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【摘要】 为弥补解剖结构图像(CT, MRI, B超等)和功能图像(SPECT, PET等)的各自不足,医学图像融合技术应运而生,并且有了较大发展. 本文从三方面综述了近年来有关医学图像融合技术研究的最新进展,认为在医学影像设备的发展中,功能图像和解剖图像的结合是一个发展趋势,在肿瘤的精确定位、早期检测和诊断中将发挥重要的作用.
【关键词】 诊断显像;图像融合
0引言
医学影像学是临床诊断信息的重要来源之一. 根据医学图像所提供的信息内涵,可将医学影像分为两大类: 解剖结构图像(CT, MRI, B超等)和功能图像(SPECT, PET等). 这两类图像各有其优缺点: 功能图像分辨率较差,但它提供的脏器功能代谢信息是解剖图像所不能替代的;解剖图像以高分辨率提供了脏器的解剖形态信息(功能图像无法提供脏器或病灶的解剖细节),但无法反映脏器的功能情况.
目前这两类成像设备的研究都已取得了很大的进步,一方面,双方都在逐步弥补自身弱点,如MR的功能成像开发以拓展其功能,SPECT, PET新型晶体开发以增强自身的空间分辨率;另一方面,双方均在不断地增强自身强项,如MR开发不同新型成像序列,CT的螺旋层数不断增加,PET的晶体数目越来越多. 这使得各自图像的空间分辨率和图像质量有很大的提高,但由于成像原理不同所造成的图像信息局限性,使得单独使用某一类图像的效果并不理想,且进展缓慢,往往事倍功半. 由于上述原因,医学图像融合技术应运而生[1].
1图像融合(image fusion)技术的内涵
图像融合是指将多源信道所采集到的关于同一目标的图像经过一定的图像处理,提取各自信道的信息,最后综合成同一图像以供观察或进一步处理[2]. 简单来说,医学图像融合就是将解剖结构成像与功能成像两种医学成像的优点结合起来,为临床提供更多、更准确的信息. 其最终结果是1+1>2.
20世纪90年代以来,医学图像融合技术随着计算机技术、通讯技术、传感器技术、材料技术等的飞速发展而获得重大发展,经历了异机图像融合和同机图像融合两个阶段.
2异机图像融合
2.1异机图像融合的研究内容在同机融合显像设备没有出现以前,图像融合的研究仅限于异机图像融合. 最初其研究内容仅限于相同或不同成像模式(imaging modality)所得图像经过必要的几何变换,空间分辨率统一和位置匹配后,进行叠加获得互补信息,增加信息量. 而现在,异机图像融合的研究范围包括: 图像对位、融合图像的显示和分析,利用从对应解剖结构图像(MRI, CT)获取的先验信息对发射型数据(SPECT, PET)做有效的衰减校正、数据重建等[3].
2.2异机图像融合的基本方法按图像融合对象的来源可分为同类图像融合(innermodality,如SPECTSPECT, CTCT等等)和异类图像融合(intermodality,如SPECTCT, PETMRI, MRICT, MRB超等). 按图像融合的分析方法可分为同一患者的图像融合、不同患者间的图像融合和患者图像与模板图像融合. 按图像融合对象的获取时间可分为短期图像融合(如跟踪肿瘤的发展情况时在1~3 mo内做的图像进行融合)和长期图像融合(如进行治疗效果评估时进行的治疗后2~3 a的图像与治疗后当时的图像进行融合). 临床工作人员根据自己的研究目的不断设计出更多的融合方式.
2.3异机图像融合的主要技术图像融合的步骤大致为: 特征提取,设计误差评估方法,对图像数据进行处理使误差最小,将变换后的图像数据进行对位和综合显示,分析综合数据. 其中对位技术是图像融合的关键和难点[4].
2.3.1特征提取特征提取可分为内部特征提取和外部特征提取内部特征主要是人体解剖结构特征,如颅骨、脊柱、胸骨、肋骨、关节;膈下软组织,如脾、肝、肾等等. 外部特征是为进行融合处理而特制在两幅图像上均可见的体表标记物. 据文献报道使用的外标志物有进行脑图像融合的头罩、牙环,胸部、腹部图像融合采用的背带,四肢图像融合采用的支架,甚至颅骨嵌入螺钉等等. 采用内部特征的优点是不需要对患者做预处理,可进行多次融合方法分析,缺点是难以实现融合自动化处理,需要人工干预,融合的精确性往往与经验有关. 外部特征的优点是特征明确,易于进行计算机自动处理,缺点是预处理复杂,并且由于而引起的脏器与体表标记之间的位移误差难以避免.
2.3.2误差评估方法常用的有基于相似度的误差评估方法(以相似度最大为最优)和基于距离的误差评估方法(以距离最小为最优).
2.3.3图像处理图像预处理: 对于有条件的图像进行重新断层分层(reslice)以确保图像在空间分辨率和空间方位上的大体接近. 几何变换: 主要包括尺度变换、平移、旋转等.
2.3.4图像的对位将处理好的图像按误差最小的原则进行对位. 按外部特征进行对位的方法以两幅图像上的特征点配准为对位成功. 按内部特征进行图像对位法主要有两种:图像分割配准和像素特征配准[5].
图像分割配准法分为曲线法和表面法,在目前实际应用中较多采用. 因分割算法通常是半自动的,需人为参与,其配准的精度受限于分割的精度. 理论上此法可用于全身各部位的配准,但现在常用于神经系统成像和矫形外科成像. 曲线法是将一些具有几何特征的线条(如脊线)或栅格提取出来进行配准. 但是,曲线法要求图像有较高分辨率,以便提取几何特征. 表面法的代表算法是“头帽法”: 从一幅图中提取一组轮廓点作为“帽子”,从另一幅图中提取表面模型作为“头”,然后使用Powell搜索算法(使帽点和头表面间的距离平均平方和最小)来确定变换关系. 采用表面匹配技术可以对SPECT和PET的心脏图像进行了对位融合.
表面配准算法不仅用于3D刚性(rigid)变换,而且可用于3D弹性(elastic)变换,从而为一些组织器官的配准,如心脏、肝脏、肺等,提供了可能性. 但这种方法与其他基于组织分割的算法一样,配准精度受限于组织分割的精度. 近年来,由于分割算法的复杂程度降低、自动化程度提高以及斜面匹配技术在计算距离变换上的优势,此法被普遍应用. 表面配准法主要应用于PETMR图像的配准,由于SPECT图像的边界模糊,不宜使用此法. 像素特征配准法[6]: 像素特征配准法与其他内部特征配准方法不同之处在于,他是以图像灰度为配准依据,不需要对图像原始数据进行预归纳或预分割,其常用算法有主轴矩配准、全图像信息配准和图谱法配准. 主轴矩配准: 是将图像灰度内容转换为数量和方向的几何表示. 目前大多是从零阶及一阶矩中计算出图像的质心及主轴,再通过平移和旋转使两幅图像的质心和主轴对齐,达到配准目的. 此法对于数据缺失比较敏感,细节丢失或形状的病理性改变均会影响配准结果. 但此法实现了自动化,且十分快捷,易于移植,目前多用于粗配准. 全图像信息配准: 是在配准全过程中使用全部图像信息,使用的算法有区域相似性测量法、最大互信息法、相关法、联合熵法、条件熵法等. 此方法适用性最广,它不象其他内部特征法那样需先进行灰度图像的信息压缩提取,而是在配准过程中利用所有可获得的信息. 图谱法: 用于患者间的图像配准同一解剖结构的形状、大小、位置都会因解剖和生理上的个体差异有很大不同,这就使患者间的图像配准问题成为当今医学图像分析中的最大难题. 因此就要有一个详细标记人体各个解剖位置的标准化图谱. 用图谱法对两个患者的PET或MRI图像进行比较时,首先把二者的图像都映射到一个标准化的图谱空间去,然后在此空间中进行比较. 使用内部特征定位不需外加定位装置,但要求两幅图像要有相似结构或共同特征才可进行匹配. 定位的精确度是由具体的算法来决定的.
2.3.5融合数据的分析以某种算法将融合图像数据综合显示并做定量分析. 有些影像学工作者提出了如融合图像中像素CT值/SPECT计数等数值分析方法,但由于图像融合技术研究时间较短,各种融合数据对临床的指导意义有待进一步检验确定.
融合图像有多种直观的显示方法. 常用的有断层显示法和三维显示法. 融合图像的显示往往以某个图像为基准,该图像用灰度色阶显示,另一个图像迭加在基准图像上,用彩阶显示[7]: ① 断层显示法: 对于某些(得到原始数据)图像融合,可以将融合的三维数据以横断面、冠状面和矢状面断层图像同步地显示,便于观察者进行诊断. 这是融合图像最常用的显示方法. 这种显示要求观察者对于图像三维层面的特征有丰富的经验; ② 三维显示法: 将融合的三维数据以三维图像的形式显示使观察者可更加直观地观察病灶的解剖位置,在外科手术设计和放疗计划制定中有重要的意义.
2.4异机图像融合的现状目前对于刚性组织的对位已基本解决,如脑部异机图像融合[8],而对于非刚性组织(如腹部)的对位有待进一步研究. 因此在图像对位技术上目前尚未找到一种确保完全、通用、有效的方法.
