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我体会深刻的一点是:理论要与实践相结合。其实很多东西在学校的时候我都学习过,但知道的都是理论,知道操作步骤,却没有多少实践,甚至都没有考虑到按照这些步骤去做的时候,也会出现很多的问题以及要如何去解决这些问题。在遇到问题的时候我全面的思考,不让自己的思想有局限性。
我谦虚谨慎,勤奋好学。注重理论和实践相结合,将所学的课堂知识能有效地运用于实际工作中,认真听取老员工的指导,对于别人提出的工作建议,可以虚心听取。表现出较强的求知欲,并能够仔细观察、切身体验、独立思考、综合分析,灵活运用自己的知识解决工作中遇到的实际困难。
工作中踏实肯干,吃苦耐劳。有创造性、建设性地独立开展工作的思维;具有一定的开拓和创新精神,接受新事物较快,涉猎面较宽,有自己的思路和设想。能够做到服从指挥,认真敬业,工作责任心强,工作效率高。
这篇是小编特地为大家整理的大学毕业生自我鉴定毕业生登记表,希望对大家有所帮助!
大学四年生活即将随着我的成长而慢慢逝去,回顾这丰富多彩的四年学习生活,我已在老师的辛勤培育下成长为一名品学兼优的合格大学生了,这些日子将永远铭记在我心中。这四年在学习阶段,思想上要求上进,认真学习,努力钻研专业知识,毕业之际,回顾四年来的学习,工作及生活,做自我鉴定如下:
四年的大学生活,使我对人生观,价值观,世界观都有了更深的认识。我的为人之道——以诚待人,待事、坚持信念行动创造价值、自我创新。
如今回首,是对过去的审视和总结,亦是对未来的憧憬和希望,即将踏出校门的我,满心期待大千世界的挑战和磨练。
深知性命相托的重要,从踏入学校门槛的那天起,在良师的精心指导下,自己奋力拼搏,自强不息,逐渐成为了一个能适应社会要求的大学生,并为做一个知识型的社会主义建设者打下坚实的基础。
生活方面,自从来到湖南第一师范学院,我的生活充满了爱,充满了情。同学之间的情犹如亲情但更胜亲情,朋友之间的情犹如手足之情,湖南第一师范学院事我都很是关心,就这样我爱上了湖南第一师范学院的每个人,每件事物。同时独立自主的生活在我的美好的大学三年中也就这样成熟了起来,我也就体会到了大学独立自主的生活是我们进入社会的生活的根本。
学习方面,自我进湖南第一师范学院的第一天起,我就没有忘记我来湖南第一师范学院的目的——学好知识,学会做人。在湖南第一师范学院,虽然我在有些方面得到了肯定,但我真正实现自我价值还需要更加努力,读到到老,学到老也就成了我最基本的思想。
思想方面,我经过班级的初选,到系审核,再到院的批准,我成了湖南第一师范学院美术系第12期入积极分子党培训中的一员,并经过学习与考核,成绩合格成为了入党积极分子。我就由一个对我们党了解一点到了解了我们党的人。
工作方面,在寒暑假期实习中,我知道了事业的伟大和一个人的付出与成就。在大学生的社会实践活动中我得到了找工作比较难的启发,启发我要克服困难勇于直前。
一、思想上高度重视
这几年的工作,使我充分认识到之前在校所学的知识及工作经验在一定程度上已经不能满足今后的工作需要,急需补充相关理论、专业技能知识。
在xx大学的学习,我在思想上有很大的觉悟,认识到这次学习,让我学到不少理论知识,将对我的知识更新以及素质提高帮助不少,并且能够学到今后工作需要的理论知识、专业技能及工作经验,不断增强工作办事能力,为比较顺利地完成各项工作创造了良好条件。为了保证能够安心学习,顺利地完成各门课程,我就提前把要参加学习期间的事务做出合理安排,确保能够全身心参加上课阶段的学习。
二、认真学习,严守纪律
由于不同于全日制的授课方式,除了面授的机会外,可以说大部分时间要靠我们自学去完成。为了提高自已,我特别珍惜这次学习的机会。我能正确处理好工作与学习的关系,把学习当作完善自身的需求,把学习当成促进工作的动力。在工作之余,我认真阅读教学材料,仔细领会每门课程所讲述的内容,做到课前预习了解,把不明白的内容带到课堂,向教师请教;课后复习巩固。这次函授的教师,是一些从事教学活动几十年的优秀教师,他们的丰富理论知识以及理论联系实际工作经验吸引了我,增加了我学习的信心和决心。对老师的辅导总能倾心、安心、静心地聆听,认真地圈划重点,按类别认真做好笔记,既兼顾基础知识,又突出重点内容; 回家后舍得化时间,根据复习提纲认真地读书,认真地背诵记忆,做到在理解基础上背记,在背记基础上理解。
在整个学习过程中,能够合理使用科学的学习方法,充分利用时间,勤学苦练;虚心向同学和教师请教;能够严守学院各项纪律和规章制度;做到尊敬教师和同学。 经过二年的学习,起到事半功倍的效果。二年的大学学习生涯和社会实践活动,是我不断挑战自我、充实自己的一段光辉历程。
三、珍惜机会,受益匪浅
诚然,在校学习其间,有过成功的喜悦,也有留下探索的苦恼与挫折。在这里,老师的博学,讲课的场景,使我终身难忘;同学之间的真诚,那份纯洁,真挚仿佛让我一下子回到了从前的学生时代。
【关键词】 ULBP4;,NKG2D;,IFN
Expression and biological function of ULBP4 in RosettagamiTMB(DE3) and mAb preparation
[Abstract] AIM: To express human ULBP4 in RosettagamiTMB(DE3) and to prepare monoclonal antibody against ULBP4 for the research of γδT cells recognition mechanism. METHODS: DNA fragments of ULBP4 were derived from HO8910 RNA by reversetranscriptase polymerase chain reaction(RTPCR). The fragments encoding the former 225 amino acids of ULBP4 were cloned into Histag fusion protein expression vector pET22b(+). The CHistag fusion ULBP4(225a) protein was expressed in inclusion body and purified step by step according to manufactory’s protocol and renatured in bag filter. It’s functional effect on NK cells was evaluated by NKG2D binding assay and IFNγ secretion experiments. Prokaryotic expressed human ULBP4 was used as an antigen to prepare monoclonal antibodies by means of the B lymphocyte hybridoma technique. RESULTS: ULBP4 recombinant protein can stimulate NK cells to secrete IFNγ. Through PEG fusion and screening by limited dilution, we obtained four strains of hybridoma cells secreting antiULBP4 antibodies. CONCLUSION: The fusion protein was expressed successfully and functional. At the same time, the antiULBP4 mAbs were prepared successfully. Both of them provide a platform for further research.
