30 kbp，包含23个外显子，编码CBS多肽的551个氨基酸残基。在目前已知的CBS基因132个突变位点中，大多数为错义突变和缺失突变，不同的突变位点对CBS活性的影响不尽相同。C572T位点位于编码区第5外显子(EX5)，cDNA的第572位(基因组第6714位)C被T替代，使第191位密码原编码的苏氨酸(T)变为蛋氨酸(M)，导致酶活性严重下降，引起Hcy代谢障碍、进而可形成HHcy血症。哥伦比亚HHcy血症患者C572TT等位基因突变频率高达75%，在西班牙和葡萄牙约为50%，而在南美委内瑞拉、阿根廷和巴西分别为25%、20%和14%［7～9］。李丽帆等［10］研究发现C572T中T等位基因频率在广西籍冠心病患者为48.44%，在正常人为46.67%，二者差异无统计学意义(P＞0.05）。目前尚未见C572T与HDP的相关性研究报道。本研究中，观察组基因型T/T、C/T型及T等位基因频率分别为4.76%、84.13%和46.83%，而对照组分别为3.13%、87.50%和46.87%，两组基因型及等位基因频率比较，差异均无统计学意义（P＞0.05），提示C572T与HDP发病无明显相关性；C/T、T/T型OR小于或略大于1.0，提示CBS C572T可能不足以构成广西河池地区HDP发病的独立遗传危险因素。HDP为多因素、多基因参与形成的疾病，单纯从CBS某个或某几个突变位点来确定其对HDP的作用，其意义往往很有限，况且研究本身受样本量和基因位点代表性的限制。因此，要全面阐述CBS基因多态性与HDP的关系，需进一步增加样本及多基因、多位点、多因素的综合研究。

参考文献

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第2篇：妊娠高血压基因检测范文

【关键词】 妊娠期高血压病；血清；胎盘；白介素-12

DOI：10.14163/ki.11-5547/r.2015.18.050

作为妊娠期所特有的一种病症， 妊娠期高血压疾病（PIN）会严重的威胁到孕妇及胎儿的生命安全， 这也是诱使孕妇和胎儿死亡的主要原因， 但是对于其致病机理的形成过程还没有探索清楚。当前的医学研究表明， 之所以会引发PIN， 主要原因是胎盘缺氧和免疫系统被损坏所造成[1]。经过多年的研究发现， 只有保证母亲和胎儿界面之间的免疫平衡维持在一个合理的范围内， 才会让胎盘在着床之后顺利的进行妊娠反应， 而在这一平衡中发挥主要作用的就是TH2因子， 但是白细胞会分泌出一种称之为白介素-12的因素， 诱使免疫的平衡界面向着TH1的方向去发展， 这样就使得TH1和TH2的平衡比例被打破， 引起细胞免疫的反应进一步增强， 从而打破了孕妇与胎儿之间的免疫平衡状态， 这一平衡的打破和PIN疾病的发生有着极其密切的关系[2]。现对2014年1月～2015年1月在本院接受孕期检查的妊娠期高血压患者的血清与胎盘IL-12水平的变化与关系探讨情况报告如下。

1 资料与方法

1. 1 一般资料 本组资料共计120例， 均为2014年1月～ 2015年1月在本院接受孕期检查的孕妇， 年龄19～38岁， 平均年龄（25.6±2.9）岁；分娩孕龄33～41周， 平均孕龄（37.9± 1.3）周；其中， 妊娠期高血压25例， 子痫前期轻度27例， 重度68例。筛查出60例妊娠期高血压疾病患者为观察组， 并随机抽取同期进行孕期检查的60例正常孕妇为对照组， 两组患者在年龄、孕龄及病情等方面比较差异无统计学意义（P>0.05）， 具有可比性。

1. 2 方法 对于所有的被选取的研究对象都进行空腹静脉采血3 ml， 在经过血清分离之后将其保存在-20℃的环境下等待检测；对于剖宫生产的孕妇在手术之后要立刻将中间带一胎盘的小叶拿出来， 使用预冷的生理盐水充分的漂洗， 吸收掉多余的水分， 使用液态氮进行速冻， 在-30℃的环境下保存起来， 以备使用。在测定之前要取出大约0.4 g的胎盘组织， 并加入1.0 ml的含有蛋白酶的抑制剂的缓冲液（pH 7.4， 20 mmol/ L Tris， 150 mmol/ L 氯化纳， 1 mmol/ L DDT ， 0.1 mg/ ml PMSF， 1 μg/ ml Leupeptin）， 而所取得的混合液摇匀之后在4℃的温度下进行20 min的离心， 取出上层的清液备用。对于所检测的两组样本检测其胎盘中的白介素-12的成分， 使用Real-Time PCR和westernblot的方法来检测其中的mRNA和蛋白质的具体水准。对于血清的浓度表示方法应当采用ng/ml来表示， 而对于胎盘组织的浓度应当用pg/mg来表示[3]。

1. 3 统计学方法 采用SPSS13.0统计学软件对数据进行统计分析。计量资料以均数±标准差（ x-±s）表示， 采用t检验；计数资料以率（%）表示， 采用χ2检验。P

2 结果

2. 1 妊娠期高血压病患者血清胎盘 IL- 12 水平的变化 与对照组比较， 观察组血清IL-12水平增高， 差异具有统计学意义（P0.05）。见表1。

表1 两组妊娠期高血压病患者血清与胎盘IL-12水平的

变化（ x-±s）

组别 例数 血清IL-12（ng/L） 胎盘IL-12（pg/mg）

观察组 60 360.95±5.00a 21.74±2.00b

对照组 60 292.52±5.00 18.41±2.00

t 2.254 1.758

P 0.05

注： 与对照组比较， aP0.05

2. 2 两组患者不良妊娠结局发生率对比 对比两组患者的不良妊娠结局发现， 观察组的不良妊娠结局发生率显著高于对照组， 差异具有统计学意义（P

表2 两组患者不良妊娠结局发生率对比[n（%）]

妊娠结局 观察组（n=60） 对照组（n=60）

新生儿窒息 11（18.33） 1（1.67）

胎儿窘迫 5（8.33） 1（1.67）

胎盘早剥 1（1.67） 0

产后出血 7（11.67） 2（3.33）

围生儿死亡 1（1.67） 0

早产 5（8.33） 2（3.33）

剖宫产 36（60.00） 12（20.00）

低体质量儿 5（8.33） 1（1.67）

注：两组比较， P

3 讨论

白介素-12有比较多的命名方式， 如自然杀伤细胞刺激因子或者称为细胞毒淋巴细胞， 是一种异源的二聚体细胞因子， 它属于TH1型细胞因子， 是白介细胞中的全新发现， 也是人体中单核以及巨噬细胞， 树突状细胞的主要来源[4]。而IL-12又是当前所发现的所有细胞素之中免疫性调节范围最广的一种免疫因子， 在介导机体中对于抗原的免疫和排斥发挥着极其重要的作用， 是一种不可忽视的重要因子。

正常情况下， 妊娠反应下的单核细胞， 巨噬细胞以及树突状细胞对于抗原的吞噬能力是逐渐增强的， 而抗原所能呈现出的病原态是逐渐减弱的。在孕妇体内的胎儿， 由于所接受的抗原比较少， 在后天的生长过程中免疫系统没有被启用， 这种现象称之为“TH2现象”：使TH2细胞的基因表达效果逐渐增强， TH1的表达效果受到抑制， TH1主要发挥的是产生免疫， 清除抗原的作用， 而TH2则是让机体对于抗原的清除过程不必反应过度， 让机体处于一个相对平和的状态。所以， 这时候产生妊娠反应的母亲才不会排斥胎儿[5]。

IL-12是一种极其重要的细胞， 在细胞亚群的分化中发挥着相当重要的作用。研究表明， 它能促进淋巴细胞的分化， 在TH细胞的分化中能够发挥协同作用[6]。如果免疫系统向着TH1的方向去发展， 而且由于胎盘和胎儿的基因组成相同， 所以， 一旦发生免疫平衡被打破的情况， 就会使得胎盘和胎儿之间产生免疫排斥的现象， 造成的结果就是， 胎盘中的绒毛纤维素样坏死， 胎盘上的绒毛数量会减少， 管腔严重堵塞， 对于胎盘能够滋养就会减少。

以往对于妊娠期高血压相关的报道比较少。本研究则采用对照的方法很好地说明了妊娠期高血压病的胎盘较正常的孕妇胎盘更易产生疾病， 但是在试验中并未考虑到个体差异所带来的影响， 所以妊娠期高血压胎盘IL-12的变化所产生的意义还有待进一步研究。循环细胞因子的来源也是多样性的， 但具体的影响因素也有待进一步的研究和探索。

参考文献

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第3篇：妊娠高血压基因检测范文

关键词：妊娠高血压；危险因素；健康教育；护理干预；预防措施

妊娠高血压是妇产科妊娠期常见病症之一，以高血压、蛋白尿、水肿为主要特征。妊娠高血压综合征仅次于产后出血，居第2位，是一种常伴有脂肪和糖代谢紊乱以及心脑、肾和视网膜等器官功能性或器官性改变，以及器官重塑为特征的全身性疾病。夲症多发于妊娠32 w，发病越早病情越重，发病初期表现为血压轻度升高，伴有水肿和蛋白尿，若不给予及时的治疗和科学的护理，可能引起抽搐、昏迷、肾功能衰竭等并发症。严重者会危及母婴生命安全，为了查找诱发的危险因素，我们在针对性护理干预的基础上给予患者个体化的健康教育，取得较好效果，先报告如下。

