核酸检测情况精选(九篇)

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第1篇：核酸检测情况范文

关键词：窗口期 艾滋病毒 核酸检测

Doi：10.3969/j.issn.1671-8801.2014.03.619

【中图分类号】R3 【文献标识码】B 【文章编号】1671-8801（2014）03-0399-01

献血者血液必须经过经血传播疾病病毒检测合格，才能发往临床，保证用血者的安全。传统血液筛查采用酶联免疫法对献血者血液进行检测，虽然酶联免疫技术应用已经很成熟，但仍存在方法本身的限制，病毒感染“窗口期”较长。我站从2010年12月开始对常规酶免检测合格的献血者血液，增加艾滋病毒核酸（HIV DNA）检测，检出1例艾滋感染“窗口期”的献血者，阻止了该献血者血液进入临床，感染患者，保证了输血安全。现对该血液的检测情况总结如下。

1 材料与方法

1.1 标本来源。本站无偿献血者，男，20岁，追踪采集献血者标本3次。

1.2 试剂与方法。①ELISA检测。对献血者血液标本采用3种酶免试剂（北京万泰试剂、法国伯乐试剂，均为4代试剂，可检测P24抗原；珠海丽珠抗体检测试剂）平行检测抗-HIV1/2，操作中严格按照试剂说明书和本站操作规程进行操作。②核酸检测。首次献血标本经酶免检测合格，采用上海浩源核酸血液筛查试剂进行核酸检测，核酸筛查阳性标本采用罗氏核酸定量试剂进行定量检测。③蛋白印记确证检测。对核酸阳性标本再进行蛋白印记确证实验。

2 结果

2.1 追踪采集标本时间及酶免和核酸检测结果见表1。

3 讨论

本例HIV RNA阳性标本，经过对该献血者的追踪检测，证明该献血者献血时正处于“窗口期”感染。血清学酶免检测在第1次追踪检测时，进口伯乐试剂开始转阳，而国产万泰试剂和丽珠试剂仍为阴性，说明在献血后第4天，血液中P24抗原已经转为阳性，且进口试剂灵敏度高于国产试剂。第2次和第3次追踪检测时，所有的血清学指标和蛋白印记确证试验都转为阳性，明确该献血者被感染艾滋病毒，献血时正处于感染窗口期。有文献报道，核酸检测技术可将HIV感染的“窗口期”缩短11天（缩短“窗口期”的50%）[1]。在本研究中，核酸检测将病毒检测的“窗口期”提前了4天。核酸检测技术在我国还处于起步阶段，在血液筛查中的必然性和重要性逐步显现。随着该技术在全国各采供血机构中陆续开展，不断提高血液检测质量，缩短病毒检测“窗口期”，为社会提供安全、有效的血液，挽救患者生命。

第2篇：核酸检测情况范文

关键词：乙肝病毒；前S1抗原；脱氧核糖核酸；乙肝病毒e抗原

根据调查研究我国是乙型肝炎高发区，前S1抗原是乙型肝炎病毒的重要组成部分，在肝细胞受乙型肝炎病毒感染中起着重要的作用。随着我国近几年对乙型肝炎、前S1抗原的研究发现前S1抗原在乙型肝炎诊疗中具有一定的应用价值，本文对前S1抗原、脱氧核糖核酸、乙肝病毒e抗原的检测进行研究，分析前S1抗原检测技术的应用价值。

1 资料与方法

1.1一般资料 选取100例乙型肝炎患者，其中男性65例，女性35例，年龄在12～75岁，平均年龄为41.5岁，所有研究对象的表面抗原检测均呈现阳性，符合肝炎病毒诊断标准，并排除了其他类型的肝炎。

1.2方法 前S1抗原、乙肝病毒e抗原的检测采用酶联免疫吸附法，脱氧核糖核酸检测采用实时荧光定量PCR检测方法。

1.3统计学处理 本次研究中的所有数据采用SPSS13.0统计学软件进行处理，计数资料采用χ2检验，计量资料采用t检验，以P

2 结果

所有乙肝病毒患者血清样本中前S1抗原呈现阳性的有76例，乙肝病毒e抗原呈现阳性的有61例，脱氧核糖核酸呈现阳性的有83例。其中乙肝病毒e抗原阳性61例患者中前S1抗原呈现阳性的有47例，阳性率为77.05%，脱氧核糖核酸呈现阳性的有50例，阳性率为81.97%，前S1抗原阳性率和脱氧核糖核酸阳性率比较，差异不明显，P>0.05，不具有统计学意义。在脱氧核糖核酸呈现阳性的83例中，前S1抗原阳性72例，阳性率为86.75%，乙肝病毒e抗原呈现阳性的有48，阳性率为57.83%，前S1抗原阳性率和脱氧核糖核酸阳性率比较，有显著差异P

3 讨论

乙肝病毒的传统途径有血液、母乳喂养等，我国当前乙型肝炎的发病率非常的高，乙肝病毒成为危害我国人民健康的最为严重的一种病毒性肝炎。近几年我国医学界对乙型肝炎的研究取得较大的成就，对乙型肝炎病毒的研究主要是通过对乙型肝炎病毒患者的血清标志物、脱氧核糖核酸、乙肝病毒e抗原等进行检测，在通过患者的临床表现进行诊断[1]。以前采用的血清标志物检测无法将乙型肝炎病毒在患者体内的恢复情况进行反映，只能将乙型肝炎病毒在患者体内的免疫状态进行反映，无法将检测结果作为患者的乙型肝炎诊断依据，而脱氧核糖核酸含量的检测结果能作为乙型肝炎病毒传染性的直接诊断依据，当前对乙型肝炎的研究得出前S1抗原和脱氧核糖核酸有密切的关系。在人体感染乙型肝炎病毒以后，首先受到影响的就是前S1抗原，所以对前S1抗原进行检测，可以将人体的免疫状况进行反映。

本次研究中100例乙肝患者的血清检测，前S1抗原呈现阳性的有76例，乙肝病毒e抗原呈现阳性的有61例，脱氧核糖核酸呈现阳性的有83例。在61例乙肝病毒e抗原阳性患者中前S1抗原和脱氧核糖核酸的检出率分别为77.05%，81.97%，而在83例脱氧核糖核酸阳性患者中乙肝病毒e抗原、前S1抗原检出率为57.83%，86.75%。前者无统计学意义，后者P

