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1.1研究对象
以厦门市6家区级精防机构和38家社区卫生服务中心或乡镇卫生院为研究对象,共44家,其中6家区级精神卫生防治机构为各区疾病预防控制中心,社区重性精神疾病管理由25家社区卫生服务中心及13家乡镇卫生院负责。各社区服务中心或乡镇卫生院主要从事的精神卫生工作包括对辖区重性精神疾病患者建档管理与随访、病情分类干预、健康体检;患者家庭健康教育及护理指导、居民心理卫生知识健康教育、精神疾病患者双向转诊、应急医疗处置等。
1.2研究方法
采用自编《社区精神卫生工作人员人力资源现状调查表》,收集区级精防机构及社区卫生服务中心或乡镇卫生院主要从事社区精神卫生人员的基本情况,包括年龄、性别、专业、学历、职称、从事精神卫生工作年限、接受精神卫生知识培训等。
1.3统计分析方法
采用SPSS15.0进行统计分析。计量资料采用(均数±标准差)形式描述,计数资料采用频数资料进行描述。以P<0.05为具有统计学意义。
2结果
2.1社区精神卫生工作人员一般情况
截止2013年12月31日,厦门市登记在册的重性精神疾病患者约8328人,在管重性精神疾病患者约为5763人。35家社区卫生服务中心或乡镇卫生院均有1名兼职人员,3家社区卫生服务中心有2名兼职人员。平均每个社区精神卫生工作人员约要服务7.51万人口,服务约122名重性精神疾病患者。厦门市社区精神卫生工作人员基本情况。
2.2社区精神卫生工作人员兼职数情况
在47名精神卫生工作人员中,专职数为2人(4.26%),兼职数为2项的有37人(78.72%),3项的6人(12.76%),4项的2人(4.26%)。
2.3社区精神卫生人员接受精神卫生知识培训情况
厦门市精神卫生中心每年对从事社区精神卫生工作人员进行2~4次精神卫生专业知识培训。主要内容包括各种精神疾病相关知识,如病因、症状、治疗、愈后;重性精神疾病管理规范、随访和沟通技巧培训;社区精神卫生健康教育和健康指导;提供心理支持与危机干预;以及向精神卫生机构转介患者等知识。社区精神卫生工作人员培训的参与率为97.9%(46/47)。
3讨论与建议
本研究结果显示,厦门市社区精神卫生工作人员中兼职比例达到95.7%,同时负责其他工作;此外,社区精神卫生工作人员学历总体较高,但专业以临床医学为主,进一步提示需要给予精神卫生工作人员在精神卫生防治工作更多的时间,以及优化专业机构。这与李丽红等对深圳市的研究结果相似。其他地区经验表明,社区精神卫生工作人员的工作应该由社区全科医生承担较好,但本研究结果中47名社区精神卫生工作人员中临床医学专业仅占68.07%。此外,精神科医师、精神科护理人员、心理治疗师、社会工作者等专业人员在大部分社区卫生服务中心或乡镇卫生院都普遍缺乏。社区精神卫生工作者以中青年为主,平均年龄(35.09±9.3)岁,队伍虽然年青化能更快理解和把握工作思路,但年龄大的工作人员则有较为丰富的社区工作经验,在多部门协调及工作组织开展方面更有经验,进一步建议各社区或乡镇卫生院在精神卫生工作中新老工作人员合理搭配,优势互补,将更有利于社区精神卫生工作的开展。本研究中从业精神卫生工作平均年限仅为2.77年,人员队伍流动性较大,无法保证精神卫生工作的顺利交接,许多工作被迫停滞不前。由于精神卫生工作涉及到患者的个人信息,需保护个人秘密,患者及家属与社区精神卫生工作人员之间建立长期稳定关系,保持工作人员的稳定将有利于社区精防工作顺利推进。由于基层人员的技术力量薄弱,精神科专业知识缺乏又无法接受系统培训,虽然每年他们都会接受相关的培训,但是由于人员流行性太大,导致无法顺利完成精神卫生工作,进一步提示稳定专业人才队伍,减少人才损失是重中之重。社区精神卫生工作人员流动性大,将在医患关系和业务能力方面给社区精神卫生工作的持续发展带来负面影响。除此之外,各社区卫生服务中心还存在人员参差不齐,学历水平低、专业培养不尽规则等问题,精神疾病的康复现状等不容乐观。因此,我们建议卫生行政部门应制定相关政策,保障社区精神卫生工作者的配备及稳定性,促使高素质人才愿意到基层从事精神卫生工作。对社区人员积极加强健康教育,提高知晓率,消除社会对精神疾病的偏见和歧视,使社区居民能正确识别精神疾病的早期表现,认识到精神疾病是一种可以预防、可以治疗及康复的疾病,这将有利于社区精神卫生工作的开展。大力加强精神卫生工作人力资源的培养和开发,有计划,有针对性地采取多种方式对精神卫生从业人员进行培训以及开发,积极开展培训,提高他们对精神疾病的预防、诊断、治疗及护理,提升他们的业务水平和工作能力。
