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梅毒是一种传染性较强的人类性传播疾病,其病原体主要为梅毒螺旋体,传染性较强,危害性较为严重。梅毒通常可分为先天性梅毒和获得性梅毒,其中先天性梅毒主要传播方式为母婴传播,母体携带的梅毒螺旋体通过胎盘组织传染给宫内胎儿,可能会导致胎儿早产、流产等妊娠不利结局。因此,有必要在产前对孕妇进行梅毒筛查,以便于及时采取相应的干预措施,以减少梅毒的传播,改善妊娠结局。本次研究为了探讨不同梅毒血清检测方法在产前梅毒常规筛查中的应用效果,特于2014年1月~2015年6月选取500例进行梅毒筛查的孕妇进行研究,分别采取梅毒螺旋体明胶凝集试验(TPPA法)、免疫胶体金法、甲苯胺红不加热血清反应素试验(TRUST法)进行检测。现将研究结果分析如下。
1资料与方法
1.1一般资料
于2014年1月~2015年6月,选取在我院进行产前梅毒常规筛查的500例孕妇进行研究,所有孕妇均进行产前梅毒常规筛查,孕妇的年龄分布于20~37岁之间,平均为(29.67±6.34)岁,孕周为12~32周,平均孕周为(21.94±9.57)周,其中有427例初产妇、73例经产妇。在进行研究前,孕妇及其家属均对研究方法和目的进行了详细的了解,并签署知情同意书。此次研究经医院伦理委员会许可通过。
1.2研究方法
分别采用梅毒螺旋体明胶凝集试验(TPPA法)、免疫胶体金法、甲苯胺红不加热血清反应素试验(TRUST法)对孕妇进行梅毒血清学检测,每例孕妇均于清晨空腹状态时采集5mL的静脉血液,以3000r/min的速度进行离心处理,取血清进行检测。具体检测方法如下:(1)TPPA法:使用微量滴管将血清稀释液依次滴入微量反应板的第1~4孔中,每孔均滴入25μL血清稀释液,使用移液管将25μL血清稀释液转移到微量反应板的第1孔中,再以2倍递增的量依次转移到第4孔,未致敏粒子滴入至第3孔中,将致敏粒子滴入至第4孔中,并使用平板振荡器进行30s的振荡,使其混合,加盖,放置于室温中,2h后观察并记录结果。当粒子环增大且外周边缘不规则,或有均匀的凝集形成且呈膜状延伸,表示检测结果为阳性。(2)免疫胶体金法:将血清和胶体金试纸放置于室温中,将试纸带有箭头的一端放置入血清容器中,待10s后,将其平放,15min后观察并记录结果。当试纸的检测线和对照线位置均出现1条反应线时,表示检测结果为阳性。(3)TRUST法:在室温环境中,取0.05mL血清,置入试验卡圈中,均匀涂抹,滴入1滴TRUST试剂液,以每分钟100r的速度轻轻摇晃,8min后观察并记录结果。当试验卡圈中出现粉红色的凝集物质时,表示检测结果为阳性。
1.3观察指标
对比三种单一的梅毒血清学检测方法、三种方法联合检测的敏感度、特异度、准确性、阳性预测值以及阴性预测值。
以暗视野显微镜检查和VDRL非梅毒螺旋体抗原试验作为诊断金标准,显微镜下可见梅毒螺旋体,且非梅毒螺旋体抗原试验结果为阴性,即确诊为梅毒。敏感度=真阳性/(真阳性+假阴性);特异度=真阴性/(真阴性+假阳性);准确性=(真阳性+真阴性)/总例数;阳性预测值=真阳性/(真阳性+假阳性);阴性预测值=真阴性/(真阴性+假阴性)。
1.4统计学方法
在SPSS17.0软件中录入数据,并进行处理。计数资料表示为[n(%)],进行x2检验。三组之间的敏感度、特异度等数据采用2×3卡方表格检验,三组与三组联合检测之间的数据采用2×4卡方表格检验。当P
2结果
500例进行产前梅毒常规筛查的孕妇中,有448例孕妇被确诊为梅毒阳性,52例孕妇为阴性。三种梅毒血清学检测方法的敏感度、特异度、准确性、阳性预测值以及阴性预测值均不存在显著差异(x2=0.674、0.400、0.254、0.104、0.085,P=0.714、0.819、0.881、0.949、0.959),但三种检测方法联合检测的敏感度、特异度、准确性、阳性预测值以及阴性预测值均明显高于单一的检测方法(x2=35.953、14.484、50.323、26.975、50.381,P=0.000、0.002、0.000、0.000、0.000)。见表1~2。
3讨论
梅毒是一种由梅毒螺旋体入侵机体引发的感染性疾病,是一种较为常见的性传播疾病,其临床表现以生殖器官溃疡为主。一般情况下,梅毒可分为先天性梅毒和获得性梅毒,获得性梅毒是指通过传播的梅毒,先天性梅毒是指妊娠期孕妇体内的梅毒经胎盘组织进入宫内胎儿体内引发的梅毒。近年来,随着生活方式和观念的转变,梅毒的发病率逐渐增高,通常表现为潜伏性的梅毒,如孕妇携带有梅毒螺旋体,很可能会传染给其宫内胎儿,导致胎儿宫内死亡、胎儿畸形等妊娠不利结局的发生。因此,有必要对妊娠期孕妇进行产前梅毒筛查,以尽早发现孕妇的梅毒携带情况,并采取相应的干预措施,能够有效具有十分重要的意义。
目前,临床上检测梅毒螺旋体的方法主要有梅毒螺旋体明胶凝集试验(TPPA法)、免疫胶体金法、甲苯胺红不加热血清反应素试验(TRUST法),其中TPPA法主要是通过对梅毒病原体进行分包处理,采用致敏粒子和未致敏粒子进行对比,观察其凝集反应,以检测梅毒螺旋体,这种检测方法相对较为简单,检测所需时间较少,可在2h内对结果进行判断,通常被应用于大规模的梅毒筛查;胶体金法主要是通过试纸在血清中放置后的反应线出现数目进行判断,操作相对简单,检测较为快速,但容易受到其他因素的干扰,容易出现漏诊;TRUST法主要是通过特制的TRUST试剂液对血清中的反应素进行检测,操作简单,但容易受到机体其它免疫性病变的影响,容易出现假阳性情况。
【关键词】 梅毒;甲苯胺红不加热血清试验;明胶颗粒凝集试验;酶联免疫吸咐试验
血清学检测是诊断梅毒的重要依据之一。不同的检测方法都有其特殊的临床诊断价值,实验室如何更合理地选用检测方法,避免误诊、漏诊等问题是非常必要的。笔者利用TRUST、TPPA、ELISA法检测分析梅毒检测呈阳性的血清样本及正常对照血清,以探讨3种方法对梅毒的辅助诊断价值。