由此我们可以得出前S1抗原在乙肝病毒传染中起到一定的提示作用，和脱氧核糖核酸有相关性，而且这种相关性要高于和乙肝病毒e抗原之间的相关性，可以将乙肝病毒传染强度进行反映。乙肝病毒前S1抗原可以作为乙肝病毒感染的临床检测指标，在临床乙肝病毒诊疗中具有非常重要的应用价值，可以将乙肝病毒前S1抗原检测技术在临床检验中广泛使用[2]。

参考文献：

第3篇：核酸检测情况范文

现在去武汉需要做核酸检测吗12月 现在去武汉是不需要做核酸检测的，但前提是你是低风险地区，毕竟按照抗疫规定全国低风险地区武汉凭健康码绿码、体温正常即可通行，但是如果你是高风险地区的，全国中高风险地区来武汉地区，请主动到当地社区进行申报并配合当地疫情防控指挥部的所有防控措施到指定地点隔离14天。隔离期间，将进行2次核酸检测以及1次抗体检测。

12月去武汉会被隔离吗 12月去武汉不会被隔离，不过是低风险地区。

假使你是从中高风险区到达武汉，用不用核酸检测、隔离，就要视武汉的防控措施来定，通常情况下，应该给到7天核酸阴性证明就能通过，亦可能必须进行核酸检测并隔离14天。假使你是从低风险区域去武汉，基本可以直接进入，不用进行核酸检测和隔离。

12月去武汉要注意什么 1、任何时候来武汉旅游记得带上雨具。当然，秋季雨水要少一点。

2、不要低估武汉的冷，即使东北来的也不要充大爷，武汉的冷可以整得你鼻青脸肿。

3、和其它城市一样，尽量避开火车站的拉客，但你若感觉信心满满，试试也无妨。

第4篇：核酸检测情况范文

2022五一学生出省回来要隔离吗

如果学生去的是低风险地区，健康码是绿码，核酸是阴性，体温正常，一般不需要隔离。

从中等和高风险地区返回时需要隔离，从省外低风险地区返回时不需要隔离，但需要进行核酸检测。

对于从中高危地区返回的学生，需要进行14天的集中隔离。隔离期间，严格遵守观察点规定，配合核酸检测和健康监护。

在家庭健康监测期间，除非必要，否则不要外出，也不要参加任何聚会活动。对造成疫情传播或者传播风险的，依法追究责任。

2022五一学生出省需要做核酸吗

一般都需要核酸检测。

很多地方都有一些要求。例如，对于来自中高危地区的学生，教师应进行核酸检测和医学观察。对于来自低风险地区的学生来说，核酸检测可能不是必需的。这还需要各地和学校根据当地疫情防控要求进行安排。

如果学校有特殊情况，比如突然发烧或其他身体异常，其他学生也可以戴口罩。如果出现突发疫情，应紧急启动应急预案，并可能要求相关人员采取相应的防控措施。首先要做的是戴口罩。

五一期间怎么做好防护

1.外出时，携带足够的口罩、快干手消毒剂等个人防护用品，科学佩戴口罩，做好手卫生。

2.尽量减少与公共交通工具上其他人的沟通，避免聚集，并尽可能与其他乘客保持距离。尽量避免直接接触门把手、电梯按钮等公共设施。接触后及时洗手或用快干手消毒剂擦拭干净。

第5篇：核酸检测情况范文

  

  “电话发我！”短短四个字，让“深圳卫健委”的词条迅速冲上了微博热搜第一。

  事件起源于1月8日，深圳一位市民Prnliy在“深圳卫健委”微信公众号上留言求助：“昨晚9点在龙华中心医院做的核酸，产妇等着住院要核酸证明才能入住，什么时候能出结果啊？12小时了。能不能优先安排，因为真的挺急。”不到一分钟内，深圳市卫健委火速在留言区回复称：“电话发我。”

  紧接着，经过深圳市卫健委、深圳市龙华区中心医院、第三方检测机构争分夺秒地协调和安排，一个半小时后，该市民收到了后方上传的核酸检测报告，而后孕妇也顺利办理了住院。

  网友纷纷点赞，并表示 “感动”“好感拉满”“好酷，深圳速度”。有网友称，这是 “2022年目前看到的最霸气的四个字”。

  昨天下午，深圳市卫健委宣教处处长王岭向记者表示：“我们只是做了应该做的。”

  【事件】

  不能入院!

  孕妇核酸检测未出结果

  王岭介绍，她作为深圳卫健委公众号的负责人，会时常关注后台的留言信息，对于存在紧急情况的留言及时给予回复，并安排处理。

  1月8日上午10点57分，她在后台收到一位市民求助称：“昨晚（1月7日）9点在龙华中心医院做的核酸，产妇等着住院要核酸证明才能入住，什么时候能出结果啊？12小时了。”在该留言下方，她回复了一句：“电话发我。”

  王岭表示，要到留言的何先生电话以后，她把何先生反映的问题转交龙华中心医院进行处理。医院相关负责人告诉王岭：“昨晚的标本结果已出来，正在做上传处理，但数据量大，还是有延迟。”

  1月8日11点17分，医院门诊部联系何先生询问采样过程，并请他提供夫妻二人姓名与身份证号码。医院查询后发现，何先生提供的信息在医院未查询到结果。何先生称，采样地点是在“大门进来左边往中医科那条路”。

  医院发现，何先生所说的是一个医院设置的临时采样点，采样后标本被送到第三方检测机构。而医院为入院患者专门设置了采样点，都是由医院自己实验室检测的。于是王岭又问询第三方检测机构，得到回复称：“结果已出，但因人手不足未经审核，马上审核。”

  当天12点28分，何先生及爱人的核酸检测报告被上传到系统。王岭立即将消息发给何先生，并收到何先生的回复短信：“好的，已收到。感谢。”

  【结果】

  “电话发我”!