1妊娠高血压的危险因素

1.1易诱发的因素，包括年龄、遗传等 ①初产妇。②年轻初产妇（年龄≤20岁）或高龄孕产妇（年龄>34岁）者。③精神过度紧张或受刺激致使中枢神经系统功能紊乱者。④与气候变化有密切关系，在冬季及春季、秋冬交替时发病率最高。⑤身体矮胖者，即体重（Kg）/身高（m2）>24者。⑥有慢性高血压、慢性肾炎、糖尿病等病史的孕妇。⑦营养不良，如贫血、低蛋白血症者。⑧子宫张力过高（如羊水过多、双胎妊娠、糖尿病、巨大儿等）者。⑨多基因遗传性疾病，家族中有高血压史，尤其是孕妇之母有重度妊娠期高血压史者。

1.2可改变的行为危险因素

1.2.1高盐饮食、膳食，食盐摄入量与血压水平呈显著相关性。高钠摄入可使血压升高，而低钠可降压。建议不要食用腌制食物、熏鱼、方便面等，刺激性强的食物，肥肉，蟹黄等。

1.2.2肥胖，体重超重和腹型肥胖是高血压发病的重要危险因素，在18～38岁时体重增加的人危险性最大，超过20%标准体重的人患妊娠高血压的危险性更高。

1.2.3缺少体力活动 缺少体力活动是造成超重或肥胖的重要原因之一，可增加妊娠高血压患者心血管的发生危险。

2资料与方法

2.1一般资料 从2012年12月～2013年11月本院共收治妊娠高血压综合症患者110例，年龄18～43岁，平均30.5岁，孕周26～38 w，平均32 w。病期：轻度62例，中度32例，重度16例，临床症状，均有不同程度的水肿，高血压和蛋白尿，其中先兆子痫16例，均有不同程度的眼花、头痛、胸闷等症状。

2.2方法

2.2.1所有患者入院后①均给予镇静、降压、解疼、扩容和利尿等治疗。②患者入院后给予常规护理和基本健康教育。包括保持整洁、安静的治疗环境及时更换床单，正确的卧床，纠正电解质及酸碱平衡、呼吸道通畅、饮食护理、基本的健康宣教等。对患者做全身心评估，在常规护理的基础上，给予针对性的护理和宣教，具体如下。

2.2.2用药物降压护理干预 根据患者用药禁忌及临床表现，及时调整用药，患者入院后立即建立静脉输液通路，遵医嘱用硫酸镁5 g加入5%葡萄糖液20 mL在20 min左右缓慢静脉输注控制抽搐，再用硫酸镁7.5～15 g加入5%葡萄糖500～1000 mL静脉输注，注意硫酸镁的毒性反应监测血镁浓度以防中毒。调整血镁浓度维持在1.7～3.0 mmo1/L。利尿剂、速尿20～40 mg静推或静脉滴注，2～4 h再重复使用。密切观察患者的反应，若患者出现面部潮红、恶心、发热等反应，应减慢滴速。若患者抽搐频繁或昏迷，可静脉推注地塞米松，休息≥10 h，左侧卧位可减轻子宫对腹主动脉下腔静脉的压迫，使回心血量增加，改善子宫胎盘的血供。有研究发现左侧卧位24 h可使舒张压降低10 mmHg

2.2.3心理护理干预 在患者治疗期间我们发现部分患者由于对病情和治疗方案的不了解，对自身病情的康复和母婴的安慰缺乏信心，以及对病房环境的陌生，容易发生精神紧张、焦虑、悲观等情绪。这些不良情绪会不同程度的影响到患者康复，严重者可能引起肾上腺素分泌增加、血管收缩、血压升高、加重病情，我们对患者加以仔细观察，及时掌握患者的情绪变化。根据其性格特点和心理状况，给予针对性的心理疏导，在与患者的交流与沟通中，认真倾听患者的意见，耐心解答患者的疑问，安慰患者的紧张、焦虑等情绪，并用眼神、手势等暗示性动作鼓励患者，增强患者的信心，增强患者的亲近感和配合意识，使患者在良好的情绪下接受治疗。

2.2.4加强监护护理措施 对危重患者，即使目前状况稳定，但有潜在发病可能的患者，要做好重点监护护理措施，抢救车、吸引器、压舌板、和急救器材处于备用状态。密切观察患者心率、呼吸、脉搏和血氧饱和度等的变化情况。抽血检验血气分析1次/4 h，观察尿量和常规化验，记录尿量和血清肌酐等的动态变化，补液应在CVP检测下进行。呼吸衰竭给予呼吸机辅助呼吸，并做好呼吸频率、潮气量和气道压力等的观察记录，以便再次发病时能及时调整到最佳呼吸机参数，为抢救赢得时间。无诱因的倦怠，胸闷和心慌等患者的临床发病先兆给予观察和总结。做好预见性护理工作。

3健康教育

部分患者由于保健意识较差或者虽然有保健意识，但是不正确或不科学，因此健康教育尤为重要，具体如下：①入院宣教：包括病室环境、规章制度、探视制度、作息制度、治疗原则、护理内容和医护人员等。②住院宣教：包括并发症预防、用药指导、饮食指导、产褥期注意事项等。坚持个体化原则，因人而异，使患者能尽量理解，针对部分患者文化较低的情况可制作一些简单的宣教卡片，用图画或图示向患者解释相关问题交流或回答疑问时。

3.1保证休息，精神放松，心情愉悦，减少聊天时间，主动睡眠、休息和睡眠时以左侧卧位为宜，避免平卧位，这样可以改善宫胎循环

3.2建议合理饮食 即高蛋白、高纤维素、低盐低脂饮食、动物内脏肉类、家畜类、水产类、蛋类、牛奶、豆制品、海带、紫菜、虾皮、芝麻、山楂、海鱼、新鲜水果蔬菜，（笋干、菜花、菠菜、南瓜、白菜、油菜、胡萝卜）杂粮类主食等。

3.3学会自我保健意识：坚持每天数胎动，检测体重，注意有无妊高症相关症状出现积极配合医师进行早期治疗，通过健康教育、用药指导、运动指导等方式，可提高妊娠高血压患者对高血压病基本知识的认识，改变其不良生活习惯，培养其积极健康的生活行为，增强其遵医行为的执行能力，从而能有效地控制血压，减少并发症的发生，维护母子健康，提高生活质量。出院指导：严格避孕1～2年，产褥期要测量血压1次/w，了解身体恢复情况、护理及母乳喂养。

4预防措施

做好产前检查，孕期宣教保健工作。为防止发生妊娠高血压疾病，首先做好产前检查及孕期保健宣教工作。使孕妇掌握妊娠、分娩、产褥期的一般知识，解除他们对妊娠、分娩的思想顾虑，生活上给予指导，使其有所依循。对于异常的孕产妇应进行严密观察。

4.1通过定期的产前检查，及时发现妊娠期的异常情况，对预防合并症的发展有密切关系，每次产前检查均需测量血压及体重，测血压时应注意和基础血压比较。量体重时，每次应穿相同的衣裤，以免因天气变化增减衣服影响体重的准确性。每次检查留清洁尿查尿蛋白。通过血压、体重、尿蛋白的检测，发现异象，有助于及时采取措施。

4.2饮食应摄入足够的蛋白质、维生素及钙、铁等矿物质，限制食盐以减轻水、钠潴留。督促孕产妇按照遗嘱服降压药或镇静药物，以保证疗效。根据病情的严重程度增加产前检查次数。重视孕妇主诉尽快缩短第二产程，适时终止妊娠，预防产后大出血，严密观察孕妇生命体征，防止回心血量减少所致休克。按时检查子宫底高度及收缩情况，注意阴道出血，必要时做好输血准备。

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第4篇：妊娠高血压基因检测范文

关键词 妊娠并发症 子痫 可溶性CD105淋巴细胞抗原

doi:10.3969/j.issn.1007-614x.2010.13.081

子痫前期是妊娠期常见的特有并发症,是导致孕产妇和围产儿死亡的重要原因之一。其病因目前尚不清楚,血管内皮损伤是其基本病理生理变化,而来源于胎盘组织的“毒性因子”被认为在引发血管内皮损伤中发挥重要作用。新近研究发现,可溶性Endoglin(soluble Endoglin,sEng)由胎盘分泌,是转化生长因子(TGF)β1 和β3型受体复合物的成分之一,它通过限制促血管生成蛋白TGF-β1的表达参与子痫前期病理生理过程。为探讨sEng在子痫前期发病中的作用,本研究对子痫前期患者发病前及发病时外周血sEng水平进行了检测。

资料与方法

2007年9月～2009年3月收治住院分娩的妊娠妇女,子痫前期组47例,其中轻度子痫前期患者12例;早发型重度子痫前期19例,平均孕周3135±251周;晚发型重度子痫前期16例,平均孕周3722±191周。另选同期正常足月妊娠孕妇40例,平均孕周4022±101周,作为对照组。两组均为单胎,平均孕妇年龄差异无显著性,两组年龄分别为2862±438岁和2765±385(P>005)。所有研究对象既往均无自身免疫性疾病、高血压、糖尿病等病史,在采集标本前均未接受输血及免疫治疗。子痫前期的诊断及分类标准参照乐杰主编的《妇产科学》(人民卫生出版社,第7版)。

标本采集、处理、保存:患者均于清晨空腹抽取肘静脉血3ml,血样均立即离心,取血清样本置-20℃冰箱保存备用。

方法:采用ELISA法检测各组血清中sEng水平。操作按照说明书进行,所有标本均行复孔检测且为同批测定,均值为最终浓度,批内变异

统计学方法:采用SPSS110统计软件,两样本均数比较用两独立样本的t检验,多个样本均数两两比较用方差分析。

结 果

各组血清中sEng水平随孕周的变化:在正常对照组,sEng维持在低水平至33～36孕周,之后逐渐升高直至分娩。早发型重度子痫前期患者发病前sEng水平在17～20孕周即开始升高,之后随孕周逐渐升高,至临床症状出现时达到高峰,均显著高于对照组(P

各组血清中sEng水平的比较:sEng水平在子痫前期组显著高于对照组(P

讨 论

子痫前期以在妊娠20周以后出现高血压,蛋白尿为特征。本病被认为是一种胎盘疾病,胎盘缺血、缺氧以致其合成和释放过多“毒性因子”进人循环,在血管内皮细胞激活和损伤中发挥重要作用。