1 资料与方法
1.1 资料 本资料为本院2008~2010年手术和输血前筛查的2340血清标本。男1330例,女1010例。年龄4~78岁,平均45岁。
试剂与仪器:TRUST试剂盒为上海荣盛生物技术有限公司产品,TPELISA为上海科华有限公司提供的梅毒螺旋体抗体酶联免疫诊断试剂盒;TPPA为日本东亚株式会社提供的梅毒螺旋体血球凝集试验试剂盒。仪器:安图2010型酶标仪。
1.2 方法 TRUST、TPELISA、TPPA法均按操作说明书进行操作,并在有效期内使用。使用TRUST试剂盒检测2340例手术和输血前的血清标本,检出阳性的标本再用TPELISA试剂盒、TPPA试剂盒进行重复检测,对每项结果的阳性数与阴性数进行统计得出结论。
2 结果
2.1 三种方法检测结果比较2340血清标本中经流行病学等方法确诊的梅毒患者58例,占2.47%,非梅毒患者2282例,占97.53%。TPELISA、TPPA、TRUST方法
检测梅毒患者血清阳性率分别为100%(58/58),2.39%(56/2340),2.09%(49/2340)。
2.2 三种方法检测结果特异性比较 TPELISA、TPPA、TRUST特异性分别为99.8%,98.6%,99.2%。特异性以TPELISA法最高,TRUST法的特异性次之,TPPA法特异性最低[1]。提示TPPA法误诊率最高。
2.3 三种方法检测结果灵敏性比较 TPELISA、TPPA、TRUST灵敏性分别为100%(58/58),96.55%(56/58),84.48%(49/58)。在上述三种方法中。灵敏性以TPELISA法最高,TPPA法次之,TRUST法最差。提示TRUST法漏诊率最高。
3 讨论
梅毒是由梅毒(苍白螺旋体)引起,在不同感染时期机体产生的抗体也不同。一期梅毒抗体主要是IgM型,二期梅毒抗体有IgM、IgG型,三期梅毒抗体主要是IgG型。由于梅毒患者在不同分期梅毒抗体出现早晚有差异,故临床实验室应同时检测梅毒非特异性血清反应素与特异性抗体,以避免梅毒患者的漏诊。
TPELISA是利用基因重组工程合成梅毒特异性抗原包被在微孔板上,检测血清中的梅毒特异性抗体是诊断梅毒螺旋体感染的依据之一。但其检测的是梅毒IgM和IgG的混合抗体,梅毒IgG抗体治愈后相当长的时间内仍然存在较高的阳性率,甚至终生阳性。因此,TPELISA阳性只能说明正处于感染期或既往感染,不能判断梅毒疾病活动与否,不能作为疗效监测手段[2]。
用ELISA方法和TPPA试验可用来初筛梅毒,但由于TPPA采用手工操作,需主观判断且步骤繁琐,操作水平要求较高,价格昂贵,不适用于筛查。ELISA价格适中、操作简便,可在自动化仪器上直接读取数据,符合室间及室内质控要求,便于质量控制管理。TRUST法检测虽然价格低、操作简单,但特异性和灵敏度均较低,不适合于筛查。因此,目前梅毒血清学筛选试验应首选ELISA法。
临床应该同时检测非特异性抗类脂质抗原的血清反应素和特异性螺旋体抗体进行确诊。本组实验结果表明,实验室应合理选用不同的方法平行进行梅毒的血清学检测,以减少漏诊、误诊率,为梅毒的确诊提供参考依据,并且在判定梅毒的发展、痊愈及药物疗效方面都具有十分重要的意义。
参 考 文 献
关键词 梅毒抗体 类脂质抗体 甲苯胺红不加热血清试验 酶联免疫吸咐试验 胶乳颗粒凝集试验
doi:10.3969/j.issn.1007-614x.2009.03.071
资料与方法
标本来源:2004年12月~2006年10月,临床标本中TPPA检测阳性标本66例,梅毒恢复期病人标本30例,住院内科相关疾病30例。(类风湿性关节炎10例,系统性红斑狼疮5例,乙型肝炎8例,丙型肝炎3例,高脂血症4例。
检测试剂:TRUST、TP-ELSIA 试剂,TPPA试剂。
方法:TRUST、TP-ELISA-TPA法均按操作说明书进行操作,并在有效期内使用。
结 果
结果见表1、2。
讨 论
从表1可见,TP-ELISA与TPPA法灵敏度、特异性都高,经X2检验,TP-ELISA与TPPA之间差异无显著性。但TPPA试剂成本高,操作较繁琐、耗时较长,而TP-ELISA操作简便,不受样本中纤维蛋白和溶血的影响,一次可进行多份样本的检测,用酶标仪分析,客观准确,结果便于标准化管理。其检测的是梅毒螺旋体的特异性抗体,该抗体在梅毒潜伏期即产生(约感染2周后)。因此,我们认为TP-ELISA法是目前梅毒筛选、早期诊断、确认的最好方法之一。
TP-ELISA法主要缺点是该法检测的是梅毒病原体IgM和IgG的混合抗体,梅毒IgG抗体治愈后相当长的时间内仍然存在较高的阳性率,甚至终身。因此,TP-ELISA单独阳性只能说明正在感染或曾经感染过,不能判断梅毒疾病活动与否,或处于恢复期,因此不能作为疗效监测手段。
感染梅毒后,人体会产生两类抗体,一类是针对梅毒螺旋体的特异性抗体,另一类是针对类脂质的非特异性抗体,而TRUST法就是检测针对类脂质的非特性抗体,除感染梅毒外,患另外一些疾病,如类风湿性关节炎、红斑狼疮、乙丙型肝炎、钩端螺旋体病、高脂血症等都可能导致类脂质抗体产生,因而造成实验假阳性。从表2可知,TRUST法假阳性率为27%,故TRUST法阳性要紧密结合临床表现和TP-ELISA法检查。值得一提的是本文TP-ELISA、TPPA在这些疾病中也有4%的假阳性。国内曾报道其住院内科患者中,TP-ELISA法、TPPA法假阳性更高。
参考文献
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2 宋继权,冯谊,等.ELISA在梅毒血清学诊断中的应用.中国皮肤性病学杂志,2000,14(4):258-259.
