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微生物技术国家重点实验室依托山东大学,实验室是作为世界银行贷款重点学科发展项目的一个子项目,由世界银行贷款120万美元,国内配套362万元人民币投资建设的。
1995年11月通过国家验收,并开始正式运行和对外开放。生物反应器工程国家重点实验室俞俊棠教授任学术委员会主任,山东大学生命科学学院院长曲音波教授任实验室主任。实验室现有工作人员28人,其中教授9人,副教授12人,讲师4人,工程技术人员3人。
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一、常规安全操作制度
1、禁止非工作人员进入实验室。参观实验室等特殊情况须经实验室负责人批准后方可进入。
2、进入实验室前应穿着专用的实验服,严禁穿便服进入实验室,尽量减少出入实验室的次数。
3、接触微生物或含有微生物的物品后,脱掉手套后和离开实验室前要洗手。
4、严禁在工作区进行饮食、吸烟、处理隐形眼镜、化妆及储存食物等一切与实验无关的行为。
5、用移液器吸取液体,禁止口吸。
6、按照实验室安全规程操作,降低溅出和尽可能少的产生气溶胶。
7、每天至少消毒一次工作台面,活性物质溅出后要随时消毒。
8、培养基、组织、体液及其他具有潜在危险性的废弃物须放在防漏的容器中储存、运输及消毒灭菌。所有培养物、废弃物在运出实验室之前必须进行灭活,如高压灭活。
9、制定有效的防鼠防虫措施。
二、特殊安全操作制度
l、进行感染性实验时,禁止他人进入实验室,或必须经实验室负责人同意后方可进入。免疫耐受或正在使用免疫抑制剂的工作人员必须经实验室负责人同意后方可在实验室内工作。
2、可能产生致病微生物气溶胶或出现溅出的操作均应在生物安全柜或其他物理抑制设备中进行,并使用个体防护设备。
3、处理高浓度或大容量感染性材料均必须在生物安全柜或其他物理抑制设备中进行,并使用个体防护设备。
4、当微生物的操作不可能在生物安全柜内进行而必须采取外部操作时,为防止感染性材料溅出或雾化危害,必须使用面部保护装置(护目镜、面罩、个体呼吸保护用品或其他防溅出保护设备)。
5、在实验室中应穿着工作服或罩衫等防护服。离开实验室时,防护服必须脱下并留在实验室内。不得穿着外出,更不能携带回家。用过的工作服应先在实验室中消毒,然后统一洗涤或丢弃。
6、当手可能接触感染材料、污染的表面或设备时应戴手套。如可能发生感染性材料的溢出或溅出,宜戴两副手套。不得戴着手套离开实验室。工作完全结束后方可除去手套。一次性手套不得清洗和再次使用。
7、实验室入口处必须贴上生物危险标志,注明危险因子、生物安全级别、需要的免疫、负责人姓名和电话、进入实验室的特殊要求及离开实验室的程序。
8、工作人员应接受必要的免疫接种和检测(如乙型肝炎疫苗、卡介苗等)。
9、必要时收集从事危险性工作人员等基本血清留底,并根据需要定期收集血清样本,应有检测报告,如有问题及时处理。
10、将生物安全程序纳入标准操作规范或生物安全手册,由实验室负责人专门保管,工作人员在进入实验室之前要阅读规范并按照规范要求操作。
11、工作人员要接受有关潜在危险知识的培训,掌握预防暴露以及暴露后的处理程序。每年要接受一次微生物实验室组织的最新培训。
12、严格遵守下列规定,防止利器损伤:
①除特殊情况(肠道外注射和静脉切开等)外,禁止在实验室使用针、注射器及其他利器。尽可能使用塑料器材代替玻璃器材。
②尽可能应用一次性注射器,用过的针头禁止折弯、剪断、折断、重新盖帽、从注射器取下,禁止用手直接操作。用过的针头必须直接放入防穿透的容器中。非一次性利器必须放入厚壁容器中并运送到特定区域消毒,做好高压消毒。
③尽可能使用无针注射器和其他安全装置;
④禁止用手处理破碎的玻璃器具。装有污染针、利器及破碎玻璃容器在丢弃之前必须消毒。
13、实验室设备在运出修理或维护前必须进行消毒。
关键词:菌种复苏;传代;保存
微生物实验是我国建筑医药研发及生产的重要环节,是确保我国医药研发行业发展的关键基础。根据药典中的标准,微生物实验室对于新引进的培养基需要通过灵敏度测试后才能投入使用;另外,在对无菌实验成果进行检查时需要使用金黄色葡萄球菌作为对比参照,而在对日常灌装环境质量检测时需要使用环境菌进行辅助检验。由此可见,菌种为微生物实验中非常关键的因素,所以必须要建立起一个科学、健全的微生物实验室菌种的复苏、传代及保存体系。
1 用具与设备
接种环,接种针,酒精灯,电热恒温培养箱,生化培养箱,冰箱,灭菌柜,超净台,液氮罐,超低温冰箱,1.5mL冻存管,试管等。
2 菌种的复活