  霸气回复显速度更显温度

  截至1月9日10时许，深圳市卫健委这则简短回复已收获2万多次点赞，话题阅读量已高达2.8亿。

  对此，有网友表示：“电话发我”彰显霸总气场，并广为流传。“电话发我，2022年目前看到最霸气的四个字”……

  昨天下午，何先生向记者证实了此事，新华社也对他进行了采访。

  何先生表示，夫妻俩来深圳4年多，这是他们的第一个宝宝。留言求助之后，很快就接到了来自龙华中心医院的电话并查到了核酸结果，粤康码也出来了，他的太太顺利入住了医院。目前孕妇的情况稳定，正在深圳市中医院进一步治疗。

  “感谢深圳市卫健委及时帮忙联系了做核酸的医院录入了结果，（我们）顺利办理了入院。”1月8日，何先生在微博上留言透露，他爱人怀孕8周左右，应该是孕妇，不是产妇，但情况还不稳定，医院建议住院观察治疗，当时他在“深圳卫健委”微信公众号留言是想加快核酸录入。“希望宝宝坚强健康留下来，以后也去‘深圳卫健委’当小编。”

  王岭称，目前深圳市正在进行大规模核酸检测，无论是单方个人采集还是集体采集，报告结果出来的时间可能会较平时稍有延迟，“我们作为官方公号后台与市民有直接联系的渠道，如果遇到紧急情况，当然也要紧急处理，回复也好，协调也好，我们也只是按照国家要求做了应该做的。”

  【专访】

  应该做的!

  服务型政府就是服务民众

  对于深圳市卫健委的这一处理方式，网友们纷纷点赞。

  “深圳市政府是服务型政府，简单来说就是服务民众。当时我们没有想那么多，只想着尽快帮助市民解决问题就好。”1月9日，深圳市卫健委宣教处处长王岭接受采访时表示。

  王岭介绍，根据国务院副总理的讲话，深圳市召开了疫情防控新闻会，提出了统筹做好疫情防控和就医服务保障工作，督促各类医疗机构不能以任何借口推诿拒收患者，对透析患者、放化疗等肿瘤患者以及孕产妇、新生儿等急需就医的，建立24小时值班值守制度，确保就诊救治需求得到充分保障。

  在接受记者采访时，王岭回顾了此事的经过，“深圳卫健委”微信公众号有1400万粉丝，平时收到很多网友留言求助，8日上午，她看到这一单求助比较紧急，就马上回复网友：“电话发我。”拿到电话以后，她直接发给了医院方面，敦促落实处理。

  从市民发出求助，到事情顺利解决，前后花了不到两个小时。

  “深圳人比较务实，没有太多道理可以讲。对我来说，就是发了个电话给医院，督促医院落实。后面主要是医院在处理，行动力很强。”王岭告诉记者。

  王岭表示，后续深圳卫健委将会继续认真做好封控管控区域的生活保障工作，充分运用此前社区小区防控保障经验，组建专门服务保障团队，开通专门热线电话，认真做好粮食蔬菜、口罩等基本生活物资和防疫物资保障工作，对隔离人员中的“老幼病残孕”特殊人群，将建立“一对一”或“一对多”服务机制，加强心理疏导和人文关怀，特别是将统筹做好疫情防控和就医服务保障工作，督促各类医疗机构不能以任何借口推诿拒收患者，对透析患者、放化疗等肿瘤患者以及孕产妇、新生儿等急需就医的，建立24小时值班值守制度，确保就诊救治需求得到充分保障。

  【经过】

  1月8日上午10:57，“深圳卫健委”微信公众号后台收到市民求助，要到市民电话以后，转交深圳市龙华区中心医院进行处理。

  11:17，医院门诊部根据截图中市民Prnliy在10:57发到公众号留言中的电话号码，与市民Prnliy联系上，问询采样的过程，并请Prnliy提供姓名与身份证号码。

  11:20，市民Prnliy发来两个身份证号码，在医院未查询到结果。

  12:07，市民短信提示采样点是“在大门进来左边往中医科那条路”（指的是医院核酸采样点旁边的临时采样点）。医院发现，这是一个医院设置的临时采样点，并非医院为入院患者专门设置的采样点，采样后标本被送到第三方检测机构。入院患者的都是由医院自己实验室检测的。

  12:26，问询第三方检测机构回复：“结果已出，但因人手不足未经审核，马上审核。”

第6篇：核酸检测情况范文

关键词：诺如病毒；PCR；食源性疾病；检测技术

Abstract：Objective A laboratory investigation and analysis of school outbreaks of acute gastroenteritis caused by Norovirus was performed. Methods The method combined epidemiological investigation with laboratory testing was employed. A total of 40 samples includingswabs and feces of patients； food； condiments； smear samples of environment samples ； water samples were collected and utilized for RT-PCR detection and routine bacteriological testing. Results Norovirus nucleic acid were detected positive inswabs of six students， a health care teacher， three chefs and a feces sample， a food. Conclusion Norovirus inswab， feces and food can be detected quickly and effectively by RT-PCR.

Key words：Norovirus；PCR；Foodborne diseases；Detection technology

近年来，诺如病毒引起的急性胃肠炎暴发时有发生。诺如病毒可通过食物、水及人与人接触而使人感染发病，若在学校及幼儿园等集体单位发生，则易引起群体性胃肠炎暴发。诺如病毒感染性腹泻以起病急、传播快、暴发多为特征，因该病的症状及其多在冬季流行率上升，故被称为"胃肠道流感"或"冬季呕吐病"[1]。本文针对2015年3月成都市成华区某小学发生的一起诺如病毒引起的聚集性急性胃肠炎，将相关实验室病原检测情况及技术探讨报告如下：

1 资料与方法

1.1临床信息 学生聚集性病例的主要症状为呕吐、腹泻、腹痛、恶心，部分病例的血常规检测结果显示白细胞总数、中性粒细胞率增高。

1.2流行病学及卫生学调查 患者均为在校学生及教师，有在校共同进餐史，学校提供公用直饮水及生活用水。

1.3 样本采集及其来源 根据流行病学信息，准备的采样物资包括病毒采样管（北京友康）、自配灭菌1% NaCl肉汤、灭菌盐水和肠道致病菌直划平板（Mac、HE、TCBS）。采集病例肛拭8份、粪便样1份、学校厨师肛拭8份、供餐食品留样5份、调味品4份、环境涂抹样16份及水样2份（见表1）。

1.4实验室检测 对采集的样本进行病毒学检测和食物中毒常规致病菌检测。用RT-PCR法检测诺如病毒和轮状病毒核酸；采用RT-PCR和细菌培养法检测食物中毒常规致病菌：沙门氏菌、志贺氏菌、金黄色葡萄球菌、副溶血性弧菌、蜡样芽孢杆菌、致泻大肠埃希氏菌。