梅毒(syphilis)是由苍白梅毒螺旋体(T.pallidum,TP)感染而引起的慢性传染病,几乎可侵犯人体全身各器官,严重者可危及生命。梅毒的传播方式主要有3种途径,即性传播、母婴传播和血液传播。为了解本地区无偿献血者的梅毒感染情况,提高输血安全,笔者对焦作市2003年1月1日至2007年12月31日86 263名无偿献血者的梅毒检测结果进行调查分析,报告如下。
1 材料与方法
1.1 标本来源 2003年1月1日至2007年12月31日焦作市无偿献血者86 263人,年龄18~55岁,经体检合格后献血。
1.2 试剂 初检用ELISA 试剂盒(北京现代高达生物技术有限公司),复检用ELISA 试剂盒(北京万泰生物技术有限公司),TPPA试剂盒(日本富士瑞必欧株式会社)。所有试剂均经批检合格,在有效期内使用。
1.3 主要仪器 STAR全自动样本处理系统(瑞士HAMILTON公司),FAME全自动酶免分析系统(瑞士HAMILTON公司),HTⅢ扫描酶标仪(奥地利ANTHOS公司),MK2洗板机(芬兰Thermo公司)。
1.4 方法 用两种ELISA试剂分别检测无偿献血者血液标本。所有操作均严格遵守操作规程,并按试剂使用说明书要求判读结果。结果呈阳性的标本,用TPPA试剂进行确认。
1.5 统计学方法 采用χ2检验,以P
2 结果
2003年1月1日至2007年12月31日共检测无偿献血者血液标本86 263例,经TPPA试剂确认阳性者247例,结果见表1、表2。
3 讨论
本文结果显示,焦作地区无偿献血者梅毒感染率为0.286%,低于张家港的1.8%[1]和上海的0.98% [2],与包头的0.27% [3]和毫州的0.28% [4]相近;247例梅毒阳性献血者中,男128例,女119例,男女比为1.08∶1,梅毒感染率的性别差异无统计学意义(P>0.05)。从年龄段看,梅毒阳性献血者以26~45岁最多,感染率达0.404%,高于0.286%的总的梅毒感染率,这可能是因为这一年龄段人群性生活活跃且相对开放所致。
从梅毒感染率的趋势看,2003年最高,2004-2006年逐年降低,2007年略有回升,与文献[3-5]报道的献血者梅毒感染率逐年增高的结果不符。分析原因可能是,本血站于2004年7月1日起使用了献血者信息指纹识别系统,在献血前对献血员的所有信息进行惟一性识别,杜绝梅毒抗体阳性者的再次献血;同时对梅毒阳性献血者的检测结果反馈进行了进一步改进,由原来的语音电话、电话通知等方式改为了面对面交流反馈。一方面建议梅毒阳性献血者进行积极治疗;另一方面建议其配偶进行认真检查,抗体阴性者也要跟踪检查半年,期间不得参加献血。由此降低了献血者梅毒阳性检出率,减少血液浪费,进一步保证输血安全。
综上所述,为保证输血安全,血站应做好以下几方面的工作:一是加强无偿献血队伍建设。做好无偿献血的宣传、动员、招募工作,不断发展、建立一支相对稳定的低危献血者队伍,保证临床用血安全。二是加强和改善献血前的征询工作。体检医生应针对献血员的特征,耐心细致地进行讲解、询问,特别是对初次献血者,更要进行系统全面的详细了解,尽可能筛除高危献血者。三是注重试剂选择。使用灵敏度高、特异性好的试剂进行血液检测,以防漏出现假阳性。四是加强血液管理,科学合理用血。除血小板等特殊用血外,其他用血尽量在2℃~6℃保存72 h以后方可发往临床使用。五是加强献血后的信息管理工作。如使用指纹识别系统识别献血员信息、对梅毒阳性者进行面对面结果反馈等。
参考文献
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【关键词】 血清固定; 梅毒螺旋体IgM抗体; 免疫印迹法; RPR
梅毒是由苍白密螺旋体(treponema pallidum,TP)感染所致的一种慢性系统性性传播疾病,可侵犯全身各组织器官,造成多器官的损害[1],是我国目前主要性传播疾病之一。近年来,梅毒的发病率呈逐年上升趋势[2],随着发病率的上升,梅毒病人治疗后的一种血清学现象日益受到关注,即少数患者经驱梅治疗后梅毒血清试验持续不阴转,这种现象称之为血清固定(sero-fixation)[3]或者血清抵抗(sero-resistance)。据报道近年来梅毒患者血清固定发生率显著升高[4],各期梅毒治疗后血清固定发生率不一。
目前,临床上通常采用荧光梅毒螺旋体抗体吸收试验(FTA-ABS)、梅毒螺旋体血球凝集试验(TPHA)、梅毒螺旋体明胶凝集试验(TPPA)、快速血浆反应素环状卡片试验(RPR)等方法来为梅毒的诊断提供实验室依据。其中,RPR通常用作梅毒筛查、疗效观察、判断复发及再感染的监测[5],而FTA-ABS、TPHA、TPPA通常用作确证梅毒。上述各种方法均已成熟,但仍各有缺点,不足以完全解决梅毒的实验室诊断问题。本文采用抗原特异性免疫印迹法(WB)检测梅毒螺旋体特异性IgM抗体,用于血清固定病例的确证,现总结如下。
1一般资料
1.1病例资料
梅毒患者285例,来自2012年1月1日至7月31日我院皮肤科门诊。梅毒初筛实验采用快速血浆反应素环状卡片实验(RPR),选取病程1年以上、RPR阳性且滴度固定病例用梅毒螺旋体特异性IgM抗体检测试剂盒(WB法)做确诊实验。
1.2检测试剂
快速血浆反应素环状卡片实验(RPR)试剂盒由上海科华生物工程股份有限公司提供,梅毒苍白螺旋体特异性IgM抗体检测试剂盒(WB法)由无锡博慧斯生物医药科技有限公司提供。所有试剂均在有效期内。
1.3仪器
