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大数据热正在席卷全国，很多地方已经着手大数据产业规划。但是，以往规划中的常见语“弯道超车”、“抢占技术制高点”、“跨越式前进”是大数据规划需要避免的问题，急于求成会使大数据发展欲速而不达，使事情变得越来越糟。
不是所有的东西都能够轻易地超越，大数据只是一种工具，不会解决所有的问题，其功效是要靠使用者来发挥的。而使用者则需要学习和理解，以为只要买个超级计算设备、配齐大数据软件就能发展起大数据应用是不现实的，这就如同买架钢琴就以为自己可变成郎朗一样可笑。
设备可以跨越式配备，但应用的知识、技能、经验是无法跨越式发展的，没有长期专注的努力，大数据应用想要取得成效也是不可能的。发展大数据产业很复杂，它是一个生态环境的建设，不能弯道超车、跨越式发展。
信息技术只会“锦上添花”不会“雪中送炭”是信息化的基本规律，大数据技术继续延续这一规律一点也不奇怪。因为大数据能够解决的问题不是当前用户最急切的问题。大数据带来的改进是精雕细刻的改进，只有部分企业才有精力和设施进行这类的改进，一个处于初级阶段的企业需要解决的问题太多了，一件比一件急切、一件比一件重要，企业无法把大数据应用排在最首要的位置，如果强行推行大数据应用反而得不偿失。
阻碍机构大数据应用的最大因素不是资金、设备，也不是知识与理念，而是机构存在着更重要、更有效益的事情需要做，只有当这些事情做完了，才能轮上大数据应用改进工作。大家应该清楚：大数据最擅长的是做小事情（典型的例子是啤酒、尿布的摆放），向急需“雪中送炭”的企业推广大数据应用很不实际。
在城市，大数据产业规划者、专家们最常见的建议是“投资大数据技术制高点”，但制高点战略每每不成功，一个重要的原因是：产业技术的发展依赖于特定的生态环境，它们常常是产业集群的结果，是市场、生产与研发聚集的环境，形成竞争与合作的氛围，制高点技术才能涌现，离开了这种环境的技术创新，很难发展与生存。
技术制高点只是冰山一角，其下面的生态环境支持才是技术发展的动力。发展大数据产业必须从推广应用开始，有大量应用支持的技术开发才能生存。应用规模出现了，自然会创造出自己的制高点。
大数据产业有自己的规律，它是一种智力密集的服务业，很像咨询业。咨询业自身GDP难有大规模，其成果体现在用户的业务成长上，大数据应用也是一样，自身不容易产生GDP规模，但是能够为用户创造很大的间接效益。
大数据应用重要难点是数据源问题，大数据来源经常是其它某项特殊的业务。统计数据是按信息需求设计的，而大数据不是，大数据是按业务需求设计的，大数据应用是业务数据的再利用，必须依赖现成业务数据。寻找数据源成为大数据应用的难题，大数据应用的繁荣依赖于可公开的数据源的丰富程度。
一个产业能否繁荣要看其有无发展的机制，发展依赖于正反馈的良性循环机制，即产业的增长要能产生更大的促进增长的力量，这样才能出现繁荣。产业集群非常关键，市场、服务、开放的聚集是促进产业良性循环的关键。政府支持某些应用开发效果不大的重要原因，是形不成正反馈机制，单纯的示范工程对企业的吸引力不大，企业总是见利而动，效益是推动应用繁荣的关键。
大数据产业能否生存，关键不是技术，也不是资金，关键是用户有没有获得真正的效益。用户效益是核心要素，用户有效益才能反馈，进而形成造血机制。产业规模是由受益者规模决定的，没有足够的大数据受益者人群，就没有大数据产业持久的经济来源，创造受益者规模是发展大数据产业的最核心措施。
全省要推的“两考合一”沈阳已实现
推行初中学业水平考试后，将实现一考多用，让初中毕业、高中招生“两考合一”，各地学校不得再另行组织初中毕业考试和高中招生考试。据了解，目前沈阳市已经实现了“两考合一”。
初中学业水平考试科目将覆盖国家义务教育课程方案规定的所有科目，其中语文、数学、外语(含听力口语测试)、道德与法治、历史、地理、物理、化学、生物、体育与健康、音乐、美术、信息技术等13科作为考试科目;综合实践、地方课程、校本课程等作为考查科目。
考试内容将注重引导深化课程改革、推进素质教育，联系社会实际与学生生活经验，增强考试内容的基础性、系统性及综合性。各学科试题的难易程度按低、中、高三档划分，试题的分值比例为7∶2∶1。命题采取省、市分级负责方式进行，计入高中学校招生总分的科目委托省招考办组织命题，市里统一组织考试。
物理、化学动手实验操作将占20分
为减轻学生课业负担，不同科目考试方式不同。省教育厅有关负责人介绍，语文、数学、外语、道德与法治、历史、地理实行纸笔考试;物理、化学、生物采用纸笔考试和实验操作方式进行，值得注意的是，实验操作将在“物化综合”考试总分120分中占到20分，物理、化学实验操作各10分;物理和化学、生物和地理、道德与法治和历史的纸笔考试采取同场分卷方式进行，道德与法治和历史实行开卷考试;外语听力口语测试采用人机对话的方式进行;体育与健康、音乐、美术科目采取过程性评价与结论性评价相结合的形式，以纸笔开卷考试和技能考试相结合的方式进行;信息技术考试采取上机操作方式进行;综合实践、地方课程、校本课程等考查科目，由各市根据课程方案和课程标准要求，采取过程性评价与终结性评价相结合的方式统筹安排。“学完即考”且全省统一考试
考试时间按照“学完即考”的原则，实行全省统一考试。生物、地理考试安排在学生八年级学年末或九年级学年末进行;物理、化学实验操作考试安排在九年级下学期进行;外语听力口语测试在九年级下学期进行。
语文、数学、外语(含听力口语测试)、物理、化学、体育与健康、道德与法治或历史、生物或地理等科目计入学业水平考试总分。其中，语文150分(汉字书写考试赋分不低于3分)，数学150分，外语120分(100分笔试+20分人机对话)，物化综合120分(100分笔试+20分实验操作，100分笔试中物理为60分、化学为40分，20分实验操作中物理、化学各10分)，体育与健康60分。
高中将有一定数量的自主招生名额
《实施意见》指出，将进一步完善自主招生政策。给予有条件的高中阶段学校一定数量的自主招生名额，招收具有学科特长、创新潜质的学生，推动高中阶段学校多样化有特色发展，满足不同潜质学生的发展需要。严格规范自主招生办法和程序，将自主招生的各个环节和录取结果向社会公开，接受社会监督。
生物地理由各市选择一科以分数呈现