[Keywords]ULBP4; NKG2D; IFNγ; RosettagamiTMB(DE3) E.coli; Expression; Biological function; monoclonal antibody
[摘 要] 目的: 在大肠杆菌中表达ULBP4重组蛋白, 并制备其特异性的单克隆抗体(mAb), 为γδT细胞对ULBP4的识别机制研究奠定基础。方法: 根据GenBank中ULBP4的基因序列设计相应的引物, 用RTPCR方法从HO8910细胞中扩增得到ULBP4片段, 构建重组原核表达质粒pET22b(+)/ULBP4(前225aa胞外段), 在RosettagamiTMB(DE3)大肠杆菌中获得表达且主要位于包含体中, 经纯化透析复性后, 分析其对NK细胞IFNγ细胞因子分泌的影响。以ULBP4为抗原, 免疫BALB/c小鼠, 取免疫小鼠脾细胞和Sp2/0骨髓瘤细胞常规融合, 依次经HAT选择培养、 间接ELISA法、 克隆化培养、 荧光免疫检测和流式细胞术以及Western blot筛选和鉴定抗ULBP4 mAb的杂交瘤细胞株。结果: 构建了pET22b(+)/ULBP4(225aa)原核表达体系, 并检测到重组蛋白的有效表达; 纯化的重组蛋白在体外培养体系中可以刺激NK细胞IFNγ细胞因子的分泌。此外, 还获得了4株可稳定分泌抗人ULBP4 mAb的杂交瘤细胞株。结论: 成功地构建并表达了具有生物活性的ULBP4, 为γδT细胞的识别机制研究建立抗原制备平台, 同时所制备的抗人ULBP4 mAb, 为后续研究奠定了基础。
[关键词]ULBP4; NKG2D; IFNγ; RosettagamiTMB(DE3)大肠杆菌; 表达; 生物学功能; 单克隆抗体
NKG2D是一种激活性的C型凝集素受体, 由同源二聚体构成, 表达于多种淋巴细胞的表面。近几年, 发现了一种新的NKG2D的配体家族UL16 binding proteins(ULBPs又称为RAET1分子)[1, 2], 其中, ULBP13为糖基磷脂酰肌醇连接的膜蛋白, 而ULBP4和RAET1G则为含跨膜区域和胞内区域的膜蛋白。它们在正常组织细胞表面不表达或表达量很低, 但病毒感染和细胞恶性转化后能明显增强其表达, 暗示了它们在抗感染免疫和肿瘤免疫中潜在的作用。序列分析提示其与MICA较为相似, 且都属于延伸的MHCI类分子家族, 但只含α1和α2功能域且不能呈递小肽。鉴于其序列上与MICA的相似性, 提示其可能也为γδ1T细胞群的抗原之一[3]。事实上, 已有证据表明其中的一个分子ULBP3可以被慢性B型淋巴细胞性白血病患者外周血的γδ1T细胞群所识别[4]。为了进一步加深对γδT细胞识别机制的认识, 我们在原核表达系统中表达并纯化了ULBPs家族的另外一个成员ULBP4, 同时制备其单克隆抗体(mAb), 为今后的研究工作奠定实验基础。
1 材料和方法
1.1 材料 克隆载体pGEMT Easy Vector System购自Promega公司, 原核表达质粒pET22b(+)和宿主菌RosettagamiTMB(DE3) E.coli均购自Novagen公司, DH5α菌为本室保存。HO8910人浆液性卵巢腺癌细胞株、 803人低分化胃腺癌细胞系以及CHO中国仓鼠肾细胞系也为本室保存, 均以含100 mL/L小牛血清的RPMI1640完全培养液进行贴壁培养。而Hep G2人肝癌细胞系则以含100 mL/L小牛血清的MEMNEAA完全培养液进行贴壁培养(HO8910、 803、 Hep G2均为ULBP4 mRNA阳性的细胞株)。NK92细胞由中国科学技术大学生命科学院免疫学研究所田志刚教授惠赠, 以含125mL/L的胎牛血清、 125mL/L的马血清以及200U/mL IL2的MEMα培养液进行悬浮培养。Sp2/0小鼠骨髓瘤细胞为本室保存。细胞培养用RPMI1640购自Gibco BRL公司。Trizol试剂购自Invitrogen公司, Tag DNA 聚合酶和T4 DNA连接酶购自MBI公司。小量质粒制备试剂盒、 MMV逆转录酶、 Oligo(dT)15 Primer、 RNA酶抑制剂、 Xgal均购自Promega公司。Nde I, Xho I限制性内切酶购自NEB公司。PCR产物切胶回收试剂盒购自TaKaRa公司。HisTrap kit Ni亲和柱购自美国安玛西亚公司。IPTG、 氧化型还原型谷胱苷肽购自MERCK公司。Histag mAb购自北京天为时代公司。HRP和FITC标记的羊抗鼠IgG均购自北京中山公司。Western blot的化学发光底物supersignal West Pico购自Pierce公司。硝酸纤维素膜购自美国安玛西亚公司。NKG2DFc融合蛋白和人IFNγ细胞因子检测试剂盒购自R&D公司。次黄嘌呤(H)、 氨基喋呤(A)、 胸腺嘧啶(T)、 弗氏完全佐剂和弗氏不完全佐剂以及PEG4000购自Sigma公司。BALB/c近交系小鼠(8周龄, 雌性),