3同机图像融合
同机图像融合是伴随着同机显像设备的发展而发展的. 1991年,Hasegawa等[9,10]人首先提出了同机图像融合设备的设想. 1999年,通用电器公司(GE)推出了全球第一台医用同机图像融合设备Hawkeye,它将XCT球管、探测器及放射性核素探头装在同一旋转机架上,患者可同时进行CT和SPECT检查. 得到的X线图像不仅可以用来与SPECT图像进行融合,还可以通过不同软组织及骨骼对X线与γ光子的不同衰减比例因子,由CT值计算线性衰减系数,进行SPECT的衰减校正. 由于这一台划时代设备的出现,使得图像融合技术发生了根本性的变化.
由于图像融合设备显像过程中,患者同时进行两种不同的检查,其变化由计算机精确控制,且不同显像间的时间间隔非常短暂,从根本上解决了异机图像融合中的最大难题:对位技术的准确性. 在CT与SPECT图像融合的领域内,它具有了所有异机图像融合的优势,而且实现过程更为简单,并广泛应用于临床医学的各个领域[11]. 因此,这一设备从产生之日起,就对影像医学特别是影像核医学产生了革命性的影响. 目前已广泛应用于国内、外影像医学临床诊断.
在Hawkeye之后,GE公司、西门子公司及飞利浦先后推出了第二代图像融合设备: PET/CT[12],其功能在Hawkeye基础上更进一步,定位更加准确,诊断准确性进一步提高. 目前国内有此设备十余台.
相比PET/CT,PET/MR的研究更加令影像医学工作者期待. PET/MR除具有所有PET/CT的优点外,还可以提供更多的软组织信息,其提供的组织信息可应用于高精度的PET图像衰减校正,从而进一步提高图像质量和空间分辨率. 目前,美国将PET晶体置于MR内部,已研制出一种新型的PET/MR,并已获得了大鼠脑部同机融合图像[13],相信PET/MR很快将进入临床.
4展望
总之,在医学影像设备的发展中,功能图像和解剖图像的结合是一个发展趋势,而图像融合的潜力在于综合处理应用这些成像设备所得信息以获得新的有助于临床诊断的信息[14],在肿瘤的精确定位、癌症的早期诊断和治疗中发挥重要的作用. 随着功能成像设备和解剖成像设备杂交技术的出现,图像融合技术将得到进一步的发展,给临床诊断带来一场新的变革.
参考文献
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【关键词】计算机技术;医学影像;利用
医学影像其实是一种依靠计算机进行组建的一种数字化图像,简单的说它是根据电离辐射的自身特点和非电离辐射的自身性质两者相互产生作用下所产生的规律,并用计算机技术所采集而成的一种数据。医学影像在医学中运用广泛,它是医生进行患者医疗诊断的重要工具。而要很好保证一张医学影像的质量,就必须依靠计算机技术进行后期的处理.但是在乡镇医院里这项技术却发展得不是很好,由于多方面的原因,在利用计算机技术时会出现很多问题。
1医学影像的分类
现代医学影像一般包括这样几类;超声成像,主要是对人体的超声回波进行测量,X线成像;测量人体内的X线,例如胸透。光线成像、磁共振成像、发射型计算机断层PET、核医学成像等等,这些影像都是医院的宝贵材料,对于诊断病情有很大的帮助。
2如何利用计算机技术进行医学影像处理提高质量
2.1利用计算机技术进行提高医学影像的分辨率其实不管是X线影像还是CT影像、磁共振影像等等,刚刚出来的成像信息量是非常少的,要想增多的它的信息量就需要后期利于计算机技术提高它的分辨率.医学影像它都是由一个个相连接的像素矩阵所组成的,如果在一个影像的固定面积内所含的像素越高,影像得到的各种信息量就更多,内容更加丰富。要想实现这一点,就的依靠计算机技术进行更改,例如现在设计常用的各种软件photoshop,美图秀秀等都有这方面的功能可以更改一张尺寸固定的影像像素,步骤如下:首先打开photoshop,打开一张未处理过的影像,点击“图像”调整“画布大小”打开对话框,这里就可以调整影像的像素,宽度的像素、高度的像素,宽度和高度是否按比例调整等等。一般来说分辨率的提高是需要增加影像的像素,以此增加更多的信息量,保证影像的质量,通过计算机后期的处理就可以实现。
2.2利用计算机技术进行医学影像的对比度提高对比度也是影响一张医学影像好坏的根本因素,一般计算机图像处理技术中,所谓的对比度,其实是指的是两个相近的像素灰度值之间的一个差异。如果两个相
近的像素灰度值之间的差异截然不同,差异越大,两者的对比度的数字越大,看清医学影像的内容更清晰、更容易。例0和4之间的灰度值比较相邻,就很难讲它们进行区分。而0和150之间的灰度值的差异就非常大,对比度就很强,也使人们对医学影响的内容更容易分辨。而用计算机的软件技术photoshop,美图秀秀等。则可以改变对比度。首先打开photoshop,打开一张未处理过的影像,点击“图像”调整“亮度/对比度”,然后将0和4之间分别乘以20,这样把0和4之间变成了0和40之间,那么医学影像的对比度就会增强,分辨起来也就越容易,也就更能提高医学影像的质量。
2.3利用计算机技术进行医学影像亮度的提高根据一般规律人们对于分辨率值低的图像分辨能力较差,刚刚成像的未经修改的影响就有这样的特点,这张影像的质量就大打折扣了,医生无法看清影像信息的内容,也就无法做出正确的判断,这时就可以利用计算机软件技术photoshop,美图秀秀等改变影响的亮度,首先打开photoshop,打开一张未处理过的影像,点击“图像”调整“亮度/对比度”,其取值范围为0-255,0表示影响全黑暗,255表示全白或者全亮,可以随意进行调整,直到你看清楚整张影像为止。
3如何利用计算机技术对冻结的影像进行处理
由于过去的技术落后,很多影像都是采取冻结处理,如果需要采集这些图像的信息就需要计算机技术。这里介绍一款医学影像处理体统,现在笔者就说说如何利用它来进行医学影像的增加。首先把图片分门别类整理,处理的目的最终是要提高图像的清晰程度。影像的分类并不是能随便分的,而是按照某种特征进行分类。这些特征又是和图像的灰度分布的形式如何息息相关,这种分布又是不定性,X放射科的系统最大问题就是图像的对比度低,在这种情况下,就要使用系统的增强功能,例如前面提到的提高图像亮度、对比度、对比拉伸等等,这样冻结过后的图像影响就会清晰得多。
4如何利用计算机技术处理内窥镜
医学影像,建立三维模型随着医学的发达,例如胃镜、肠镜、咽喉镜等内窥镜技术的运用也越来越广泛,这个技术的出现,给疾病诊断增加了准确性,但是患者却痛苦万分,医生操作也非常不方便。加上传统胶片的落后性,诊断起来也非常困难。这就需要入计算机技术,同过计算机技术对病人相关部位影像进行处理,做一个三维重建,然后构建一个模拟化的相关器官图,这样各种内窥镜就能在其中进行检测,减轻病人的痛苦,增大判断的效果。
5总结
计算机技术的不断发展,给医学领域带来了一次新的革命,计算机不仅在人们的生活中运用广泛,在医学领域中运用也非常广泛,尤其在医学影像方面,由于拍摄刚刚成型的影像存在不足,需要计算机技术进行后期处理,对于年代久远的影响清晰度低,也需要计算机技术进行医学影像后期处理,新的医学技术也需要计算机技术进行医学影响后期处理,这就需要医学人员掌握更多的影像处理技术,懂得如何计算机技术对各种医学影像进行后期处理、后期调整:例如图像增强、对比度的变化、亮度的调整等等,最终帮助医生得到更准确的患者信息,帮助医生做出最正确的医疗诊断。
参考文献
[1]何友全,方磊.医学影像计算机传输与处理[J].西南交通大学学报,2003年6月第3.期
1小学数学中几何的教学现状与学生的学习情况
1.1小学数学中的几何教学工作现状
在实际的课堂教学中,老师在引导学生认识几何学入门概念时,往往会出现两个极端。一种情况是,老师在课堂上为了让学生更好地认识几何体,而举出了大量的实际生活中的例子,来方便学生?砝斫狻5?在老师举了很多例子后,并没有对这些范例进行总结,因为老师作为成人,在潜意识会认为这是通俗易懂的,但实际上学生并没有这种概念,学生自然也就难以理解实例所代表的数学模型。这就好比一个艺术家给一个观赏者一幅无比美丽的画卷,却不告诉你画的是什么。而第二种情况,则是老师在教学中引用了大量课本或数学体系中的抽象概念,而不能很好地举出相应的例子,这同样使学生缺少理论的实际引用,学生同样无法对几何学有一个系统的认识。
模型构建不仅是课堂上学生的学习工具,也是教师教学思想的一种实际应用。现今我国小学教学正在进行新课程改革,而教学工作正在新旧交替的时期,这就使得不同教师的实际教学效果参差不齐。而模型构建是一种数学思想,学校应该时常开展适当的教研会,交流教学经验,建立教学中普及课堂模型构建教学的教育理念。
1.2小学数学学习中学生的学习现状