1.4.1 病毒检测样本处理 肛拭和粪便样本无需前处理；对于食品样本，采用无菌操作取适量（约5 g）样本至病毒采样管内（若有体积较大的食材，则用灭菌剪刀剪碎后放入），充分振摇后，静置待用。

1.4.2 细菌DNA 的提取及检测 取样本盐水管上清液1mL，12000rpm离心5min后弃上清。沉淀加入灭菌水50μL，将其悬浮后100℃煮沸5min，12000rpm离心2min，取上清用于PCR反应。本实验采用达安生物科技有限公司提供的沙门氏菌、志贺氏菌、金黄色葡萄球菌、副溶血性弧菌、蜡样芽孢杆菌、致泻大肠埃希氏菌核酸检测试剂盒，按说明书加入5μL核酸提取物，在ABi Step-one plus PCR扩增仪依程序进行40次循环扩增，并检测。

1.4.3病毒RNA 的提取及检测 选用天隆核酸提取试剂盒（磁珠法）（Ex-RNA/DNA 病毒2.0）提取病毒RNA。取各样本上清液200μL，按说明书加入10μL Proteinase K，4μL Acryl Carrier，放入天隆NP 968核酸提取仪依程序自动提取。RT-PCR采用达安生物科技有限公司的A、B、C 组轮状病毒核酸、诺如病毒核酸检测试剂盒，取核酸提取物5μL，加入PCR反应管，放入ABi Step-one plus PCR扩增仪依程序扩增40个循环，并检测。

1.4.4 细菌学培养法常规检测 按照WS 271-2007、GB 4789-2010方法进行沙门氏菌、志贺氏菌、金黄色葡萄球菌、副溶血性弧菌、蜡样芽孢杆菌、致泻大肠埃希氏菌、变形杆菌、椰毒假单胞菌等病原菌的检测。

2结果

2.1细菌PCR检测 扩增曲线均无明显指数增长期和平台期，表明样本中未检出目标菌核酸。

2.2病毒RT-PCR检测 RT-PCR结果表明，6名学生、1名保健教师、3名食堂厨师的肛拭样本和1个粪便样本、1个食品样本（炒榨菜）中检出诺如病毒；所有样本中均未检出轮状病毒（见表2）。

注：打"/"号为该样品未开展检测此项检测。

2.3细菌学培养 细菌学培养结果显示，样本均未检出目标菌。

2.4疫情控制 临床资料、流行病学调查资料和实验室检测结果显示，从食品加工者、食品及用餐者检测出诺如病毒，构成一条出清晰的传播链。因此，此次疫情判定为诺如病毒引起的聚集性疫情，可能系诺如病毒污染学校供餐食品所致。明确诊断和进行疫情分析后，疾控中心继续开展调查，指导并督促学校落实疫情控制措施，停止食用污染的食品，对相关区域进行了消毒，对带病毒厨师调离食品加工岗位，继续开展症状监测、病例搜索等防控措施。对住院病例进行有针对性治疗。截止疫情发生后第3d，住院病例相继痊愈出院，未发现新发病例，疫情得到有效控制。

3 讨论

3.1在17例病例的临床检验结果中，有5例血常规检测结果显示中性粒细胞率增高，淋巴细胞率降低，部分患者白细胞总数增高。一般情况，接诊医院会做出胃肠道细菌型感染诊断，但检测实验室不应轻易排除对病毒的采样、检测。

3.2此次事件共采集了40个样本，包括肛拭、粪便、食品、调味品、环境涂抹样、水样等不同的样本类型，样本容器包括病毒采样管、1% NaCl肉汤采样管、灭菌盐水采样管和Mac、HE、TCBS致病菌直划平板。科学、适度、合理的采集样本可提高病原微生物的检出率。

3.3诺如病毒的检测目前主要采用RT-PCR 技术，国内食品类检测研究仅限于牡蛎等贝类样本， 尚未见蔬菜、水果等其他食品的病毒检测方法报道。另外，食品样本一般体积大，病毒含量少，样本处理、病毒富集是实验室检测的关键点，也是难点。一般采用有机絮凝沉淀法进行富集[3]。但无论是PEG沉淀法，还是Trizol抽提法，过程都比较繁琐、用时长，加之多数基层疾控中心现阶段并未配备相关设备和耗材，因此无法进行病毒富集。在此次检测中，我们根据经验判断病毒含量可能比较大，所以采用均质后静置，取上清液直接进行检测，结果显示多个样本诺如病毒阳性。这表明在样本数量足够、污染病毒量大且成分单一的情况下，本方法对于突发公共卫生事件的快速检测有一定的可行性。

3.4 与常规培养方法相比，PCR技术用于病原微生物检测具有灵敏、快速、检出率高等优势。目前，该技术的应用越来越广泛。此次采用PCR法检出以诺如病毒为代表的肠道致泻病毒，为聚集性胃肠炎的病因诊断提供了有力证据。

3.5对于基层疾控中心来说，病原微生物的富集、检测等基础设备设施的匮乏给检测带来了一定的难度，特别是中西部地区的基层疾控中心应加强检测能力的建设。

参考文献：

[1] GUREMONT E，BRASSARD J，HOUDE A，et al.Development of an extraction and concentration procedure and comparison of RT-PCR primer systems for the detection of hepatitis A virus and norovirus GII in green onions[J].J Virol Meth， 2006， 134（1-2）：130-135 .