Endoglin又名CD105,位于人染色体9q34,是一种同型二聚体膜糖蛋白,主要表达于人类内皮细胞表面和足月胎盘合体滋养层细胞表面。它是TGF-β1和TGF-β3的复合受体,通过调节细胞对TGF-β的反应,参与血管发育和重塑。sEng是Endoglin的氨基末端裂解重组的截短形式Venkatesha等[1],在正常妊娠妇女体内表达水平较低,在非孕妇女体内几乎检测不到。

我们发现在有子痫前期临床症状的患者血清中sEng水平升高,在早发型子痫前期患者中的表达更为显著,这提示sEng可能在子痫前期的发病中发挥重要作用,与Venkatesha等[1]及Mutter等[2]研究结果一致。过量的sEng可能来源于胎盘,因为产后48小时循环中sEng水平下降,但尚缺乏子痫前期患者sEng来源于胎盘的直接证据,有待进一步证实。可能情况是,子痫前期时滋养叶细胞对螺旋动脉浸润不足,子宫胎盘血流灌注不足,导致胎盘缺氧,胎盘合体滋养细胞(STB)产生sEng增多,过多的sEng释放到循环中。sEng与TGF-β结合,从而削弱TGF-β1与其受体结合的能力,使触发Thr495脱磷酸作用、激活内皮细胞NO合成酶(eNOS)基因磷酸化、促进血管内皮细胞产生NO等一系列下游反应不能正常进行,内皮细胞NO的产生显著减少(可能与eNOS基因突变有关),从而导致患者血压升高,致使较多血液流向胎盘。因此,sEng浓度升高会引发严重的子痫前期。Levine等研究也表明,胎盘中sEng和sFltl这两种蛋白质的失衡会导致子痫前期的发生。异常升高的蛋白质水平会大量结合维持血管内皮正常的必要物质,血管内皮细胞失去这些必不可少的物质后会发生病变甚至死亡,从而导致高血压和蛋白尿等临床症状出现。

本研究表明在子痫前期临床症状出现前数周,患者体内的sEng已经有明显升高,显著高于后来没有并发子痫前期的正常妊娠妇女。这与Robinson等[3]及Levine等[4]研究结果一致。因此,孕中期监测孕妇血清中sEng对妊娠后期并发子痫前期有重要预测价。Salahuddin等证明[5],检测sEng对预测子痫前期灵敏度和特异度分别为90%和95%。Stepan等[6]通过前瞻性研究发现,在妊娠中期血清sEng升高,意味着不良妊娠结局,其中发展为早发型子痫前期者升高最显著,研究表明,联合检测sEng和sFlt-1,对早发型子痫前期的预测灵敏度达100%,特异度达933%。因此,在妊娠初期检测sEng水平,对预测后期子痫前期的发生和发展有很大帮助,而且还有助于区别子痫前期与慢性高血压、肾病等症状类似的疾病,这对于及早发现和治疗子痫前期意义重大。

总之,病理性胎盘释放的“毒性因子”― sEng进入循环,引起血管形成障碍及内皮功能失调,导致子痫前期的发生。sEng与子痫前期关系的研究为探讨子痫前期的病因及发病机制开辟了新思路,也为sEng作为子痫前期发生、发展和预后判断的指标奠定了基础。

参考文献

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3Robinson CJ,Johnson DD.Soluble endoglin as a second-trimester marker for preeclampsia.Am J Obstet Gynecol,2007,197(2):174-175.

4 Levine RJ,Lam C,Qian C,et al.Soluble endoglin and other circulating antiangiogenic factors in preeclampsia.N Engl J Med,2006,355(10):992-1005.

第5篇：妊娠高血压基因检测范文

异常信号1：孕28周以前，突然出现阴道流血、阵发性下腹痛。

高度怀疑：流产

分析：自然流产的发生率约占全部宫内妊娠的15%。流产多发生于妊娠12周前，也有部分流产发生在孕12周以后、孕 28周以前。导致流产的原因很多，胚胎遗传基因缺陷，刺激子宫收缩，过度疲劳，剧烈运动造成盆腔充血，接触有害化学物质、射线，长期处于噪声及高温环境等，均可引起流产。

专家建议：无论阴道流血多少，下腹痛轻重程度如何，皆应立即就诊。

处理：如果阴道流血少，下腹痛轻微，妇科检查子宫颈口未开，子宫大小与停经月份相符，妊娠有希望继续者，应绝对卧床休息，禁止性生活，口服维生素E、肌注黄体酮保胎。

提醒：有遗传基因异常的胚胎，绝大多数将自然淘汰，流产在所难免，不必保胎。

异常信号2：外阴瘙痒、灼痛，或伴有尿频、尿痛，白带稠厚呈凝乳或豆渣样。

高度怀疑：念珠菌阴道炎

分析：念珠菌阴道炎，亦称真菌性阴道炎，由白色念珠菌引起。妊娠期，胎盘分泌大量雌激素，阴道上皮细胞内糖原含量增加，糖原经阴道杆菌分解生成乳酸增多，阴道酸度上升。当阴道pH小于4.5，而局部免疫力有所下降时，念珠菌即会繁殖，引发炎症。

专家建议：一旦出现典型症状，应尽早去医院检查。若在阴道分泌物中找到白色念珠菌孢子和假菌丝即可确诊。

处理：孕8个月前可以阴道给药，选用咪康唑、克霉唑或制霉菌素制剂。若局部用药效果差，可全身用药，口服伊曲康唑、氟康唑。孕8个月后，不宜再阴道给药，可口服药物治疗。治疗期间应勤换内裤，穿过的内裤、用过的盆及毛巾应用沸水烫洗。

提醒：念珠菌性阴道炎的治疗务必彻底。因为如果母体阴道内有念珠菌繁殖，胎儿娩出时很可能受传染。如果念珠菌污染与、奶瓶、衣服、床单等，则传染新生儿的机会更多，会导致新生儿鹅口疮发生。

异常信号3：突然出现寒颤、高热、头痛、周身酸痛、恶心、呕吐、腰痛、尿频、尿急、尿痛、排尿未尽感。

高度怀疑：急性肾盂肾炎

分析：孕期的特殊生理特点决定了孕妇易患急性肾盂肾炎，原因主要有以下四点：①胎盘产生的大量孕激素使输尿管平滑肌松弛及蠕动减弱，容易导致膀胱过度充盈、排尿不尽、膀胱内残余尿增多，有利于细菌在尿路内繁殖。②增大的妊娠子宫压迫输尿管，形成机械性梗阻。③增大的妊娠子宫和胎头将膀胱向上推移变位，易致排尿不畅或尿潴留。④孕期尿液中葡萄糖、氨基酸及水溶性维生素等营养物质增多，有利于细菌生长。另外，女性尿道短，尿道口与靠近，容易受肠道细菌感染。

专家建议：出现上述症状，应立即去医院就诊。经尿常规及中断尿细菌培养可确诊。

处理：根据中段尿培养及药敏试验，选用敏感抗生素控制感染。除静脉输液外，还需多饮水，使每日尿量达2000毫升以上。晚期妊娠者，应取侧卧位休息，左右轮换，以减少子宫对输尿管盆腔段的压迫，使尿液引流通畅。

提醒：急性肾盂肾炎的治疗必须彻底，以免反复发作而转为慢性肾盂肾炎。

异常信号4：妊娠20周后，出现下肢水肿，检查发现血压升高、蛋白尿。

高度怀疑：妊娠高血压综合征

分析：妊娠高血压综合征在我国的发生率约为10%，是孕妇特有的疾病。目前病因不明，基本病变是全身小动脉痉挛。妊娠高血压综合征若未得到良好控制，会使脑、心、肝及胎盘均发生缺血缺氧损害，使母儿处于险境。

专家建议：从妊娠早期开始，按时进行产前检查。一旦发现有上述征兆，应在医生的指导下进行对症治疗及病情监测。

处理：一旦确诊，轻症病人可采取休息、左侧卧位、加强营养等对症治疗，严密监测病情进展情况。中、重症病人则需住院治疗，接受解痉、扩容、利尿、降压等一系列治疗。症状极其严重，且胎龄超过36周的孕妇，可以考虑提前终止妊娠。

提醒：孕后保持精神愉快，注意休息，睡眠充足，减少脂肪和盐的摄入，增加蛋白质、维生素、铁、钙和其他微量元素的摄入，对预防妊娠高血压综合征很有好处。

异常信号5：无痛性阴道流血。初次出血一般在妊娠28 周以后，突然发生，量不多，往往一阵就停。

高度怀疑：前置胎盘

分析：正常情况下，胎盘附着在子宫体的前壁、后壁或侧壁。如果胎盘附着于子宫下段，其下缘达到或覆盖子宫颈内口，位置低于胎儿先露部（最先进入母亲骨盆的胎儿部分），那就是前置胎盘。胎盘的前置部分发生剥离，不仅会导致孕妇失血，还会影响胎儿的氧气和营养供应，极有可能造成胎儿宫内死亡，对母儿危害巨大。

专家建议：立即去医院就诊，腹部B超可帮助确诊。

处理：前置胎盘的处理原则是制止出血，纠正贫血。妊娠不满37周或胎儿体重估计不足2300克，阴道出血量不多的孕妇，可采用期待疗法――绝对卧床休息，纠正贫血，等胎儿成熟后再考虑终止妊娠。胎儿已成熟或者大量出血已危及生命的孕妇，则考虑立即终止妊娠。

提醒：产后或流产后子宫内膜炎，多次生育、引产、刮宫损伤子宫内膜，胎盘面积过大（如双胎妊娠），胎盘异常（如有副胎盘时），受精卵发育迟缓等因素，均与前置胎盘的发生有一定关联。因此，积极贯彻计划生育，坚持避孕，避免人工流产及防治宫腔感染，是减少前置胎盘发生的重要手段。