在学习《几何体认识》这本书时,小学生大多刚刚接触数学不久,对几何没有概念。在这个年龄段,儿童是对未知的事物抱有足够的兴趣的。但在课堂实践中,大部分学生都难以领悟模型是何物,这是因为数学模型的建构需要足够的表象作支撑,但实际上小学生往往会因为生活经历过少而导致无法产生足够的联想从而无法理解课堂所建立的教学模型。而学生作为几何教学的被启蒙者,这个群体需要启蒙者的引导才能走进修行的大门。而老师的教学思想陈旧,教学方法落后是导致学生学习效果不佳的重要原因。数学原本是为生活所服务的,但数学思想中的模型构建并没有与现实相结合,而是成为了生搬硬套的僵硬理论。在几何教育工作中,模型不仅是对教师升华,也对学生的未来学习有着不可估量的影响。
2模型构建对小学几何数学的影响和意义
上文已经提出,模型构建不仅仅是一种教学工具,它更是一种数学、教育思想。在小学数学中,教师无时无刻不在应用模型构建的思想,但他们不是为了方便学生理解,而是方便教学。可以想象的是,老师有意无意中对模型构建的使用,如方程未知数的构建、对生活规律的公式化总结、几何的形状演变等,都是为了更好地理解实际生活。那么,小学生建立一个完整的模型构建思想体系,对其未来的数学学习的好处,则是不言而喻的。数学观,是一种模式观,更是世界观的变相理解。掌握模型构建思想,学生可以举一反三,通过生活实际来反推出实际现象所隐含的数学规律。数学起源于生活,在生活中升华,自然最后也要回归于生活。这一点对于小学数学尤为重要。几何架构是世界的基础,而小学数学更是数学的启蒙部分。几何、或者说数学最重要的就是规律的总结和运用,模型构建思想可以让儿童对生活初步有一个清晰的认识,也对数学的学习有了一个初步系统的了解,使之后的数学学习更加方便。
另一方面,通过教学工作中构建模型的教育理念的建立,老师可以通过多种角度来理解教学目标的内容。更多地,也是建立一种几何教学中的一种教学模式。以模式的角度来看待课堂上的教育工作、以模式的角度来和学生探讨几何学的学习,可以提升课堂的学习效率,也会提高老师的教学水平,让整个教学环节产生一个良性的循环。总的来说,数学万变不离其宗,还是思想的运用,教师和学生掌握了构建模型的思想,可以更好地学习数学,完善小学数学的几何教学模式。
【关键词】 脊髓损伤;
摘要:[目的]探讨NT3(神经营养素3)对脊髓损伤保护作用的机制。[方法]105只SD大鼠随机分为3组:对照组(生理盐水组),实验组(NT3组)和假手术组,每组35只,各分为7个时相点,每个时相点5只大鼠。采用Allen’s法以30gcm力致伤大鼠T8脊髓,经蛛网膜下腔导管分别于术后0、4、8、12、24h、3、7d各注入NT3溶液200ng与生理盐水组和假手术组对照,于术后4、8、12、24h、3、7、14d自右心室取血用比色法测定血清中的一氧化氮合成酶活性。[结果]大鼠脊髓损伤后一氧化氮合成酶(NOS)升高,术后12h达高峰,实验组NOS水平及升幅明显低于对照组。[结论]NT3能有效抑制NOS在脊髓损伤后的活性,从而减少了NO的生成,这可能是促进大鼠脊髓损伤后运动功能恢复的作用机制之一。
关键词:神经营养因子3;脊髓损伤;一氧化氮合成酶
Effect of neurotrophin3 on blood NOS after actual spinal cord injury of rats
Abstract:[Objective]To investigate the protective mechanism of neurotrophin3(NT3) in spinal cord injury(SCI).[Method]One hundred and five SD rats were randomly pided into 3 groups:control group(saline group),experimental group(NT3 group) and sham group. SCI in SD rats was created with Allen's method by a 30gcm impacting on the posterior T8 spinal cord. NT3 was grafted into the subarachnoid space of the rats in treatment group immediately and 4,8,12, 24h and 3,7d after spinal cord injury. The nitricoxidesynthase (NOS) activity in rats blood were assayed with colorimetric methods in 4,8,12,24h and 3,7,14d.[Result]Abnormal activity expression of NOS was detected in serum of injured rats, and reached peak at 12 hours after the injury.The level of NOS activity in NT3 group was significantly lower as compared with that in control saline group.[Conclusion]NT3 can protect spinal cord from injury in vivo,and inhibit abnormal expression of nitricoxidesynthase(NOS),thus the neurotoxicity of excessive nitricoxide(NO) is abated.
Key words:Neurotrophin3(NT3);
Spinal Cord Injury;
Nitricoxidesynthase(NOS)
神经营养因子3(NT3)能促进脊髓损伤后运动功能的恢复,对神经元具有保护作用,但是其作用机制至今仍不清楚,本试验在大鼠脊髓损伤后局部给予NT3观察其对NOS水平的影响,探讨NT3的作用机制。
1 材料与方法
1.1 材料与仪器
NOS测定试剂盒(南京建成生物工程研究所)752型分光光度计(上海第三分析仪器厂),37℃恒温水浴箱,NT3(CYTOLAB公司)SD大鼠(第三军医大学大坪医院实验动物中心)
1.2 动物与分组
健康成年SD大鼠105只,体重220~270g,雌雄不拘,分为3组:(1)NT3组(实验组)35只,在术后即刻、4、8、12、24h、3、7d经蛛网膜下腔给予NT3溶液20μl(含NT3 200ng;(2)生理盐水组(对照组)35只,在相同时点注入等容积生理盐水;(3)假手术组35只只打开椎板,蛛网膜下腔置管,不造成损伤。
1.3 动物模型
20%乌拉坦(1000mg/kg)腹腔麻醉,以T8为中心,取背部正中切口,长约5cm,依次切开皮肤,皮下组织,显露棘突,锐性切开椎旁肌并以刀柄向两侧分离,显露T7~12棘突及椎板,用文氏钳小心咬除T7~10棘突,咬除T8全椎板,以脊髓为中心显露直径约3mm圆形区。再咬除T10右侧半椎板,暴露硬脊膜,作为蛛网膜下腔置管区。用薄铜片约3mm×3mm弯成弧形与脊髓表面形状一致,以6g×5cm致伤力造成大鼠T8脊髓损伤模型。大鼠尾巴痉挛性摆动,双下肢及躯体回缩扑动后双下肢瘫痪,为造模成功标志。造模成功后,用显微镊轻提T10处硬膜,偏离后正中血管在硬脊膜上用针头(1ml注射器)制孔,见脑脊液流出后慢慢向脊髓损伤方向于蛛网膜下腔插入细导管(内径约0.1mm)约3mm,并于椎旁软组织及皮肤固定,手术组和对照组分别在术后即刻、4、8、12、24h、3、7d给予NT3溶液20μl(含NT3 200ng)或等容积生理盐水,假手术组,只打开椎板不造成损伤,插入导管后固定缝合,不给予任何处理。
1.4 术后处理
对24h、3、7、14d时点大鼠进行BBB功能评分,各组于术后4、8、12h和24h、3、7、14d分别取5只大鼠自右心取血,用南京建成生物工程研究所NOS测定试剂盒,比色法测定NOS吸光度,其原理为NOS催化LArg和分子氧反应生成NO,NO与亲核性物质生成有色化合物,在530nm波长下测定吸光度,根据吸光度的大小计算NOS活力。取血后进行生理盐水和4%多聚甲醛液灌注,切取损伤区脊髓组织,4%多聚甲醛溶液固定,脱水,石蜡包埋,切片,尼氏染色,观察神经元及尼氏体变化。
1.5 统计学处理
所有数据用SPSS10.0软件包处理,以均数±标准差(±s)表示,组间差异采用独立样本t检验。P
2 结果
2.1 血中NOS活性变化
NOS活性检测(表1)显示除术后4h对照组与试验组无显著差异以外,其余时点二者均有显著差异,12h NOS水平达高峰,对照组NOS水平及升幅均显著高于实验组;7d后实验组与假手术无明显差异,但与对照组仍有显著性差异,表明NT3能显著抑制NOS水平并对神经功能起到保护作用。表1 大鼠脊髓损伤后血中一氧化验氮合成酶活性变化(略)
2.2 组织学染色
对照组伤后4h出现明显出血灶,8h出现脊髓灰质结构破坏,大量神经元死亡,前角部分神经元尚存,但Nissl体减少,其中部分神经元固缩,伤后24h损伤段灰质中神经元数量明显减少,细胞呈现空泡状核,核仁着色明显,核质不着色,胞浆内有少量深紫色的呈块状或点状的Nissl体(图1)。实验组出血量明显减少,前角细胞残存数量较多,染色深(图2),假手术神经元形态及数量,Nissl体数量变化均不大(图3)。