购自中国药品和生物制品鉴定所啮齿类实验动物中心。
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1.2 方法
1.2.1 ULBP4全长cDNA的扩增和克隆 根据GenBank中ULBP4的基因序列设计相应的引物, 于编码的5′和3′端各设计一条引物P1、 P2, 同时设计编码前225个氨基酸的下游引物P3, 以上引物均由北京奥科生物技术有限公司合成: P1: 5′ GGAATTCCATATGCGAAGAATATCCCTGACTT 3′; P2: 5′ CCGCTCGAGAGACGTCCTCAAGGGCCAGA 3′; P3: 5′ CCGCTCGAGATCTGGTAGACTAGAAGAAGACC 3′。其中, 斜体代表添加的酶切位点(Nde I和Xho I)和保护碱基。按照Trizol试剂盒的说明书提取RNA同时进行逆转录, 以cDNA为模板, 扩增全长的ULBP4基因片断, 上游引物为P1, 下游引物为P2。扩增条件为: 94℃ 30 s, 60℃ 45 s, 72℃ 90 s, 共进行30个循环, 最后72℃再延伸10 min。扩增出的片段用T4 DNA连接酶克隆入载体pGEMT Easy Vector System, 用CaCl2法转化大肠杆菌DH5α, 用Xgal和IPTG进行蓝白斑筛选, 阳性重组子经菌液PCR和测序分析证实(由上海博亚生物技术有限公司完成)。同时使用小量质粒制备试剂盒提取测序正确的阳性质粒。
1.2.2 ULBP4(225aa)原核表达质粒pET22b(+)的构建和诱导表达 以测序正确的阳性质粒为模板, P1和P3引物对扩增ULBP4(225aa)片段, PCR产物经切胶纯化回收后, 使用Nde I、 Xho I限制性内切酶直接双酶切, 37℃过夜。将双酶切的产物纯化回收后连入原核表达载体pET22b(+)同时转化大肠杆菌DH5α, 氨苄抗性的阳性重组子经菌液PCR和测序分析证实与预期结果相符(由上海博亚生物技术有限公司完成)。测序正确的原核表达载体pET22b(+)/ULBP4(225aa)质粒转化RosettagamiTMB(DE3) E.coli, 挑取克隆菌接种于50 mL LB培养液中(氨苄青霉素 100 μg/mL), 37℃振荡培养过夜。次日以1∶100的比列转接于1L2×YT培养液中, 37℃振荡培养, 当A600值达到06~08时加入IPTG(至终浓度为05 mmol/L)进行诱导, 37℃振荡继续培养4 h。
1.2.3 ULBP4的分离纯化和复性 离心收集菌体, 经超声破碎后高速离心获得包含体, 3 mol/L尿素反复洗涤后溶于8 mol/L的尿素中。按照安玛西亚公司的说明书过柱纯化ULBP4。收集纯化的样品进行SDSPAGE电泳以及Western blot检测。将纯化后的样品装入透析袋中, 梯度降低尿素的浓度同时在尿素浓度为2 mol/L时补加氧化型还原型谷胱苷肽, 最后换成PBS并透析3次。
1.2.4 ULBP4的生物学功能鉴定 (1)以1 μg/孔的人NKG2D重组蛋白包被96孔板, 4℃过夜, 以含5mL/LTween20的PBS洗涤3次, 用20 g/L BSA于37℃封闭1 h, 洗涤3次后分别加入ULBP4以及带His标签的无关蛋白, 37℃孵育1 h, PBST洗涤3次后加入抗Histag的mAb, 37℃孵育1 h, PBST洗涤3次后加入HRP酶标羊抗鼠二抗, 37℃孵育1 h, 再次以PBST洗涤5次, 并用重蒸水洗涤3次。OPD底物显色系统显色5~10 min, 测定A490/630值。(2)以10 μg/孔包被24孔板, 离心收集NK92细胞, 调整细胞密度为5×105/孔, 37℃培养24 h后收集上清, 用R&D公司的人IFNγ检测试剂盒分析培养上清中的含量。
1.2.5 抗ULBP4 mAb的制备 取50 μg的ULBP4原核表达蛋白和弗氏完全佐剂混合后皮下多点注射小鼠, 然后分别在第14天, 21天, 28天使用同剂量的抗原和弗氏不完全佐剂混合后皮下多点注射小鼠。融合前3 d, 尾静脉加强注射1次。取免疫小鼠的脾细胞和Sp2/0骨髓瘤细胞在PEG的作用下融合, 在HAT选择性培养基中进行筛选, 并经有限稀释克隆化培养获得杂交瘤细胞株。