值得注意的是，《实施意见》提出，道德与法治、历史二科，地理、生物二科，各市须结合本地实际，分别选择一科以分数呈现，均为50分(二选一科目也可以采用等级方式呈现，然后各市依据等级每科以适当分值计入总分)，所有文化课计分科目总分不超过700分。未选择计分的科目均采取等级呈现的方式，一般分为A、B、C、D、E等若干等级，各等级的划分由各市根据本市初中考生数量和高中招生计划合理确定。
目前，辽宁省各市中考具体政策略有差异，从沈阳市来看，语文120分、数学120分、英语120分、理综合150分、文综合100分，生物、地理90分(初二已考)，文化课计分科目总共是700分，再加上体育60分，全部总分就为760分。这里道德与法治和历史两科不是选择一科以分数呈现，而是同场合卷开卷考试，生物、地理也不是选择一科以分数呈现，而是同场合卷考试。
逐步打破以考试成绩作为招生标准
我院2000年10月~2006年11月收治腕屈侧切割伤236例，其中早期处理不当造成的误诊误治患者10例，在我院行二次手术，现分析失误的原因及治疗体会如下。
1 资料与方法
1.1 一般资料：本组10例，男7例，女3例，年龄17~45岁，平均36例。致伤原因：刀砍伤2例，玻璃割伤5例，锐器刺伤3例。
1.2 误诊、漏诊情况：医生漏诊8例，其中尺神经损伤2例，正中神经损伤3例，环指指深屈肌腱损伤2例，掌长肌腱断裂1例。二次手术时发现早期手术操作失误，指深屈肌腱漏接4例，其中环指指深屈肌腱2例，拇长屈肌腱1例，食指指深屈肌腱1例。错接4例，环指指深屈肌腱与正中神经吻合1例，掌长肌腱与正中神经吻合2例，结扎尺动脉时连同尺神经一同结扎1例。早期诊断为正中神经、掌长肌腱损伤，结果未能一期吻合正中神经，延误治疗时机2例。
1.3 手术方法：在臂丛神经麻醉下，上臂捆扎气压止血带，做腕部S型切口，适当扩大切口，保证术野清晰，常规清创探查，切断误接错接的肌腱、神经，并做好标记，损伤的肌腱用改良Kessler法修复，用4/0线缝合，5/0线修复腱周组织，正中神经、尺神经断端修整后，在显微镜下用7/0无损伤线做外膜缝合，用腓肠神经移植修复尺神经1例，注意微创操作。术后石膏托外固定4周，3天后开始进行被动屈指、主动伸指训练，拆石膏托后主动练习手指功能，配合理疗等对症治疗。
2 结果
本组10例，经过二次手术，7例手部功能满意，3例手部功能部分受限，合并有神经损伤患者愈合较差，功能恢复不甚满意。
3 讨论
3.1 漏诊原因：本组腕部屈侧组织损伤多为锐器损伤，常同时损伤肌腱、神经，由于早期处理不当，造成术后功能恢复不佳，分析原因如下：（1）腕部切割伤的诊断较容易，医生主观上不够重视，或是医疗条件限制，往往在小清创室局麻下手术，无良好的麻醉，不绑止血带，手术视野不清晰，在有血情况下操作，影响彻底清创探查手术，造成漏诊。（2）术前未能全面检查，导致漏诊。（3）解剖不熟悉，导致误将肌腱与神经、不同的肌腱远近端接错，甚至将肌腱、神经漏接。
3.2 防止误诊误治的治疗措施
3.2.1 首先要树立医生的高度责任感，在思想上高度重视这种切割伤的处理，充分认识腕掌侧解剖的复杂性，损伤的多样性，切忌不能草率行事，对损伤情况估计不足，造成误诊误治，同时要加强手外科专业的培养和显微外科基本技能的提高。要遵循无血、无创、无痛的手术原则，采用显微外科技术进行修复，重视止血带的使用，在无血的清晰视野下操作，才能正确辨认各种组织损伤情况，尽可能应用无创伤技术，精确的锐性分离和无创缝合，更好的保证手部功能的最大限度恢复。
3.2.2 术前对组织损伤的正确判断：术前要详细询问病史，了解致伤物、受伤机制、损伤性质及体格检查情况进行初步诊断，仔细检查相关体征，如手休息位有无改变，畸形的程度，手内外肌功能，手指活动、感觉及血运情况，结合娴熟的局部解剖学知识，以明确诊断。腕掌侧解剖结构复杂，切割伤后应该想到正中神经、尺神经和肌腱的损伤情况及层次，伤口的深浅、方向等，综合各项检查，积累丰富的临床经验，对伤情和组织损伤的程度做出正确、全面的分析判断，预见术中可能遇到的困难，制定正确的手术方案，有条不紊地进行手术。向患者及家属详细交待病情及可能出现的情况，享有疾病的知情权，配合治疗，避免医疗差错和纠纷的发生。
关键词：柱切技术 组分分离 色谱 抑制剂 在线分析
一、引言
气相色谱法作为一种高效、高灵敏的分离分析方法，在石油、化工等行业的在线控制分析中得到广泛应用。如在环氧乙烷的生产工艺中，乙烯和氧的反应中会出现生成水和二氧化碳的副反应，副反应的生成不仅影响环氧乙烷的产量，还影响催化剂的寿命。工艺以添加适当抑制剂来抑制副反应的生成，抑制剂的含量会影响反应的生成，检测其含量就尤为重要。环氧乙烷工艺生产气中有乙烯，氧气，甲烷，氮气，环氧乙烷，水，二氧化碳，乙烷，氩气九种组分和一些杂质。抑制剂采用一氯乙烷，在反应中还会生成氯甲烷，氯乙烯，氯丙烷，二氯乙烷。抑制剂的含量为ppm级，要想在多组分中快速分离出来，无干扰连续分析，色谱仪柱切技术的应用就尤为必要。
二、柱切实现过程
1.在工业气相色谱中，柱切技术的实现通常的硬件配置为：取样阀、定量管、预分柱、柱切阀、分离柱、检测器等。取样阀：位于色谱气路系统的初级，与被测样品接触，可通过阀的开关状态实现样品被定量采集和定量注入色谱柱的部件。定量管：通常是一段容积固定的微小管道，可做为被测样品称量容器，通过取样阀的动作来实现样品注入色谱柱的管道。对于液相样品来说，定量管通常不是管道，而被其它称量形式取代。预分柱：具备保留非测组份并能溶出被测组份的色谱柱。通常预分柱很短，不能实现对被测组份的彻底分离。分离柱：能够将被测组份彻底分离的色谱柱。通常要比预分柱长1～4倍，可以提供较高的柱效和组份针对性。检测器：可以对被测样品进行定量测量的部件，最终将气体浓度转变为电信号输出。常用的检测器有TCD（热导型检测器）FID（氢火焰离子检测器）FPD（火焰光度检测器）而这一系列部件是通过取样阀和柱切阀的开关状态给予了不同的组合。这种气路的切换组合就叫柱切。
2.典型的柱切组合有下面三类。（1）、反吹：在预分柱中，非测组份的保留时间大于被测组份，在被测组份完全脱离预分柱时，利用柱切技术，将预分柱内非测组份反向吹出预分柱的一种柱切方式。（2）、前吹：在预分柱中，若非测组份的保留时间小于被测组份，利用柱切技术将其向前直接吹出柱外而不进入分离柱的一种柱切方式。（3）、中心切割：在某两类组份的分子量和沸点都很接近情况下，并且其中一种组份体积比例远远大于另一种组份时，为了分离体积比小的组份，要利用柱切技术将该组份切割出来，再进入分离柱继续进行分离的柱切方式。