2.3 功能评分(表2)表2大鼠脊髓损伤BBB评分变化(略)
对24h、3、7、14d时间点的大鼠进行BBB评分结果显示实验组与对照组在运动功能恢复上有显著差异,实验组明显优于对照组,尽管在术后14d实验组与假手术组仍存在显著性差异,但仍表明NT3能明显促进大鼠脊髓损伤后运动功能的恢复。
3 讨论
脊髓损伤包括原发性和继发性损伤。原发性损伤是损伤后的即刻反应,继发性损伤是其后的病理反应扩大和泛化的过程,在对不可逆的原发性损伤尚无有效的治疗方法的情况下,目前脊髓损伤后治疗的主要目的在于阻止或减少继发性损伤的发生,最大限度地保存受伤脊髓的功能。许多因素如兴奋性氨基酸、单胺、神经肽、血小板活化因子、自由基、脂质过氧化、Ca2+等均参与了继发性损伤过程。近年来一氧化氮(NO)作为体内的生物活性分子已被证实参与了脊髓损伤后的多种化学反应过程,过量的NO可以增加神经元死亡的数目并且与脊髓水肿密切相关。原因可能是SCI后NO通过氧化作用使脂质过氧化,造成膜结构的破坏导致细胞膜及血脊屏障的损伤,加剧水肿的发生[1]。同时过量NO生成又可介导兴奋性氨基酸神经毒性,与超氧阴离子反应形成毒性很强的过氧化硝基阴离子和羟自由基引起广泛的脂质过氧化及蛋白质酪氨酸硝基化反应,与细胞内许多酶的铁硫中心结合,破坏线粒体电子传递体系和柠檬酸循环,抑制靶细胞氧化呼吸,干扰DNA双链,影响其转录翻译等,促使细胞死亡,产生组织损害[2]。有研究表明NO能抑制脊髓及背根神经节细胞的体外存活和突起生长,对脊髓修复不利[3]。NOS是NO生物合成的关键酶,其在体内的水平直接决定NO的含量。在中枢神经系统有3种NOS同工酶:神经元型NOS(nNOS)、诱导型NOS(iNOS)和内皮型NOS(eNOS),均能产生NO。nNOS和eNOS为钙依赖性,合称为固有型一氧化氮合酶(cNOS)。刘成龙等[4]研究认为大鼠脊髓损伤后6h nNOS达高峰,24h iNOS达高峰,赵立等[5]研究发现cNOS在伤后10min活性升高,30min达高峰。本实验结果显示伤后12h总NOS达高峰,可能原因为伤后12h nNOS略有下降而iNOS处于上升阶段,两者叠加后显示总NOS水平达到高峰。既往研究多取脊髓匀浆测定NOS,这在临床应用中受到一定的限制。本实验用测定血清中NOS吸光度计算出NOS水平,为今后的临床应用提供了方便。
神经营养素3具有广泛的生理学作用,能促进神经元的生长、发育、分化和成熟,对神经系统发育及维持其正常生理功能有重要意义,可阻止胚胎期及出生后运动神经元细胞死亡,维持神经元的存活及促进神经损伤后的修复与再生,并参与调节神经元突触活动。在发育中及成熟后的大鼠中,NT3能促进脊髓损伤后皮质脊髓束的生长,且能阻止大鼠发育中损伤红核神经元的退行性死亡,体外研究表明NT3能微弱而短暂地刺激成熟的少突胶质细胞增殖并分化成为髓鞘形成细胞[6]。
本实验研究表明NT3能显著抑制NOS的表达,减少脊髓前角运动神经元的丢失,促进运动功能的恢复,随着NOS水平的下降,脊髓前角运动神经元丢失减轻,BBB评分分值上升,三者之间体现了一致性,表明通过抑制NOS的表达,减少NO的生成可能是NT3发挥作用的机制之一。NT3促进脊髓损伤后运动功能恢复是否有其它机制尚有待进一步研究。
参考文献
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[2]Zhang J,Dawon VL,Dawon TM,et al.Nitricoxide activation of poly(ADP ribose)synthetase in neurotoxicity[J].Science,1994,263:687-689.
[3]廖柏松,杨浩,鞠躬.一氧化氮对体外培养脊髓及背根神经节细胞的作用[J].第四军医大学学报,1996,17(6)401-403.
[4]刘成龙,靳安民,周初松,等.大鼠脊髓损伤后一氧化氮合酶基因表达的变化[J].中华实验外科杂志,2001,18(1):74-75.
【关键词】 医学需要;计划生育服务对象;终止妊娠;镇痛技术;腰-硬联合穿刺;羊膜腔穿刺;疼痛评分
[Abstract] Objective Due to medical need, such as birth defects and unplanned pregnancy to terminate the pregnancy trimester pregnant women, they had dual mental and physical pain. The project was to study clinically relevant analgesic effect for spinal - epidural anesthesia on the induction of labor in pregnant women,reduce the mental and physical suffering need on pregnant women for medical induction of labor, alleviate the pressure of family planning services. But should firmly follow the “population control, and improve population quality”,the family planning policy, screening and review the application object, resolutely resist and eliminate non-medical need and non-family planning pregnancy.Methods Choose 10 taboos, without referring to the medical needs of the voluntary termination of pregnancy agrees to ease the family planning service, for the observation group were pregnant women in pregnancy, selected 10 voluntarily agreed to the traditional surgery trimester abortion as the controls. Compared pain scores in both groups, labor and time for comparison and the effect.Results Pain scores was different,but labor, labor physiological changes, contraction strength, contraction duration, interval time, blood loss was not different.Conclusion Minimize the mental and physical trauma in termination of pregnancy with medical needs and family planning services , alleviate the pressure of family planning services,improve the quality of the population and social benefits, embodies the “patient-centered, personalized service”.
[Key words] medical needs; family planning clients; termination of pregnancy; analgesia; spinal - epidural puncture; amniocentesis; pain score
人民的生活水平越来越高,解决出生缺陷问题,提高人口和民族的素质是我们面对的最大问题。为此,我国长期实行“控制人口数量,提高人口素质”的计划生育政策,对于因各种医学需要,如畸胎等,以及计划外的中期妊娠孕妇,最常用的补救措施和终止妊娠方式是羊膜腔穿刺利凡诺引产术。因利凡诺会刺激宫缩而娩出胎儿,因此该过程无可避免地出现类似足月分娩的阵痛,这更增加了孕妇的精神和生理痛苦。为解决该问题,减轻孕妇的痛苦,提高人民群众的生活质量和产科质量,缓解了计划生育服务工作的压力,充分体现 “以病人为中心,人性化服务”的宗旨,提高人口素质,笔者开展了“医学需要和计划生育服务对象的终止妊娠镇痛技术应用”的专项研究。