梅毒旋转振荡器1台, XK96-9型,由姜堰市新康医疗器械有限公司生产;低速离心机1台, SC-04型,由安徽中科中佳科学仪器有限公司生产。
2结果
2.1梅毒患者RPR实验结果
285例来我院就诊的梅毒患者均按照中华人民共和国卫生部颁布的《中华人民共和国卫生行业标准》明确诊断,其中一期梅毒108例,二期梅毒121例,潜伏梅毒56例;RPR阳性198例,滴度在1∶1~1∶32之间,RPR阴性87例。198例RPR阳性梅毒患者病程在1周~5年之间,其中28例患者病程1年以上,且RPR滴度固定。28例患者中二期梅毒17例,潜伏梅毒11例,无一期梅毒。
2.2梅毒患者血清固定情况
在28例血清固定的患者中,RPR滴度固定于原倍者17例,1∶2者9例,1∶4者2例,无RPR滴度大于1∶4者。见表1。RPR滴度转阴后复升者1例,为二期梅毒。
3讨论
机体感染梅毒螺旋体后产生的抗体分为两类:梅毒螺旋体特异性抗体和非梅毒螺旋体特异性抗体。前者包括TP-IgM抗体和TP-IgG抗体,TP-IgM抗体在感染2周后产生,4周后机体产生TP-IgG抗体;后者主要是类脂质又称为反应素,是组织被梅毒螺旋体破坏后释放的心磷脂等刺激机体产生的抗体[6]。因此梅毒血清学抗体的检测有特异性和非特异性两类,性病研究所实验室试验(VDRL)、甲苯胺红不加热血清反应素试验(TRUST)、RPR等非梅毒螺旋体特异性实验用于常规筛选、疗效观察、判断复发或再感染;TPHA、TPPA、TP-ELISA和梅毒螺旋体免疫印迹试验(WB)等梅毒螺旋体特异性试验常用作确诊试验[7]。
早期梅毒经规范化治疗后,多数患者的梅毒血清反应素抗体可转阴,但有部分患者的梅毒血清反应素抗体滴度下降较慢或不转阴。GOH等认为早期梅毒患者接受规范驱梅治疗后12个月血清反应素试验不阴转者即为血清固定。血清固定形成的原因和机制尚不完全清楚,根据长期临床经验推测血清固定可能与以下因素有关:部分梅毒患者感染梅毒螺旋体后,因无临床症状而忽视,未经治疗;部分患者虽经治疗,但不规范或剂量不足,未按要求定期复查;部分患者因个体的免疫状态不同出现细胞免疫抑制或免疫失衡,逃避免疫系统的梅毒螺旋体长期潜伏于组织中,机体受其持续刺激产生抗体,导致血清学检测持续阳性[8]。因此机体免疫抑制可能是造成梅毒血清固定的重要因素。赵建斌等[9,10]对免疫抑制的研究也得出类似观点,外周血CD4+CDbright调节性T细胞比例增高造成免疫抑制,导致梅毒患者血清固定。有研究认为未经正规驱梅治疗的早期梅毒患者存在明显的细胞免疫抑制现象,表现为Th(CD4)、NK、Th/Ts(CD4/CD8)明显降低,而Ts(CD8)明显增高[11]。Levene等[12]发现二期梅毒患者的血浆中含有大量由进入血液的苍白螺旋体脱落的荚膜粘多糖,它能灭活Th/Tc细胞,从而导致Th低下。在梅毒非特异性抗体血清学检测中(如RPR),常出现生物学假阳性。由于磷脂抗体的非特异性,在梅毒患者合并某些结缔组织病及伴有自身抗体的疾病中,生物学假阳性维持时间较长,可持续数月或数年甚至终身[13],这在一定程度上造成了梅毒血清固定患者的假阳性。
近年来,随着梅毒患者的增多,血清固定发生率也随之增加,血清固定后是否需要重新治疗,应根据脑脊液VDRL检测结果来确定,但由于部分医院医疗条件和病人依从性的限制,脑脊液检测较难普遍开展,因而治疗和处理十分棘手,成为梅毒防治工作中的难题,严重影响患者身心健康。而TP-IgM抗体是大分子蛋白,不易通过脑脊液,因此我们探讨TP-IgM抗体是否可作为梅毒血清固定患者感染并活动的一项血清学指标。
本研究采用快速血浆反应素环状卡片实验(RPR)对285例梅毒患者血清作初筛,其中28例患者病程在1年以上,RPR阳性且滴度固定,即血清固定,再用抗原特异性免疫印迹法对28例血清固定患者做确认实验。本研究中血清固定发生率为9.82%,较杨文林等报道17.5%低[4],其中二期梅毒发生血清固定率为14.05%,潜伏梅毒血清固定率为19.64%,一期梅毒无血清固定。大部分潜伏梅毒患者病期不明,患病早期治疗不及时不规范,容易形成血清固定,该部分患者通常仍具有一定的传染性[14]。何玉清等[15]研究认为部分梅毒患者在两年内机体内仍有少量梅毒螺旋体存在,使TP-IgM抗体产生并维持一定水平。
本研究28例梅毒血清固定患者中8例经免疫印迹法检测为TP-IgM阳性,按照神经梅毒给予头孢曲松钠治疗半个月,一年后复查TP-IgM 6例转阴,RPR 3例转阴。头孢曲松钠药代动力学显示可以在脑脊液中达有效浓度,并维持对敏感细菌的杀菌作用达24h,证明在部分梅毒血清固定患者机体内确实存在活的梅毒螺旋体,也在一定意义上提示我们TP-IgM抗体可作为梅毒血清固定患者感染并活动的一项血清学指标。但由于本研究样本量较小,存在一定的局限性,有待进一步研究探讨。
杨琳等[16]研究显示部分梅毒患者反应素持续阳性,但TP-IgM抗体经3次以上检测均为阴性。本研究28例梅毒血清固定患者中20例经免疫印迹法检测为TP-IgM阴性,8例TP-IgM阳性患者经抗菌治疗后6例阴转,说明该部分梅毒血清固定患者机体内已不存在活动的梅毒螺旋体。TP-IgM抗体的检测对梅毒患者判愈更有意义。一般认为一期梅毒患者TP-IgM抗体阴转为3个月,二期梅毒患者达到9个月,潜伏梅毒患者时间较长,可达到2年[17]。对TP-IgM抗体的检测结果分析,当TP-IgM抗体转阴,说明患者体内没有活动的梅毒螺旋体,可酌情继续随访或判愈;TP-IgM抗体不转阴,说明患者体内可能残存梅毒螺旋体,需继续治疗;某些特殊病例中,TP-IgM抗体阴转患者随访时再转阳性,表明再次感染梅毒[18]。