3.现以西门子工业色谱为实例，其采用了反吹和中心切割的柱切组合。
3.1气路设置。西门子工业色谱设置了CR2 、SR2 ； CR1 、SR1相互不干扰两路并行气路。如下图：CR1 、SR1 组成的气路，CR2 、SR2组成的气路。
3.2阀位时间动作设置如图：
第一路SR1 0s开，30s关。动作的作用是SR1阀在0s时打开，进入SR1-2和SR1-9之间的定量管的样品随载气经过SR1-8进入色谱柱R1-1进行样品进样初步分离，再经过SR1-5，SR1-4进入色谱柱R1-2进行在分离，然后经过CR1-10和CR1-9进到S检测器上，不需要的组分被前吹掉。这是样品反吹阶段。时间持续30s，30s后结束。在这其间CR1是关闭的。CR1 55s时开，100s时关。动作的作用是在0到55s时，在0-30s样品反吹阶段。55-100s这段时间CR1阀开，样品就会进入CR1-10和CR1-1进入色谱柱R1-3进行组分分离，然后进入FID检测器进行分析。这是样品进样阶段。100s 后CR1阀关闭，样品又进入反吹阶段。进样反吹的整个过程，首先使用SR1阀进样0-30s ，进样后会在FD的S检测器检测出一未完全分离开的合峰，观察此大峰的结束时间，在近结束时间点将CR1 阀打开，切入一小部分样品进R1-3色谱柱。在R1-3主分柱进一步分离， HC PAMP 是MCL VCL ECL等峰的合峰，中心切割进入R1-3色谱柱进一步分离，最终进入FID检测器进行分析。
第二路SR2 300s开，362s关。动作的作用是SR2阀在300s时打开，进入SR2-2和SR2-9之间的定量管的样品随载气经过SR2-8进入色谱柱R2-1进行样品进样初步分离，再经过SR2-5，SR2-4，在经过CR1-10和CR1-9进到S检测器上，不需要的组分被前吹掉。CR2330s时开，360s时关。动作的作用是在330到360s时，在300-330s样品反吹阶段。330-360s这段时间CR2阀开，样品就会进入CR2-10和CR2-1进入色谱柱R2-2进行组分分离，然后进入FID检测器进行分析。这是样品进样阶段。360s后CR2阀关闭，样品又进入反吹阶段。进样反吹的整个过程，首先使用SR2阀进样300-330s ，进样后会在FD的S检测器检测出一未完全分离开的合峰，观察此大峰的结束时间，在近结束时间点将CR2阀打开，切入一小部分样品进R2-2色谱柱。在R2-2主分柱进一步分离， HC PAMP是ACL、EDCL等峰的合峰，最终进入FID检测器进行分析。
三、柱切技术的优势
柱切技术的优势在于除去有害组份，保护色谱柱和检测器。是指因为某一个或某一类组份自身的物理或化学性质原因，或因在样品中占有的体积比例过大，不适合进入分离柱参与组份的分离。若此类组份进入分离柱或检测器，可能造成色谱柱的短期或长期的中毒，甚至失效。某些极端情况，会损坏某些检测器。使不测量的组份不经过分离柱，以缩短分析时间。选用不同长度和不同填充物的柱子，进行有效的分离，缩短分析时间。吹掉不测定的而又会因自身扩展影响小峰的背景峰以改善组份的分离度。即最长时间、最大效能的发挥色谱柱和检测器的功能；最短时间、最合理的组份分离；最精确的组份测量。
关键词：FastCAM 切割效率 精度 CAD放样
一、引言
FastCAM软件是上世纪70年代由澳大利亚发思特公司研发的一款切割套料转换软件，并经过不断的升级和创新，在机械加工业和装备制造行业中，得到了广大用户的高度认可。我容器结构厂在烷基化反应器斜锥下料过程中，通过CAD制图软件对无法编程的零件进行放样，然后利用FastCAM进行套料转换。从而实现了数控等离子切割，不但提高了下料的精度和效率，同时也大大提高了钢材的利用率。以下来介绍一下我们在生产中对FastCAM使用中的一些体会。
1.FastCAM对CAD文件的高度识别：
FastCAM在套料过程中可以完美的和CAD绘图软件相结合应用到实际生产中，由于套料软件自身所带的绘图功能操作具有局限性，利用CAD绘图软件对我们所需要的零件进行放样，但是在生产中我们会经常发现，我们画好的CAD图形在套料图形导入后，会发现导入套料模板的图形会出现很多引入线和引出线，这是因为我们在绘制CAD图形时，没有使一些线条相交或者存在残留绘图痕迹所致。此时，就需要我们返回DFX文件检查修改，再次确认尺寸，然后再进行套料即可。
2.FastCAM在实际中的使用流程：
二、套料软件在斜锥下料中的实际应用
1.实现套料图形的转换
利用FastCAM套料转换软件可以将CAD进行放样好的图形以DXF的形式保存并进行转换，通过套料转换后形成的TXT文档代码可以由数控切割机识别生成斜锥放样时的图形，从而实现数控切割。
2.利用数控等离子进行切割
数控等离子具有切割速度快、切割割缝齐、切割精度高、气割材质广泛等诸多特点，在压力容器制造中，经常需要切割一些不锈钢材质，形状不规则的配件，利用FastCAM功能，可以在数控切割机上实现复杂配件的下料，从而大大提高了下料精度和下料效率，在斜锥的下料切割中，等离子切割速度达到了1000mm/min。
3.提高了板材在下料中的利用率
FastCAM套料转换软件兼容了自动套料和手动套料功能，利用自动套料，只需将参数设置好，导入所要切割零件的图形，即可完成套料转换；在通常情况下，我们需要在同一张板材上先套入我们需要切割的主要切割零件，手动调整好套料位置后，再利用板材空余的地方套入我们需要的一些小的零部件，从而使板材的利率大大提高。
[关键词] 晚疫病 防治技术
[中图分类号] S436.412 [文献标识码] A [文章编号] 1003-1650 （2014）07-0039-01
近几年我县搭建了大量日光温室，主要定植作物是番茄，通过连坐晚疫病是重要病害之一。本文对番茄晚疫病的防治进行了较为详细的描述，实践证明，该技术在我县日光温室番茄的日常管理、生产中是可行的。
一、发病症状