1.2.6 抗ULBP4 mAb的特性鉴定 (1)间接ELISA法检测抗体: 以1 μg/孔ULBP4抗原包被96孔板, 并设立空白、 阴阳对照, 37℃包被过夜。以含5 mL/L Tween20的PBS洗涤5次, 并用含20 g/L BSA的PBS于37℃下封闭2 h, 再次以含5 mL/L Tween20的PBS洗涤5次。加入待测的细胞培养上清, 37℃孵育1 h, 以含5 mL/L Tween20的PBS洗涤5次。加入HRP酶标羊抗鼠二抗, 37℃孵育1 h, 以含5 mL/L Tween20的PBS洗涤5次,并用重蒸水洗涤3次。OPD底物显色系统显色5~10 min, 测定A490/630值。(2)间接免疫荧光法检测抗体: 分别将803、 Hep2、 Hep G2、 CHO细胞和稳定表达ULBP4的CHO细胞接种24孔板, 37℃培养48 h后, PBS洗涤5次, 用40 g/L多聚甲醛冰上固定30 min。以含50 g/L BSA的PBS于4℃封闭过夜。次日, PBS洗涤5次后加入待测样品, 37℃孵育1 h, 以PBS洗涤5次。加入FITC酶标羊抗鼠二抗, 37℃孵育30 min, 以PBS洗涤5次, 并用重蒸水洗涤3次。于荧光显微镜下检测。(3)流式细胞术分析: 收集待测细胞, PBS洗3次, 吸尽上清, 于每管分别加入抗ULBP4 mAb, 4℃, 孵育60 min。离心, PBS洗3次, 加入FITC酶标羊抗鼠二抗, 4℃, 孵育60 min。离心, PBS洗3次, 加入500 μL PBS固定液, 4℃保存, 进行流式细胞术常规荧光分析。
2 结果
2.1 重组表达载体的构建以及鉴定 首先采用RTPCR方法从HO8910细胞中扩增出ULBP4全长基因, 测序结果证实所扩增的基因完全正确。然后再以P1和P3引物扩增出ULBP4的胞外段(225aa), PCR产物大小分别为:ULBP4全长808 bp、 ULBP4胞外段694 bp(片段大小均包含酶切位点和保护碱基序列), 见图1。用Nde I和Xho I限制性内切酶将ULBP4胞外段克隆入原核表达载体pET22b(+)。将连接产物转化大肠杆菌DH5α, 抗生素筛选后的阳性克隆经菌液PCR鉴定, 取其中的阳性克隆进行测序。根据序列比较, pET22b(+)中插入片段的序列与GenBank中的序列一致。重组质粒载体的双酶切鉴定见图2。
图1 ULBP4全长和ULBP4胞外段PCR结果(略)
Fig 1 The PCR products of ULBP4 and the outer part segment
1: ULBP4; 2: The outer part segment of ULBP4; 3: DNA marker.
图2 pET22b(+)/ULBP4(225aa)原核表达重组质粒的双酶切鉴定(略)
Fig 2 Identification of recombinant vector pET22b(+)/ULBP4(225aa) digested by Nde I and Xho I
1: Recombinant vector pET22b(+)/ULBP4(225aa) digested by Nde I and Xho I; 2: DNA marker.
2.2 ULBP4蛋白在大肠杆菌中的诱导表达和分离纯化 ULBP4蛋白的原核表达系统在05 mmol/L IPTG和37℃条件下诱导4 h, 表达以包含体为主, 相对分子质量(Mr)约为25000。镍柱纯化后目的蛋白经SDSPAGE电泳和Western blot证实Mr在31000左右有一蛋白带, 与预期大小相符(图3)。
图3 大肠杆菌诱导后的SDSPAGE电泳(A)及ULBP4的Western blot(B、 C)结果(略)
Fig 3 SDSPAGE (A) and western blot analysis (B and C) of ULBP4 expressed in RosettagamiTMB(DE3)
(A) 1: Uninduced supernant of cell lysate by sonication; 2: Induced supernant of cell lysate by sonication; 3: Uninduced precipitate of cell lysate by sonication; 4: Induced inclusion body of cell lysate by sonication; 5: Purified ULBP4 protein; M: Low molecular marker proteins. (B) 1: ULBP4 detected with AntiHistag mAb; M: Low molecular marker proteins. (C) 1: ULBP4 detected with AntiULBP4 mAb 10F7; M: Low molecular marker proteins.