在8例TP-IgM抗体阳性患者中,4例RPR固定在1∶1,占TP-IgM阳性的50%,他们具有以下临床特征:年龄偏大,平均60.75岁,感染后治疗时间较晚,3例合并有基础性疾病;3例固定在1∶2;1例固定在1∶4。但TP-IgM抗体与RPR固定滴度的关系尚不明确,与以上三项是否相关有待进一步研究。同时本研究样本数有限,还需在今后的工作中进一步扩大研究。
参考文献
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[14]Lin LR, Zheng WH, Tong ML, et al. Further evaluation of the characteristics of Treponema pallidum-specific IgM antibody in syphilis serofast reaction patients. Diagn Microbiol Infect Dis, 20l1, 71(1):201-207.
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[16]杨琳,刘文力.应用TRUST和FTA-ABS-IgM试验判愈梅毒的探讨.中国皮肤性病学杂志,2010,24(1):55-56.
1.辽宁省铁岭市中心血站,辽宁铁岭 112000;2.辽宁省调兵山市铁法煤业集团总医院,辽宁调兵山 112700
[摘要] 目的 探究分析血清梅毒抗体检测结果为阳性与临床有关问题。方法 于2012年11月—2013年11月期间接受血清梅毒抗体检测的1410例患者,通过两种不同的检验方法加以检测,并且根据患者年龄的不同、性别的不同对比分析其关系。结果 不同性别患者采取梅毒血清检测后,检测结果对比不存在差异性,P>0.05不具统计学意义。但对于不同年龄阶段的患者采取梅毒血清检测发现,检测结果有明显差异性,P<0.05有统计学意义。结论 因为患者本身原因、检测试剂原因,易导致血清试验存在一定假阳性率,引发临床上的医患纠纷事件。血清梅毒抗体检测结果呈阳性的患者应结合临床综合因素具体分析判断。
[
关键词 ] 血清梅毒抗体检测;阳性结果;临床相关问题
[中图分类号] R759.1
[文献标识码] A
[文章编号] 1672-5654(2014)05(c)-009-02
Study on detection of syphilis antibody positive results and related clirnical problems
SHI BoLIU Liya
1.Liaoning province liaoning tieling tieling blood center of Diaobingshan City ,Liaoning 112000 ,China;2.Tiefa coal industry group general hoaspital,Liaoning Diaobingshan ,Liaoning 112700 ,China
[Abstract] Objective Analysis of serum syphilis antibody test results are positive and clinical study on the issues related to abstract. Methods From 2012 November -2013 year in November 1410 cases underwent detection of serum antibody of syphilis patients, to be detected by the two different test methods, and the comparison of different gender patients, according to different age analysis of their relationship. Results The patients with different gender take syphilis serum detection, detection results there is no difference, P> 0.05 is not statistically significant. But for the different age patients with syphilis serum detection, the detection results have significant differences, P< 0.05 had statistical significance. Conclusion Because patients itself causes, detection reagent, easily lead to serum test has some false positive rate, cause clinically doctor-patient dispute. Serum syphilis antibody test results were positive patients should be combined with clinical comprehensive factors specific analysis and judgment.