该病大发生时短期内常使植株成片枯死，造成大面积减产，甚至毁种无收。该病苗期、成株均可发生。幼苗染病，叶片上现暗绿色水渍状病斑，病斑由叶片向主茎扩展，造成茎变细并呈黑褐色，致幼苗萎焉或倒折。该病主要危害果实和叶片，也侵染茎杆。叶片感病，多从植株下部叶片的边缘或叶尖开始，病斑初呈水浸状暗绿色，半圆形，近圆形或不规则形，扩大后呈褐色或暗褐色，高湿时病健交界处长出稀疏的白色霉层，即病菌的孢子梗和孢子囊；果实染病，病斑呈水浸状不规则的云纹斑，后变为深褐色，边缘明显病部表面坚硬而不平整，潮湿时，在病部破伤处长出白色的霉层；茎杆发病，多见于病叶多植株，初为长条形水渍状病斑，随着病情的发展，病部凹陷呈黑暗色，常导致病部以上的枝叶萎焉枯死。
二、发病原因
番茄晚疫病的病菌在条件适宜时，由棚膜水滴滴溅或灌水迸溅至植株下部叶片，果实上引起发病，形成中心病株，中心病株出现后，由气流传播使病害向四周扩展蔓延，往往十多天内整棚番茄就会普遍生病。因此，番茄晚疫病是由点（中心病株）到片（病株周邻的发病）再到面（整棚发病）直至到毁棚绝收。另一方面，晚疫病先由温室前部番茄发病（由于前部昼夜温差大，露水多），随后向中后部扩展蔓延，最后整棚发病。
晚疫病病菌在较低温度（10-13℃）和高温（空气相对湿度85%-97%）条件下容易发生。叶面有水滴是发病的决定条件，一般在白天温暖但不超过24℃，夜间冷凉但不低于10℃，早晚雾大露水多或连日阴雨雪，棚内空气湿度长时间在75%-100%时，晚疫病就会发生并容易流行。凡是地势低洼，土质粘重，灌水过多过量，植株茂密徒长，偏施氮肥，搭架、打杈、去除老叶和吊蔓不及时，病害都会加重发生。
三、传播途径和发病条件
干旱炎热或过于寒冷的天气，病原以卵孢子、厚垣孢子或菌丝体存活。潮湿寒冷的天气菌丝体和游动孢子产生较多，使病害进一步扩展。当土壤潮湿而温度适宜时病菌借气流或水雾（水滴）从番茄的气孔、伤口或表皮直接侵入，也可从茎的伤口、皮孔侵入，在棚中形成中心病株，经多次重复侵染，引起该病流行。在耕作稳定的情况下，发生危害情况主要受气温和湿度的影响。温度适宜，湿度高利其发生，20-23℃，菌丝在寄主体内繁殖速度最快，潜育期最短。日光温室白天22℃左右，相对湿度高于95%，持续8小时，夜间温度10-13℃，叶面结露或叶缘吐水持续12小时，致病疫霉菌即可完成侵染发病；气温15-20℃，相对湿度超过80%，2小时晚疫病便可严重发生。
近年来，随着我县日光温室番茄面积不断扩大，茬次不断增加，各个地方积累了大量的足够的菌源，只要出现浇水过大，排水不良或密度过大，温室内放风不及时或施用氮肥过量，不论是露地还是日光温室，不论是反季节的番茄还是长季节栽培的番茄都会发生晚疫病。
四、防治方法
1.农业防治
选用德奥特7728、格瑞特、安娜、劳斯特、凯利198、保罗塔、佳粉15、毛粉802等抗病性较强的品种；及时清除棚内病叶、病果及病株残体。
2.生态调节
高垄覆膜栽培，采用膜下小水暗灌，注意合理灌水，切忌大水漫灌，灌水后及时排湿，适时放风并逐渐加大放风量，降低棚内湿度，控制病害发生；施足基肥，多施有机肥和磷钾肥，少施氮肥，防止植株徒长，增强植株后劲；加强栽培管理，合理密植，及时吊蔓、整枝，改善通风透光条件；加强温室温度、湿度、光调控管理，创造一个有利于番茄生长，而不利于病害发生的条件；尤其是阴天也要拉帘利用散射光，并进行短时间换气后在密闭分口提温。
3.药剂防治
【关键词】预算 管理 企业
1. 企业预算管理机制存在的问题分析
1.1重编制，轻控制，对全面预算管理的认识不到位。首先，有些企业没有充分认识推行全面预算的重要性，认为预算管理就是成本控制的“变异”，实质和以往没有什么太大的变化，资金预算、财务预算等观念相对薄弱，简单的认为预算就是成本控制；其次，部分企业把预算当作是对生产的限制，没有站在确保完成企业经营战略目标的高度去统筹安排生产经营工作，使管理者往往只注重短期的经济效益，而忽视了长期经营目标；第三，由于受传统思维观念的影响，对预算管理的职责不清晰，“管生产”的不“管经营”，“管经营”的不能有效的主导经营成本，业务管理与财务管理“偏离轨道”，企业生产和经营管理没有形成合力。
1.2预算编制目的不明确，科目设置不合理。预算编制目的不明确在预算编制上的集中体现是预算的分类不科学。预算科目不能准确、全面地反映政府事权和收支全貌。大量体现政府职能的收支在预算科目中没有反映。而且科目分类标准不统一，按经济性质和政府职能交叉分类，逻辑关系不清，体系较为混乱。
1.3重行政命令，轻科学管理。现在一讲预算执行，就是硬性包干，有的都上长升到了政治的高度。不接受方案就换人成为了一句常用的管理禅语。这种简单、粗暴的工作方法虽然易于操作，由于过分强调行政命令，没有按经济规律办事，造成了口服心不服、表服内不服的后果。也使预算的科学性、合理性受到置疑。更重要的是，这种缺乏科技含量的管理手段，严重地打击了各级干部群众执行预算的主观能动性，与以科学管理为代表的现代企业管理格格不入。
1.4预算管理的绩效评价体系不完善，忽视预算的激励作用。绩效评价是全面管理的重要环节，预算缺乏有效的考核和激励措施影响企业预算目标不能充分实现的重要原因之一。考核与奖罚是全面预算管理的生命线，只有通过科学合理的考核，做到奖罚分明，才能有效的做到全面预算管理。但是目前，部分企业“权责利”不明确，导致全面预算管理的控制效用不能得到充分发挥，对全面预算管理的绩效评价指标主要限于财务指标，而不重视非财务指标的影响，因而不能全面反映企业的实际运行情况和职工的工作业绩，导致业绩评价不公平，从而挫伤了员工的积极性，致使员工产生抵触的情绪，最终导致了全面预算的失败。
2. 完善预算管理机制，切实打造企业管理新气象
2.1建立预算调节机制。预算不是一成不变的，会因环境、时间等因素的变化而发生变化。因此必须对预算进行及时调整。但这种调整不是随意的，要建立一种规范的调节机制。包括预算追加、追减的动因、时间、权限、原则、程序、方法等。追加和追减必须有相应的“可行性计划书”，充分论证预算调整的原因，并经过各级预算组织的评估。预算调整一般分为预算事项的应急调整和季度调整，应急事项是指不及时进行调整就会影响生产和经营，一般是每月调整一次，但这种调整不是经常的，有严格的标准；季度调整是对重大事项的调整。