第7篇：核酸检测情况范文

1免疫学的方法

在食品微生物的检测当中免疫学技术主要是建立在抗原、抗体特异性结合的反应基础上,并且以免疫放大技术为辅,利用病原体刺激生成免疫球蛋白。这种方法的优势在于不需要进行样品选择性增菌之后分离,就可直接进行筛选,具备了灵敏度高的特点,按照检测方法的差异可以分为凝集反应、免疫扩散反应和免疫荧光反应等。

1.1凝集反应凝集反应从本质上来讲也是利用抗原、抗体相结合的原理,将特异性抗体包被于乳胶颗粒之上,进而产生了肉眼可见、便于观察的凝集反应。这种方法因其特异性需要获得较纯的细菌培养物,然后使培养物和致敏乳胶发生反应,通常应用于大肠杆菌类细菌中H7和O157的鉴定。

1.2免疫扩散反应免疫扩散反应的本质是生成一种不溶性的抗原、抗体复合物,是将抗体放入固体或者液体的培养基中进行培养,生成一种肉眼可见的沉淀性物质,这种反应需要在特定培养基中进行,在实际的食品微生物检测方法中,应用了这一技术的有VIP免疫扩散的试剂条还有Salmonella1-2的TestTM,这一类产品在实际当中应用也颇为广泛。

1.3免疫荧光反应免疫荧光学反应的本质是一种免疫学标记技术,利用荧光素对检测抗原或者抗体进行标记,而后产生的特异性抗原反应能够形成带有荧光的抗原、抗体结合物,在仪器中得到检验。这种方法在实际应用的过程中按情况不同可以分为直接方法和间接方法。直接方法就是直接在检测的样品上滴加已知特异性的荧光标记抗血清,在洗涤之后进行观察。间接方法就是将细菌特异性抗体上滴加在检测样本上,经过反应后再洗涤,然后加入荧光标记第二抗体,实现检测。这种方法因其荧光性更加有利于观察,也因其特异性主要适用于沙门氏菌、葡萄球菌、李斯特菌以及单核细胞增生的李斯特氏菌等方面的检测。

2分子生物学法

2.1聚合酶链式反应技术聚合酶链式反应技术是一种体外的选择性DNA或RNA扩增技术。其根本目的就是将人工无法培养出的微生物进行相应DNA或者RNA的片段扩增,通过检测扩增产物的含量来快速检测饲料当中存在的致病菌含量。聚合酶链式反应技术简称为PCR,可以直接对样品当中的肉毒梭菌、大肠杆菌、乳酸杆菌和痢疾杆菌进行检测,PCR能够克服核酸定量敏感性低的缺点,分析出极为微量的DNA,对任何模板的标本都能够实现定量扩增及分析。聚合酶链式反应技术克服了基因探针技术灵敏度不高的缺陷,其中引入的Taq聚合酶还能够简化反应程序,实现半自动化。以同位素标记基因探针的PCR反应为例,这种方法应用于水源E.Coli的检测,能够使检测量达到100%,能够快速检验出食品当中带有污染的病原,并能够保证其准确性。美国杜邦快利康公司已经建立了BAX+病原菌的检测系统,PCR技术在细菌检测方面的应用前景十分广阔。

2.2核酸探针技术核酸探针本身是一种带标记的DNA特异性片段,核酸探针技术的原理是利用碱基互补的原则,使核酸探针和目的DNA进行杂交,最终以特定方法进行标记物测定,核算探针技术大致可以分为非放射性标记和放射性标记两大类。核酸探针具有特异性。传统的检测方法都是以基因表达产物为检测目标,会受到多种因素的干扰,检测病毒要在组织培养之后对蛋白质的囊膜进行检测,还须采取超低温的保存技术,但仍然会因其一些编码蛋白的基因变化,核算探针则避免了这一复杂的程序,无需改变目的蛋白质的结构,更方便应用。但是要注意这其中要将RNA除外,因为RNA探针不耐受碱处理,需要采取不同的方法来制备出检测用的RNA。核酸探针特异性主要取决于使用条件和碱基序列,还会受到探针长度的影响,其敏感性主要受标记系统和探针本身的控制,延长培养的时间也能够提高探针灵敏度。在当前的核酸探针应用过程中还存在一些问题,要实现更快更简洁的制备还需要一段时间的研究和探讨,逐步克服因待检菌种繁多而产生的核酸探针制备问题,突破局限性。

3结语

第8篇：核酸检测情况范文

【关键词】乙肝；病毒感染；血清；乳汁；核酸检测；病毒检测

乙肝是我国常见的传染性疾病，母婴途径是其重要的传播方式。作为婴儿最为理想的食物，母乳是否具有传播乙肝病毒的作用目前还存在着一定的争议，有研究认为约有（30-50）%的乙肝病毒慢性携带者由母婴途径引起［1］。本研究通过对92例血清HBV-Ag阳性的孕产妇血清及乳汁病毒核酸进行检测和分析，现报告如下：

1资料与方法

1.1临床资料选取2007年1月-2011年11月期间我院收治的乙肝病毒携带产妇92例，年龄（28-43）岁，平均（29.17±3.82）岁；孕（37-41）周，平均（39.16±0.42）周。所有孕产妇均为单胎妊娠，且为第一次妊娠。胎儿体重（2100-4500）g，平均（3273.73±637.26）g。所有产妇均未见明显的临床症状，丙氨酸氨基转移酶（0-40）U/L。采用Child-pugh法对肝功能进行分级［2］，A级13例，B级39例，C级40例。剖宫产37例，自然分娩53例，阴道助产2例。

1.2方法采用ELISA检测法对产妇血清及乳汁中乙肝标志物进行测定，并采用荧光定量多聚酶链式反应法对血清以及乳汁中的HBV-DNA含量进行测定。于产妇分娩前采取清晨空腹外周血3ml，放置10min后以6000r/min进行离心10min。取50ul放入Eppendorf管，并加入50ulDNA提取液充分打匀，放入100℃干式恒温器10min，然后进行10min离心，转速为10000r/min。取5ul行PCR检测。产妇分娩3d后收集3ml初乳，以10000r/min进行离心10min，去除上层油脂后吸取100ul下层乳汁放入无菌微量离心管，加入100ul100g/L聚乙二醇液混匀，并在4℃下进行10000r/min离心15min，抛弃上清液。加入50ul灭菌双蒸水，将沉淀进行充分溶解，并加入DNA提取液，充分混匀。将上述标本放置于冰箱以4℃冷藏过夜，然后吸取750ul乳汁注入Eppendorf管进行ELISA检测和HBV-DNA定量检测。

1.3统计学处理采用SPSS13.0软件进行分析，计量资料采用t检验，计数资料采用χ2检验，且以P＜0.05为有统计学意义。

2结果

2.1ELISA检测结果92例患者中大三阳24例（26.09%），小三阳36例（39.13%），HBsAg以及HBcAb阳性32例（34.78%）。

2.2HBV-DNA检测各组患者乳汁HBV-DNA阳性率均低于血清检出率，但是差别并不明显（P＞0.05）。大三阳组患者血清、乳汁HBV-DNA检出率明显高于其他两组，且其病毒载量明显高于其他两组（P＜0.05）。且随着血清病毒载量的升高，乳汁病毒载量也相应升高，两者成正相关（r=0.853，P＜0.05），见表1。