扩展阅读

妊娠反应什么时候开始

妊娠反应的发生时间早晚与孕妇的个人体质有关，但一般都会在停经40天左右会出现妊娠反应。另外，妊娠反应与体内激素水平有关，部分孕妇可能不会出现症状，而常见的早孕反应有：恶心、呕吐、嗜睡、疲倦等。所以不管有没有妊娠反应，如果没有做避孕措施，月经延期超过了10天后，就建议去做一下妊娠检测。

妊娠头三个月即0 ~ 12周，称妊娠早期。此阶段正是受精卵向胚胎、胎儿剧烈分化的重要时期，也可以说是胎儿“分化组装成形”的时期。

妊娠早期会有妊娠反应，感觉头晕乏力、倦怠嗜睡，并且食欲减退。有些人还可能有食欲异常、挑食、喜酸味和厌油腻。从胚胎学来看，从受孕到妊娠60天左右是器官发生期，尔后是组织发生和功能形成期。如脑和神经系统形成于受精后15 ~ 20天；心血管系统形成于受精后20 ~ 40天。这里所说的时间是实际受孕时间，并不等于末次月经以后的时间。以末次月经的时间减去两周即为实际受孕时间。胎儿各器官形成时期，最易受外界的最响。加之胎盘发育还不充分，孕激素分泌处于低潮，这正是易发生流产的时期。所以平时月经准时，当末次月经过期一周仍不见来者，夫妇应首先意识到是怀孕。一旦确诊，除生活上注意，避免公共场所活动外，同时也得从心理上做好准备。其次避免影响胚胎分化和胎儿发育的各种危险因素。如：放射线、烟、酒、滥用药物、各种有毒物质如苯、铅、汞、砷等，病毒感染，特别是风疹感染，该病在妊娠早期的畸形儿发生率可高达55 ~ 60%。

妊娠13 ~ 27周为中期妊娠。是母亲和胎儿都已安定的时期。早孕反应消失，心情变得愉快起来，肚子还不算大，动作也还方便。此期间胎儿发育较快。

第6篇：妊娠高血压基因检测范文

【关键词】 过氧化物酶体增殖物激活受体γ;基质金属蛋白酶9;妊娠期高血压疾病;胎盘;免疫组化

ABSTRACT: Objective To investigate the expressions and clinical significance of PPARγ and MMP9 in the genesis and development of hypertensive disordercomplicating pregnancy (HDCP). Methods The expressions of PPARγ and MMP9 in placenta of 31 normal pregnant women (control group) and 36 pregnant women with hypertensive disordercomplicating pregnancy (experimental group) were detected by using SP method of immunohistochemistry， and the relationship between PPARγ and MMP9 expressions and hypertensive disordercomplicating pregnancy was explored. Results ① PPARγ expression in placental tissues was significantly higher in the experimental group than in the control group (P

KEY WORDS: peroxisome proliferationactivated receptor γ(PPARγ); matrix metalloproteinase 9; (MMP9); hypertensive disordercomplicating pregnancy (HDCP); placenta; immunohistochemistry

妊娠期高血压疾病(HDCP)是妊娠期特有的疾病，我国发病率为9.4%～10.4%， 严重影响母婴健康， 是孕产妇和围生儿患病率及死亡率的主要原因， 发病机制不明。最近研究发现滋养细胞浸润能力下降是HDCP的主要原因之一[1]。过氧化物酶体增殖物激活受体γ(peroxisome proliferationactivated receptorγ， PPARγ)是一类配体启动的核转录因子， 在转录水平上调控多种细胞的增殖、侵袭、分化和凋亡。PPARγ在胎盘形成中起重要作用， 不仅对滋养细胞浸润分化是必需的， 而且可建立成熟的母胎转运。研究发现PPARγ的表达或活性增加可以抑制体外培养人类滋养细胞的浸润，因此其可能影响滋养细胞的正常浸润，在HDCP的发病过程中起一定作用。MMP9分解基底膜的主要成分Ⅳ型胶原，是参与细胞滋养细胞浸润的关键酶，许多胎盘激素和细胞因子对滋养细胞浸润的调节都是通过控制MMP9的分泌而实现的，所以MMP9在滋养细胞浸润过程中起重要作用。本研究通过免疫组化SP染色法，检测HDCP患者与正常孕妇胎盘组织中PPARγ和MMP9的表达， 揭示其在HDCP发生发展中的表达，探讨两者的关系。

1 资料与方法

1.1 临床资料 选取西安交通大学医学院第一附属医院2008年4月～10月住院初产妇HDCP患者36例(妊娠期高血压10例，轻度子痫前期13例，重度子痫前期13例)作为实验组，同时随机选取同期剖宫产结束妊娠的正常初产妇31例为对照组。所有对象均无肝炎、结核等急慢性传染病史，无心脏病及肝肾疾病史，无其他妊娠合并症及并发症。诊断标准依据乐杰教授主编的第七版《妇产科学》。两组孕妇年龄、孕龄比较均无统计学差异(P>0.05)， 实验组胎盘重量和新生儿体重明显低于对照组(P

1.2 检测方法

1.2.1 取材 所有标本均于胎盘娩出后10min内收集，迅速称量胎盘重量，于胎盘母体面近脐带处避开钙化点区取胎盘组织约1.5cm×1.0cm×0.5cm大小， 置于40g/L中性多聚甲醛液固定，常规石蜡包埋，5μm连续切片，HE染色后观察典型组织为入选标本。

1.2.2 PPARγ、MMP9测定 兔抗人PPARγ多克隆抗体、兔抗人MMP9多克隆抗体、SP型免疫组化试剂盒及DAB显色试剂盒均购自北京博奥森生物技术有限公司，具体操作参照说明书。采用免疫组化SP法测定胎盘组织PPARγ、MMP9的表达。每批染色均设阳性对照(公司提供)和阴性对照[磷酸盐缓冲溶液(PBS)]代替一抗。

1.3 结果分析 采用德国LEICA公司生产的生物医学图像分析系统(Q550CW)进行灰度定量分析， 由显微摄像机将切片图像输入计算机，每张切片随机选取5个不重叠高倍视野， 分别计算每个视野PPARγ及MMP9的平均灰度值，求出每例胎盘标本的平均灰度值。用平均灰度值代表PPARγ及MMP9在胎盘的表达水平。阳性区表达的强弱和灰度值呈负相关，灰度值越大则阳性表达越弱，灰度值越小则阳性表达越强。

1.4 统计学方法 所有数据均采用SPSS13.0统计软件进行处理，结果用(±s)表示，临床资料和平均灰度值比较采用t检验，P

2 结 果

2.1 PPARγ在胎盘组织的表达情况 PPARγ主要表达于胎盘绒毛小叶的合体滋养细胞、细胞滋养细胞及蜕膜细胞的细胞核上， 在胎盘绒毛和蜕膜的间质中也有表达。PPARγ在对照组、实验组灰度值表达有显著性差异(P0.05)， 轻度子痫前期、重度子痫前期与对照组比较存在显著性差异(P

2.2 MMP9在胎盘组织的表达情况 MMP9主要表达于胎盘绒毛小叶的合体滋养细胞、细胞滋养细胞及蜕膜细胞的细胞质中，胎盘绒毛血管内皮细胞及间质少量表达。MMP9在对照组、实验组灰度值比较有显著性差异(P

2.3 PPARγ和MMP9的相关性分析 实验组PPARγ和MMP9在胎盘组织中的表达水平进行Pearson相关分析， PPARγ和MMP9的表达水平呈负相关(r=-0.529，P

3 讨 论

过氧化物酶体增殖物激活受体γ(peroxisome proliferationactivated receptorγ， PPARγ)属Ⅱ型核受体超家族成员， 是参与多种生物学效应的核受体， 除与脂质代谢、炎症、心血管疾病、糖尿病、肥胖等一系列生理过程密切相关外，还对细胞的生长、分化甚至凋亡有重要影响。PPARγ的配体分为天然配体和合成配体。天然配体主要来源于食物和机体的代谢产物，如亚油酸、亚麻酸、前列腺素及其代谢产物等。PPARγ合成激动配体包括：噻唑烷二酮类(TZDs);羧酸类激动剂和其他类型激动剂， 如非甾体类抗炎药(NSAIDs)等[2]。FOURNIEDR[3]等发现利用PPARγ的激动剂合成配体(罗格列酮)和天然配体(15PGJ2)可以抑制体外培养的人类滋养细胞浸润， PPARγ的激动受体可以影响滋养细胞的正常浸润，引起HDCP的发生。FOURNIER等[4]研究发现鼠类在胚胎形成的第8天就可在胎盘中表达PPARγ，其分布在母胎界面的滋养细胞上，而PPARγ基因敲除的小鼠胎盘形成障碍，胚胎死亡率增加，滋养细胞浸润受阻及血管重铸障碍， 说明PPARγ在胎盘的发育中起了至关重要的作用。研究发现PPARγ能抑制滋养细胞的浸润性， 对滋养细胞的侵袭行为起负调控作用。PPARγ受体在胎盘上有许多重要的功能，包括滋养细胞分化、入侵和摄取胎儿宫内发展重要的脂肪酸和在滋养层中作为合成类固醇激素的前体。此外，利用激动剂激活PPARγ受体可能通过抑制胎膜炎症反应来降低的早产风险[5]。本实验应用免疫组化SP法检测HDCP患者和正常孕妇的胎盘组织中PPARγ的表达，结果显示HDCP患者胎盘组织中PPARγ表达水平明显高于正常孕妇，且随病情加重升高，而在二者胎盘组织中PPARγ的分布基本一致，主要位于绒毛滋养细胞，提示PPARγ的过度表达限制了滋养细胞的正常浸润能力，导致滋养细胞侵入过浅，使胎盘螺旋小动脉重新生成障碍，胎盘浅着床，最终引发HDCP。