2.2完善和创新预算控制评价分析与信息反馈机制。从评价指标设计来看，影响中小企业战略和目标实现的不仅仅是财务因素，还包括非财务因素。因此，在设置和选择评价指标时，首先应该考虑能够反映中小企业战略和目标实现影响因素的指标；其次应该既包括财务指标又包括非财务指标。另外，评价指标应该根据管理层次、工作性质、承担任务等条件的不同而不同。从评价方法来看，评价方法不但要应用定量评价，而且要应用定性评价；不仅要应用综合评价，而且要应用动态评价；不但要采用水平分析，而且要采用结构分析、比率分析和因素分析等方法。在具体应用时要灵活掌握，针对不同的分析对象采用不同的方法。
2.3树立“以企业战略为导向实施预算管理”的新理念，加强对预算管理的认识。预算管理是企业管理的核心内容。应树立全新的预算理念，第一，企业成员要加强学习和交流，将企业经营计划与预算管理区别开来；第二，企业要明确的长远战略的指导思想，加强预算管理的计划性，实行预算管理的科学性；第三，要改变传统的认为企业预算管理只与财务会计人员和部门相关的错误观念，明确企业预算管理是各级企业成员的共同职责；第四，明确正确的思想认识和人员因素对企业预算管理的决定作用，在企业实行预算管理的过程中，需要企业全体员工的共同努力和协调发展。
2.4以完善制度为重点，强调企业发展与民主管理的结合。企业发展要达到既短期升值，又能实现长期分红的目标，完善制度是基础，民主管理是方向。一是要摒弃只顾眼前不讲长远、只重显绩不重潜绩的发展模式，政策、制度的强化、细化要有可持续性，不要按下葫芦浮起瓢,甚至按下一个葫芦浮起几个瓢。二是要强化民主管理，提高群众在财务管理中的参与性。俗话说，“横拿竹竿是走不出森林的”。像油田这样的特大型企业，仅仅依靠几位专家，或者说过于依靠几个骨干，把广大的职工群众撇在一边当观众，想搞好企业是不可想象的，也是不现实的。
2.5以科学管理替代经验管理，提升预算管理的科技含量。通过精选管理技术、技术与经济相结合的办法，科学地描述预算与现实的内在规律，使预算管理与实际操作贴近油田企业生产实际，由强调行政命令改为依靠科学管理，由基层强调客观改为发挥主观能动性，由被动管理改为我要管理，提高预算的执行力。
2.6建立严格而完善的预算执行与控制体系。完善的预算执行与控制体系的主要内容主要是企业应当及时将各业务机构及所属各级企业重点财务预算指标进行层层分解。各预算执行单位则应当将分解下达的年度财务预算指标细化为季度、月度预算，层层落实财务预算执行责任。同时，企业要严格执行经核定的年度财务预算，切实加强投资、融资、担保、资金调度、物资采购以及产品销售等重大事项以及成本费用预算执行情况的跟踪和监督，明确超预算资金追加审批程序和权限，并应对财务预算的具体执行情况进行跟踪监测，及时分析预算执行差异的原因，以采取相应的解决措施。
结束语
[关键词] 颠茄；托品烷生物碱；数字表达谱；qPCR
[收稿日期] 2013-07-01
[基金项目] 教育部新世纪人才支持计划项目（NCET-12-0930）；国家高技术研究发展计划（863）项目（2011AA100605）；国家自然科学基金项目（31370333）；重庆市科技攻关项目（CSTC2012GGYYJS80013）；西南大学中央高校基本科研业务费专项（XDJK2013A024）
[通信作者] *廖志华，博士，教授，博士生导师，Tel：（023）68367146，E-mail：
[作者简介] 强玮，博士研究生，研究方向为植物生物学与生物技术，Tel：（023）68367146，E-mail：
托品烷类生物碱（tropane alkaloids， TAs）是一类具有巨大医疗价值的抗胆碱药物，广泛用于麻醉、镇痛、止咳、平喘和抗晕动病，也用于控制帕金森病的僵直和震颤[1]。临床上常用的是莨菪碱（hyoscyamine）和东莨菪碱（scopolamine），其中东莨菪碱毒副作用更弱，药效更强，价格也更昂贵，两者的市场需求均十分巨大[2]。目前TAs 都是从少数茄科TAs资源植物中提取，包括颠茄Atropa belladonna、曼陀罗Datura stramonium和莨菪Hyoscyamus niger，颠茄是东莨菪碱和莨菪碱最主要的商业栽培药源， 也是药典收录的TAs药源植物[3]。野生颠茄植株中莨菪碱质量分数为0.02%～0.17%（干重），东莨菪碱含量极低，仅为干重的0.01%～0.08%。因此，培育TAs高产颠茄一直是该行业长期追求的目标[2，4-5]。
随着对烟草、曼陀罗、莨菪等相关生物碱模式植物研究的深入，托品烷类生物碱合成途径已基本清晰（图1）。TAs生物合成以鸟氨酸和精氨酸为前体，分别经鸟氨酸脱羧酶（ornithine decarboxylase，OrnDC）直接脱羧或精氨酸脱羧酶（arginine decarboxylase，ArgDC）、精胺亚胺基水解酶（agmatine iminohydrolase， AIH）、N-甲氨酰基腐胺氨基水解酶（N-carbamoylputrescine amidohydrolase， CPA）的三步反应最终都形成腐胺。N-甲基-腐胺-转移酶（putrescine N-methyltransferase，PMT）与多胺合成途径的亚精胺合成酶（spermidine synthase， SPDS）竞争腐胺前体生成N-甲基-腐胺，将腐胺流从多胺代谢转向TAs合成，是TAs合成途径上的第一个限速步骤[6]。 N-甲基-腐胺经过一系列酶促和自发反应过程最终生成具有托品环结构的托品酮，托品酮继而被还原生成托品，然后与来源于苯丙氨酸的苯乳酸缩合生成海螺碱。从海螺碱到莨菪碱涉及到多步分子重排反应，CYP80F1是从莨菪中鉴定出来的参与其中反应的一个细胞色素家族基因[7]。莨菪碱6β-羟化酶（hyoscyamine 6β-hydroxylase，H6H）催化莨菪碱羟基化及环化两步反应，最终生成东莨菪碱，这也是东莨菪碱生物合成途径上最后一个限速步骤[8]。在TAs生物合成中，托品酮还原酶Ⅱ（tropinone reductase Ⅱ， TRⅡ）催化托品酮还原成假托品是最大的一个竞争支路途径，因为在野生颠茄中，该途径终产物打碗花精含量约是TAs的2倍[9]。
*.本文分析9个基因；实线箭头表示单一酶促反应步骤；虚线箭头表示多步酶促反应步骤。
图1 植物体内托品烷类生物碱生物合成途径
Fig.1 The biosynthetic pathway of TAs in planta