2.3 体外NKG2D结合实验和细胞因子分泌实验 间接ELISA检测结果显示: 原核表达复性后的ULBP4能与人NKG2D结合, 而带His标签的无关蛋白则不能与之结合, 说明复性后的ULBP4仍能维持正确的天然构像。此外, 细胞因子分泌实验显示: 虽然NK92细胞有一定的本底表达, 但经ULBP4刺激后NK92细胞的IFNγ分泌明显增强。
图4 ULBP4刺激NK92细胞分泌IFNγ(略)
Fig 4 ULBP4 stimulated NK92 cells to secrete IFNγ
2.4 杂交瘤细胞株的建立 通过细胞融合、 筛选以及克隆化培养, 获得了4株可稳定分泌高效价mAb的杂交瘤细胞株6C12、 8C9、 8G1及10F7。
2.5 抗人ULBP4 mAb的特性鉴定 荧光免疫检测和流式细胞术结果显示以上4株杂交瘤细胞株所分泌的mAb能识别天然的ULBP4。部分结果见图5和图6。
图5 抗ULBP4 mAb的荧光免疫技术检测(略)
Fig 5 Immunofluorescence assay of the characterization of antiULBP4 mAbs
A: CHO cells stained with antiULBP4 mAb 8C9; B: ULBP4CHO cells stained with antiULBP4 mAb 8C9; C: HO8910 cells stained with antiULBP4 mAb 8C9; D: HO8910 cells stained with antiULBP4 mAb 6C12.
图6 抗ULBP4 mAb的流式细胞术分析(略)
Fig 6 Flow cytometry assay of the characterization of antiULBP4 mAbs
3 讨论
γδT细胞作为第3种特异的免疫细胞, 虽然在人体T细胞群体中只占很少的比例, 但在抗感染免疫、 免疫监视、 免疫调节以及专职的抗原提呈方面都起重要的作用[5, 6]。最近一项相关的研究表明慢性B型淋巴细胞性白血病患者外周血的γδ1T细胞群可以识别ULBP3[4], 然而遗憾的是未能对ULBP家族的其他成员进行相关的研究。为此, 我们在原核系统中表达了ULBP4, 所表达的ULBP4可刺激NK92细胞分泌IFNγ, 表明包含体表达复性后的蛋白仍有活性, 为进一步研究γδ1TCR对ULBP的识别机制奠定了基础。值得注意的是, 在进行原核表达的过程中首先使用的是传统的BL21(DE3)表达菌, 但是未能获得表达。而后我们从Novagen公司引进RosettagamiTMB(DE3)表达菌, 该菌本身有3种抗性(氯霉素、 卡那霉素和四环素), 可以提供稀有碱基, 在05 mmol/L IPTG诱导下获得了高效表达。此外, 2006年有报道在淋巴细胞白血病患者的外周血中能检测到游离性的ULBP2, 而在健康人中则检测不到, 这一过程是由金属蛋白酶所介导的, 表明了其在肿瘤逃逸中潜在的作用[7]。除此以外, RAET1G在RNA水平发生选择性的剪切也能生成无跨膜区和胞内区的游离性的ULBP。因此, 我们所制备的ULBP4 mAb还为ULBP4所介导的肿瘤逃逸机制研究奠定了基础。
参考文献
[1] Bacon L, Eagle RA, Meyer M, et al. Two human ULBP/RAET1 molecules with transmembrane regions are ligands for NKG2D[J]. J Immunol, 2004,173(2): 1078-1084.
[2] Cosman D, Mullberg J, Sutherland CL, et al. ULBPs, novel MHC class Irelated molecules, bind to CMV glycoprotein UL16 and stimulate NK cytotoxicity through the NKG2D receptor[J]. Immunity, 2001, 14(2): 123-133.
[3] Cao W, He W. UL16 binding proteins[J]. Immunobiology, 2004, 209(3): 283-290.
[4] Poggi A, Venturino C, Catellani S, et al. Vdelta1 T lymphocytes from BCLL patients recognize ULBP3 expressed on leukemic B cells and upregulated by transretinoic acid[J]. Cancer research, 2004, 64(24): 9172-9179.
[5] Hayday AC. γδ cells: a right time and a right place for a conserved third way of protection[J]. Annu Rev Immunol, 2000, 18: 975-1026.