4总结
王大卫是位有独立人格、独立精神和独立思想的作家。作为他的读者,访问他的愿望,已储存在心里许久。2010年8月,中国作协安排西部地区和北京地区20位作家到北戴河创作之家休假,王大卫也在其中,让我有机会近距离、面对面采访了他。
先从王大卫的第二本书《寻找天堂》说起。2001年下半年,当他在云南知道有个叫约瑟夫・洛克的美籍奥地利植物学家、探险家、学者,半个世纪前在云南金沙江、澜沧江、怒江三江并流区生活、工作了二十八年,并写下数百万字记述纳西族历史与文化的著作,拍摄了数千张反映三江及其流域自然生态、民族风情的图片并将其推介给全世界时,他被洛克在中国28年艰苦卓绝、筚路蓝缕、惊世骇俗的经历、精神感动了。翌年开春后,便沿着洛克当年行走的足迹,自费去了云南三江并流区。三江及其流域的神奇秀美,与它的险峻萧森是交织的。在昆明时,云南美术出版社旅游编辑部主任张晓源,当着王大卫的面规劝他:“你已五十出头,别再拿生命去跑了,多少人为此耗尽一生积蓄,有的甚至一去就走上了不归路。”张晓源还不知道,王大卫已是一个股骨头坏死Ⅱ期患者。
王大卫的生命没白“跑”,也没一去不复返。2003年,中国文联出版社以高版税果断出版了他“跑”的结果――《寻找天堂》。王大卫说:“为什么要历尽艰辛历尽危险去写洛克,因为他做了中国人、云南人应该去做而没去做的事;他是值得景仰,值得纪录的。”
“寻找那些灵魂”
2004年底,王大卫不经意间在贵阳东山阳明祠翰林茶院看到东人达、东父女译注的《在未知的中国》,他被书中英国传教土旷代、纯粹的献身精神,以及他们绝然虔诚,绝然悲壮的生命经历感动了,于是又决定去近百年前英国传教士生活、工作过的乌蒙山区采访、考察。
王大卫惊讶的发现,在这片云贵接壤的苍莽的高寒山区,近百年前竟然是中国西南地区的“文化圣地”、“苗族最高文化区”。20世纪上半世纪,柏格理、王树德、高志华、张道惠等英国传教士,在以贵州威宁石门(石门坎)为中心的乌蒙山区,创造了数个文化、教育、体育、医疗史上的奇迹:首次创制苗文,结束了苗族无母语文字的历史;首次创办乌蒙山区民族学校;首次在西南苗族、彝族地区实行男女生同校(比先生1912年提出男女同校早7年);首次实践双语(汉语、苗语)教学;首次在西南地区建设足球场、游泳池;首次在乌蒙山区创办医院、孤儿院、麻风病医院……
王大卫阅读完《苗族史》、《苗族救星》、《在未知的中国》、《“窄门”前的石门坎》等记述那段历史的相关著作和近半尺高的文献资料后,潸然泪下。他被那段历史感动和震撼了。
2005年上半年,王大卫毅然携了拐杖,拖着他那条患骨病的右腿,又自费往中水、石门、彝良、昭通等地去了。去乌蒙山区采访、考察,与去云南金沙江、澜沧江、怒江和独龙江流域采访、考察一样,跋山涉水,沐风栉雨,不仅异常艰苦,而且充满危险。
2008年,以20世纪上半叶乌蒙山区建设和发展乡村教育为主线的长篇纪实文学《寻找那些灵魂》,在香港文汇出版社董事总经理何梅荣先生支持、策划下顺利出版。《寻找那些灵魂》以生动、感人、精致的笔触,真实、客观地记述了20世纪上半叶乌蒙山区“文化圣地”的繁荣景象。
王大卫说,“我是在感动状态中写这部书的;如果是为钱,为版税,为利益,我早就放弃了。谁不敬畏生命呢?”他在“缱绻石门”中说:“在乌蒙山区那些日子,我是经常在感动状态中度过的;感动不仅伴随着我的行程,而且赋予我力量。”
王大卫认为:“敬畏生命的更高意义,抑或说精神意义,就是敬畏人类文明。”
与先后五次去云南三江并流区一样,王大卫也先后五次去了云贵乌蒙山区,两次系列行走,行程数千公里,历时近两年。两次体验式苦旅,他不仅对滇西北、黔西北地区的地理、历史、文化、宗教、自然生态以及民风民俗做了深入采访、考察,也对世世代代生活在这两个地区的纳西族人、傈僳族人、普米族人、怒族人、独龙族人、彝族人、苗族人的心灵与精神世界做了细致入微的采访、考察。没有这些坚韧、备尝艰辛、殚精毕力的采访、考察,《天地无极》和《寻找那些灵魂》不会那么地沉甸、斑斓、深厚,也不会那么地富有历史、文化和审美价值。