如上所述，尽管TAs生物合成途径脉络已基本阐明，但主要是基于对模式植物的研究，至今颠茄中也只有上游PMT和下游H6H基因得到了克隆并进行了生化分析。本文通过对新近完成的颠茄转录组数据库进行整合分析，绘制了上述9个基因EST序列的数字组织表达谱，并利用qRT-PCR技术对其中已的4个基因的组织表谱进行了验证，同时结合HPLC同步检测了相应组织中的莨菪碱和东莨菪碱含量，以全面了解颠茄TAs生物合成和存储积累，同时为解决该途径中不清晰的合成步骤和研究该途径的转录调控提供理论基础。
1 材料与方法
1.1 颠茄 颠茄种子由西南大学生命科学学院“重庆市甘薯工程技术研究中心”保存，植株种植于西南大学温室。在颠茄生长花果期，从3株不同植株中分别采取根、老茎、嫩茎、老叶、幼叶、花、幼果和果萼共8个部位，40 ℃烘干研磨成粉，用于提取生物碱。绘制组织表达谱的材料则更加细致地采集11个器官的材料，依次为主根、须根、老叶、幼叶、嫩茎、花蕾、花瓣、花蕊、花萼、果萼和幼果，液氮速冻后-80 ℃保存用于提取RNA。
1.2 数字表达谱绘制 美国密歇根州立大学新近的药用植物基因组学资源网站（http：//medicinalplantgenomics.msu.edu/）完成了基于高通量测序的颠茄各组织/器官的转录组数据，EST序列经过充分组装后构建了UniGene转录组数据库，并进行了功能注释。登陆该网站搜索ODC，ADC，AIH，CPA，SPDS，PMT，TRII，CYP80F1，H6H共9个基因的所有UniGene序列，同时与烟草、曼陀罗和莨菪的相关同源基因进行blast比对，确保序列相似性在70%以上。基于基因表达丰度的FPKM（fragments per kilobase per transcript per million mapped reads）算法，作者同时获得了各UniGene在各组织/器官的FPKM值，以此为表达丰度作图，绘制各基因UniGene序列的数字表达谱。
1.3 总RNA提取及cDNA合成 总RNA提取使用TIANGEN公司的RNAsimple Total RNA Kit 试剂盒，紫外分光光度计测定其在260，280 nm处的吸光度，A260/A280均大于1.8小于2.1，表明RNA无蛋白和DNA污染。使用TaKaRa公司的PrimeScript？ RT reagent Kit Perfect Real Time试剂盒将各器官的RNA进行反转录，得到cDNA第一链作为荧光定量PCR检测模板。加样体系：5×PrimeScript TMBuffer（for Real Time） 2 μL，PrimeScript TM RT Enzyme Mix I 0.5 μL，Oligo dT Primer（50 μmol・L-1） 0.5 μL，Random 6 mers （100 μmol・L-1） 0.5 μL，总 RNA 1 μL，补足RNase Free H2O至10 μL，反转录反应条件：37 ℃ 15 min，85 ℃ 5 s。
1.4 引物设计与 qPCR 根据NCBI上已公开的颠茄PMT，TRII，CYP80F1，H6H序列，使用Beacon designer软件设计qPCR引物（表1）。使用IQTM5 Multicolor Real-Time PCR 仪，参照SYBR？ Premix Ex TaqTM Ⅱ （perfect real time）试剂盒说明书进行qPCR反应。反应体系：2×SYBR Premix ExTaqTM10 μL，上游引物（10 μmol・L-1）0.8 μL，下游引物（10 μmol・L-1）0.8 μL，cDNA模板 0.5 μL，RNase-Free H2O 7.9 μL， 总体积20 μL。反应程序：95 ℃ 30 s，接着进行40个扩增循环（95 ℃ 5 s，退火 30 s，72 ℃ 20 s，延伸结束后采集荧光），退火温度见表1；融解曲线分析：60 ℃到95 ℃逐渐升温，每间隔0.5 ℃保温10 s，采集1次荧光。以PGK，ACTIN双基因作为内参，根据Pfaffl Method方法计算各基因的相对表达量。
表1 各基因qPCR引物
Table 1 primer pairs employed for the detection of expression levels
1.5 生物碱提取与 HPLC检测 颠茄各器官干粉参照Wang等发表的方法[2]提取托品烷生物碱用于HPLC检测莨菪碱和东莨菪碱含量，标准品均购至Sigema公司。HPLC检测使用岛津LC-60A高效液相色谱仪（泵 LC-6AD、柱温箱 CTO-10AS vp、控制器 SPD-20A），色谱柱为Phenomenex Gemini C18 110A液相色谱柱（4.6 mm×250 mm，5 μm），流动相为甲醇-0.05 mol・L-1 pH 4.6醋酸胺缓冲液（流动相体系包含0.002 5 mol・L-1 SDS）（58∶42），流速1 mL・min-1，柱温箱40 ℃，检测波长226 nm，进样量20 μL。
2 结果与分析
2.1 TAs合成途径基因数字表达谱 高通量转录组测序技术的发展为研究大基因组（>100 Mb）物种任何组织中的基因表达丰度提供了一个十分直接的方法，基于FPKM与RPKM等算法，可在宏观水平显示所有基因在组织/器官内和各基因在组织/器官间的表达差异。目前，颠茄11个组织/器官（主根、须根、茎、叶、花苞、花、幼果、成熟果、成熟种子、无菌幼苗和愈伤）转录组数据已公开，除了环境因素诱导表达的基因外，它基本包括了该物种所有表达的基因。本文以此为基础，绘制了颠茄TAs合成途径上9个基因UniGene序列的数字表达谱（图2）。有5个基因存在2条或多条UniGene， 表明可能是小基因家族，但是UniGene条数不代表基因家族成员数，本课题组克隆了CYP80F1基因全长cDNA，CYP80F1 1，3，4这3条UniGene其实是一个转录本的上中下游3个部位的小EST片段，其他可能也类似。TAs合成途径上游4个基因ODC，ADC，AIH，CPA在颠茄各器官均有表达，但在须根中的表达量基本都是最高，其中ODC有一个成员仅在须根和花苞异表达。2个支路途径基因SPDS和TRⅡ也在各器官均有表达，各UniGene在组织间表达量无太大差异。3个TAs合成的特异性结构基因PMT，CYP80F1和H6H只在根中表达，且须根中表达量都显著高于主根；H6H只在须根中有表达； CYP80F1有一个UniGene主要在主根和花中表达，须根和花苞中表达量微弱，其他器官不表达。