应在环境洁净度D级下的局部洁净度不低于B级的单向流空气区域内或隔离系统中进行,其全过程必须严格遵守无菌操作,防止微生物污染,制备F1,(接收到合适菌种准备使用时,应根据菌种/细胞株的说明书制备复活的培养基对标准菌株、细胞株进行复活。清洁安瓶(可用75%乙醇)后,用砂轮在安瓶的上部1/3处划线,用干燥的无菌纱布包裹安瓶,将安瓶打开。用一无菌吸管吸取0.5-0.8mL适量的液体培养基(生抱梭菌用液体硫乙醇酸盐培养基;大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、短小芽胞杆菌、铜绿假单胞菌和枯草芽抱杆菌用胰酪大豆胨液体培养基;白色念珠菌、黑曲霉用沙氏葡萄糖液体培养基)滴加到安瓶中,轻轻旋转安瓶并吹打,使冻干菌种和液体培养基充分混合并完全溶解,再将安瓶内的菌液转移至相应的培养基中,根据菌种类型将其放入适宜的培养条件[需氧菌培养温度(30-35)℃,18-24h;真菌培养温度(20-25)℃,3-5d下培养,观察培养基是否浑浊,浑浊说明菌种复活生长,此为F1,如不浑浊,需氧菌应延长培养时间至5天以上,真菌应延长培养时间至7d以上,仍不浑浊,按121℃,30min条件火菌处理,再对复活后的标准储备菌株进行纯度和特性的确认。
3 菌种的传代
菌种是微生物实验中的重要辅助工具,所以其质量非常重要,每一个菌种在使用前都需要进过严格的测评才能投入实验中。微生物实验是一项对严谨性和精确性要求非常高的工作,所以对于试验中要用到的每一类菌种的复苏、传代和保存都有一套非常严格的标准及原则,已经透过严格检定、确定与相关条件相吻合的菌种才能执行传代步骤。另外,传代工作流程在实际操作时也有非常严格的要求,传代次数不宜过多,且要减少不必要的传代工作,同时还要对传代时的温度进行合理调控。
4 菌种的保藏
在菌种的复苏及传代工作完成后,实验室中的菌种管理工作体系已经进入最后一个环节,这一环节同样是保证菌种质量及功效的重要步骤。而在实验室的当中对菌种进行保藏的方法有很多,下面笔者就对几种实验室中常见的菌种保藏方法进行简要阐述。
4.1 甘油冷冻管保藏法
甘油冷冻管保藏发是在实验室中一种非常常用的保藏手段,该方法的具体操作方法是使用无菌接种环对菌种表面的菌苔进行刮取,然后利用接种环接触试管的方式使细菌通过与试管壁的轻度摩擦向事先准备好的放置于试管内部的无菌蒸馏水中传输,或直接将菌放置于培养基当中,同时还要对菌液的浓度进行调节,然后在调配完成后的菌悬液中添加体积相等、浓度标准是30%的无菌甘油,从而得出15%的甘油菌悬液。在操作过程中要保证所使用的甘油浓度保持在一个较低的程度,如果甘油浓度高于实验标准将会造成细菌细胞渗透压力产生变化,最终导致细菌发生死亡的问题。在细菌传导完成后需要对试管进行振动和摇荡,在摇时要注意对力度的控制,让试管内的各种物质达到充分融合,再将融合后的溶液分别放置于无菌小试管中,最后将制作完成的甘油冷冻管放入-20℃的低温环境中进行预冻处理,并将其放在低于-80℃的超低温环境中存放,且要保证冰箱的温度至少为-30℃,其在这种冷冻环境下通常能够保留的时长为2a,而乙型溶血性链球菌对保存温度的要求较高,在超低温环境下该菌种的可保存时长为3个月。
4.3 斜面低温保藏法
斜面低温保藏法是一种过渡性较强的保藏方法,其保藏时间较短,该方法是通过将菌种转移至条件合适的试管培养基上,或将其转接在茄子瓶的固体培养基斜面上进行培养,在菌种成长到一定程度之后再将其放入2-8℃的温度环境中进行保存。而微生物菌种的类型不同,其保存时间长短也会有所差别。然而,这种保藏方法有一个非常突出的劣势特点,就是采用这种方式进行保存的菌种极易发生状态改变,如果菌种发生变异会对其后期传代效果造成影响,使菌种受到污染。所以,这种方法只能在需要保藏时间较短的菌种类型的保藏工作中使用,并且还要对菌种的保藏状态进行随时检查。
4.4 液氮超低温保藏法
4.4.1 制备菌悬液
将需要保藏的菌种接种在适宜的固体斜面培养基上,适宜温度培养,当菌落健壮地长满斜面时取出。配制30%的甘油溶液进行121℃下高压火菌30min,将生长良好的菌种斜面用生理盐水制成菌悬液,菌浓度控制在107左右,然后加入等体积甘油水溶液混匀后制成15%的甘油菌悬液。
4.4.2 分装菌悬液
把购买的1.5ml的塑料冻存管拧松管帽置一烧杯中,外扎纱布、牛皮纸包扎好进行121℃高压火菌30min。然后将制备好的菌悬液分装至1.5mL的塑料冻存管中,每支冻存管加入1mL菌悬液,拧紧管帽,并用胶布封口,分别在胶布和冻存管上做好菌种标记。
4.4.3 液氮保藏
将菌液保持在0摄氏度的状态,然后将有关设备放置到零下70摄氏度左右的冰柜立面,然后进行降温。接着将相应的冻存管放入到液氮罐妥善的保存,并且在罐的外面做好详细的标记工作,为以后使用菌种带来方便。当液氮中所存在的菌种需要复苏时,这时操作人员就应当将菌种提出来,放置到大约35-40摄氏度的环境里面进行充分的搅拌,从而达到解冻的目的。为了避免菌种出现污染的情况,操作人员需要用75%的酒精进行擦拭,当表面完全干燥以后就可以使用相应的容器将菌液按种到相应的培养基上做好培养工作。
结束语
综上所述,对微生物实验室中的菌种进行保存的方法有很多种,这些方法的正确使用对菌种的保存质量的提高具有积极作用。然而,若方法使用不合理使菌种的保存质量严重降低,不但无法达到有效提高菌种保存效果的目的,还会造成适得其反的结果,因此一定要建立起科学规范的菌种复苏、传代和保存体系,这样才能有效提高菌种保藏的科学性和规范性,以促进微生物实验室检验效率的提高,增强实验结果的精确性,为微生物实验工作的完善奠定基础,从而推动该行业在我国快速发展。