3讨论

乙型肝炎是一种严重危害人类健康的全球性疾病，在我国乙肝病毒携带率高达（10-15）%，每年更是有超过百万的乙肝病毒携带者分娩，母婴传播是乙肝病毒进行传播的重要途径。母乳中不仅富含优质蛋白、乳糖、维生素以及饱和脂肪酸，而且可以有效提高婴儿抵抗力，促进其健康成长［3］。但是乙肝表面抗原阳性产妇是否可以进行母乳喂养一直以来都存在着较大的争议。

乙肝病毒核酸是病毒具有传染性的最为直接的标志，其拷贝数量直接衡量着传染性的强弱，也是衡量治疗效果的重要指标［4］。本研究中乳汁HBV-DNA的检出率略低于血清，但是差异并不明显。大三阳患者血清以及乳汁病毒核酸载量明显高于其他患者，且乳汁病毒核酸载量随着血清载量的升高而升高。这些都说明，乙肝病毒携带患者其体内HBV仍然处于较为活跃的复制期，在这种情况下，产妇进行母乳喂养应各位谨慎。条件允许时可以对血清以及乳汁中病毒核酸进行检测以确定喂养方式，如果条件不允许，则应放弃母乳喂养。

参考文献

［1］曾定元，莫可良，贺红英，等.联合免疫后乙肝病毒携带产妇母乳喂养安全性的探讨［J］.现代妇产科进展，2006，18（2）：125-127.

［2］刑荣春，郑军，肖建华.Child-Pugh分级的发展及临床应用［J］.山东医药，2011，55（52）：114-115.

第9篇：核酸检测情况范文

摘要在CIK细胞的培养过程中加入卡介菌多糖核酸，研究其对CIK细胞体外增殖及杀瘤活性等方面的影响.CCK8检测结果发现低浓度卡介菌多糖核酸处理的CIK细胞相比对照组（生理盐水），细胞增殖能力和杀瘤效果都显著上调.RTqPCR结果显示卡介菌多糖核酸处理后的CIK细胞毒活性相关因子（Granzyme B， IFNγ， TNFα和TNFβ）mRNA的表达相比对照组都有提高.这些结果可为培养具有更高效杀瘤活性又能大量扩增的CIK细胞提供新思路.

关键词卡介菌多糖核酸；CIK；细胞增值；杀瘤活性

中图分类号Q78文献标识码A文章编号10002537（2017）02003306

The Impact of BCGPSN on the Activity of CIK Cells

HUANG Zhaoqin1， SU Renxiang1， ZHONG Beifen1， HAN Huimin2， GU Zhixin2， YAN Donglan2， XIN Xiu2， YUAN Li2， HU Xiang1，2*

（1.Key Laboratory of Protein Chemistry and Developmental Biology of State Education Ministry of China，

College of Life Science， Hunan Normal University， Changsha 410081， China；

2.Jiuzhitang Limited Share Company Postdoctoral Workstation， Changsha 410205， China）

AbstractThe BCG polysaccharide and nucleic acid （BCGPSN） was added to CIK cells to study CIK cells responses on the proliferation and tumoricidal activity in vitro. CCK8 results showed that the CIK cells treated with low dose BCGPSN， compared with control group （normal saline）， were significantly enhanced on the proliferation and tumoricidal activity. RTqPCR results revealed that the expression of CIK Granzyme B， IFNγ， TNFα， TNFβ mRNA of BCGPSN group was higher than that of the control group. These results lay the foundation for how to cultivate a large number of CIK cells with high tumoricidal activity， and provide new ideas for the therapy of antitumor adoptive immunity.

Key wordsBCGPSN； CIK cell； cell proliferation；tumoricidal activity

盒灾琢鲅现匚：θ死嘟】担目前常规的手术和放化疗治疗方法均不能彻底清除体内的瘤细胞，过继免疫治疗法因具有符合生理、低毒和高效等优点成为重要的肿瘤辅助治疗手段[1].其中，细胞因子诱导的杀伤细胞（cytokineinduced killer cells， CIK细胞）是近年来发现的一种非常有前景的过继免疫细胞，具有增殖迅速、杀瘤活性广谱且高效、毒副作用微小等优点，已经成为肿瘤免疫治疗领域的一种新选择[24].CIK是以CD3+CD56+ T细胞为主的异质细胞群，兼有 NK 细胞和 T 细胞的特征.在功能上，CIK 一方面拥有 T 淋巴细胞强大的抗肿瘤活性，另一方面还拥有 NK 细胞非 MHC 限制性的杀伤肿瘤的特点，其增殖迅速、对正常造血影响轻微[5].CIK细胞的增殖和细胞毒活性依赖于多种外源性细胞因子的刺激，但何种因子组合为最佳尚无定论，因此研究如何进一步提高CIK的增殖和杀瘤活性已经成为抗肿瘤的过继免疫细胞生物治疗的一个热点[6].

卡介菌多糖核酸（BCG polysaecharide and nucleis acid，BCGPSN）是在卡介苗的基础上，通过热酚法提取卡介菌中的多糖、核酸，混合而制成的免疫活性物质，是我国首创的具有自主知识产权的新型免疫调节剂[78].BCGPSN 能诱导多种免疫细胞的活化，调节多种细胞因子的分泌，可作为一种较好的肿瘤辅助治疗手段[9].

由于卡介菌多糖核酸能提高机体免疫力并且辅助提高肿瘤治疗效果，同时CIK细胞亦是肿瘤过继免疫治疗的有效方法，且国内外还没有BCGPSN联合CIK进行研究的相关报道，因此本课题将两者结合起来研究.为研究卡介菌多糖核酸的生物活性及药理作用，在CIK细胞的培养过程中加入卡介菌多糖核酸，研究其对CIK细胞的体外增殖及对肝癌细胞的毒活性（杀瘤活性）方面的影响，并且探讨其对CIK细胞毒活性相关因子表达的影响.