基质金属蛋白酶9(matrix metalloproteinase9， MMP9)是REPONE和SAHLBERG1994年在小鼠胚胎发育中的破骨细胞内发现的， 分子量为Mr 92×103。MMP9作用底物主要是层粘连蛋白、Ⅳ、Ⅴ型胶原和Ⅰ、Ⅴ型明胶和弹性蛋白， 使用金属蛋白酶抑制剂和MMP9的特异性抗体能完全抑制细胞滋养细胞的侵蚀性，且Ⅳ型胶原为内皮细胞基底膜所特有，因此MMP9在滋养细胞侵蚀及血管重铸中发挥重要作用。LI[6]等通过免疫组化方法测量20名正常孕妇和20名妊娠期高血压疾病患者的胎盘中MMP2、MMP9的表达，同时利用实时PCR技术测量两组人群的基因MMP2、MMP9，结果发现在妊娠期高血压疾病患者胎盘中MMP2和MMP9表达显著下降，妊娠期高血压疾病胎盘中MMP2、MMP9的低表达可能导致侵滋养层细胞浸润受阻致胎盘浅着床，从而引起妊娠期高血压疾病的发生。本研究发现，HDCP患者绒毛上皮细胞的MMP9 阳性表达明显低于正常妊娠组， 而且与病情的严重程度呈正相关，MMP9的表达呈下降趋势明显有统计学意义，进一步证明了MMP9分泌不足使滋养细胞对子宫内膜侵蚀表浅和螺旋小动脉侵蚀受阻， 会造成胎盘浅着床和胎盘缺血、缺氧的HDCP特征性病理生理改变，以致最终发展为HDCP。

妊娠期高血压疾病是一类具有高血压、水肿、蛋白尿的妊娠综合征， HDCP发病常分为两个阶段：第一阶段是滋养层细胞浅着床，引起胎盘循环缺氧，同时释放的可溶性因子和滋养细胞碎片释放入母体血循环。第二阶段上述因子引起相应产科并发症。但该病的发病机制至今不清，研究发现滋养细胞浸润能力下降是导致HDCP的主要原因之一[1]。研究发现PPARγ、MMP9在妊娠整个过程中的各环节都有着一定作用，均可使妊娠滋养细胞的浸润增强及分解细胞外基质成分，为受精卵着床及胎盘的植入、胎盘绒毛血管的新生起到了重要的作用，而PPARγ、MMP9表达的异常可能导致病理妊娠如HDCP的发生。研究发现在一些类型细胞中转录因子PPARγ可通过调节下游MMP9发挥作用。LEE[7]等研究在脑缺血组织中，PPARγ被配体吡格列酮激活后可下调MMP9的表达，改变了细胞外基质的成分，利用吡格列酮能减少脑梗死面积，说明PPARγ激活后降低了MMP9活性， 减少了MMP9对细胞外基质的降解作用。本实验结果显示，在胎盘绒毛组织中PPARγ表达与MMP9呈负相关(r=-0.529，P

PPARγ、MMP9在HDCP中的发病机制尚未完全明了， 但已确定的是两个因子在HDCP发病中起到了非常重要的作用。PPARγ和MMP9可能通过协同作用影响滋养细胞的浸润过程， 使滋养细胞的侵袭能力降低，从而导致胎盘植入过浅，引发一系列病理生理变化，最终导致HDCP的发生。因此，临床上可以采取措施维持PPARγ、MMP9的正常表达水平来预防及治疗HDCP。

参考文献

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[5]TIMOTHY SW， YAACOV B， YOEL S. The pleiotropic function of PPARγ in the placenta [J]. Mol Cell Endocrinol， 2006， 249(10):1015.

第7篇：妊娠高血压基因检测范文

【摘要】 研究缺氧诱导因子1α (HIF1α)及其靶基因血管内皮细胞生长因子(VEGF)在子痫前期患者胎盘组织中的表达和相关性，探讨HIF1α、VEGF在子痫前期发病机制中的作用。方法：采用免疫组化链霉素抗生物素蛋白过氧化酶连接法（SP）法对20例子痫前期患者（子痫前期组）和15例正常妊娠妇女（对照组）胎盘组织中HIF1α、VEGF蛋白表达进行半定量分析；应用RTPCR技术检测两组胎盘组织中HIF1α、VEGFmRNA的水平并进行相关性分析。结果：（1）免疫组化结果显示，子痫前期组HIF1α蛋白表达明显增强，其中（+++）阳性表达率分别为45%，显著高于对照组13.3%（P

【关键词】 妊娠并发症；缺氧诱导因子1α;血管内皮细胞生长因子;受体

Abstract0bjective： To investigate the expression and correlation of HIF1α and VEGF in the preeclamptic placenta， aiming to discuss the significance in the pathogenesis of preeclampsia．Methods：Placenta were collected from 20 pregnant women with preeclampsia as study group and 15 normal pregnant women as control group， the expression of HIF1α and VEGF protein were semiquantitatively analyzed with immunohistochemicall assay and mRNA level was determined by using reverse transcription polymerase chain reaction (RTPCR) technique．Results：（1）The expression of HIF1α protein in preeclamptic group obviously increased， with（+++）positive expression rate significantly higher than control group（P

Key　wordspreeclampsia；HIF1α；vascular endothelial growth factor；receptor

妊娠高血压综合征子痫前期(以下简称子痫前期)是妊娠期特有疾病，严重危及母婴健康和生命安全。其发病机理是病理产科研究的热点问题，目前较公认的学说之一是，滋养细胞分化和功能异常导致子宫螺旋动脉生理重铸过程障碍，引起胎盘绒毛浅着床及胎盘缺血缺氧。胎盘氧含量对滋养层相关的生理和病理有重要的调节作用。研究发现作为激活缺氧反应基因转录的调节因子，缺氧诱导因子1α (HIF1α)在低氧条件下可通过调节靶基因血管内皮细胞生长因子(VEGF)的转录，参与多种与血管形成有关的疾病。本研究采用免疫组化法和RTPCR技术分别检测子痫前期和正常胎盘组织中HIF1α、VEGF蛋白和mRNA表达的差异和相关性，初步探讨HIF1α及其靶基因在子痫前期发病机制中的作用。

1 资料与方法

1.1 研究对象

选择2007年5月至2007年7月在沈洲医院妇产科住院选择剖宫产结束妊娠者35例，其中子痫前期20例，孕妇年龄24～34岁，平均 (26.9±1.9)岁，平均孕周（36±2）周;子痫前期的诊断标准参照《妇产科学》（第6版）［1］。正常孕妇15例，年龄25～33岁，平均(27.3±1.4)岁，平均孕周（38±2）周。入选病例均无原发性高血压、心脏病、糖尿病、肾病、贫血及前置胎盘等、近期无急、慢性感染。两组孕妇年龄及孕周差异均无统计学意义（P>0.05）。

1.2 方法

1.2.1 标本采集

胎盘娩出后立即切取近脐带附着处全层胎盘组织两块，每块1 cm×1 cm×1 cm，用灭菌生理盐水反复漂洗后分成两份，一份置入4%中性多聚甲醛固定，用于免疫组化测定；另一份用无菌纱布吸去水分，装入RNA酶灭活的冻存管，迅速投入液氮中，整个操作在5 min内完成，过夜后转入－80℃冰箱保存用于RNA的提取及RTPCR技术检测。

1.2.2 免疫组化法检测胎盘组织中HIF1α、VEGF蛋白的表达

固定标本常规脱水，石蜡包埋并制成3cm厚度连续切片，经HE染色判断切片质量后，采用链霉素抗生物素蛋白－过氧化酶（SP）连接法在同一时间，同一条件下进行免疫组化检测。鼠抗人HIF1α单克隆抗体、鼠抗人VEGF单克隆抗体均为美国Novus公司产品。染色步骤参照SP试剂盒（北京中山生物技术有限公司提供）说明书进行，微波修复抗原，一抗滴度均为1：100。 磷酸盐缓冲液（PBS）代替一抗作为阴性对照。每张切片观察l0个高倍视野，根据阳性细胞比例及着色深浅计分，细胞无着色或无阳性细胞为0分；细胞染色为浅棕色或阳性细胞1%～25%为1分；细胞染色为棕褐色或阳性细胞26%～49%为2分；细胞染色为深棕色或阳性细胞>50%为3分。根据计分结果判断阳性等级：0～1分为（－）； 2分为（+）；3～4分为（++）；5～6分为（+++）。

1.2.3 RTPCR技术检测胎盘组织中HIF1α、VEGFmRNA的表达 RTPCR扩增引物根据Genebank提供的资料设计，HIF1α、VEGF引物序列见表1。引物及试剂盒由大连宝生生物公司提供。采用Trizol一步法提取胎盘组织总RNA。反应总体积20μl， RNA模板量1μg，参照试剂盒说明进行逆转录酶反转录。PCR反应条件：94℃预变性5min、94℃变性 40s、，52℃退火1 min，72℃延伸1min，在PCR扩增仪上（美国Perkin Elmer公司产品）共完成32个循环。取5μl PCR产物进行2%琼脂糖凝胶电泳，β肌动蛋白作为内参照，紫外透射成像系统显像，测定特异条带的密度并与内参照比较，得出目的基因片段的相对表达量。表1 HIF1α、VEGF及βactin引物序列（略）

1.3 统计学方法

采用SPSS10.0统计软件进行统计学分析。所测数据以x±s表示，组间比较采用t检验和χ2检验，相关资料采用Spearman等级相关分析。

2 结果

2.1 两组孕妇胎盘组织中HIF1α、VEGF蛋白表达的比较

组孕妇胎盘组织中，HIF1α蛋白主要表达在合体滋养细胞和细胞滋养细胞的细胞核中，间质细胞少见。子痫前期胎盘组织中阳性表达明显增强，棕黄色阳性颗粒主要分布在合体滋养细胞中，强阳性表达率为 45%，明显高于对照组的13.3%，两组比较，差异有统计学意义（P