参考文献
【关键词】生物安全;微生物学与免疫学实验室
生物安全( biosafety) 指的是避免危险生物因子造成实验室人员暴露、向实验室外扩散并导致危害的综合措施[1]。而实验室生物安全(laboratory biosafety)是我国卫生行政管理的重要内容,随着科技进步及生物技术的发展,目前实验室生物安全问题已经成为科研单位、医院、高校等重要场所管理及工作学习人员最为关心的内容之一。
早在1983年,世界卫生组织就出版了《实验室生物安全手册》来增强人们对实验室生物安全问题的重视。但是,2003 年9 月到2004 年初在新加坡、台湾以及北京连续发生的实验室人员感染SARS 冠状病毒的事件,2005 年的H2N2流感病毒样本风波, 2010 年11 月至2011 年3 月东北某农业大学发生严重的布鲁氏菌实验室感染事件[2],这些生物安全事件的发生又一次次给人们敲响了警钟。我校微生物学与免疫学实验室是具有对周围环境和教师及学生造成潜在生物危害的主要场所。本文将从以下几个方面来分析一下我校的生物安全工作。
1 实验室功能介绍
我校微生物与免疫学实验室(以下简称微免实验室)主要由以下几个独立实验室组成:病原生物与免疫学实验室、医学微生物学检验实验室、医学免疫学检验实验室、寄生虫学检验实验室。分别承担了《病原生物与免疫学》、《微生物学检验技术》、《免疫学检验技术》、《寄生虫学检验技术》等课程的实训教学任务。教学对象主要是五年制高职护理、助产、涉外、药学、医学检验等专业学生。
2 学生实验现状分析
2.1 专业层次不一
病原生物与免疫学实验的学生为高职护理等专业二年级的学生。她们的医学知识相对薄弱、对病原生物的认识也刚刚开始。而对于微生物学检验实验室和免疫学实验室来说,授课对象主要是高职医学检验专业学生,不同年级的学生会有交叉,既有刚刚接触微生物学检验基础和免疫学检验基础的低年级学生,也有即将面临毕业的高年级学生,他们无论在知识储备、操作技能还是安全防护意识上都有一定差距。
2.2 生物安全意识弱
初次进入微免实训室的学生,都是低年级学生,她们年龄偏小,存在着强烈的好奇心。尤其面对一些形形的病原标本兴趣浓厚。在实训过程中表现出来的问题有:声音过于嘈杂、未经允许触摸标本、实验过的标本随意丢弃、带与实验无关的东西进实验室、防护服穿着不当等等问题。而且按照教学进度,学生是先学习免疫学再学习微生物学知识,也就导致第一次实训课时,她们并不能充分认识到自己所处的实验室环境会对她们有什么样的潜在危害,也没有很好的生物安全保护意识。检验专业的同学虽然有一定的专业基础,但在做一些脓汁标本、大小便标本检验时依然存在麻痹大意的思想,容易造成环境的生物污染。同时,实验室也保存有大量的病原微生物标本,如:伤寒沙门菌、变形杆菌、克雷伯菌、炭疽杆菌等具有强致病性的微生物菌种,他们在操作技能上不熟练也有导致菌种泄露造成生物污染的风险。
2.3 实训内容安排不合理
对于护理专业,《病原生物与免疫学》课程的学习中,往往是先学习免疫学,再学习微生物学。所以,学生没有学习到微生物学的知识就进行入微免实训室免疫室进行实训,这也造成了她们只是在老师的要求下去遵守实验室规章制度,并不能很好的理解微生物会对她们和环境造成什么影响。而且由于实训场地限制,有些实验采取分组进行,同学之间有着较强的互动意识,这也在一定程度上增加了生物安全危险因素的传播风险。
目前我校微免实验室主要承担教学工作,由于学生数量庞大,且层次不一,尽管有相关制度的约束,但是生物安全工作仍然是每次实训课上教师要反复强调的问题。有研究表明,从事卫生检验工作人员发生职业病危害的概率比普通人群高5-7倍[3],所以在传授技能的同时提高她们的自身防护意识就显得非常重要。
3 实验室生物安全工作方向
3.1 制度建设
制度建设是实验室生物安全管理工作的最基本的环节,对开展工作具有指导意义和约束力[4]。微生物学与免疫学实验室不同于其他实验室,里面存放着很多具有致病性质的病原生物,为了避免生物安全事故的发生,保证实验老师和学生的生命安全,我校制定了一系列实验室生物安全规章制度。如《生物安全管理制度》、《生物安全保卫制度和措施》、《工作人员执行生物安全相关规定》、《生物安全工作内部自查制度》、《生物安全管理人员及实验室人员培训制度》、《实验室人员准入规定》及《发现存在生物安全问题时的反馈和纠正措施程序》等。根据学校相关制度,微免实验室也制定了微免实验室管理制度、实验室生物安全手册、仪器室管理制度、准备室管理制度、大型仪器操作规范等来规范实验室工作人员、任课教师和学生的行为,避免实验室生物感染情况的发生。
3.2 提高生物安全意识
要加强实验室管理人员及实验室人员对生物安全的认识,举办生物安全管理为内容的学习班,通过学习提高相关人员特别是微免实验室工作人员的生物安全意识,转变观念,为做好生物安全工作起积极推动作用。对于学生,如护理、助产、检验等专业毕业生将来从事临床一线工作,她们负责标本的直接采集和检验,如果不注意生物安全,其被感染的可能性很大。所以在平时的实训课中,更应该加强对她们生物安全意识的培养,帮助她们养成良好的工作习惯。包括学习学校制定的各种生物安全制度、认真研读实验室生物安全手册,进行生物安全专题培训等。