1 资料与方法
1.1 一般资料
选择10例无禁忌指征,因医学需要或计划外怀孕而自愿同意进行镇痛终止妊娠的中期妊娠孕妇为观察组,另外选择10例自愿同意进行传统中期妊娠引产术的类同对象为对照组。
1.2 适应证
(1)母体方面:①各种严重并发症经药物治疗无效,继续妊娠可能危及母婴安全者,如重度妊娠高血压综合征,妊娠合并心脏病、慢性肾炎等;②部分性前置胎盘或胎盘早期剥离征需终止妊娠者;③羊水过多,胎儿畸形或压迫症状严重,威胁母亲生命者。(2)胎儿方面:①胎儿畸形如无脑儿、脑积水等;②宫内死胎;③胎盘功能低下,如过期妊娠、胎儿宫内发育迟缓等;④母儿血型不合,胎儿处于高危者。
1.3 禁忌证
(1)非医学需要者。坚决反对非医学需要的终止妊娠,尤其是性别选择的终止妊娠,更应坚决抵制和严厉处罚。(2)有明显头盆不称,产道阻塞,横位,初产妇臀位估计经阴道分娩有困难者。(3)有过剖宫产史、子宫肌瘤剜出术等子宫手术者。(4)胎盘呈完全性前置状态者。(5)各种疾病的急性阶段。(6)心、肝、肺、肾疾患在活动期或功能明显障碍者。(7)子宫发育不良者。(8)有急性生殖道炎症或穿刺部位皮肤及背部皮肤有感染者。(9)术前24h内两次体温在37.5℃以上者。(10)有任何导致孕妇凝血功能障碍的疾病。另外不具备麻醉意外抢救设备和技术的医院,孕妇有脊椎畸形及有麻醉药过敏史均在此列。
1.4 羊膜腔内穿刺注射
术前利用超声波诊断胎盘位置及肢体所在侧。孕妇排空膀胱取仰卧位,查清宫底高度,常规消毒皮肤,铺消毒巾,根据超声波确定羊水池最深处皮肤,局部麻醉,必要时在介入性超声波引导下,以20~21号腰椎穿刺针垂直刺入腹壁,有落空感或介入超声波显示确切已达羊膜腔内,抽出针芯,接上空针,抽取羊水2ml,然后接上1%利凡诺4ml,缓慢注入羊膜腔内,注毕快速抽出穿刺针,注射部位用无菌纱布敷盖,压迫2~3min。如回抽时有血液,则可能刺入胎盘,应试向更深部进针,或继续在介入超声波的引导下调整针向,如仍有血液或感觉刺向胎体,即应抽出,另选穿刺点,但穿刺不得超过2次。如穿刺后72h仍未发动宫缩者,可考虑再注入1次,仍不成功,改用其他方法,或用静滴催产素法加强子宫收缩,促使排出。
1.5 蛛网膜下腔-硬膜外联合穿刺
羊膜腔穿刺后通常于24h即可发动规则宫缩,此时即可实施腰-硬联合穿刺术。与无痛分娩类似,选择L3~4间隙进行硬外穿刺,待硬外穿刺成功后进行蛛网膜下腔穿刺,成功后蛛网膜下腔给予罗哌卡因2~2.5mg+芬太尼10~12.5μg混合液。硬膜外置管后,持续泵注0.1%罗哌卡因+0.0002%芬太尼混合液,自控PCA 3ml/次,间隔时间30min。可直至胎儿及胎盘娩出,规则宫缩停止后适时关泵。
2 结果
观察两组疼痛评分(即视觉疼痛模拟评分,VAS评分),观察组较对照组存在明显差异,而两组的产程生理变化,产程,宫缩强度,宫缩持续时间、间歇时间,出血量的比较则无明显差异。详见表1、表2。表1 两组疼痛评分及生命体征变化情况 表2 两组孕产妇产程、宫缩程度、宫缩持续时间及出血量比较
3 讨论
3.1 此技术的优越性
与分娩镇痛类似。在过去的20年,硬膜外镇痛是用于分娩镇痛最常用的方法。然而,硬膜外麻醉有其潜在的缺点:镇痛起效慢,有时需30min;由于硬膜外导管的关系,有时镇痛效果欠佳,采用的硬麻外局麻药液可能引起不必要的运动阻滞从而影响产程。为避免硬膜外镇痛的缺点,国内外近十年来开始实施蛛网膜下腔-硬膜外联合阻滞麻醉分娩镇痛。其主要优点为镇痛起效快,用药量少,运动阻滞较轻,孕产妇更为满意。为减少静脊膜穿破后的头痛,目前采用铅笔尖式或无创性腰麻针,大大减少甚至避免了有关术后的头痛。避免运动阻滞,不影响孕妇活动和宫缩。孕妇清醒,可参与整个过程。必要时还可满足术后的清宫或手术需要。该项技术所需的器械很少(一枚腰椎穿刺针,一个腰硬联合麻醉包和专用药泵),所需手术费用少,操作简便易学,使医院的社会效益得到提高,而且减轻了医学需要的终止妊娠孕妇的痛苦,提高了医疗质量。较之分娩镇痛,给药时机相对不受限制,从规则宫缩出现,即可穿刺给药,而且可持续给药至胎儿及胎盘娩出后规则宫缩消失。
3.2 应用范围、条件和前景
此技术的应用意义更多地体现在社会效益上。我国长期实行“控制人口数量,提高人口素质”的计划生育政策,最常用的补救措施就是医学需要的终止妊娠。对于因医学需要而终止妊娠的孕妇,其精神上已经承受了沉重的打击,再加上要承受类似分娩的阵痛,真可谓双重打击,雪上加霜。随着医学模式的改变和人们生活水平的提高,产科镇痛是时代的需要,是医学发展的需要,开展此项技术,使本来已属不幸的孕妇减轻了生理疼痛,提高了她们的生活质量,也提高了产科质量。此项技术的开展,也有效地缓解了计划生育服务工作的压力,更加体现了“以病人为中心,人性化服务”的宗旨,提高了人口素质。本项目的应用范围仅限于医学需要和计划生育服务对象的终止妊娠,实际工作中应严格甄别应用对象,坚决抵制和杜绝非医学需要和非计划生育服务对象的终止妊娠。尤其是性别选择的终止妊娠,有违社会伦理,更应坚决抵制和严厉处罚。
3.3 与国(省)内外同类技术对比
从规则宫缩开始到胎儿胎盘娩出时间、宫缩强度、出血量等与传统引产无明显区别,证明孕妇的辅助肌肉力量没有受到明显影响。
3.4 存在问题和改进意见
本项目的应用对象仅限于医学需要和计划生育服务对象的终止妊娠,以提高人口素质,应严格甄别应用对象,坚决抵制和杜绝非医学需要和非计划生育服务对象的终止妊娠。尤其是性别选择的终止妊娠,有违社会伦理,更应坚决抵制和严厉处罚。另外有极少数孕妇出现轻微瘙痒。见表3。表3 孕妇不良反应及并发症
改进意见:性别比例失衡问题引起了有关方面的高度重视。2005年2月,中国多位人大常委会委员在分组审议刑法修正案(五)草案时建议,尽快对刑法有关条款作出修改,计划生育委员会、卫生部和药品监督管理局也联合制订了《计划生育技术服务超声波操作管理规定》,严惩非医学需要的胎儿性别鉴定行为,确保出生人口性别比例的平衡和正常。作为医务工作者,有责任、有义务遵纪守法,维持社会人口性别比例平衡,这关乎国家的和谐稳定,民族的未来与昌盛。当今社会上,仍有个别群众思想落后,存在选择性别的行为,应对此应予以坚决地反对和耐心细致的思想工作。对于出现不良反应的孕妇,可充分与家属沟通及对症处理。
参考文献
1 江克强.妇产科学.北京:人民卫生出版社,1985:243.
2 赵英,鲁永鲜,李萌萌,等.妇产科镇痛的开展与常规化实施的探讨.解放军医学杂志,2006,31(8):829-830.
【摘要】
目的观察壮药白莲Ⅰ号方对小鼠移植性肉瘤S180的抑瘤作用和其对小鼠血浆白细胞介素18(IL18)的影响,以探讨该药抑制肿瘤的作用是否与诱生小鼠血浆中IL18的含量有关。方法建立小鼠移植肉瘤S180模型。用大、中、小剂量壮药白莲Ⅰ号方及环磷酰胺治疗肉瘤S180小鼠,观察其抑瘤率及血浆IL18的含量。结果白莲Ⅰ号方在一定剂量范围内对荷瘤小鼠的抑瘤率>30%,并且白莲Ⅰ号方各剂量组均有促进荷瘤小鼠IL-18生成的作用趋势,改善荷瘤小鼠的生存质量。结论白莲Ⅰ号方能有效抑制小鼠S180实体瘤的生长,存在量效关系;白莲Ⅰ号方具有诱生荷瘤S180小鼠血浆IL-18的作用,具有良好的免疫调节作用。
【关键词】 壮药白莲Ⅰ号方 S180癌细胞 白细胞介素-18
Abstract:ObjectiveTo study the effect of Bai Lian Prescription No.1 on tumor and IL-18 level in sarcoma S180 mice. MethodsSarcoma 180 tumor mice were treated with high,medium and low doses of Bai Lian Presription No.1 and cyclophosphamide (CTX) . The inhibiting rate and the content of IL-18 were assayed in mice. ResultsThe tumor inhibiting rate on tumor mice was over 30%, and it could promote the prduction of on IL-18 in sarcoma S180 mice, improve living quality of the tumor mice.ConclusionBai Lian Prescription No. 1 can inhibit the growth of transplanted S180 tumor of mice significantly in a dose-dependent manner promote the production of IL-18 in sarcoma S180 mice, which has a good immunoloregulation effect.