图2 颠茄TAs合成途径上9个基因的数字表达谱
Fig.2 Digital expression patterns of nine genes involved in tropane alkaloids biosynthesis in different tissues
2.2 4个已发表基因在不同器官中的表达 数字表达谱可以在宏观上呈现一个代谢通路上所有基因的表达模式，但是具体研究某些基因的表达量还需要qPCR验证。根据NCBI上公开的4个颠茄TAs合成基因序列（CYP80F1和TRⅡ为实验室克隆），设计qPCR引物，实验验证扩增效率均在90%～105%的有效统计范围内（表1），无引物二聚体，表明符合qPCR要求。采用双基因作为内参，根据Pfaffl Method方法计算各基因在颠茄11个器官的相对表达量（图3）。这4个基因表达结果与数字表达谱结果基本一致，PMT，CYP80F1，H6H都只在须根异性表达，主根中表达极低或根本不表达，表明这3个基因存在组织特异性；TRⅡ在各器官均有表达，且须根、老叶和花瓣中表达量最高。
图3 颠茄4个TAs合成基因的相对表达量
Fig.3 Relative expression level of four genes involved in tropane alkaloids biosynthesis in different tissues
2.3 不同器官中TAs含量 对颠茄各个器官中2种托品烷生物碱（莨菪碱和东莨菪碱）含量进行测定（n=3）（图4）。在所有检测器官中，莨菪碱相对于东莨菪碱都是主要生物碱，莨菪碱质量分数最高器官是嫩茎（3.364 mg・g-1），其次是根、幼叶、幼果和果萼（分别为1.598，1.526，1.271，1.413 mg・g-1），根中莨菪碱含量约是它们的2倍；东莨菪碱质量分数在果萼中（1.003 mg・g-1）最高，嫩茎和幼叶（分别为0.600，0.601 mg・g-1）中其次；在老茎（莨菪碱0.283 mg・g-1，东莨菪碱0.043 mg・g-1）和老叶（莨菪碱0.313 mg・g-1，东莨菪碱0.080 mg・g-1）中，莨菪碱和东莨菪碱质量分数都是最低的。总体而言，地上部位的幼嫩茎叶和果实是颠茄TAs含量积累最丰富的部位。
3 讨论
托品烷类生物碱（主要是莨菪碱和东莨菪碱）由于其显著临床药用价值和巨大市场需求，一直以来都是植物次生代谢领域研究的热点之一。目前，TAs生物合成途径已较为清晰，几个关键酶基因也得到了生化和转基因验证，这主要得益于对烟草、曼陀罗和莨菪等模式植物的研究。烟草虽然不能生产莨菪碱和东莨菪碱，但是其合成的尼古丁共享了TAs生物合成上游鸟氨酸、精氨酸到1-甲基-Δ-吡咯啉正离子的所有步骤。曼陀罗对于中游托品酮还原酶家族和苯乳酸来源支路途经的研究发挥了主要作用[10]，尽管参与该支路途径的基因仍还没有得到鉴定，但是已经否定了苯丙氨酸解氨酶PAL在TAs合成中的作用，同时也确定了是苯乳酸而不是托品酸参与了TAs的合成[11]。莨菪是研究下游H6H基因的绝佳材料，因为在莨菪中东莨菪碱是主要的托品烷生物碱，TAs合成途径上最近被鉴定出来的一个基因CYP80F1也是从莨菪中克隆[7]。颠茄作为我国法定TAs药源植物，其TAs合成途径研究已明显滞后，PMT和H6H作为该途径中公认限速酶，是唯一从颠茄中克隆到的2个基因。
图4 颠茄各个组织中TAs含量
Fig.4 Content of tropane alkaloids in different tissues
最近，颠茄转录组数据库完成并开放，本实验室陆续完成了其中TRⅡ和CYP80F1基因的克隆和验证（数据正在发表），结合该途径上其他基因的数字表达谱，颠茄中TAs生物合成进一步清晰。腐胺是广泛存在于植物体中的一种多胺，也是TAs合成的前体，合成腐胺的上游4个基因ODC，ADC，AIH，CPA连同亚精胺合成基因SPDS在颠茄各器官都有表达，因此属于初生代谢。PMT在联系初生代谢（多胺合成）和次生代谢（TAs合成）中起着枢纽作用，该基因和之后的CYP80F1和H6H均只在颠茄须根中大量表达，表明须根是TAs合成主要场所。支路途径的TRⅡ除了在须根中大量表达外，在茎叶中表达量也相当，由于打碗花精在植物体内的防御作用目前仅是假设，所以对于TRⅡ在根茎叶均高水平表达的结果有待进一步研究。
虽然须根是TAs合成主要部位，但是TAs含量最高的器官却是嫩茎、嫩叶和果萼，表明颠茄中生物碱存在转运过程。烟草中已经发现了若干个尼古丁转运蛋白[12]，大多数也能转运TAs， 生物碱转运蛋白研究是另一个热门的领域。幼嫩部位积累高浓度生物碱有其生理生态意义，对于防止食草动物和昆虫啃食幼嫩组织发挥着重要作用，同时对于颠茄采收也有指导意义。
在TAs合成途径上还存在3个值得探讨的问题，首先是腐胺合成的生源问题，鸟氨酸和精氨酸途径均能为多胺和TAs合成提供腐胺前体，但是对TAs合成起主要作用的途径仍有待研究。烟草中最新的研究发现干扰ODC表达能够显著减低尼古丁含量[13]，而反义干扰ADC的表达则没有太大效果[14]，表明鸟氨酸途径是参与尼古丁合成的主要途径。颠茄ODC数据表达谱表明存在一条在须根和花苞异表达的EST， 而ADC在各部位均有表达，强烈显示可能在须根中存在为TAs提供腐胺的特异鸟氨酸途径。其次是苯乳酸支路途径上酶基因的克隆，至今仍然没有突破，通过放射性同位素标记前体饲喂，已经在曼陀罗中确定苯乳酸、苯丙酮酸和苯乳酸能有效整合进莨菪碱的合成中[10]，但是参与该途径的基因克隆除了排除了PAL外一直没有进展[15]。最后一个问题是关于该途径转录调控，TAs合成途径是较早研究的一条次生代谢合成途径，虽然关于其次生代谢的研究仍然在各TAs资源植物中进行，但至今仍没有任何关于其转录调控和转录因子的报道，这相对于其他次生代谢途径如花色素苷、萜类吲哚类生物碱和青蒿素等已严重滞后。本研究从数字表达谱和qPCR均发现颠茄TAs合成途径特异结构基因PMT，CYP80F1，H6H均只在须根中大量表达，其他无组织特异性表达的基因也在须根中高水品表达，表明须根是TAs合成的主要场所，筛选颠茄须根转录组数据库就有可能确定上述两个问题的候选基因，为透彻认识和完善该生物合成途径提供新的思路和理论依据。