3.3 加强学生技能训练
在实训过程中,对学生严格要求,勤学苦练增强专业技能。如对于护理、助产专业,要加强消毒灭菌操作练习,这些工作是确保医疗安全的基础[5]。对于检验专业来说,每天面对各种各样的临床标本,各类标本中都有很多未知的病原生物,这就要求他们更应加强对生物安全的重视程度[6]。学生在实训操作前应穿好工作服,必要时还应该带好口罩和手套等防护用品,认真听老师讲解的操作要领和注意事项后,方可进行实训。对于涉及病原性细菌的接种、分离、培养等操作时,要严格要求无菌操作,操作过程要规范、切忌毛手毛脚,避免危险性病原生物对自己及周围环境造成污染。在进行免疫学检验实验时,由于涉及大量的具有传染性的血清标本,如梅毒阳性血清、乙肝阳性血清等,操作时一定要做好防护,避免其经过皮肤伤口感染。
3.4 科学合理安排实训内容
对于实训内容的安排应该遵循由易到难、由简单到复杂的原则。对于一些病原生物与免疫学的实验内容最好先安排微生物学内容,因为实验室存储的各种病原生物是最主要的生物安全危险因素。对微生物的了解可以帮助她们树立无菌观念、为今后的实训内容打下安全基础。
3.5 杜绝各类生物安全隐患
任何实训课上,老师都要对学生的操作情况认真指导。杜绝学生在观察细菌培养物、病原性细菌鉴定、临床标本鉴定等实训课上发生菌液等危险因子的外漏。如果遇到此类情况,老师一定要在第一时间做好消毒灭菌措施,必要时,汇报实验室管理人员妥善处理。
综上,生物安全建设依然是一项长期而又艰巨的工作,作为一所医学类院校,良好的医学素养是我校对学生的培养目标之一,而生物安全素养作为医学素养的一部分直接关系到学生今后在工作中的自身安全。虽然工作之后也有诸多培训,但在学生阶段对她们行为习惯的养成却是非常关键的时期。生物安全牵涉到我校师生的生命财产、关系着我校各项教学、科研工作的顺利发展,我校将继续改进生物安全相关制度、规范实验室使用规范、改善教学内容、对老师和学生严格要求,在学校领导和全体师生的共同努力下做好生物安全工作,杜绝任何生物安全事故的发生。
【参考文献】
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为进一步规范高致病性动物病原微生物实验活动审批行为,加强动物病原微生物实验室生物安全管理,现就有关事项通知如下。
一、严格掌握高致病动物病原微生物实验活动审批条件
高致病性动物病原微生物实验活动,事关重大动物疫病防控,事关实验室工作人员及广大人民群众身体健康和生命安全。省级以上兽医主管部门要高度重视高致病性动物病原微生物实验活动管理,认真贯彻实施《病原微生物实验室生物安全管理条例》,按照《高致病性动物病原微生物实验室生物安全管理审批办法》规定的条件,严格高致病性动物病原微生物实验活动审批。
(一)高致病性动物病原微生物实验活动所需实验室生物安全级别。按照《病原微生物实验室生物安全管理条例》和《高致病性动物病原微生物实验室生物安全管理审批办法》规定,一级、二级实验室不得从事高致病性动物病原微生物实验活动;三级、四级实验室需要从事某种高致病性动物病原微生物或者疑似高致病性动物病原微生物实验活动的,应当经农业部或者省、自治区、直辖市人民政府兽医行政管理部门批准。经省级以上兽医主管部门批准的高致病性动物病原微生物实验活动,必须按照《动物病原微生物实验活动生物安全要求细则》(附后)的要求,在相应生物安全级别的实验室内开展有关实验活动。
(二)高致病性动物病原微生物实验活动审批条件。三级、四级实验室从事高致病性动物病原微生物或者疑似高致病性动物病原微生物实验活动的,应当具备下列条件:一是必须取得农业部颁发的《高致病性动物病原微生物实验室资格证书》,并在有效期内;二是实验活动仅限于与动物病原微生物菌(毒)种或者样本有关的研究、检测、诊断和菌(毒)种保藏等;三是科研项目立项前必须经农业部批准。
二、严格规范高致病性动物病原微生物实验活动审批程序
省级以上兽医主管部门应当按照《高致病性动物病原微生物实验室生物安全管理审批办法》和农业部第898号公告规定的审批主体、审批程序,做好高致病性动物病原微生物实验活动审批工作。
(一)审批主体。从事下列高致病性动物病原微生物实验活动的,应当报农业部审批:一是猪水泡病病毒、非洲猪瘟病毒、非洲马瘟病毒、牛海绵状脑病病原和痒病病原等我国尚未发现的动物病原微生物;二是牛瘟病毒、牛传染性胸膜肺炎丝状支原体等我国已经宣布消灭的动物病原微生物;三是高致病性禽流感病毒、口蹄疫病毒、小反刍兽疫病毒等烈性动物传染病病毒。从事其他高致病性动物病原微生物实验活动的,由省、自治区、直辖市人民政府兽医主管部门审批。
(二)审批程序。实验室申请从事高致病性动物病原微生物实验活动的,应当向所在地省、自治区、直辖市人民政府兽医主管部门提出申请,并提交下列材料:一是高致病性动物病原微生物实验活动申请表一式两份;二是高致病性动物病原微生物实验室资格证书复印件;三是从事与高致病性动物病原微生物有关的科研项目,还应当提供科研项目立项证明材料。省级以上兽医主管部门按照职责分工,应当在收到申请材料之日起15日内做出是否审批的决定。