Key words:Bai Lian Presription No.1; Transplanted sarcoma 180 tumor; Interleukin-18
壮药白莲Ⅰ号方是广西民族医药研究所历经十余年在全区范围内开展民族医药普查工作,收集并整理出来的广西壮族地区民间常用的抗肿瘤验方,组方依据壮医治疗肿瘤调气解毒补虚的基本原则而设,具有清热解毒、活血化淤、软坚散淤、益气补虚之功。临床初步应用有着抑制肿瘤生长、改善症状、延长生命、提高生存质量的效果,对放化疗还有减毒增效作用。为深入探讨壮药白莲Ⅰ号方的抗肿瘤药效学作用,为其临床用药提供理论依据,笔者进行了以下的实验研究。现报道如下。
1 器材
1.1 动物与瘤株
昆明种雄性小鼠60只,体重(20±2)g,由广西中医药研究所提供。小鼠S180肉瘤,由广西中医药研究所提供,瘤株按常规传代保种。
1.2 药物
壮药白莲Ⅰ号方由白花蛇舌草、半枝莲、白花丹、叶下珠、广莪术、三棱、黄花倒水莲、旱莲草、五指牛奶、黄芪、党参组成,第1次加冷水至液面漫过药物2 cm ,浸泡30 min,武火急煎,煮沸后再用文火煮60 min,第2次加冷水至液面与药物齐平,武火急煎,煮沸后再用文火煮45 min,将两次所得药液过滤后混匀,置60℃水浴锅中浓缩至每100 ml药液中含生药160 g,置冰箱备用。注射用环磷酰胺(CTX),上海华联制药有限公司生产,200 mg/支,产品批号:012034,用生理盐水配制成3 mg/ml, 置冰箱备用。
1.3 试剂及仪器
白介素-18检测试剂盒(北京北方生物技术研究所产品);FJ2008型放射免疫计数器(国营二六二厂产品);DL-8R型冷冻离心机(上海离心机械研究所产品)。
2 方法
2.1 分组昆明种雄性小鼠60只,称重编号后,按随机区组分为白莲Ⅰ号大剂量组(A组)、白莲Ⅰ号中剂量组(B组)、白莲Ⅰ号小剂量组(C组)、西药阳性对照组(D组)、生理盐水组(E组)、正常饲养组(F组),共6组,每组10只动物。
2.2 造模在无菌条件下,抽取接种后7 d的S180小鼠的腹水,用无菌生理盐水稀释至2×106/ ml,于A~E组50只小鼠的右前肢腋下皮肤,每鼠接种0.2 ml S180瘤细胞悬液。
2.3 给药接种后第2天开始给药。A组壮药白莲Ⅰ号方大剂量组(按30 ml/kg灌胃给药)、B组壮药白莲Ⅰ号方中剂量组(按20 ml/kg灌胃给药)、C组壮药白莲Ⅰ号方小剂量组(按10 ml/kg灌胃给药)、D组环磷酰胺组(按60 ml/kg腹腔注射)、E组生理盐水组(按0.2 ml/20 g灌胃)、F组为正常饲养组(自由饮食、饮水)。给药1次/d,连续给药10 d。
2.4 检测指标
2.4.1 白细胞介素-18(IL-18)含量的测定末次给药后24 h称体重,摘眼球取血,离心15 min(3 500 r/min),取血清,采用抗原竞争放免方法,按IL-18试剂盒说明书方法测定IL-18的含量。
2.4.2 荷瘤小鼠的抑瘤率末次给药后24 h称体重后,颈椎脱臼处死小鼠,取肿瘤组织,精密电子天平称重,按下列公式计算抑瘤率[1]。抑瘤率(%)=(对照组平均瘤重-给药组平均瘤重)/对照组平均瘤重×100%
2.5 统计学方法实验结果计量资料以±s表示,多组间多个样本均数的比较采用方差分析,选用SPSS 11.5医学统计软件进行统计学处理。
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3 结果
3.1 对荷瘤小鼠的一般状况的影响各组小鼠接种前活泼度、体毛致密度无明显差别。随着肿瘤的生长,各组小鼠日进食量、进水量逐渐减少,活泼度下降,环磷酰胺组出现掉毛现象,其余组无掉毛现象。
3.2 对移植性S180实体瘤抑制作用环磷酰胺组及白莲Ⅰ号高、中、低剂量组S180荷瘤小鼠的平均瘤重均明显低于模型对照组(P
3.3 对荷瘤小鼠血浆IL-18的影响 与正常饲养组比较,白莲Ⅰ号3个剂量组均有促进荷瘤小鼠IL-18生成的作用趋势(P<0.01),CTX组相有抑制荷瘤小鼠IL-18生成的作用趋势(P<0.01)。白莲Ⅰ号3个剂量IL-18含量均高于NS组、CTX组 (P0.05 )。由此说明白莲Ⅰ号能激活与肿瘤免疫相关的细胞因子IL-18的活性,使荷瘤小鼠淋巴细胞对IL-18的生物活性的反应性提高,从而通过细胞因子调节机体的免疫功能。表2 各组小鼠外周血IL-18含量比较(略)
4 讨论
细胞因子(cytokine)由造血系统、免疫系统或炎症反应中的活化细胞产生,能调节细胞分化增殖和诱导细胞发挥功能,是高活性多功能的多肽、蛋白质和糖蛋白[2]。细胞因子可作为恶性肿瘤生长的直接调节剂,可以杀伤肿瘤细胞而不影响正常细胞,可以通过作用于肿瘤的血管和营养供应系统影响宿主/肿瘤关系,也可以激发宿主对肿瘤的免疫反应。
IL-18作为近来发现的多功能细胞因子,是生物学活性最强、作用最持久的细胞因子[3],具有诱生IFN-γ、 增强NK和CTL细胞活性、促进T细胞增殖、诱发Th1类细胞因子产生、促进免疫细胞表达FasL、增强Fas介导的细胞毒作用等多种生物学功能,在抗肿瘤、抗感染及免疫调节等方面有着积极的作用[4,5]。特别是其抗肿瘤作用,在肿瘤治疗和肿瘤基因治疗方面具有潜在的应用前景,已成为目前广泛研究的热点。大量的实验研究证实,IL-18的抗肿瘤作用及其作用机制, IL-18首先激活NK细胞,使其能够特异地杀伤肿瘤细胞,然后在NK细胞的调节下,CD8+和CD4+T细胞逐渐活化,CTL发挥杀伤作用,CD4+T细胞参与形成肿瘤特异性免疫记忆。另外,IL-18通过抑制肿瘤组织的血管生长从而抑制肿瘤的生长[6]。
壮药白莲Ⅰ号方广西壮族地区民间常用的抗肿瘤验方,它依据肿瘤病机特点及调补的治疗原则进行组方。方中白花蛇舌草、半枝莲、白花丹、叶下珠在《中国壮药学》[7]中均列为解毒药。四药相配伍,可收清内热解癌毒之功。现代研究认为清热解毒药在体内和体外均有一定程度的直接或间接抗癌抑瘤作用。广莪术、三棱破血消积;黄花倒水莲、旱莲草、五指牛奶《中国壮药学》均谓其为调气补虚之良药;黄芪、党参,益气健脾补虚。诸药合用,既清热解毒,软坚散淤,又益气补虚;既可培补正气,又使邪有出处;既重视局部病位,又重视全身机能的调节。组方攻补兼施,寒温并用,调解补相结合,气血同治,构思严谨,切中肿瘤病机,颇为相宜。
本实验研究表明,壮药白莲Ⅰ号方具有明显的抗肿瘤作用,在一定剂量范围内对荷瘤小鼠的抑瘤率大于30%。同时,白莲Ⅰ号方有促进荷瘤小鼠IL-18生成的作用趋势,由此说明白莲Ⅰ号能激活与肿瘤免疫相关的细胞因子IL-18的活性,使荷瘤小鼠淋巴细胞对IL-18的生物活性的反应性提高,从而通过细胞因子调节机体的免疫功能。另外,白莲Ⅰ号方改善小鼠的一般生存状况,提高其生存质量,有利于荷瘤机体的治疗,明显优于化疗药物。综上所述,壮药白莲Ⅰ号方是一个有效的抗肿瘤壮药复方,值得进一步研究开发。
参考文献
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[5]Lebel-Binay S , Berger A , Zinzindohoue F , et al. Interleukin-18 : biological properties and clinical implications[J]. U R Cytokine Netw , 2000 , 11(1) : 15.
【关键词】 神经元,干细胞; 脊髓损伤; 组织学; 疾病模型,动物
脊髓损伤(spinal cord injury, SCI)是临床上常见的疾病,致残率高,治疗效果不理想,多以不全瘫或全瘫为结局,严重影响患者的生活质量。因此SCI后功能恢复的研究一直是神经科学研究的难点和热点。近年来,神经干细胞(neural stem cells, NSC)的移植给SCI后治疗带来新的希望。NSC具有多潜能、自我复制和更新、未分化等特征。本研究通过在损伤脊髓的局部移植NSC,观察行为学和组织学方面的变化,初步探讨NSC对损伤脊髓局部神经细胞的影响及其表达功能的调节。
1 动物与方法
1.1 动物与仪器试剂 SpragueDawley(SD)大鼠(SCXK闽2004002)70只,体质量(200±20)g,雌雄不限。生物显微镜(BX40型,日本Olympus公司);立体定位仪(江湾C型,上海第二军医大学);微量注射器(1 μL,美国Sigma公司);组织切片机(Leica2135型,德国)。脱毛剂:8%硫化钠水溶液;10%甲醛水溶液;1%伊红水溶液;10%苏木素;缓冲亚甲蓝染液;0.2%醋酸盐缓冲液;4%钼酸铵液;NSC(由福建医科大学分子医学211工程实验室提供)漂洗3次,含量为105 μL-1。
1.2 方法
1.2.1 分组 大鼠随机分3组:(1)对照组10只,仅暴露硬脊膜。(2)SCI组30只,用3%戊巴比妥钠(40 mg/kg)腹腔注射麻醉后,俯卧位固定,显露T9T11棘突,咬除T10棘突及椎板,暴露硬脊膜,应用Allen打击法致SCI,打击势能50 gcm,损伤部位注射等量生理盐水,并于SCI后2、5、12 d各取10只大鼠处死,取SCI部位上下各4 mm脊髓,行HE染色和神经尼氏体染色。(3)NSC移植组30只,于SCI后即刻注射NSC。注射时用微量注射器吸取NSC 1 μL,应用立体定位仪于T10平面脊髓后动脉旁开0.5 mm注射,深度1 mm,5 min内注射完毕,留针3~5 min,并于注射NSC后2、5、12 d各取10只大鼠处死取材,取材范围及染色方法同SCI组。
1.2.2 行为学及组织学观察 神经功能评价标准采用改良Gale联合评分法(改良CBS法)[1]。检测项目是:开放空间运动能力、脚趾伸展、触地反应、回缩反射、矫正反射、斜板试验及游泳试验。评分以正常为100分,后肢全瘫为0分。常规HE染色,光镜观察脊髓出血、水肿等;神经尼氏体采用Pischingert氏亚甲蓝染色法,光镜观察神经细胞肿胀、变性、坏死及尼氏小体变化等。
1.3 统计学处理 数据以x±s表示,采用SPSS 10.0软件进行统计学分析,组间比较采用单因素方差分析。
2 结 果
2.1 行为学观察结果 NSC移植组大鼠感觉、运动功能恢复明显,与SCI组及对照组比较,差别有统计学意义(P
2.2 SCI前后及NSC移植后组织学变化 SCI组于SCI后2 d,脊髓灰、白质中出现片状出血,神经元肿胀、破裂、溶解,尼氏小体减少甚至消失,且随距损伤处距离的延长而逐渐减轻;于SCI后5 d,损伤坏死区有胶质细胞增生,伤后12 d增生更加明显(图1)。表1 大鼠改良CBS评分与脊髓损伤组比较,:P
3 讨 论
SCI是一种常见而严重的临床疾患。我国发病率约每年6.7人/百万人,以中青年胸腰段损伤最多。常导致患者损伤平面以下感觉、运动功能减退
A~D:脊髓损伤后2 d(A:×40;B~D:×400);灰、白质中出现片状出血,神经元肿胀、破裂、溶解,尼氏小体减少甚至消失,且随距损伤处距离的延长而逐渐减轻;E:脊髓损伤后5 d(×100),损伤坏死区有胶质细胞增生;F~G:脊髓损伤后12 d组(F:×100;G:×400);损伤坏死区有胶质细胞增生更加明显. A、B、C、E、F:HE染色;D、G:Pischingert氏亚甲蓝染色.