VEGF在两组孕妇胎盘组织中的分布基本一致，主要分布在细胞滋养细胞，血管内皮细胞及绒毛间质细胞，在子痫前期组胎盘中VEGF的阳性表达明显减轻，其中10例染色强度为（+），7例（++），3例（+++）；与对照组相比较，子痫前期组VEGF（+++）阳性表达率为15%，明显低于对照组，两组比较差异有统计学意义(P

2.2 两组孕妇胎盘组织中HIF1α、VEGFmRNA表达水平的比较

琼脂糖凝胶电泳扩增结果显示，子痫前期胎盘组织中HIF1α表达水平分别（0.604±0.013）明显高于对照组的（0.208±0.007），两组比较，差异有统计学意义（P0.05);两组HIF1α、VEGFmRNA表达的图像分析结果见表3，琼脂糖凝胶电泳扩增结果见图1。表3两组孕妇胎盘组织中HIF1α、VEGFmRNA表达水平的比较（略）注：与对照组比较，11P

3 讨论

3.1 HIF1α在胎盘组织中的表达及意义

HIF1属于bHLHPAS蛋白家族，由α和β两个亚基组成的异二聚体。缺氧条件下HIF1α和细胞核内稳定存在的HIFβ亚基结合形成有活性的二聚体，从而调控缺氧反应基因的表达。目前已经证实由HIF1α介导转录的基因有：VEGF及其受体sFlt1、细胞生成素、内皮素1、Bcl2及糖酵解有关的酶基因等[2]。这些靶基因的产物参与血管的发生及功能调节、细胞能量代谢和细胞凋亡的病理生理过程，是机体对缺氧产生耐受和适应的重要调节机制，HIF1α则是缺氧调节通路上的关键环节之一。

在胎盘形成过程中，滋养细胞的侵润能力决定妊娠的结局，而滋养细胞的侵润和胎盘局部氧含量密切相关，低氧可以促进滋养细胞的增殖和分化却抑制滋养细胞对子宫内膜的侵润。随着绒毛间隙血流的增加，滋养细胞的侵润能力在孕10～12周左右达高峰，然后下降。有研究表明作为氧敏感调控因子，HIF1α在妊娠早期绒毛组织中的表达与TGFβ3的表达同步，妊娠5-8周表达增高，并于妊娠10～12周胎盘氧含量上升时下降，同时证明低氧分压条件下培养绒毛组织并用反义核酸抑制HIF1α，可以抑制TGFβ3mRNA的表达，故推测缺氧可通过HIF1α下调TGFβ3的表达，从而促进早期滋养细胞向侵袭型分化，有利于胎盘血管重铸[3]。本研究发现在子痫前期胎盘组织中，HIF1α的蛋白表达明显增强，其中强阳性表达率显著高于对照组，同时HIF1αmRNA水平也明显升高，说明HIF1α从mRNA和蛋白两个水平参与子痫前期的病理生理过程。

3.2 胎盘组织中VEGF表达的意义

VEGF是一种高效特异的内皮细胞有丝分裂原，与其受体sFlt1结合发挥强烈的促血管生长及增加微血管通透性的作用。研究表明VEGF及其受体在早孕期主要表达于细胞滋养细胞，而在中、晚孕期主要位于合体滋养细胞，并且滋养细胞源性VEGF可通过旁分泌调节滋养细胞的分化和代谢[4]。作为重要的血管诱生因子，VEGF在妊娠早期参与胎盘血管网的形成，而在妊娠晚期主要调节血管内皮细胞的通透性，有利于胎儿生长发育。然而关于VEGF在子痫前期胎盘组织中表达的研究结论不一，Chun［5］等研究发现子痫前期胎盘组织中VEGF表达升高同时伴有VEGF受体表达升高，VEGF受体通过抑制VEGF介导的滋养细胞和血管内皮细胞功能调节，导致子痫前期的发生。本研究结果显示，在子痫前期胎盘组织中，VEGF蛋白表达明显降低， mRNA表达水平虽有升高，但与对照组比较，差异无显著性。随着对VEGF研究的深入，目前至少已发现4种VEGF分子亚型，它们在生物学和结构特性上有所不同[6，7]，以往研究应用抗体的不同可能是导致这种差异表达的原因，说明对VEGF亚型在子痫前期发病机制中的作用还需深入研究。

3.3 胎盘组织中HIF1α、VEGF表达的相关性及意义

作为HIF1α转录调节的一个靶基因，VEGFmRNA在子痫前期胎盘组织中表达虽有升高但不显著，VEGF蛋白表达明显降低，推测是子痫前期细胞滋养细胞功能缺陷的结果，即缺氧激活HIF1α的表达并诱导下游VEGF基因的转录，表现为VEGFmRNA代偿性升高，但由于滋养细胞功能受损VEGFmRNA升高并不明显，并且蛋白表达显著降低，从而影响导致胎盘血管构建障碍及血管内皮细胞通透性的改变，加重子痫前期的病理变化。

目前认为子痫前期的发生是滋养细胞侵润功能障碍导致胎盘血管重铸不良的结果，而滋养细胞侵润受胎盘局部氧含量的精细调控。本研究结果提示，作为缺氧敏感调节因子的HIF1α在子痫前期胎盘组织中蛋白和mRNA表达均增高，可能通过调节下游基因VEGF的转录影响滋养细胞的侵润功能，参与子痫前期的发生发展。因此关于胎盘滋养细胞中HIF1α在低氧应激中的转录调节活性，以及对下游基因VEGF表达调控的确切机制有待深入研究，为探讨子痫前期的发病机理提供理论基础。

【参考文献】

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第8篇：妊娠高血压基因检测范文

[关键词] 单核苷酸多态性；亚甲基四氢叶酸还原酶；甲硫氨酸合成酶还原酶

[中图分类号] R715.5 [文献标识码] A [文章编号] 1673-7210（2014）08（b）-0008-04

Polymorphisms of MTHFR and MTRR among the Han women in Shouguang City

TANG Hongying1 LU Yanqiang2 LI Ying2 LI Dongqing1 YANG Qi3

1.Department of Clinical Laboratory， Shouguang Women and Children Health Care Hospital， Shandong Province， Shouguang 262700， China； 2.Shanghai Institute of Targeted Therapy and Molecular Medicine， Shanghai 200433， China； 3.Center for Women and Children's Health， Chinese Center for Disease Control and Prevention， Beijing 100101， China

[Abstract] Objective To explore the 5，10-methylenetetrahydrofolate reductase （MTHFR） and 5-methyltetrahydrofolate-homocysteine methyltransferase reductase （MTRR） gene polymorphisms among the Han women in Shouguang City. Methods A total of 787 Han women were recruited. And their oral epithelial cells were collected to extract genome DNA in order to detect gene polymorphisms of MTHFR C677T， A1298C and MTRR A66G using fluorescence quantitative PCR. Then the results were compared with those in other cities in China. Results The frequency distribution of MTHFR C677T among Shouguang women was significantly different with Zhengzhou， Yantai， Zhenjiang， Wuhan， Deyang， Kunming， Huizhou， Qionghai （P < 0.05）. The frequency distribution of MTHFR A1298C among Shouguang women was significantly different with Yantai， Zhenjiang， Wuhan， Deyang， Kunming， Huizhou， Qionghai （P < 0.05）. The frequency distribution of MTRR A66G among Shouguang women was significantly different with Qionghai （P < 0.05）. Conclusion The MTHFR C677T， A1298C and MTRR A66G polymorphism distributions of Han women in Shouguang City are different with other regions， which have visible difference.

[Key words] Single nucleotide polymorphism； 5，10-methylenetetrahydrofolate reductase； 5-methyltetrahydrofolate-homocysteine methyltransferase reductase

叶酸在人体的代谢需要大量的酶催化，其中5，10-亚甲基四氢叶酸还原酶（5，10-methylenetetrahydrofolate reductase，MTHFR）和甲硫氨酸合成酶还原酶（5-methyltetrahydrofolate-homocysteine methyltransferase reductase，MTRR）是完成叶酸代谢利用的关键酶，其基因多态性会影响到酶的活性，进而影响体内同型半胱氨酸（homocysteine，HCY）水平。体内HCY在甲硫氨酸合成酶的催化下，以维生素B2为辅酶，接受5-甲基四氢叶酸提供的甲基生成甲硫氨酸。5-甲基四氢叶酸由MTHFR催化5，10-亚甲基四氢叶酸还原而来，而维生素B12需要MTRR催化其甲基化维持辅酶的活性，使甲硫氨酸合成酶的催化反应正常进行。因此，这两种酶的活性与神经管畸形[1]、复发性流产[2]、妊娠期高血压[3]等疾病的发生密切相关，严重影响母婴健康。

本研究针对寿光市汉族女性，开展大样本的分子流行病学调查，旨在阐明本地区人群MTHFR C677T、A1298C和MTRR A66G的遗传特征，获取相关群体遗传数据，为个体化保健提供依据。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取2011年12月～2014年1月到寿光市妇幼保健院进行孕前与孕期检查的汉族女性，排除籍贯非本市者，入组对象共787名，平均年龄（27.65±3.79）岁。根据知情同意原则，采集口腔黏膜上皮细胞。

1.2 方法

样本的基因组DNA提取采用硅胶吸附方法。MTHFR C677T、A1298C和MTRR A66G位点的单核苷酸多态性检测采用荧光定量PCR技术。相关试剂和仪器均购自美国ABI公司。每个反应体系10 μL，包含1 μL DNA模板（20 ng/μL），5 μL Taqman Universal Master Mix，0.5 μL Taqman-MGB探针和3.5 μL去离子水。反应条件为95℃预变性10 min，92℃变性15 s，60℃延伸1 min，20个循环；89℃变性15 s，60℃延伸90 s，30个循环。反应完成后，在ABI 7900型荧光定量PCR仪上读取样品孔中的终点荧光，利用分析软件确定各个样本的基因分型结果。

1.3 统计学方法

采用SPSS 18.0软件进行统计学处理，应用HaploView 4.2软件分析SNPs的Hardy-Weinberg平衡、LD水平和单倍型结构。计数资料采用率表示，对基因型及等位基因频率进行χ2检验，以P < 0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 Hardy-Weinberg平衡分析