三、切实加强高致病性动物病原微生物实验活动监督管理
高致病性动物病原微生物实验活动管理是实验室生物安全监管的重点内容。各级兽医主管部门一定要认真贯彻实施《病原微生物实验室生物安全管理条例》的各项规定,采取切实有效措施,对高致病性动物病原微生物实验活动实行全程监管,确保实验室生物安全,确保实验室工作人员和广大人民群众身体健康。
(一)严肃查处违法从事实验活动的行为。各级兽医主管部门要严格执行高致病性动物病原微生物实验活动事前审批制度。对未经批准从事高致病性动物病原微生物实验活动的,要依法严肃查处,三年内不再批准该实验室从事任何高致病性动物病原微生物实验活动。
(二)加强实验活动监督检查。各级兽医主管部门要定期组织实验活动监督检查。重点检查实验室是否按照有关国家标准、技术规范和操作规程从事实验活动,及时纠正违规操作行为。要督促实验室加强内部管理,制定并落实安全管理、安全防护、感染控制和生物安全事故应急预案等规章制度。
【关键词】微生物 实验教学 实验技能
《动物微生物学》是动物医学、畜牧兽医、动检及畜牧专业的必修专业基础课,其实验技能是临床操作及科学研究中必备的基本技术。掌握良好的微生物实验操作技能可以为以后的临床、实验室检验和科学研究工作打下良好的基础。笔者在多年的教学中对微生物实验课程的讲授有一下几点体会。
一、讲授与示教相结合,强调示教作用
实验课程中首先要讲授清楚实验的目的、所用仪器材料、具体实验方法,但单纯的讲授和板书学生不容易接受,难与实际操作结合。所以,在讲授过程中或结束后,教师亲自操作示范,让学生有一个感观上的直接认识,并且在示教过程中强调注意事项、解释操作原理,学生掌握起来更加轻松容易。有条件的可以利用相关教学录像达到这一目的。有了直观的感受,学生更容易模仿操作,已达到更好的教学效果。在实验课程中,示教是不可缺少的一部分。
二、留出短暂时间供学生回顾体会
讲解、示教结束后,根据所讲内容的多少留出3―5min时间,让学生回顾刚刚讲过的实验内容,体会操作的方法和注意,鼓励学生对清楚的知识点提出疑问,允许学生彼此之间轻声地相互交流。在这短暂的几分钟时间里,学生可以对教师的讲授和示教过程进行自我总结和体会,不同的学生会有不同的问题出现。再通过与教师或同学的交流,及时解决出现的问题。
三、学生代表模拟讲解
为调动实验课程中学生的积极性,也为检验学生对实验内容的接受情况,随机选择2~3名学生到讲台进行模拟操作,讲述操作中的注意事项;同时要求其他学生仔细观察其操作,对其出现的错误操作及时进行纠正。通过此项内容不仅可以有效地检查学生对实验操作的理解情况,及时找到学生易出错的环节并及时纠正而且可以锻炼学生的语言表达能力,增强学生的紧迫感,提高学生上课的注意力。
四、注重学生操作时的指导
实验课程中,教师的教授只是课程的一小部分,另外一部分就是学生自己动手操作。在这部分时间中,教师要关注学生操作的方式方法。由于学生都是初次接触微生物实验操作,难免会在操作中出现错误,教师如能及时予以纠正,必将有助于学生形成良好的实验技能。例如,在微生物实验过程中要注意无菌操作,但是对于初学者来说是说起来容易做起来能,学生往往是讲得条条有理,但做起来总出错误。教师如能及时的指出学生的错误,学生可以立即改正,久而久之形成良好的无菌操作习惯。
五、定期批改实验报告
实验结束后要求学生按照学校的统一规定书写实验报告,并定期批改。通过批改实验报告可以掌握学生对实验的理解程度、完成情况,并及时做出反馈;学生通过实验报告的分数和批语可以了解自己的问题所在,以便在以后的实验中不断改进。
六、建立合理的考核制度
衡量实验课程的教学质量,重要的一个指标就是学生的掌握情况。如何衡量学生的掌握情况,这就要建立一个合理的考核制度。笔者在实践中采取实验操作考核的形式,首先自制考核项目条,由学生随机抽取,然后按照所抽取的项目进行操作,教师根据学生操作情况打分,以便检验学生的学习效果。
对于任何一门课程而言,实验课程是与今后的工作和科研密切相关的一项内容,也是学生必须掌握的一项内容。实验课程质量的高低直接影响着学生的素质能力,对实验课程的教学质量不容忽视。笔者仅就个人在教学中的一些经验体会做以简单介绍,希望能有一定帮助。
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关键词:纤维机构 微生物实验室 质量控制
目前,我国纺织品检测涉及微生物的标准主要有:《羽绒羽毛检验方 法》( GB/T 10288―2003)?《抗 菌 针 织 品》( FZ/T 73023―2006)?《絮用纤维制品通用技术要求》(GB 18383―2007)?《地毯抗微生物活性测定》(GB/T 23164―2008)?《 抗 菌 毛 巾 》 ( FZ /T62015―2009) 等?检测的产品涵盖羽绒羽毛及其制品填充物?抗菌针织品?生活用絮用纤维制品?地毯?抗菌毛巾等?涉及的微生物种类主要包括:嗜温性需氧菌?粪便链球菌?还原亚硫酸盐梭状芽孢杆菌?沙门氏菌?绿脓杆菌?溶血性链球菌?大肠杆菌?金黄色葡萄球菌?白色念珠菌等?作为纤检机构,应具备上述诸多标准的检测能力,最根本的是需形成科学?安全?高效的微生物实验室质量控制体系?