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高等学校毕业生登记表自我鉴定
一直以来坚持着人活到老学到老的学习理念,我于2006年通过成人高考考入广州城市职业学院。在这三年中,我积极参加政治学习,关心国家大事,认真学习“三个代表”的重要思想,拥护党的各项方针政策。遵守校纪校规,尊敬师长,团结同学,政治上要求进步;学习目的明确,态度端正,争做一个有高尚思想品德的公民。
大学对于我们这群接受成人教育的大学生来说有着更深刻的含义,通过社会的实践和自我的发现,大学对于我们来说更多的是对知识的渴望与需求,所以在学习上我热爱自己的专业,学习认真刻苦,要求自己在专业知识和各项技能上全面发展,对学习一丝不苟,认真完成学校规定的学习任务且取得优良成绩。作为学生干部,我时刻严格要求自己,有强烈的集体荣誉感和工作责任心,对班委工作认真负责,关心同学,热爱集体。
三年的大学校园生活给我的人生赋予无限的亮点。使自己的知识水平、思想境界、工作能力等方面都迈上了一个新的台阶。在这即将告别美好大学生活、踏上社会征途的时候,我将以饱满的热情、坚定的信心、高度的责任感去迎接新的挑战,攀登新的高峰。
毕业生个人登记自我鉴定
光阴似箭,转眼大学生活即将过去了,本人从进入××大学××系××班级学习以来,一直以严谨的学习态度和积极的工作热情投身于学习和工作中,虽然有过成功的喜悦,也有过失败的辛酸,然后日益激烈的社会竞争也使我充分认识到,若想成为一名德智体全面发展的优秀大学生,这些锻炼都是很基础的和必要的。大学时期的所学、所感、所悟将指导我一生受用!
在政治上,我有坚定的政治方向,积极上进,热爱祖国,热爱人民,坚决拥护中国共-产-党的领导,拥护党的各项方针政策,遵纪守法,勇于批评和自我批评,树立了正确的人生观和价值观。
在学习上,凭着对知识的渴望和追求,我一向严于律己,刻苦钻研,勤奋好学,态度端正,目标明确,为把自己,变成一个掌握现代信息和职业技能的合格×××,我牢固掌握了本专业的基础知识和技能,除此之外我还广泛猎取其他学科的知识,给自己更多的机会参加社会实践,做到理论联系实际。
在工作上,除了积极参加学校、系、班级组织的各项活动外,结合自身特长,我还积极参加学校、社会组织的各种网络设计比赛,并获得奖励,为学校争光,得到了学校、老师和同学们的认可。
在生活上,养成了良好的生活习惯,生活充实而有条理,有严谨的生活态度,良好的生活作风;为人热情大方,诚实守信,乐于助人。有自己为人处世的原则,与同学,朋友和睦相处,共同进步。
在体育方面,认真参加、学习学校开设的体育课程并圆满完成任务,积极参加各项课外活动,并不断丰富自己的阅历。
×年的大学生活,使自己的知识水平、思想境界、工作能力都迈上了一个新的台阶。在这即将告别美好大学生活、踏上社会征途的时刻,我将以饱满的热情、坚定的信念、高度的责任感去迎接新的挑战,攀登新的高峰。
毕业生登记表个人鉴定
转眼间大学生生活就要结束了,离校之前,为了明确自己的过去与未来.我觉得我有必要对这几年的大学生活做个自我鉴定!
大学期间,我不仅重视对专业课程和第二外语(日语)的学习,掌握了扎实的专业知识技能,同时注重个人思想道德品格和修养的提升,坚信“先做人后做事”的至理名言,认为正直的人格是人才的一项重要标准.
我性格开朗,亦静亦动,本着一颗诚心与人交往,有较强的表达能力,同时也很乐意倾听,懂得自我反省.我品尝过失败,经历过迷惘,但最终在集体生活中慢慢成长起来,形成了良好的性格品质.
[关键词]船机装配;仿真装置;开发
[DOI]1013939/jcnkizgsc201537053
1引言
本课题是大学生实践创新训练项目。大学生参加实践创新训练项目,可以鼓励和支持大学生尽早参与科学研究、技术开发和社会实践等创新活动,提高大学生的科学、文化素养,培养大学生的创新精神、创业精神和实践能力。江苏海事职业技术学院已筹备开展《船机装配工》中级职业技能训练鉴定,还需要加强《船机装配工》实训硬件建设,通过大学生实践创新训练项目,自主开发船机装配实训教学仿真装置,即船舶主推进仿真装置;测定船舶轴系理论中心线装置,应用于《船机装配工》中级职业技能训练鉴定,即强化“双证书”人才培养模式,实现“理实一体化”教学方式,提升学生的实践创新能力。
2船舶主推进仿真装置开发方案
21船舶主推进仿真装置主要组成
船舶主推进仿真装置,即十字头式柴油机仿真装置、船舶轴系仿真装置,构成船舶主机与轴系主推进仿真装置。
22船舶主推进仿真装置总体结构
船舶主推进仿真装置装配图,如图1所示:
23船舶主推进仿真装置材质
(1)十字头式柴油机仿真装置材质:铝材、塑料。
(2)船舶轴系仿真装置材质:铝材、塑料。
24船舶主推进仿真装置主要零部件配置
船舶主推进仿真装置主要零部件配置,如下表所示。
25开发的船舶主推进仿真装置实物图
开发的船舶主推进仿真装置实物,如图2所示。
26船舶主推进仿真装置功能