[Key words] Detection of serum antibrly of syphilis; Positive results;Related clincal probleus梅毒螺旋体(简称TP)是密螺旋体中苍白螺旋体的一个亚种[1],就是导致人类性病梅毒的一种病原体,对人类的身体健康产生极为严重的危害。对TP的临床诊断,现阶段一般依据临床铁法煤业集团总医院检查、患者病史以及暗视野显微镜检查TP,检测血清学抗体。目前,对于手术前、输血前的患者检查将血清梅毒抗体的实验检测设为常规检查项目。现选取于2012年11月—2013年11月期间接受血清梅毒抗体检测的1410例患者,统计其血清梅毒抗体检测的结果并具体分析,总结如下。
1资料与方法
1.1一般资料
选取铁法煤业集团总医院于2012年11月-2013年11月期间接受血清梅毒抗体检测的1410例患者,均属于手术前、输血前的患者。其中,女性患者665例,男性患者745例。年龄均在2~77岁之间,平均年龄(43.62±3.52)岁。同时,选取同期在铁法煤业集团总医院体检的465例健康者作为对照,其中335例男性,130例女性。
1.2检测试剂
RPR试剂盒来自厦门创新公司生产,FTA-ABS 检测试剂盒选自军事医学院生物流行病学研究所。
1.3检测仪器
Genesis BMP 酶标仪由瑞士 TECAN 公司制造。
1.4方法
1.4.1非密螺旋体抗原检测RPR 检测,即为快速血浆反应素环状卡片试验。试验操作方法、步骤均根据RPR试剂盒说明书严格执行。
1.4.2密螺旋体抗原检测FTA-ABS 检测,即为荧光密螺旋体抗体吸收检测。试验操作方法、步骤均根据FTA-ABS试剂盒说明书严格执行[2]。
2结果
2.1性别不同的患者行梅毒血清学检测对比情况
不同性别患者采取梅毒血清检测后,检测结果对比不存在差异性,P>0.05不具统计学意义。详见表1。
2.2年龄不同的患者梅毒血清学检测对比情况
对于不同年龄阶段的患者采取梅毒血清检测发现,检测结果有明显差异性,P<0.05有统计学意义。详见表2。
2.3影响阳性结果的相关因素
对阳性结果造成影响的相关因素:①早期梅毒通常发生硬下疳后1~2周才会产生反应素,所以早起血清反应结果为阴性。②感染梅毒以后,立即治疗,因为血清反应素较低,检测易为阴性。③如果梅毒患者同时伴有艾滋病,检测时易出现漏诊。④由于技术操作、抗原敏感性较低时,会引起血清试。
3讨论
现阶段,对梅毒疾病血清学检测的择取由国际WHO推荐应用RPR检测、 VDRLFA 检测等方法,对血清加以过筛试验,检测结果呈阳性的患者通过FTA-ABS 予以检测。利用ELISA 与免疫印迹试验等方法作进一步确认试验。
RPR检测是血清梅毒抗体检测十分有效的筛选试验方法之一,也可以检测患者血清机体血清内的反应素,即为抗脂质抗体。并且反应素能够在非密螺旋体患者血清内发现,包括系统性红斑狼疮、类风湿性关节炎等机体自身免疫系统疾病,水痘、风疹等机体病毒性感染,疟疾、麻风以及吸毒者,妊娠期女性、甚至个别健康者也有可能出现生物学假阳性的结果,特异性并不高,能够导致临床中阳性率呈偏高的现象,所以还需要进一步通过特异性比较强的密螺旋体抗原检测作进一步确认试验。
FTA-ABS检测则是通过密螺旋体抗原对患者血清内的抗 TP 的 IgG/IgM 类抗体进行检测[3],其最先应用吸收剂(其含有非密螺旋体的一种 Reitr 株提取物),在非特异性螺旋体抗体去除以后,在对其加入梅毒螺旋体抗原 Nichols 株,患者发生特异性抗体反应,该种方法具有比较强的特异性。但是其仍然不能区别开地方性梅毒、品他病以及雅司病。因为苍白螺旋体苍白亚种(即为梅毒螺旋体)、品他密螺旋体以及苍白螺旋体地方极细亚种、亚种,在抗原、形态结构,甚至是DNA 同源性方面均比较相似,不能把它们一一区别出来。所以除了微生物学检查里面检测出密螺旋体、梅毒血清学检测结果阳性能够辅助临床诊断是密螺旋体感染以外,还需要根据临床实际表现,才能够确定是具体哪种密螺旋体引起的感染。但是前者不属于性病范围内,部分非性病传播疾病大多发生于经济比较落后地区的儿童人群。
本次研究可见表一中性别不同的患者采取血清学检测结果可知,男性(1.34%)与女性(1.35%)之间发生梅毒阳性率不存在明显的差异性。而表二中年龄不同的患者采取梅毒血清学检测结果对比发现,差异性尤为明显。本次研究中1410例患者并不属于性疾病传播的高危人群,在不同的年龄阶段中,在61~77岁段检测结果显示阳性率是最高的,约为1.60%。这部分老年患者中,部分通过临床试验证实确实存在梅毒,但是其他老年患者除了单纯血清梅毒抗体阳性之外,不存在任何临床症状表现、体征征象,详细询问患者病史也未发现有关证据证明他们确实感染了梅毒。所以,难以向患者及其家属给予明确解释,从而很容易产生医患纠纷事件。除此之外,患者本身原因、检测试剂、检测时间、血清因素等都会对梅素检测结果造成影响。
对于老年患者梅毒血清学检测抗体结果阳性率相对较高,可能产生的主要因素:这部分老年患者存在基础疾病,体内可能释放出可诱导抗类脂抗体分泌,或是TP抗体交叉抗原的产生。同时,还有现在市场上出售的密螺旋体抗原检测所用的部分试验试剂盒内,未佩带吸收稀释剂,需要进行检测的血清均没有应用吸收剂加以吸除及非梅毒螺旋体交叉反应的抗体。根据上述研究分析,可引起梅毒血清学试验结果存在假阳性率,特别是高年龄段老年患者。总之,血清梅毒抗体检测结果阳性,只能说明检测血清标本内含有抗类脂抗体、TP抗体,无法作为患者确实感染梅毒螺旋体的可靠依据。对于检测结果存在争议时,需要为患者或其技术给出合理的、客观的解释,以免发生误诊。对于血清梅毒检测结果为阳性的患者,必须结合其临床症状表现、疾病史分析、有关实验室检查结果加以综合分析,再给予最终的正确诊断。
[
参考文献]
[1]陈虎,陈海宏,柴浩.血清梅毒抗体检测阳性结果与临床相关问题[J].实用医技杂志,2010,15(1):48-49.