图1 脊髓损伤组的组织学变化
Fig 1 Histological changes in the spinal cord injury control group
A~B:神经干细胞移植后2 d (A:×40;B:×400),灰、白质中出现小片状出血,神经元肿胀、破裂、溶解,尼氏小体减少程度较脊髓损伤组轻;C:神经干细胞移植后5 d (×100),损伤坏死区胶质细胞较脊髓损伤组增多;D~E:神经干细胞移植后12 d (D:×100;E:×400),损伤坏死区胶质细胞较脊髓损伤组增多. A、C、D:HE染色;B、E:Pischingert氏亚甲蓝染色.
图2 神经干细胞移植组的组织学变化
Fig 2 Histological changes in t the spinal cord injury stem cell group
或丧失、植物神经功能紊乱、大小便失禁等[2]。致残率高,治疗效果往往不理想,多以不全瘫或全瘫为结局,严重影响患者的生活质量。近年来,在基础研究领域,细胞移植治疗SCI已成为促进其受损组织修复及功能重塑的重要手段[3]。在可供移植的种子细胞中,NSC以其良好的自我更新增殖能力及多向的分化潜能而成为最具前景的研究热点之一[4]。随着NSC的发现和分离成功,尤其是NSC可以在体外大量培养、增殖以及干细胞系的建立可以大量提供神经元和胶质细胞,为损伤后进行替代治疗提供了充分的材料。
本研究采用的SCI模型:(1)SCI节段的选择:因为动物胸段脊髓处椎板咬除方便,且能避开骶髓排便中枢以便术后管理,但SCI节段越高,损伤后动物死亡率亦越高,故选择胸段作为损伤节段,以T8~T12为宜。本实验采用T9~T11作为损伤节段。(2)采用改良Allen打击法致伤中胸段脊髓,其优点在于与人类SCI的相关性好,保持了硬脊膜的完整性,可有效防止外源性成分侵入SCI区域,防止脊髓外露与脊液外漏[5]。
NSC来源于胚胎早期室管膜上皮,具有多向分化的潜能。NSC具备自我更新和增殖的能力,可在特定因素影响或诱导下,向神经元或胶质细胞分化。大量研究表明,NSC移植入损伤脊髓后,不仅能在损伤信号存在的情况下向损伤原位迁移,并被诱导分化成神经元、神经胶质细胞,起到组织学上的直接替代作用,还可通过持续分泌广泛的神经营养因子,促进神经元存活和轴突生长及延伸[610]。Martinezserrano等报道,将NSC作为细胞系培养转导后移植到脊髓受损区,移植细胞存活、整合、分化为神经元和胶质细胞,阻断了神经元变性,促进了脊髓功能部分恢复[11]。NSC移植方法有直接移植法、静脉注射移植法和蛛网膜下腔注射移植法等。本研究采用直接移植法,具有以下优点:(1)NSC直接移植到损伤区域,避免NSC在静脉血液或脑脊液迁移过程中各种因素的干扰,影响实验结果;(2)NSC直接移植到损伤区域,缩短了其他移植方法中NSC到达损伤区域的时间,起到组织学上的直接替代作用;(3)实验中用的NSC量较静脉注射移植法和蛛网膜下腔注射移植法少,节省成本。本研究结果显示,在组织学方面,NSC移植组在SCI第2、5、12天,神经细胞坏死程度及尼氏小体减少程度均较SCI组减轻,而损伤坏死区胶质细胞则比SCI组增多;在行为学方面,NSC移植组在各个不同时间点(SCI后第1、3、6、9天和第12天),综合多项观察指标的评分均明显高于损伤对照组。提示SCI后通过移植NSC能减轻局部神经组织受损程度,并且能使胶质细胞增生,进而改善SCI大鼠的神经功能,促进SCI的修复,在动物水平验证了NSC在急性SCI期应用的可行性与有效性,也为进一步探讨NSC移植修复SC
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关键词:六黄合剂;胰岛素抵抗;血管内皮细胞;一氧化氮;超微结构;大鼠
研究表明,血管内皮的损伤与胰岛素抵抗(insulin resistance,IR)的关系密切,内皮功能障碍与IR之间具有相互影响、相互促进的作用,共同促进代谢综合征和心血管疾病的发生发展[1]。我们前期研究表明,六黄合剂能够增强IR大鼠的胰岛素敏感性[2]。本研究进一步应用透射电镜观察该复方对IR大鼠胸主动脉内皮细胞的影响,探讨其保护血管内皮
基金项目:辽宁卫生职业技术学院科学研究基金重点项目 (2012Z06)
的作用机制。
1 材料与方法
1.1 动物与分组
健康清洁级SD大鼠32只,雌雄各半,体质量180~220 g,中国医科大学实验动物中心提供,动物许可证号:SCXK(辽)2008-0005。所有大鼠均适应性喂养2周,自由摄水,标准饲料喂养,明暗周期为12 h(7:00-19:00),温度控制在(23±2)℃,相对湿度(55±5)%。将动物随机分为正常组、模型组、罗格列酮组和六黄合剂组,每组8只。
1.2 药物、仪器与试剂
721E型可见光分光光度计,上海光谱仪器有限公司;JEM-1200EX型透射电镜,日本JEOL公司;六黄合剂由黄芪、黄精、姜黄、蒲黄、黄连和大黄按适当比例煎制而成,药材购自沈阳市医药公司;马来酸罗格列酮片(葛兰素史克天津有限公司);地塞米松磷酸钠注射液(郑州卓峰制药有限公司);总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、游离脂肪酸(FFA)、一氧化氮(NO)等检测试剂盒,均为南京建成生物工程研究所产品。
1.3 造模与给药
参照文献[3]方法,应用地塞米松诱导IR模型。模型组、罗格列酮组、六黄合剂组大鼠肌注地塞米松磷酸钠注射液,剂量为1 mg/kg,隔日注射1次,共7次;正常组肌注等体积生理盐水。在造模的同时,六黄合剂组予六黄合剂6.3 g/kg灌胃[4],罗格列酮组予罗格列酮3 mg/kg灌胃,正常组和模型组灌胃等体积蒸馏水,给药容量为10 mL/kg,连续14 d。
1.4 指标检测
第15日,大鼠禁食12 h后,断头取血,离心,分离血清, -20 ℃保存,待测空腹血清TG、TC、HDL-C、LDL-C、FFA和NO含量,按试剂盒说明书测定。
1.5 电镜观察
2.2 胸主动脉内皮细胞超微结构观察
[关键词] 奥扎格雷钠;急性脑梗死;基质金属蛋白酶9;一氧化氮;一氧化氮合酶
[中图分类号] R743.3 [文献标识码] B [文章编号] 1673-9701(2013)34-0063-03
Effect of ozagrel sodium on serum matrix metalloproteinase 9,nitric oxide and nitric oxide synthase in patients with acute cerebral infarction
LU Xudong1 LIU Gailing1 TANG Guanmin2
1.Department of Neurology, Zhengjiang Armed Police Hospital, Jiaxing 314000, China;2. Vasculocardiology Department,Jiaxing First Hospital, Jiaxing 314001, China
[Abstract] Objective To evaluate the effect of ozagrel sodium intervention of sensory and motor nerve function defect degree, obstacle score, serum matrix metalloproteinase 9 (MMP-9), nitric oxide (NO) and nitric oxide synthase (NOS) in patients with acute cerebral infarction. Methods A total of 110 cases of acute cerebral infarction were divided into observation group and control group. The control group was given conventional treatment while the observation group was given the conventional therapy combined with sodium ozagrel treatment. Results Two weeks after treatment, the degree of neurological deficit score, the observation group was (9.52 ± 4.76) scores lower than that of the control group (12.85 ± 5.41) scores, the difference was statistically significant (P < 0.01). Two weeks after treatment, sensory integration, integration of motion, the observation group was (29.47 ± 7.83) scores, (68.43 ± 18.71) scores, were higher than those of the control group (24.19 ± 6.42) scores, (59.14 ± 17.92) scores, the difference was statistically significant (P < 0.01). 2 weeks after treatment, the serum level of MMP-9, the observation group was (66.57 ± 18.27) ng/mL were lower than that of the control group (79.18±19.02) ng/mL, the difference was statistically significant (P < 0.01). 2 weeks after treatment, serum NO, NOS of the observation group were (38.56 ± 8.95) U/mL, (18.73 ± 4.72) μmol/L, were lower than those of the control group (59.17 ± 10.46) U/mL, (31.54 ± 6.81) μmol/L, the difference was statistically significant (P < 0.01). Conclusion Ozagrel sodium can significantly improve the neurologic impairment score, feel the integral and integral of motion, in patients with acute cerebral infarction. Ozagrel sodium can significantly improve the level of serum MMP-9 in patients with acute cerebral infarction. And possibly by decreasing NO content and NOS activity in focal ischemia, in order to protect the role of the nerves and blood vessels, and promote the recovery of neurological function.