MTHFR C677T、A1298C和MTRR A66G基因多态性检验结果符合Hardy-Weinberg遗传平衡，说明样本具有本区域群体代表性。

2.2 MTHFR、MTRR基因型和等位基因频率在不同地区汉族女性中的比较

如表1、2所示，MTHFR C677T位点的基因型和等位基因频率，寿光市汉族女性与郑州、烟台、镇江、武汉、昆明、德阳、惠州、琼海等地差异有统计学意义（P < 0.05）。T等位基因频率呈现北方高南方低的趋势。MTHFR A1298C位点的基因型和等位基因频率，寿光市汉族女性与烟台、镇江、武汉、昆明、德阳、惠州、琼海等地差异有统计学意义（P < 0.05），与郑州差异无统计学意义（P > 0.05）。C等位基因频率呈现北方低南方高的趋势。MTRR A66G位点的基因型和等位基因频率，寿光市汉族女性与琼海的差异有统计学意义（P < 0.05），与郑州、烟台、镇江、武汉、昆明、德阳、惠州等地差异无统计学意义（P > 0.05）。

2.3 MTHFR C677T和A1298C两位点连锁情况及单倍型分析

MTHFR C677T和A1298C两位点组合情况显示，TT/AA组合、CT/AA组合占比最高，分别是38.9%和32.5%；CT/AC组合次之，所占比例为14.9%；未发现CT/CC和TT/CC组合，其余组合所占比例均在7%以下。单倍型分析表明，4种组合频率分别为677T-1298A（62.6%）、677C-1298A（25.2%）、677C-1298C（12.1%）、677T-1298C（0.1%）。两位点间存在高度连锁不平衡现象（D'=0.989），单倍型以677T-1298A所占比例最高。张婷等[12]报道贵州布依族、苗族的两位点间也存在高度连锁不平衡现象，但单倍型以677C-1298A所占比例最高，表明研究位点在汉族与少数民族间的分布或存在差异。

3 讨论

我国每年新增出生缺陷约90万，被成为不光彩的“珠穆朗玛峰”。山东是我国出生缺陷高发省份之一，2007～2010年出生缺陷监测结果显示，先天性心脏病、多指（趾）、总唇裂、脑积水、神经管畸形是排名前5位的出生缺陷种类，并且出生缺陷发生率逐年上升[13]。出生缺陷的发生受环境、营养和遗传因素的共同影响。作为参与体内叶酸代谢的关键酶，MTHFR C677T和A1298C位点的多态性会降低酶活性，影响叶酸代谢和利用，与出生缺陷（神经管畸形、先天性心脏病、唇腭裂、唐氏综合征等）以及孕产妇疾病（复发性流产、妊娠期高血压等）密切相关。C677T和A1298C存在协同作用，双杂合子个体与仅含C677T突变的个体相比，同型半胱氨酸浓度显著升高。本研究显示双杂合子占14.9%，与Benrahma等[14]报道的结果一致。

本研究显示，寿光市汉族女性MTHFR C677T、A1298C和MTRR A66G位点的单核苷酸多态性与其他地区汉族女性的情况存在差异。其中，MTHFR C677T位点的基因型和等位基因频率，寿光市汉族女性与郑州、烟台、镇江、武汉、昆明、德阳、惠州、琼海等地差异有统计学意义（P < 0.05）；MTHFR A1298C位点的基因型和等位基因频率，寿光市汉族女性与烟台、镇江、武汉、昆明、德阳、惠州、琼海等地差异有统计学意义（P < 0.05），与郑州差异无统计学意义（P > 0.05）；MTRR A66G位点的基因型和等位基因频率，寿光市汉族女性与琼海的差异有统计学意义（P < 0.05），与郑州、烟台、镇江、武汉、昆明、德阳、惠州等地差异无统计学意义（P > 0.05）。此外，MTHFR基因C677T和A1298C两位点在研究人群中存在连锁不平衡现象，单倍型以677T-1298A所占比例最高。

这种地域分布差异可能与人群对多种疾病的群体易感性有关。MTHFR 677T等位基因频率呈现北方高南方低的趋势，与我国出生缺陷发病率北方高南方低的趋势一致。有研究表明，T基因型女性在未服用叶酸增补剂及低叶酸饮食的情况下，其胎儿唇腭裂的发生风险均会增加，若以上两种情况同时存在，则风险进一步增高。反之，如果能够补服叶酸增补剂、提高饮食中叶酸的含量则可以降低胎儿唇腭裂的发生风险[15]。

目前的孕期保健措施是从孕前3个月到孕早期3个月，每天增补叶酸400 μg。对于那些由于基因多态性造成叶酸代谢障碍的人群，在补充相同剂量叶酸的情况下，血浆叶酸的浓度较正常人低，HCY水平明显升高。因此，通过对育龄女性进行遗传筛查，针对在遗传上存在叶酸代谢障碍风险的人群，采取增加叶酸等B族维生素的补充、定期监测红细胞叶酸水平、提高产前筛查和孕期管理依从性等干预措施，是有效达到出生缺陷及孕期疾病一级预防目的的重要方法，也是提高人口素质的必要手段。

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第9篇：妊娠高血压基因检测范文

关键词：环状RNA 生殖 妊娠 复发性流产 产前诊断

新进入人们视野的环状RNA广泛存在于真核细胞质中，是具有调控基因表达作用的内源性非编码RNA分子。不同于以线性拼接方式形成的RNA，环状RNA呈闭合环状结构，无5′端帽子和3′端尾巴。人们最早从病毒及类病毒中得到对环状RNA认知[1]，但早期的研究者认为环状RNA是RNA产生过程中发生了错误的剪接而形成的，无明确的生物学功能，从而使其未得到重视和充分的研究[2]。随着近年来高通量测序技术的发展，环状RNA不断从各种真核生物细胞中被发现[3-4]，使人们不断对其功能进行深入研究。因其特殊的生物学特性，环状RNA在疾病的发生发展机制及早期诊断方面成为近年来的热点研究项目[5]。目前环状RNA在人类生殖与妊娠方面的相关研究较肿瘤相关疾病要少的多，因此本文将简要介绍环状RNA的形成、特性及生物学功能，并重点着眼于环状RNA在不孕症辅助生殖、复发性流产（recurrent spontaneous abortion,RSA）、妊娠合并症及产前诊断中的相关研究及应用前景。

1 环状RNA简介

1.1 环状RNA的形成

环状RNA的产生机制及过程尚未彻底明确，其目前主要可分为五类，包括外显子来源的环状RNA(ecircRNAs）、内含子来源的环状RNA(ElciRNAs）、环状基因组间RNA（包括类病毒和丁型肝炎病毒）、RNA加工过程中的环状RNA中间产物（tRNA或r RNA加工过程中的中间体）、具有持家基因功能的环状RNA(ciRNAs)(RnaseP或某些snoRNA)[6]。在环状RNA的形成机制上，最早由Jeck等[7]提出RNA成环模型，即套索驱动环化和固有配对环化。环状RNA分子主要是由反向拼接形成，即下游外显子与上游外显子反方向拼接在一起形成环状转录物。此外，环状RNA还有另一种形成模式，即依赖于RNA结合蛋白。剪接因子Quaking(QKI)[8]和Muscleblind(MBL)[9]，作为连接2个侧翼内含子相互靠近的桥梁促进环状RNA形成。因此推测RNA结合蛋白在RNA环化过程中起重要作用，通过互补序列桥梁和抑制典型拼接促进环化。以上为可能性较大的学说，环状RNA具体形成机制仍需进一步研究证实。

1.2 环状RNA的特征

目前发现环状RNA的特征包括以下几个方面。(1)高丰度：与线性mRNA相比，环状RNA是分布在人类细胞中最普遍的分子。(2)稳定性：环状RNA是共价闭合环状结构，因此可避免被脱支酶和核酸内切酶降解。(3)物种保守性：环状RNA在不同物种中具有进化过程的高度保守性[10]。(4)环状RNA在不同组织及发育的不同阶段具有特异性[11]。(5)环状RNA在真核生物中主要分布于细胞核，且可能在转录或转录后过程中调节基因的表达，ecirc RNA主要分布于细胞质中，可能与miRNA的功能特性有所重叠[12]。(6)某些环状RNA包含miRNA拼接位点，可竞争性抑制内源性miRNA的调节活动[7]。

1.3 环状RNA的生物学功能

环状RNA在真核细胞中可与多种分子相互作用，其生物学功能可概括为以下五种：(1)部分环状RNA可充当miRNA竞争结合miRNA受体，降低miRNA对靶基因的抑制作用，从而调节靶基因的表达水平[13]。(2)环状RNA可与m RNA部分碱基配对，直接调控m RNA，也可通过特异的RNA-RNA途径来调控转录过程[14]。(3)环状RNA可通过调节亲本基因的表达参与生物学过程的调控。外显子来源的ecirc R-NA及内含子来源的ElciRNAs主要位于细胞核内，通过聚合酶Ⅱ和小核糖核蛋白相互作用调控亲本基因转录。(4)环状RNA可通过与蛋白结合抑制蛋白活性、募集蛋白质复合体的组分或调控蛋白质的活性。Du等[15]发现环状RNA-Foxo3可与细胞周期依赖激酶2(CDK2）形成复合体，抑制CDK2对细胞分裂的促进作用，阻碍细胞周期进展。(5)环状RNA可翻译为蛋白质。有研究证明[16]，哺乳动物或人类细胞中的环状RNA可以不依赖任何核糖体进入位点、Poly A尾或帽子结构，以滚环式扩增，翻译出足量的蛋白产物。