[2]武建国.老年人抗梅毒螺旋体抗体测定的假阳性率偏高[J].临床检验杂志,2010,24(4):241-243.
【关键词】 梅毒;TPELISA;TPPA;RPR;对比
作者单位:610051 四川省成都市第六人民医院梅毒是通过传播的高传染性疾病,发病率高,严重危害人体健康[1]。梅毒发病是梅毒螺旋体感染造成的,一般有两种抗体产生:非特异性抗类脂质抗体;特异性抗螺旋体抗体[2]。为对患病者进行早期诊断和治疗,目前采用的诊断方法主要通过血清法检测梅毒抗体,以阳性结果作为判断标准,该方法实施便捷,效果显著。本文就900份血液样本以TPELISA、TPPA、RPR等方法检测,并对结果进行分析。
1 资料与方法
1.1 血液样本 选择我院提供的900份血液样本。
1.2 试剂和仪器 TPELISA试剂由珠海丽珠公司提供;TPPA试剂由富士瑞必欧株式会社提供;RPR试剂由北京万泰生物药业有限公司提供。RPR使用仪器由上海汗诺仪器有限公司提供。
1.3 方法步骤 第一 采用TPELISA法、TPPA法检测血液样本,第二TPELISA法、TPPA法结果显示阳性的样本采用RPR法检测滴度。试剂使用必须根据说明书中规定的步骤执行。检测结果:①ELISA: 样本OD值≥cutoff(CO)为阳性,否则为阴性。CO=0.2+阴性对照平均OD值,如果阴性对照均值<0.05,则按0.05计算。② TPPA 、RPR: 根据说明书规定的时间范围内判定结果。
2 结果
2.1 TPELISA法检测900份血液样本其中阳性反应132例,TPPA法130例阳性,RPR法72例阳性。
2.2 TPPA法结果为阳性的样本采用TPELISA法复检仍显示阳性,而TPELISA法结果为阳性的样本在使用TPPA法复检时有2例显示阴性,吻合率98.48%,两组结果无显著差异。
2.3 RPR法检测样本得到72例阳性反应,对比TPELISA组吻合率54.54%,TPPA组55.38%,结果具有统计源意义(P
3 讨论
TPELISA法和TPPA法的原理都是通过合成抗原检测梅毒特异性抗体,由于所用抗原的不同,二者检测的结果会出现差异。本研究132份TPELISA阳性结果通过TPPA法检测,其中130份结果吻合,吻合率为98.48%,另外2份TPPA和RPR检测结果一致为阴性,假阳性率为1.53%。结果显示TPELISA法具有较高的敏感性,可以用于同时对较多对象进行梅毒检测。TPPA法可以用于确诊梅毒螺旋体感染,排除TPELISA法中的假阳性和假阴性结果,有利于早期患者确诊。
RPR法操作简单易行,用于检测梅毒非螺旋体抗体,即反应素的检测,结果出现的时间相对特异性抗体检测要晚一些,对于一、三期、潜伏期梅毒和神经梅毒诊断结果不理想,同时由于其他疾病出现同样的非特异性反应,造成假阳性结果。这就限制了RPR仅可以用于梅毒筛选,另一方面,通过观察RPR的滴度可以判断梅毒病情的变化。
由上可得,血清法检测梅毒抗体,第一步需要通过TPELISA法和TPPA法检测,筛选阳性反应,为负责医师通过检测结果和患者表征,进一步对病情进行诊断,降低梅毒漏诊、误诊的可能性[3]。第二,通过RPR法对上一步确诊感染梅毒患者进行滴度检测,密切关注患者是否出现梅毒复发或再感染状况,为患者施治提供依据。所以,单一方式检测梅毒抗体不能作为最终结果,需要联系患者实际,选择RPR法、TPELISA法和TPPA法筛选确诊,有效提高梅毒抗体的确诊率,为下一步的临床治疗提供参考,保证生活质量。
参 考 文 献
[1] 李韶深,刘春莉,刘琳.梅毒ELISA和TPPA两种试验方法的血清质量控制的体会.中国皮肤性病学杂志, 2005,(03).