1、培养基
应建立和保持有效的适合试验范围的培养基(试剂)质量控制程序?培养基是指液体?半固体或固体形式的,含天然或合成成分,用于保证微生物繁殖或保持其活力的物质?其质量的好坏将直接影响最终的检测结果?
1.1 购买
购买培养基时,要选择国内外知名品牌和市场信誉度高的产品,选择有质量保证能力和服务保证能力的企业?购买的数量要有计划,应控制在一年内使用完毕,尽可能买小包装的产品?
1.2 接收
接收培养基时,供应商需提供的文件有:培养基?独立成分?添加成分的名称及产品编号;批号;培养基使用前的 pH 值;储藏信息和有效期;技能评价和所使用的测试菌株;技术数据清单;质控证书;必要的危害数据?实验室收到培养基后,需检查?记录以下项目:培养基的名称?批号?数量;接收日期;首次开封日期;有效期;包装及其完整性;内容物的感官检查?
对于关键性的培养基,必须采取技术性验收,主要包括物理指标控制(pH 值?琼脂层的厚度?色泽?透明度和是否存在肉眼可见的杂质?凝胶稳定性?黏稠度和湿度)和微生物指标控制(污染测试?生长率测试?选择性测试?特异性测试)?发现下述情况的培养基应拒收:超过保质期;发生结块?颜色异常?脱水?有微生物生长和其他变质迹象?
1.3 保存和使用
应严格按照供应商提供的储存条件?有效期和使用方法进行培6养基的保存和使用?通常情况下,基础培养基在 4 ℃ 冰箱中保存应不超过 3 个月,或在室温(20 ℃)下保存不超过 1 个月?
1.4 制备记录
对各种培养基(试剂)的制备过程需有相应记录,其内容包括:培养基的名称和类型;配置日期和配置人员的标识;培养基的体积;分装的体积;成分?每种成分物质的含量?制造商?批号;最初 pH 值和最终 pH 值;无菌措施?
2、菌种
应建立所有菌种或标本的收集?接种传代?确认试验?贮藏的质量控制程序?
2.1 收集
标准菌种或标本需从认可的菌种保藏中心[如中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CMCC)]或经 ISO9001 认证的商业机构[如美国细菌收集和分型中心(ATCC)]处获得?接收菌种时,需记录菌种的名称?来源?接收日期等信息?
2.2 接种传代
将微生物的培养物或含有微生物的样品移植到培养基上的操作称之为接种,方法主要有斜面接种?液体接种等?接种传代时需记录菌种名称?接种日期?接种数量?支取数量?传代序数?废弃处理等信息?所有标准培养物从储备菌株传代培养次数不得超过 5 次,除非标准方法中要求并规定,或实验室能够提供文件化证据证明其相关特性没有改变?工作菌株不能传代,不可替代标准菌株?标准菌株的商业派生菌株仅可用作工作菌株?
2.3 确认试验
为保证试验质量,需对标准储备菌株进行确认试验?确认试验主要包括菌种纯化和生理生化鉴定(革兰氏染色?糖类发酵试验?乙酰甲基甲醇试验?甲基红试验?吲哚试验),需记录好菌种纯化方式及各试验的结果等信息?
2.4 贮藏
目前,贮藏方法主要有斜面贮藏?半固体穿刺贮藏?石蜡油封存?沙土管贮藏等?其中,冷冻干燥贮藏比较常见?实验员需记录贮藏方法?贮藏条件?有效期等信息?贮藏时,对于购买的标准菌株,要以原始的包装形式进行贮藏,复苏和使用应按照厂商提供的使用说明进行?
冷冻菌种在 - 70 ℃ 以下可无限期存放,在 - 50 ~ - 70 ℃ 可存放一年,但此方法并不适用于所有菌株?
3、废弃物处理
对于微生物实验室涉及到的弃置的培养基及其他可能受到污染的废弃物,都应采用安全且符合相关法律法规规定的方式进行处理?可参考的方法有:-使用适当浓度的自配或商业液体消毒剂(次氯酸盐?乙醇?甲醛?戊二醛?碘载体等)处理一定时间,或121 ℃高压灭菌至少30 min?-记录并保留废弃物处理的记录,包括废弃物名称?处理原因?处理方式?处理日期?处理人等?
4、设施与人员
微生物实验室的布局以区域尽头为宜,以减少潜在的对样本的污染和对人员的危害?对无菌条件要求的工作区域,应予以明确标识,并能有效地控制?监测和记录?实验室内无菌工器具和器皿应有明显的标识,目的是与非无菌工器具和器皿加以区别?微生物检测所涉及的常规的仪器设备的情节?维护,应做好相应的记录?无菌室空气灭菌效果应至少每月检验一次,方法可参考沉降法,同时做好记录?
专业人才的缺乏是制约纤检机构开展纺织品微生物检测的最大瓶颈,应加大对此类人才的引进与储备?由于微生物检测的菌种多为致病菌,因此从事检测的人员须具备一定的微生物学或相近专业的资质?对新进员工应进行相应的检测技能的培训,结束后需进行确认,以保证其具备胜任工作所必需的设备操作?微生物检测技能,符合实验室生物安全要求,并开展针对所有级别检测人员的继续教育计划?
参考文献:
[1]. 微生物降解转化块根块茎加工残渣获取膳食纤维技术[Z]. 湖北省: 华中科技大学.
[2]李美霞. 微生物亲和型炭纤维制备及其效果评价[D]. 西南交通大学: 西南交通大学,2010.
[3]勇强,余世袁,黄晶,王,徐勇. 一种微生物酶法生产纤维低聚糖新工艺[Z]. CN101693910A: 2010.