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Expression pattern of genes involved in tropane alkaloids biosynthesis
and tropane alkaloids accumulation in Atropa belladonna
QIANG Wei， WANG Ya-xiong， ZHANG Qiao-zhuo， LI Jin-di， XIA Ke， WU Neng-biao， LIAO Zhi-hua
（1.Key Laboratory of Eco-environments in Three Gorges Reservoir Region of Ministry of Education，
School of Life Science， Chongqing 400715， China；
2.Chongqing Engineering Research Center for Sweetpotato，
School of Life Science， Southwest University， Chongqing 400715， China）
[Abstract] Atropa belladonna is a medicinal plant and main commercial source of tropane alkaloids （TAs） including scopolamine and hyoscyamine， which are anticholine drugs widely used clinically. Based on the high throughput transcriptome sequencing results， the digital expression patterns of UniGenes representing 9 structural genes（ODC，ADC，AIH，CPA，SPDS，PMT，CYP80F1，H6H，TRII）involved in TAs biosynthesis were constructed， and simultaneously expression analysis of 4 released genes in NCBI（PMT，CYP80F1，H6H，TRII）for verification was performed using qPCR， as well as the TAs contents detection in 8 different tissues. Digital expression patterns results suggested that the 4 genes including ODC，ADC，AIH and CPA involved in the upstream pathway of TAs， and the 2 branch pathway genes including SPDS and TRII were found to be expressed in all the detected tissues with high expression level in secondary root. While the 3 TAs-pathway-specific genes including PMT，CYP80F1，H6H were only expressed in secondary roots and primary roots， mainly in secondary roots. The qPCR detection results of PMT，CYP80F1 and H6H were consistent with the digital expression patterns， but their expression levels in primary root were too low to be detected. The highest content of hyoscyamine was found in tender stems（3.364 mg・g-1）， followed by tender leaves（1.526 mg・g-1）， roots（1.598 mg・g-1）， young fruits（1.271 mg・g-1）and fruit sepals（1.413 mg・g-1）. The highest content of scopolamine was detected in fruit sepals（1.003 mg・g-1）， then followed by tender stems（0.600 mg・g-1） and tender leaves（0.601 mg・g-1）. Both old stems and old leaves had the lowest content of hyoscyamine and scopolamine. The gene expression profile and TAs accumulation indicated that TAs in Atropa belladonna were mainly biosynthesized in secondary root， and then transported and deposited in tender aerial parts. Screening Atropa belladonna secondary root transcriptome database will facilitate unveiling the unknown enzymatic reactions and the mechanisms of transcriptional control.