2 环状RNA与人类生殖

随着人们生活压力、环境污染及饮食安全问题等的加剧，不孕不育的发病率在逐年上升，生殖医学也随之蓬勃发展，但也有许多治疗困难或多次移植失败的病例，为此了解在环状RNA领域与人类生殖疾病，如不孕症、RSA的相关研究进展，从中可能找出提高成功率的方法。不孕症的定义是夫妇有规律性生活、未采取任何避孕措施至少1年未受孕。不孕症的发生受许多因素影响，这里只简要介绍在环状RNA领域研究较多的不孕症相关因素。

2.1 环状RNA与女性不孕

可明确的女性不孕原因较多与环状RNA研究相关的疾病有多囊卵巢综合征（PCOS）、子宫内膜异位症（EMs）等。Che等[17]的研究在20例PCOS患者中筛选出与对照组表达差异明显的4个环状RNA，并发现其相应的microRNA结合位点与PCOS疾病相关。Ma等[18]检测出在PCOS患者的卵丘细胞中有286个环状RNA差异表达，斯皮尔曼等级相关（Spearman rank correlation）系数表明PCOS组中血清睾酮水平与hsa＿circ＿0043533和hsa＿circ＿0097636的表达成正相关。分析显示环状RNA可能参与细胞周期、卵母细胞减数分裂、孕酮介导的卵母细胞成熟、FOXO信号通路及甘油磷脂代谢等。Zhang等[19]则发现PCOS组颗粒细胞中27个显着差异表达的环状RNA，在涉及炎症、增殖和与血管内皮生长因子相关的信号传导途径中发挥作用，表明这些环状RNA参与了PCOS的发生发展，并存在作为PCOS生物标志物的可能。

EMs是指因内膜细胞种植到子宫腔以外的部位而导致的以痛经和不孕为表现的一种妇科疾病，其发病机制目前不明。有研究[20]对4对卵巢巧克力囊肿及子宫在位内膜检测，筛选出553个差异表达的环状RNA，涉及9个信号转导通路可能与EMs的发病机制相关。Wang等[21]的研究结果筛选发现294个环状RNA差异表达，功能分析揭示了它们与丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）信号通路和磷脂酰肌醇3激酶-蛋白激酶B(PI3K-AKT）信号通路等的调控相关，可能是该病发病机制及治疗靶点之一。还有研究[22]发现hsa＿circ＿0067301/miR-141-5p/Notch-1轴在EMs的上皮-间质转化过程中起着重要的调节作用，提示了EMs发病机制的分子基础。临床辅助生殖中胚胎的反复移植失败亦是不容忽视的问题之一，已有研究[23]以环状RNA微阵列技术筛选出反复植入失败的女性子宫内膜活检组织中的环状RNA表达谱，结果表明，有856种环状RNA有显着表达差异，其中hsa＿circ＿070 616,hsa＿circ＿103716等七种最为明显，有成为临床辅助生殖提高移植成功率新标志物的价值。

此外亦有女性生殖系统结核等，关于结核病与环状RNA的研究已有多篇文献报道[24-26]人外周血单个核细胞中表达的hsa＿circ＿0005836、hsa＿circ＿001937等数个具有生物标志物前景的环状RNA，但未明确提到女性生殖器结核，仍需进一步研究。

2.2 环状RNA与男性不育

导致男性不育的因素很多，包括先天性的发育不良、炎、输精管梗阻、萎缩、免疫性不育、内分泌失调等，除上述因素外，畸形、无精、少弱精等更为常见。Dong等[27]通过高通量测序技术揭示了人类组织中的环状RNA谱，对首次发现能产生环状RNA的1017个宿主基因进行基因本体论（gene ontology,GO）分析，结果显示，这些基因与发生、运动、减数分裂细胞周期和受精作用等过程相关。李颖[28]的研究显示，约83%环状RNA为外显子来源环状RNA，而差异表达的环状RNA在鞭毛、鞭毛轴丝、甲基转移酶活性等方面富集较多。研究筛选出了hsa＿circ＿MYO9B、hsa＿circ＿WHsci(8）等五条环状RNA，检测结果发现hsa＿circ＿WHSCI(8）、hsa＿circ＿WHSCI(6）、hsa＿circ＿CAMSAP1三种环状RNA在弱精组中的表达水平显着上调。另有学者[29]研究发现，DAZ(Deleted in Azoospermia）家族基因中Boule基因上产生的环状RNA可能参与调控Boule的生殖特异表达，从而影响男性的少弱精症。环状RNA的高稳定性使其在精浆等体液中可以被检测，未来具有成为男性不育疾病标志物的临床价值。

2.3 环状RNA与RSA

RSA是生殖医学研究中的重要课题之一，美国生殖医学学会将≥2次的妊娠失败定义为RSA[30]。导致RSA的因素并不完全明确，基因表达异常是发生RSA的重要因素，故环状RNA在RSA的病因及发病机制的深入研究中有着重要的作用。Qian等[31]对RSA孕妇与正常孕妇的绒毛膜组织中的环状RNA表达进行差异性分析，结果显示，hsa＿circ＿104948、hsa＿circ＿104547等8种环状RNA在两组之间有显着的差异性表达，进一步分析表明，绒毛中环状RNA的差异性表达可能与其充当miRNA调节靶基因的表达水平的功能相关。目前对与RSA相关的环状RNA的研究较少，未来仍有广阔的研究空间。

3 环状RNA与妊娠

3.1 妊娠合并症

临床产科常见的妊娠合并症有妊娠期糖尿病（gestation diabetes mellitus,GDM）、妊娠合并高血压疾病、胎盘异常等，严重的妊娠合并症可导致不良的妊娠结局，甚至威胁母儿生命。以环状RNA的生物学特性在未来有可能用于早期预测妊娠合并症的发生，从而指导临床工作者得以提前预防或干预。子痫前期（preeclampsia,PE）具有发病迅速、病情进展快等特点，在妊娠合并高血压疾病中是造成不良母儿结局较多的一种[32]，有多项研究[33-35]从患有PE孕妇的血细胞或胎盘组织中筛选与正常孕妇组表达差异较大的环状RNA，而Zhang等[34]发现12种环状RNA呈现明显的差异性表达，其中hsa＿circ＿101222的表达差异更是高达10倍左右，提示其可能作为PE的诊断标志物以辅助临床，但Prefumo[36]也提出距离环状RNA正式进入临床作为检测指标还有很多的困难需要克服。

GDM是指妊娠期首次发生任何程度的由糖耐量异常引起的高血糖，在中国的发病率高达14.8%[37]，其具体原因及发病机制尚未明确，可能与遗传、胰岛素分泌等因素有关。近年有研究[38]通过检测孕妇外周血中环状RNA丰度表达发现，GDM孕妇和正常孕妇有2678个差异表达倍数>2.0的环状RNA，其中hsa＿circ＿0042852、hsa＿circ＿0004001两种环状RNA及其参与的调控网络与调节能量代谢的信号通路相关，提示了环状RNA可能参与调控GDM发病机制的某些代谢环节。Yan等[39]发现GDM孕妇胎盘绒毛中227种环状RNA表达显着增高，255种明显降低，并存在大量的GDM发病相关的miRNA结合位点，提示环状RNA的异常表达可能与GDM的发生相关。还有研究[40]检测出GDM孕妇胎盘组织中有46个环状RNA差异表达明显，分析结果提示这些环状RNA的来源基因与内分泌抵抗以及晚期糖基化终产物受体通路（AGE-RAGE）有关，在多种糖尿病并发症中发挥重要作用，并与GDM的不良妊娠结局密切相关。

3.2 产前诊断

胚胎发育是一个复杂的过程，环状RNA在胚胎发育过程中可能具有独特而重要的功能，可作为研究胚胎发育不同阶段的标志物。Xu等[41]的研究系统检测出了胎儿与成人各类组织中含有的环状RNA表达水平并不相同。而在人类胎儿脑部的发育期间，环状RNA在某些特殊区域富集较为明显[42]。在临床应用中，随着转录组测序（RNA-seq）技术的发展，以体液中的环状RNA作为检测指标具有较强的发展潜力及可操作性。目前应用广泛的产前筛查主要使用全基因组测序学方法来研究人类三体征（包括13-三体、18-三体和21-三体综合征），以鉴定这些特定非整倍性染色体中的每一个基因表达特征。林南新等[43-44]研究得到了13-三体综合征患者脐带血或母血中差异表达的环状RNA，并推测hsa＿circ＿0002473、hsa＿circ＿0005 651等环状RNA及其靶基因可能成为13-三体综合征无创性产前筛查诊断的新生物标志物；而hsa＿circ＿0001649可能成为18-三体综合征潜在的新标志物[45]。常燕[46]的研究显示hsa＿circ＿103112在21-三体综合征患儿的脐带血及其母体外周血均有显着差异性表达，其靶基因USP25也与临床症状的产生有关，可能成为21-三体综合征的临床标志物。

4 小结与展望

因环状RNA拥有广泛性、稳定性、特异性等生物学特性且具有调控基因表达的重要功能，近年来逐渐成为生物医学领域的研究热点，但目前仅少量研究环状RNA与人类生殖及妊娠相关。随着生物信息及测序技术的发展，环状RNA在人类繁衍、优生优育方面具有广阔的研究价值及发展前景。

环状RNA可以被分泌至细胞外环境中，可通过临床普遍检测标本如血液、尿液、分泌物等检测出来，用于临床诊断或研究较为方便。目前的相关研究主要流程为找出患病组较正常组独特上调或下降表达的某些环状RNA，构建环状RNA-miRNA-mRNA相关网络，并分析其与某些蛋白或信号通路的关联，从而揭示疾病的病理发病机制并期望以之作为生物标志物应用于临床早期预测干预以及治疗。但如何从大量差异表达的环状RNA中较为准确地筛选出与目标疾病相关联的某一个或几个还是目前亟待改善的问题，实验室的研究成果距离临床应用亦有很长的一段路要走，尚需生物技术与器材的继续发展和对基因调控研究的继续深入。研究人员对已知的差异调控的环状RNA进行深入挖掘及大数据分析可能促进环状RNA与疾病关系的进一步确定，从而加快临床应用的步伐，这需要研究者们的共同努力。

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