我校于2014年开始招收高职医学检验技术专业学生,在此之前,主要教学对象为中职医学检验技术专业学生。中职医学检验技术专业侧重于培养学生相关检验技术,而高职医学检验技术专业在培养学生相关技能的基础之上,还要培养学生科研思维能力与创新能力[1]。针对招生层次的变化,明确目前我校临床微生物学检验实验教学存在的问题,才能有的放矢。我校临床微生物学检验实验教学存在以下问题:(1)我校相关教师的中职临床微生物学检验实验教学经验丰富,而高职课程教学目标和教学理念均有别于中职课程,需要相关教师进行深入学习和研究,探索更为科学的教学方案与教学手段[2]。(2)我校临床微生物学检验实验教学一般采用特定的形式开展,实验步骤和结果都是确定的,学生缺少独立思考机会,实践能力和创新能力难以提高。这就需要将实验教学与临床实际联系起来,并构建科学的临床微生物学检验实验教学体系[3]。(3)目前,我校临床微生物学检验实验教学与临床实践需求存在一定的差距,在今后的实验教学过程中,学校应多与附近的医院合作,充分利用其平台的优质资源,开设应用性、综合性实验,开阔学生视野,提高教学质量。
2临床微生物学检验实验课程教学体系改革
2.1改变基础实验教学手段,建立以研究为主导的教学体系。基础实验着重培养学生实验能力,强化专业基础和实验基础[4]。本教研室对临床微生物学检验基础实验教学方法进行改革,遵循以学生动手为主、教师示教为辅与多媒体教学弥补的原则,培养学生实验能力。对于一些实验室难以开展的最新实验项目,教师可以通过微视频演示给学生,让学生了解学科最新研究动态和技术。具体基础实验教学过程中,让学生参与实验教学的每个环节[5],包括准备实验、实验过程、实验研讨、实验总结以及科研活动,实现教学相长。学生轮流参与实验准备过程,教师鼓励学生在实验过程中提出问题,组织学生以5~6人一组讨论实验过程中遇到的问题。实验结束后,每组学生根据实验结果以及遇到的具体问题进行总结,归纳成败原因,总结经验。2.2建立综合性、设计性实验教学体系。综合性实验是指在学生具有一定实验基础知识和基本操作技能的基础上,对学生实验能力与实验方法进行综合训练的一种复合性实验[6]。设计性实验是指给定实验目的、要求和实验条件,由学生自行设计实验方案。我校临床微生物学检验课程实验课和理论课学时比为1∶1,综合性、设计性实验教学体系的构建是培养临床微生物学检验人才的关键[7]。我院传统临床微生物学检验实验课程设计见表1,改革后的临床微生物学检验实验课程模块设计见表2。本教研室将综合性、设计性实验教学分为以下几个环节。2.2.1抽签选择临床模拟标本。实验教师准备临床模拟标本,例如感染病原菌的尿液、血液、痰液、脑脊液、粪便等,学生抽签进行实验,两名学生一组或者4名学生一组。2.2.2设计实验方案。每组学生应用所学知识,拟定实验方案,设计微生物学检验程序。2.2.3实施实验方案。学生根据确定的方案进行实验。在学生实验过程中,教师引导学生独立思考,协助学生解决在实验过程中遇到的问题。教师应做到总体调控,把握学生实验进度,保证其进行按时完成实验。2.2.4实验总结。实验结束后,各小组撰写实验报告,同时对实验进行总结,讨论实验结果的可信度,归纳实验成败原因,总结经验教训,完善实验方案及实验步骤。2.2.5成绩评定。教师根据学生的实验设计、实验操作、实验报告等对其进行综合评定,给出综合性、设计性实验成绩。2.3构建开放式的实验教学模式。开放式的实验教学模式是一种先进的现代化实验教学方式,是有利于培养学生实践能力、提高学生综合素质的一种模式。开放实验室不仅是时间和空间上的开放,更应该是实验内容(实验课程、实验项目、研究课程)和师资的开放[8]。教研室每学期接纳一些自愿参与研究的学生,学生利用课余时间走进实验室,开展实验研究,在此过程中,学生需要查阅大量资料以及进行简单的课题研究,掌握课题设计思想和实验技术,撰写实验研究论文,这能激发学生学习兴趣,实现教学与科研一体化。2.4逐步建立医院实践体系。本教研室与长期从事临床微生物学检验的医技人员和教学经验丰富的教师共同建立了医院实践体系。我院对2015级、2016级医学检验技术专业进行教学改革,共6个班级,改革班学生在校掌握基本技能后,进入医院接受实验教学,共设接种、培养、鉴定3个项目,每个项目都有明确的教学内容和教学要求,同时对改革班学生期末考试成绩和毕业实习期间的表现进行调查分析。
3临床微生物学检验实验课程考核体系改革
本教研室建立以能力考核为核心的实验课程多元化考核模式,重视对学生实验过程的评价[9]。实验成绩主要由基础实验成绩、综合性实验成绩、开放性实验成绩、临床试验成绩组成。基础实验成绩由教师给出,占总成绩的30%;综合性实验成绩包括小组成绩和个人成绩两部分,其中小组成绩由教师给出,占总成绩的15%,个人成绩由小组成员给出,占总成绩的15%;开放性实验成绩由教师给出,占总成绩的10%;临床试验成绩由医院带教教师给出,占总成绩的30%。
4讨论