1.材料与方法

1.1材料

淋巴细胞分离自健康志愿者外周血.SMMC7721肝癌细胞系于上海中科院购买，本实验室长期保存.斯奇康卡介菌多糖核酸注射液（1 mL/支）购自湖南九芝堂制药公司.人血液淋巴细胞分离液购自佳和生物.采血针、采血管、生理盐水购自长沙市第四人民医院.人源CD3单抗购自北京同立源生物科技有限公司，人白介素（IL2）买自江苏金丝利药业有限公司.DMEM培养液、RPMI1640和GTT551培养液，以及胎牛血清均为美国Gibco公司产品.青霉素链霉素溶液产自碧云天.

1.2方法

1.2.1CIK细胞分离及原代培养采集健康志愿者血液20 mL，平衡温度至室温.取50 mL离心管若干，将血样转移至离心管，用生理盐水稀释至30 mL，充分吹打均匀.将稀释后的血样缓缓加入另一管装有15 mL 淋巴细胞分离液的上方，形成上下两相.22 ℃，390 g离心30 min（加速1，刹车0）.离心后血浆层与分离液之间有白膜层可见，分别收集上层血浆和中间白膜层至新的离心管.于收集白膜层的离心管中加入RPMI1640至45 mL，混匀，22 ℃，1 000 g离心10 min（加速9，刹车9）.重复上一步骤两次，离心速度分别改为400 g和201 g，最后一次离心之前取20 μL混匀的细胞悬液进行台盼蓝染色计数，参照《细胞计数SOP》.离心后重悬细胞，按细胞数5×106个/mL加含有500 μg/L CD3 mAB， 1 000 U/mL IL2和10%FBS的GTT551培养基诱导培养成CIK细胞.

1.2.2肿瘤细胞培养在37 ℃，5%CO2及90%相对湿度的细胞培养箱中用DMEM完全培养液（含10%胎牛血清和100 mg/L青链霉素溶液）培养SMMC7721细胞.

1.2.3CCK8 检测细胞增殖活力将培养7 d的CIK细胞数调整至2×106 个/mL，于96 孔平底细胞培养板每孔加入细胞悬液50 μL，设实验组和对照组，对照组为生理盐水组，实验组分为5组，分别加入卡介菌多糖核酸终浓度为1，10，50，100，200 mL/L的培养基各50 μL，每个浓度4个平行对照孔，置于细胞培养箱中处理细胞72 h，加入10 μL CCK8溶液，4 h 后用酶联免疫检测仪检测OD450值A（吸光度的大小与活细胞的数量呈正比）.并对数据进行统计学分析.以BCGPSN 浓度为横坐标，以吸光度为纵坐标，作细胞增殖曲线.

1.2.4肿瘤杀伤实验将培养9 d的CIK细胞均分为两组，分别为对照组和实验组，对照组为生理盐水组，实验组为培养基终浓度为10 mL/L的卡介菌多糖核酸，置于细胞培养箱中处理细胞72 h（至12 d）.另外，在CIK细胞培养11 d时，将培养至对数生长期的SMMC7721细胞调整细胞密度为1×105 个/mL，于96孔板中铺板每孔100 μL细胞悬液，培养箱中培养24 h.CIK培养至第12天进行CIK杀伤肿瘤细胞实验，弃去SMMC7721旧的培养液，分别按n（效应细胞）/n（靶细胞）为5∶1，10∶1和20∶1调整两组CIK细胞至相应数目加入SMMC7721细胞孔中，每个比例3个复孔，同时设单独靶细胞和单独效应细胞对照组，于细胞培养箱中培养4 h. 4 h后每孔加入10 μL CCK8溶液，细胞培养箱中孵育4 h，酶标仪测定OD450值A.计算杀伤率：杀伤率（%）=[1-（实验组A值-单独效应细胞组A值）/单独靶细胞组A值]×100%.

1.2.5细胞总RNA的提取及cDNA的合成

（1）卡介菌多糖核酸处理CIK细胞：调整培养至第9天的CIK细胞数目至2×106 个/mL，于6 孔平底细胞培养板每孔加入细胞悬液1 mL，设实验组和对照组，实验组加入卡介菌多糖核酸终浓度为10 mL/L的培养基1 mL，对照组加入生理盐水，置于细胞培养箱中培养72 h.

（2）RNA提取及反D录：按TRIZOL法提取CIK细胞总RNA，按照Takara反转录试剂盒说明书操作，将RNA反转录成cDNA.

1.2.6实时定量PCR

（1）引物的设计与合成：根据GenBank中基因的序列，查找文献并用Primer Primer 5 软件设计CIK相关毒活性因子Granzyme B，TNFα，TNFβ，IFNγ，Actin（内参）基因引物（见表1）.将设计好的目的引物序列发给上海生工公司合成.

（2）引物验证：引物合成后，加入灭菌水溶解至10 μmol/L.先做一个普通PCR检测引物是否能克隆出目的片段，PCR反应体系如表2，按照体积从大到小加溶液至总体积为20 μL.

PCR体系加完后用枪轻轻混匀，放入PCR仪扩增片段.扩增条件为：94 ℃预变性5 min，94 ℃变性30 s，60 ℃复性30 s，72 ℃延伸30 s，重复29个循环，最后72 ℃延伸5 min.用2%琼脂糖凝胶电泳鉴定PCR反应完成后产物.

（3）荧光定量PCR：反应体系见表3，共30 μL，具体操作按照Takara SYBR RTqPCR产品说明书进行.

1.2.7统计分析数据以均数±标准差表示，采用SPSS 19.0统计软件及Graphpad软件进行方差及显著性分析，检验水准（P）设为0.05.

2结果与分析

2.1CIK细胞形态观察

CIK细胞即细胞因子诱导的杀伤细胞，它是从人血液分离出来的单核淋巴细胞经IL2和CD3单抗等细胞因子诱导培养产生的以CD3+CD56+ T细胞为主的异质细胞群.CIK是一种悬浮细胞，相比癌细胞其体积较小.经过适应期的CIK细胞随着培养时间延长，细胞数量对数生长且会形成细胞球，细胞体积在7～12 d时有所增大，之后几乎不变.图1是显微镜下不同时期的CIK细胞形态，A～D分别对应从人血中分离后培养至1，4，7，11 d的CIK细胞.