(1)装置具有仿真大型低速柴油机与轴系的船舶主推进装置,能直观认识船舶主机与轴系总体结构、工作原理、特性;
船舶主推进仿真装置主要零部件配置
(2)能模拟轴系安装、校中;
(3)按装配技术要求,能对装置进行装配调整及性能调试的操作技能训练。
3测定船舶轴系理论中心线装置开发
船舶建造和轴系修理时,均有轴系安装和轴系校中工作,轴系的安装和校中的质量直接关系到主机推进系统安装的可靠性和船舶航行的安全性。轴系的安装与校中都是以轴系理论中心线为依据的。轴系的理论中心线是船舶设计时确定的轴系中心线,工作实际中,在轴系安装前,必须测量确定轴系理论中心线位置,所以开发的测定轴系理论中心线装置,即是用于模拟工作实际测量船舶轴系理论中心线的。
设计制作的模拟测定船舶轴系理论中心线的装置,装置实物如图3所示。
图3测定轴系理论中心线的装置
该装置功能:模拟测定船舶轴系理论中心线。该装置加强了实训室硬件建设,开创了学生船舶轴系安装测定轴系理论中心线实训项目,完善学生知识结构,提升学生轴系安装的理论知识与操作技能,提升了学生实践应用技能。
4结论
开发的船舶主推进仿真装置以及测定船舶轴系理论中心线装置,应用于《船机装配工》中级职业技能训练鉴定、拓展实训项目,有助于完善学生知识结构,使学生适应实践岗位的技能要求,提升了“理实一体化”教学的成效。并且通过设计制作,培养学生生产设计开发能力,训练了学生的机械产品制造实践技能,提升了学生的科技创新能力。
参考文献:
[1]吴东杰主推进装置优化设计及仿真研究[D].武汉:武汉理工大学,2012
[2]孙树德船舶轴系校中状态及轴心轨迹的研究[D].大连:大连海事大学,2010
[3]冯志敏,王炳辉,蒲龙云,等船舶模拟推进装置的结构设计及其试验研究[J].内燃机工程,2003(3):4-8
在学习上, 在这一年里,先后取得了普通话水平测试证书和职业技能鉴定证书,这对我今后的工作有很大的帮助。承担创新课题一个,并顺利结题,这也是对我综合能力的肯定。学习成绩也比去年有了一定的进步。
在生活上,我独立自主,养成良好习惯,并乐助人,关心他人,与舍友、同班同学保持良好的关系。并结识一些高年级的学长,向其请教学习、工作、生活上的问题。
在工作上,积极主动,工作踏实,责任心强,具有良好的组织交际能力,注重团队协作精神,组织协调其他学生干部顺利的完成各项工作。
我个人认为自己最大的缺点就是喜欢一心两用甚至多用。急功近利,喜欢一口气学许多东西,但是贪多嚼不烂,即使最后都能学会,也已经搞得自己很疲劳。如今想想,这样其实并不好,正所谓贵在精而不在广。自从发现这个缺点后,我常常警戒自己,以后一定改正。
三年的大学生活,使自己的知识水平、思想境界、工作能力等方面都迈上了一个新的台阶。在这即将挥手告别美好大学生活,踏上社会征途的时候,我整军待发,将以饱满的热情、坚定的信心、高度的责任感投入到新的生活环境中,去迎接新的挑战,攀登新的高峰。
大三学生自我鉴定范文二:大三的学生最近几天开始写学籍和毕业生登记表,其中有一项是毕业生自我鉴定,在把学籍发到同学们手里之前,我就强调让大家把自己的自我鉴定先打个草稿,认真仔细的把自己三年来的在各方面取得的成绩好好的总结一下,然在在写到自己的学籍里面,这样做的目的一是怕学生们直接写到学籍里会出现涂改现象,第二担心他们自己的鉴定写不好,看似小小的鉴定却会影响着他们的一生,强调归强调依然会有学生的自我鉴定只有两三行,难道大学三年真的没有什么可写的吗?下面是一个学生写的自我鉴定的一个范文,供大家参考: 蓦然回首, 不知不觉中自己的求学生涯已经结束,给自己一个很好的定位,是对未来的憧憬和希望。
本人始终以提高自身的综合素质为目标,以自我的全面发展为努力方向,树立了正确的人生观,价值观和世界观,但更多的是在这期间我学到了许多书本上学不到的知识,修养和能力,也使我的修养、为人处事能力以及交际能力等都有了质的飞跃;让我懂得了除学习以外的个人处事能力的重要性和交际能力的必要性。
在校期间学习刻苦努力,积极参加学校组织的各项活动,团结同学,有耐心,乐于帮助他人,深受老师和同学的好评!为适应社会发展的需求,我认真学习各种专业知识,发挥自己的特长;挖掘自身的潜力,结合每年的暑期社会实践机会,从而逐步提高了自己的学习能力和分析处理问题的能力以及一定的协调组织和管理能力。
在思想上我领悟到与其说品德是个人的人品操行,不如说是个人对整个社会的责任。一个人活在这个世界上,就得对社会负起一定的责任义务,有了高尚的品德,就能正确认识自己所负的责任,在贡献中实现自身的价值。
在生活中,本人朴素节俭、性格开朗,严以律待人。平时善于和同学沟通,也乐于帮助同学,所以很多同学不管生活上还是思想方面有了困难也愿意寻求我帮助。在生活中建立了良好的人际关系,获得大家的尊重和支持。
【关键词】新时代;大学生;自我教育
中图分类号:G64 文献标识码:A 文章编号:1006-0278(2014)07-209-01
自我教育法是思想政治教育的传统方法之一,也是大学生思想政治教育的主要环节和重要方法,对增强大学生思想政治教育的效果有着重要意义。