在临床微生物学检验实验教学过程中,教师利用新型教学手段,使学生掌握基本实验操作技能,同时建立综合性、开放式实验教学体系,将实验教学与科研活动紧密联系起来,培养学生独立思考、解决难题能力。此外,逐步完善开放性教学模式,提高学生学习主动性。实验教学改革将课堂延伸到工作岗位,能帮助学生树立正确的择业观和就业观,增强学生职业认同感。实行多元化的临床微生物学检验实验课程考核方式,有助于提升学生独立操作能力。
关键词:微生物实验课;护生;无菌观念
无菌操作技术是护理工作的重点,它贯穿于各项护理技术操作中,是每个护生必须严格遵守的护理技术操作规程,是护理质量的重要保证,也是减少医院感染的重要措施。另外,护士作为医院与病人接触最密切的人群,有太多的操作机会遭致感染。如在进入临床实习或工作前,护生就具有了较强的无菌观念,那对今后的护理工作非常有益。也可有效地保护自己免受感染。无菌技术基于无菌观念。但无菌观念的培养并不容易,靠单纯记忆和模仿是很难达到的。如何强化护生的无菌观念,提高无菌操作技能,不仅是护理教学的重点,也是其他相关学科的教学重点。
微生物实验项目与无菌操作联系密切,在各项操作中均能找到二者的结合点,并且微生物开课在先,是学生最先接触无菌技术的课程,如果能充分利用微生物实验资源,建立并强化学生的无菌操作观念,对提高其无菌操作能力非常重要,也为护理教学起到很好的铺垫作用,为今后护理工作打下良好的基础。
一、恰当选择实验项目
微生物实验项目种类繁多,虽各项实验均蕴涵无菌操作技术,但我们根据教学大纲和护理专业的特点,选择开设了一些更利于护生无菌观念培养的项目。如革兰染色、空气中细菌的培养、细菌的接种技术、皮肤消毒实验、消毒剂消毒效果的检测等。这些实验项目,不但能让学生更深刻地认识到,微生物不但在自然界分布广范,在人体表也有大量的细菌存在。在今后的临床护理工作中,如不进行严格的无菌操作如皮肤不彻底消毒、在配药、点滴时不戴口罩,皮肤和口腔中的细菌就会导致药物污染、伤口感染等,给患者带来极大的身心伤害,和不必要的经济损失。革兰染色和细菌的接种技术两项试验包含了多种无菌技术,是培养学生无菌观念,强化无菌操作的最好项目。
二、建立无菌观念
在第一次实验课上,我们非常明确指出:护生在微生物实验课上必须严格遵守如下规则:进实验室必须穿白服并系好扣子;非实验必须用品不得带入实验室;实验室内禁止饮食;凡具有传染性的培养物、材料及小动物等需按要求处理,不得随便乱放或用水冲洗;实验室内任何物品不得携出室外;实验过程中一旦发生意外,如划破皮肤、细菌污染台面、地面、手、衣物时,应立即报告及时处理;实验完毕需用消毒液洗手,清水冲洗,方可离开实验室。然后我们让学生谈谈为什么要这样做?通过讨论,达成共识:微生物实验的实验对象是病原菌,如不遵守实验规则,可能引起自己感染,或使自己成为病原菌的传播媒介,造成他人感染;另外,空气、桌面、地面、人口腔、手都细菌存在,如无菌观念不强,就会污染无菌物品,影响实验结果。之后,我们把话题转到护生今后工作的医院:医院是病原微生物较集中、抵抗力较低人群较密集地方,如果护生在今后工作中无菌观念淡薄,无菌操作不严格如:换点滴瓶时瓶口不消毒、配药时不戴口罩、处理完患者手不消毒,就会直接或间接地成为病原菌的传播者和被感染者。此时,再列举临床上由于未严格遵守无菌操作原则导致的医疗护理事故,加深护生对无菌观念的认识,使之产生深刻的共鸣。
三、强化无菌观念
(一)教师认真示教、带教
教师是学生的榜样,教师的一言一行都会对学生产生巨大的影响。因此教师无论示教还是带教,都应认真地用自己的言行把无菌观念渗透给学生以达到强化无菌观念的目的。在学生实践过程中,教师要不断巡视,及时发现问题并予以纠正。如革兰染色时,学生对教师示教过的无菌操作如接种环的灭菌、试管口的灭菌掌握较好,但有些学生在干燥时为节约时间,用嘴吹;还有的学生在染色时发现菌膜上有棉花毛,就毫不犹豫地用手拿下;沾有细菌的吸水纸随意丢掉等。在总结时,我们把这些问题提出来让学生讨论,使他们真正理解无菌操作不只是简单的模仿,它是无菌观念在实验每一个细节上的体现。
(二)加强考核,强化记忆
考核是督促练习、强化记忆的主要方法,但单一的无菌操作考核方式不利于发现问题和纠正错误,也不能真正反应学生无菌观念的强弱。所以我们把对学生无菌观念和无菌技术的考核贯穿于全学期微生物实验课的始终,并采取了多种考核方法:
1、随堂抽查:以小组为单位随意抽查一名同学进行考核,由该组同学进行评价、打分,并请同学指出操作中哪些无菌操作规范,哪些不到位或没做到。这样,一人考核,大家受益。
2、随堂考察:教师对学生的考察从学生进入实验室就开始了。如发现违反无菌操作原则的做法:把没喝完的半瓶水带入实验室、取过菌的接种环碰到自己的手却无动于衷、接种细菌时说话、实验过程中总用手摸自己的眼睛、鼻子、口及头发等、实验结束后手不消毒、清洗就想离开实验室等,我们会让同学自己在实验考核薄上写出错在哪里,这样做的危害是什么?并给予一定的惩罚:如给同学配消毒液或把酒精灯的酒精装好或在下一次实验课时把自己的错误讲给大家听。但如果学生在操作中表现出很强的无菌观念,我们会及时表扬并给予加分奖励。如有的学生在整理弯曲的接种环时先把接种环灭菌—整理—再灭菌—使用、值日生在打扫实验室时能提出用消毒液擦拭实验台或地面、手消毒后用清水冲洗完用肘部关掉水龙头等。这种考核方法对强化学生的无菌观念非常有益。