2.2卡介菌多糖核酸对CIK细胞增殖的影响

在CIK细胞培养至第7天时，加入不同浓度的卡介菌多糖核酸处理细胞72 h，然后用CCK8试剂盒检测CIK细胞活性.分析数据结果，以不同BCGPSN浓度为横坐标，吸光度为纵坐标作量效曲线图，结果如图2所示.由图可知，随着BCGPSN浓度的增加，吸光度呈现先升后降的趋势，在BCGPSN浓度增加到10 mL/L时，CIK活细胞数目最多，吸光度最大且明显高于未加药组，统计分析差异有意义（*p

2.3卡介菌多糖核酸对CIK细胞杀伤活性的影响

为了验证卡介菌多糖核酸对CIK细胞杀瘤活性有影响，笔者将培养至第9天的CIK细胞加入卡介菌多糖核酸处理72 h（至12 d），再进行CIK杀伤SMMC7721肿瘤细胞实验.杀伤率统计结果如图3.结果显示，无论是实验组还是对照组，随着效靶比增大CIK细胞杀伤肿瘤效果增强；相比对照组，实验组CIK细胞在效靶比为5∶1和10∶1时杀伤率有显著提高（*p

2.4BCGPSN对CIK细胞毒活性相关因子RNA表达的影响

收集生理盐水和10 mL/L的卡介菌多糖核酸处理72 h的两组CIK细胞，提取RNA反转录成cDNA，做荧光定量PCR检测CIK细胞毒活性相关因子的表达.琼脂糖凝胶电泳检测CIK细胞RNA质量，可看到28S和18S两条清晰的带，如图4.RTqPCR结果显示BCGPSN实验组CIK细胞Granzyme B（颗粒酶B），TNFα，TNFβ的mRNA表达量较对照组明显升高（*p

Mark：DNA standard marker；1：对照组CIK细胞RNA；2：BCGPSN实验组CIK细胞RNA.

3讨论

卡介菌多糖核酸是从卡介菌中提取的核酸、多糖等活性物质混合而成的免疫增强剂，具有调节机体免疫水平、增强机体抗感染和抗过敏的能力[10]，还可促进T 淋巴细胞的增殖与活化及辅助提高机体内NK杀伤活力[11].於敏等[12]研究表明卡介菌多糖核酸能显著提高断奶仔猪外周血淋巴细胞分化增殖，推测其可通过直接作用于外周血淋巴细胞从而增强个体免疫力.本研究结果表明低浓度卡介菌多糖核酸可显著促进体外培养的CIK细胞增殖分化，而在机体免疫应答过程中，T淋巴细胞和B淋巴细胞的激活、分化、增殖起着重要的作用，因此，卡介菌多糖核酸或可通过直接作用于人周血淋巴细胞从而增强机体免疫力.

卡介菌多糖核酸影响CIK细胞的体外增殖及CIK杀伤肝癌细胞的特点尚无报道.SMMC7721肝癌细胞为本实验室常用细胞系，材料易得且细胞个体大、生长较快易于实验，因此在此文中笔者选择其作为CIK的靶细胞进行杀伤实验.研究发现经BCGPSN处理后的CIK细胞相比对照组杀瘤效果有明显增加，在效靶比为5∶1和10∶1时杀伤率有显著提高，在靶效比为20∶1时杀伤率也比对照组稍高，表明卡介菌多糖核酸能提高CIK的杀伤能力.

CIK杀伤肿瘤细胞的具体机制还并不清楚，根据之前相关的文献报道，笔者猜测可能与相关毒活性因子的表达相关，于是做荧光定量PCR检测了实验组和对照组处理后的CIK细胞Granzyme B，TNFα，TNFβ和IFNγ的表达，结果发现这几类因子的RNA表达水平的确有所提高.Granzyme B，TNFα，TNFβ和IFNγ这几种因子在CIK细胞杀瘤过程中发挥着重要作用，本研究也证实了其RNA表达升高促进了CIK杀瘤效果.为了进一步验证它们在蛋白水平的表达，后续将购买TNFα和IFNγ的ELISA试剂盒以检测其在CIK细胞的胞外分泌情况.

颗粒酶B（Granzyme B）是细胞毒性T淋巴细胞（CTL）和自然杀伤（NK）细胞颗粒中丝氨酸蛋白酶家族中发挥杀伤作用的主要效应分子，它能进入靶细胞，激活caspase级联反应，迅速引起靶细胞DNA的断裂，使细胞快速凋亡[13].因此，它是杀伤细胞的标志性分子之一.

肿瘤坏死因子 （Tumor Necrosis Factor， TNF ）是一类重要的细胞因子，包括TNFα和TNFβ两类，TNFα由巨噬细胞和淋巴细胞分泌产生，而TNFβ则由活化的T细胞分泌[14].TNF具有广泛的生物学活性，对肿瘤细胞有强烈的杀伤作用，还能刺激T细胞、B细胞、单核巨噬细胞、中性粒细胞及嗜酸性粒细胞使其功能增强.本研究结果显示，相比生理盐水对照组，卡介菌多糖核酸能显著提高TNFα及TNFβ的mRNA表达量.

γ干扰素（Interferonγ，IFNγ）是I型o助T细胞（Th1细胞）的标志性细胞因子，能抑制肿瘤细胞分裂，增强巨噬细胞及 NK 细胞的杀伤性.另外γ干扰素还可增加巨噬细胞对抗原的吞噬，调动机体免疫系统，提高NK细胞对靶细胞的杀伤以及T淋巴细胞和B淋巴细胞的激活，增强机体抗肿瘤免疫应答能力[15].

CIK是目前应用最广泛的肿瘤过继免疫治疗细胞，因其治疗效果与细胞输注剂量、效应细胞比例和对肿瘤细胞毒性有着密切关系，因此提高其体外的增殖效率和毒性是首要解决的问题.本研究证实低浓度下的卡介菌多糖核酸能促进CIK细胞增殖，又能提高CIK的杀瘤效果，说明卡介菌多糖核酸可以作为一种较好的肿瘤辅助治疗药物.另外CIK细胞杀瘤效率提高的同时相关毒活性因子的表达也增加，揭示其可能是杀伤肿瘤细胞的途径之一，这也为进一步研究CIK杀伤肿瘤细胞机制奠定基础，为抗肿瘤过继免疫治疗提供一些新思路.

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