一、自我教育法的发展
(一)古代的自我教育法
我国古代的德育思想理论主要是以儒家思想为基础的,儒家德育思想是我国传统德育思想的主流。而儒家的自我教育思想是儒家德育思想的重要内容。儒家先贤以自己对人性的深刻理解和洞察,对道德自我教育进行了阐发,形成了一整套较为系统的自我教育方法。儒家自我教育思想发端于儒家的心性之学。从孔子开始儒家就主张德性发乎人的内心、基于人的本性。
从孔子到宋明理学,儒家心性之学关注的核心是人自身内心的教化,反映了儒家对主体自我的肯定,体现了儒家对个体内心精神世界的关切。这意味着儒家道德教育的价值取向是强调自我内心的一种“定力”,主张在人的内心中寻找善恶美丑的标准,诉求的首先是人的“自律”而不是“他律”。这就为儒家道德自我教育思想奠定了理论基础。
(二)新时期下的大学生自我教育法
理论要随着实践的发展而不断地丰富自身。改革开放以来,社会的进步、环境的变迁、思想政治教育实践活动的拓展以及新时期大学生的新变化都对大学生思想政治教育中自我教育法的运用提出了新要求。然而,当今的教育研究只是注意探讨教育如何激发学生的方法,往往不去研究如何使学生掌握自我激发的方法。
大学生思想政治教育只有在大学生有了自我教育的要求,即有了充分的自觉性时才是有效的。促进大学生自我教育的因素有二:一是外界影响,即是社会和家庭、学校的要求。二是内在要求,是指大学生自身对物质和精神的要求。因此,教师运用这个方法时,要激越大学生的进取心,要提出对其品行的具体要求,要指出大学生的缺点和弱点,使大学生有针对性地进行自我教育。
美国教育家杜威对自我教育的倡导和研究确立了教育史上又一里程碑,他的“表先个性、培养个性、反对从上而下的灌输“成为合理的自我教育的基本原则。教育和自我教育是传承人类文化的两种途径与手段。在进入知识经济时代的今天,大学生自我教育的重要性愈加凸现,因此对自我教育的研究与剖析将有助于高校对教育的重新思考。
二、大学生进行自我教育的可能性
(一)大学生思想政治教育中自我教育的内涵
汤秀云认为,“自我教育是人们为了自己的思想进步而进行的自觉的思想转化和行为控制的活动。”。兰刚认为,“自我教育,就是以自我价值判断为标准,在原有观念和价值图式的基础上,对外来信息进行反应所形成的品质的过程。”。
顾名思义,大学生的自我教育法是大学生按照学校思想政治教育的目标和要求,主动提高自身思想认识和道德水平以及自觉改正自己错误思想和行为的方法。这种教育方法,是通过大学生自身思想的矛盾运动开展的,也是大学生自觉接受先进思想和正确行为,克服错误思想和不良行为,促使自己的政治倾向和思想品德向良好的方向转化、发展的教育方法。
(二)大学生进行自我教育的可能性
进入大学的青少年年龄基本上在18岁,这个年龄阶段的青少年在身体和心理方面都发生了显著变化,例如身体发育已经成熟,机能基本成人化;随着年龄的增长,逻辑思维发达,越来越富于独立性、批判性;情感丰厚奔放,文饰性与开放性并存;自我意识增强,独立意向显著;富有远大理想,注重面对实际;世界观趋于成熟,可塑性依然存在。大学生的这些身心上的变化,为其进行自我教育提供了可能性。
三、新时期大学生自我教育的方法
第一,自我修养。所谓自我修养,就是大学生在其思想、道德、政治以及知识等方面进行自我教育和自我锻炼,以及由此而达到的一定程度和水平。大学生可以通过反省、反思来提高自我修养水平。
第二,自我总结。大学生在学校里每天的生活丰富多彩,因此,大学生要善于每天进行总结,在总结中发现自己近期在思想、道德、政治和学习上的进步与不足。通过自我总结,提高和完善自身的反思能力。
本人性格开朗,待人热情大方,具有良好的口头表达能力,善于与他人交际,有一定的组织、管理能力,工作细心、大胆、能够积极的思考、创新。本人在大学期间,一直担任班团支书,系学生会干事,后工作积极,担任院学生会勤工助学部部长,并在学校创办了市场营销协会兼任会长,对于以后工作的规划,5年内实现财富自由,10年后希望可以创办属于自己的公司‘
对事物有敏锐的洞察力;能很好得与人沟通,具有团队合作精神;对负责的工作会付出全部精力和热情,制定缜密计划,力争在最短时间内将目标达成;喜欢挑战,能在较短时间内适应高压力的工作。
毕业后进入企事业单位从事管理方面的工作,同时增加自己有关企业管理方面的经验,在企业里面认真工作,通过自己的努力及领导的帮助指导,争取在五年内做到中层以上的一名管理人员。
我虽然没有什么社会经验,但我能吃苦耐劳,我曾在高中有两个暑假到酒店打工,也在那洗过碗,而且我很有上进心,只要自己想做的事,从来没有做不到的,请相信我,我敢保证,选我是你们永不后悔的选择。
学会自立、勤奋努力,认真对待学习,掌握扎实的专业技能知识,有较强的适应力和学习能力。为了积累经验,做事积极主动,能很好地与人交流沟通,有强烈的团队合作精神和服务精神。
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