[Key words] Sodium ozagrel;Acute cerebral infarction;Matrix metalloproteinase 9;Nitric oxide;Nitric oxide synthase
急性脑梗死是神经内科高发病率、高致残率、高致死率疾病[1]。有文献报道[2],应用奥扎格雷钠可有效改善急性脑梗死患者的神经功能,并很好的抑制患者血栓的生成。但是,目前有关奥扎格雷钠治疗急性脑梗死患者的机制报道较少。许多实验研究表明,一氧化氮(NO)在急性脑梗死后的病理生理作用既有神经保护作用,又有神经损伤作用,而一氧化氮合酶(NOS)是NO生物合成的关键因素。此外,血清基质金属蛋白酶9(MMP-9)也参与了脑梗死的发病过程,可用来做判断患者病情严重的预测指标。为此,本研究观察了奥扎格雷钠对急性脑梗死患者神经功能缺损程度、感觉和运动障碍评分、血清MMP-9、NO及NOS的影响,现报道如下。
1 资料与方法
1.1 一般资料
选择2011年3月~2013年3月在武警浙江省总队医院神经内科就诊的急性脑梗死的患者110例为研究对象,年龄60~78岁,经过伦理委员会批准及患者知情同意后,采用随机数字表法分为观察组和对照组。观察组55例(男30例,女25例),初次发病,美国国立卫生研究院神经功能缺损评分(NIHSS) 4~20 分,年龄(68.4±4.6)岁。对照组55例(男29例,女26例),初次发病,美国国立卫生院神经功能缺损评分(NIHSS) 4~20 分,年龄(58.7±4.2)岁。两组患者性别、发病情况、NIHSS评分、年龄等一般资料比较差异不显著(P > 0.05),具有可比性。入选标准[3]:①符合全国第四届脑血管病学术会议制定标准[4],并经头颅CT证实。②60岁
1.2 治疗方法
①对照组:给予阿司匹林肠溶片、抗血小板聚集、抗凝、调整血压、预防并发症等脑梗死常规方式治疗。②观察组:在对照组用药方式的基础上,加用注射用奥扎格雷钠(扬子江药业集团,国药准字H20065861),80 mg/次,2次/d,静脉滴注,连用2周。
1.3观察指标
血清MMP-9的检测[5]:两组均抽取静脉血,分离血清,采用酶联免疫吸附方法检测,MMP-9水平以ng/mL表示。NO 含量和 NOS 活性检测[6]:两组均采集静脉血,分离血清,采用南京建成生物工程研究所提供的 NO 含量和 NOS活性测试盒检测,操作步骤按试剂盒说明书进行,NO 含量以 U/mL 表示,NOS 活性以 μmol/L 表示。
1.4 疗效评定
参考文献[7,8]拟定标准:神经功能缺损评分采用《脑卒中患者临床神经功能缺损程度评分标准》(全国第四届脑血管学术会议)评定。应用改进 Fugl-Meyer 及 Lindmark 评价法对患者的感觉与运动功能评分进行评价。
1.5 统计学处理
本组数据采用SPSS 13.0统计学软件进行分析处理。组间比较,采用χ2检验或t检验。以P
2结果
2.1 两组患者神经功能缺损程度评分的比较
治疗2周时,观察组神经功能缺损程度评分为(9.52±4.76)分低于对照组神经功能缺损程度评分(12.85±5.41)分,差异有统计学意义(P
表1 两组患者神经功能缺损程度评分的比较(x±s,分)
注:与同组治疗前相比,*P
2.2两组患者感觉和运动障碍评分的比较
治疗2周时,观察组感觉积分为(29.47±7.83)分高于对照组感觉积分(24.19±6.42)分,差异有统计学意义(P < 0.01),见表2。治疗2周时,观察组运动积分为(68.43±18.71)分高于对照组运动积分(59.14±17.92)分,差异有统计学意义(P < 0.01),见表2。
表2 两组感觉和运动障碍评分的比较(x±s,分)
注:与同组治疗前相比,*P < 0.01
2.3 两组患者血清 MMP-9水平含量的比较
治疗2周时,观察组血清 MMP-9水平为(66.57±18.27)ng/mL,低于对照组血清MMP-9 水平(79.18±19.02)ng/mL,差异有统计学意义(P < 0.01),见表3。
表3 两组患者血清 MMP-9水平含量的比较(x±s,ng/mL)
注:与同组治疗前相比,*P < 0.01
2.4 两组患者血清 NO 含量和 NOS 活性的比较
治疗2周时,观察组血清NO含量为(38.56±8.95)U/mL低于对照组血清NO含量(59.17±10.46)U/mL,差异有统计学意义(P
3讨论
奥扎格雷钠是一种血栓素A2合成酶抑制剂,能抑制血栓素A2生成,具有抗血小板聚积和扩张血管作用,其用于治疗急性脑梗死患者疗效显著[9]。苏观湛等[10]将广东省兴宁市人民医院收治的120例急性脑梗死患者随机分为两组,对照组给予阿司匹林、依达拉奉及血栓通治疗,实验组在治疗组患者用药基础上,给予奥扎格雷钠治疗,以探讨奥扎格雷钠治疗急性脑梗死的临床疗效及安全性,结论显示,应用奥扎格雷钠可有效改善急性脑梗死患者的神经功能、并能很好的抑制血栓生成。治疗2周时两组急性脑梗死患者的神经功能缺损程度评分、感觉积分及运动积分均明显改善。其中,观察组神经功能缺损程度评分(9.52±4.76)分低于对照组神经功能缺损程度评分(12.85±5.41)分,差异显著。观察组感觉积分(29.47±7.83)分高于对照组感觉积分(24.19±6.42)分,差异显著。治疗2周时,观察组运动积分(68.43±18.71)分高于对照组运动积分(59.14±17.92)分,差异显著。提示奥扎格雷钠用于治疗急性脑梗死患者疗效可靠,可以明显改善患者的神经功能缺损程度评分、感觉积分及运动积分。
MMP-9 是胶原酶,可降解细胞外基质中的Ⅳ型胶原,其参与了脑梗死的发病过程,病理情况下可导致基底膜、血脑屏障被破坏[11]。有研究认为[12],血清MMP-9参与了老年急性脑梗死的发生发展,可用来做判断患者病情严重的预测指标。党颖徐等[13]的研究也认为,监测急性脑梗死患者血清MMP-9水平,对了解患者病情严重程度和预后评估具有一定的临床价值。李慧明[14]选择126例急性脑梗死患者为观察组,选择同期体检的80例健康者为对照组,并比较2组患者血清MMP-9、IL-18水平,探讨血清MMP-9及白介素18(IL-18)在急性脑梗死患者的表达及与预后的关系,结果显示,急性脑梗死血清MMP-9及IL-18水平显著升高,且与患者病情严重程度相关。本研究表明,治疗2周时两组血清 MMP-9水平均明显下降,而且观察组血清 MMP-9水平要明显低于对照组血清 MMP-9 水平,差异显著。提示奥扎格雷钠可以明显改善急性脑梗死患者的血清 MMP-9水平。
急性脑梗死患者的病理生理机制复杂,其中 NO 和 NOS 是脑缺血神经损伤的关键因素之一[15]。NO 是机体内重要的信使分子和效应分子,为神经传递、血管舒张、神经功能内源性介质[16]。NOS是 NO 生物合成限速酶,其在脑缺血中发挥着神经元保护和神经毒性双重作用[17]。林孟戈等[18]分别应用乳胶增强散射比浊法和分光光度法对183例急性脑梗死患者血浆hs-CRP、NO和NOS水平进行测定,并与56例健康对照和32例腔隙性脑梗死患者的血浆hs-CRP、NO和NOS水平进行比较,结果表明,急性脑梗死患者血浆hs-CRP、NO和NOS水平均显著升高,并认为血浆hs-CRP、NO和NOS水平与脑梗死严重程度密切相关。本研究表明,治疗2周时,两组急性脑梗死患者的血清 NO 含量及NOS活性均明显下降。而且,此时观察组血清 NO 含量及NOS活性要明显低于对照组,差异显著。提示NO 和 NOS 在急性脑梗死患者的发生发展中起着重要的作用,奥扎格雷钠可能通过降低缺血灶中 NO 含量和 NOS 活性,以发挥神经血管的保护作用,并促进神经功能恢复。
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