一、导入新课
成功的课堂开头,是师生建立感情的第一座桥梁,也是经营整个课堂气氛的第一道关卡。导入的功能主要在于使新旧学习任务之间能顺利的过渡衔接。这一环节应做好两方面的事情:一是上课伊始,运用新颖的刺激和引人入胜的活动,引导学生把注意指向新的学习课题,引导学生对课题的关注,使心理活动集中于要掌握的内容;二是利用学生熟知的素材把它作为“引子”过渡,找到新知识与学生旧有经验的“契合点”,建立新旧知识的联系,做好学习的准备。
二、出示教学目标
教学目标是指教学活动的主体在具体教学活动中所要达到的预期结果。它具体而精确的体现了教学过程结束时教师和学生共同完成的教学任务。教学目标应包括知识和能力、过程和方法、情感态度和价值观三方面。教师要明确重点、难点,提醒学生注意。
三、整体感知课文
这一环节主要是学生走进文本,感知文本的过程。学生通过读,对全文有个整体的了解和把握。这一环节要给足时间,让学生充分感知,除了解决必要的字、词障碍外,最终达到能概括出读懂的内容,能提出疑惑的问题。一般安排默读或小声读,可以自读、听读、也可以采取分组阅读等形式。感知内容时一般不安排大声读,齐读。
四、设计与探究问题
这一环节也叫主题探究,就是让学生围绕问题展开的探究活动。在这一活动中,问题是核心,要呈现有利于探究的“有效问题”,为下文深入探究做准备。师生要针对学生疑惑的问题,结合重点内容,共同筛选、整理好探究问题(一般不过四条)。学习的形式是合作、探究,每组同学可以根据自己的兴趣爱好一起合作、探究完成。可以采用问答的方法,可以采用讨论的方法,也可以采用集体校对的方法,只要最终能解决问题均可。教师也要参与进来,并要适时调动学生积极思考和讨论。
五、教师点拨指导
教师既可在学生发言中点拨,也可以在进行小结时点拨。教师要指导学生运用恰当的学习方法,发现学生的个性特点。在学生回答时,要注意引导学生主动发表意见,或根据问题的难易选择不同类型的学生来回答,并及时肯定学生的积极表现。
六、学习效果反馈
这一环节也可叫做强化巩固。就是要引导学生动手、动口、动脑,在做中用、用中学。当然让学生回答课后的问题也是一项不错的练习。现行教材的课后问题设计的都比较的科学、合理,难度适合。通过口答、笔答等形式,很容易巩固所学知识和了解到学生学习的情况。通常利用五分钟左右完成,并且可以查缺补漏。
七、总结与提升
好的课堂教学,不仅应当有引人入胜的导入,还应有发人深思、余味无穷的结语。结课的功能表现在:
a.对教学内容的梳理;
b.促进知识的拓展,延伸和迁移,做好衔接和过渡;
c.激发学习热情,鼓励探索创新。
教学有法,教无定法。模式只是我们教学中参照、借鉴的依据,不应成为束缚我们教学的枷锁。我们可以遵循模式但不惟模式,具体的情况灵活运用。
在新课程理念下,上好一节课,应努力做到:
1.落实教学的三维目标。教学目标是课堂教学的核心和灵魂,是课堂教学的根本出发点及归宿。在备课与上课时不能只考虑“知识目标”,眼中只有“知识点”,应充分挖掘教学内容中蕴含的及教学过程中“生成”的情感态度和价值观,并且要重“过程和方法”的设计。教学中做到目标全面,三维目标和谐统一。
2.注重教学内容的生活性。好课在教学内容的组织上下大功夫,要注意教学内容贴近学生的实际生活,只有那些和学生实际生活紧密相连,使其产生迷惑、兴趣、求解的问题,才有可能促使学生打开思路、积极思维,才能取得良好的教学效果。
3.体现知识的建构性。知识是主体建构的,如果没有主体的主动建构,是不可能传递给主体并被主体消化的。因此不能将知识机械的灌输给学生,必须靠学生根据已有的知识和经验主动建构。善于利用学生生活中已有的知识唤起学生学习的积极性。
4.实现教学方法的多样性。“自主、合作、探究”是新课标大力提倡的学习方式,课堂教学理应体现这种精神和原则。但不能教条的理解,要符合学科特点。语文课重在朗读、欣赏、体悟,因此多采用情景法、感悟法、欣赏法。创设情景,引发思考,引导欣赏。
5.加强教学的互动性。要想提高教学的有效性,教师要加强教学的互动性。包括师生互动,生生互动,群体互动。教师在加强互动时,应注意在师生互动中,教师的角色不能是权威,要平等的加入学生的交往中,当然是平等中的首席;教师要建立多层次的互动,提高互动的有效性。
6.重视教学过程的生成性。课程与教学应考虑知识的不确定性,允许学生与教师在“互动”与“对话”中对课程的“动态生成”、“改造”,鼓励个性化地赋予创造性地学习,而不是把知识及其学习作为满足预订目标的尝试。把教学看成是一个活的、流动的过程。
有人曾经感言:“教学方式是水池,内容则是水池中的水。多年来我们一直在研究水池应该是挖成圆的还是挖成方的,却偏偏很少考虑水池有多少水!水池是圆是方并不妨碍它成为水池。但没有了水,任何形状的池子都毫无意义。
【关键词】 滨州
【关键词】 梅毒;苍白螺旋体;传染病
梅毒是由苍白螺旋体引起的慢性传染病,主要通过胎盘及性接触传播。为了解滨州市献血者梅毒感染流行状况及对血液质量的影响,笔者对2001―2004 年无偿献血的血液标本进行了梅毒检测情况统计分析,报告如下。
1 材料与方法
11 标本来源
2001―2004 年本市各单位、街头无偿献血者的血液标本共106 763 人份,其中男 60 218 份,女 46 545 份,年龄 18 ~ 55 岁。
12 方法
所有标本均采用 RPR 及ELISA法(上海荣盛和北京金豪有限公司试剂盒)检测,严格按照试剂盒使用说明书操作,以 ELISA 法检测结果为判断标准。
13 仪器
MK3 酶标仪(韩国),TECAN 洗板机(奥地利)。
14 统计学处理 采用χ2检验。
2 结果
21 对2001-2004年,查体合格的献血者 106 763份进行复检,检出梅毒阳性者 304 份,见表 1。表 1 不同年份献血者梅毒检测阳性比率(略)
22 不同性别献血者梅毒检测阳性率 男性感染率为033%(196/60 218),显著高于女性的023%(108/46 545),χ2=807,P<001。
3 讨论
滨州市的梅毒感染比率正逐年增高,2004 年比2001 年增长 292%,但从国内近几年发表的有关梅毒流行状况的报道看,本市自然人群感染率在全国居中等以下水平。分析增高的原因:①随着改革开放,外来人员、流动人员多,人员复杂,有梅毒感染高危行为的人群增多,使自然人群的梅毒感染率逐年增高。②因梅毒疾病的特殊性,献血者确知自己感染梅毒的高危行为,却可能碍于面子而隐瞒其行为史或迫于家庭、同事、朋友、单位等压力或出于为获得献血后好处的动机而献血,致使可能感染梅毒的献血者增多。