从写作角度说,这是一种十分辛苦、严谨,有责任感和担当精神的写作态度。
王大卫这两次远距离、长时间的行走,尽管付出了巨大代价――严重损害了股骨头,也获得了巨大收获――尽管收获不属于他个人,凤凰卫视、中央电视台等多家媒体因感动、震撼于《天地无极》、《寻找那些灵魂》记述的人与历史,进而对洛克、柏格理等历史人物半个多世纪前在中国鸿烈煊赫的经历进行宣传报道,并以影视形态生动彰显了他们的精神品质和生命意义。北京群学文化影视公司总策划、总导演黄群学,还以《天地无极》、《寻找那些灵魂》为基础文本,计划筹拍两部电影。
更让王大卫欣慰的是,因为《寻找那些灵魂》,云南都市时报亲赴石门捐赠了20台电脑给当地学校;浙江温州“华福慈善基金会”也千里迢迢赴石门为89名视障儿童捐资做了复明手术;台湾信望爱公益基金会为石门民族学校923名学生每人捐赠了一套羽绒服,并捐资8000万元人民币,在贵州建立了一所公益性质的大学――贵州盛华职业学院……
一部用心血凝聚的作品,不是企望获奖,不是为了赚钱,而是让它产生社会效应,这是非同寻常的。这或许就是王大卫所言的“精神意义”。
关键词 中学生 传统文化教育 问题 对策
党的十七大报告指出“弘扬中华文化,建设中华民族共有精神家园”,强调要加强中华优秀文化传统的教育。十七大之后,教育部、文化部等部门就如何推进优秀传统文化进校园、进课堂、进教材、进入学生头脑等进行了一系列部署。但落实情况不容乐观。
一、当前中学生优秀传统文化教育遭遇“尴尬”
近年来,传统文化教育逐渐在整个中学教育体系中扮演了重要角色。但不可否认,这种教育还存在不尽完善的地方,中学生对中国传统文化的认识和理解在系统性和完整性上存在缺陷和不足,传统文化在部分中学生心目中的形象甚至还被严重误解和歪曲。主要体现在:
1、多为糟粕或腐朽落后的形象
由于中学缺少一套系统介绍传统文化的教材体系,教育和普及的力度不够,导致中学生接受的传统文化只是“散落”在各学科之中,学生了解到的只是一些片面的零碎的知识,一些学生以为传统文化都是些诸如“之乎者也”之类的东西。加之我们在对封建社会落后性进行批判时,也将传统文化“捆绑”在其中,不加甄别地予以无情批判。又由于中学生缺乏相应的辨别能力,一些传统文化留在学生记忆中大多是负面的,是“万恶旧社会”的东西,是“糟粕”。
2、落后世界或理应淘汰的形象
对中学生进行近代史教育是十分必要的,但由于学生对相应的中国古代史了解的缺失,造成部分学生认为中国自古以来经济上是落后于世界的,在文化上自然也是落后于世界的。他们对几千年曾经创造辉煌的中华文化的事实知之甚少,缺乏应有的自豪感、归属感。另外,“民主”与“进步”曾经是及中进步力量向封建势力宣战的两面旗帜。在我们对封建文化宣战的同时,也将传统文化中一些合理的部分当作革命对象进行“无情的斗争”,导致中华传统文化在当今不少中学生心目中的整体形象成了“落后世界”、“落后时代”的东西,成为早应被时代淘汰的东西。
当今社会在提倡速度、效率的同时,浮躁也成了社会的一种“通病”。在中国古代一些十分受推崇的做法或精神与之发生了激烈的碰撞,如“头悬梁锥刺股”的勤学苦练与现代提倡的“快乐学习”显得格格不入;“卧薪尝胆”的奋发精神,“愚公移山”的执着精神,被一些现代人认为是愚蠢可笑的,一些青年学生转而对当今媒体炒作的“超女超男”几近着迷,渴望自己也能“一唱”成名。再如,古人提倡“君子敏于行纳于言”,现在流行的是“敢秀你就行”、“干得好不如说得好”等等。诸如此类,发人深思。
3、晦涩难懂或令人生畏的形象
作为优秀文化承载物的“经史子集”等典籍一般都是古文,阅读起来需要相当的古代汉语水平作为基础,让人看来晦涩难懂。除唐诗宋词普及相对较好之外,其他的东西基本都离学生较远。就算是进入语文教材及作为高考内容的古文,也是让学生为了应付高考而不得不进行艰苦的背诵和逐字逐句地翻译,成为学生的“任务”和负担。再如作为国粹的京剧及一些地方戏,学生普遍反映“听不懂,看不懂,不理解,没兴趣”,对他们来说,要休闲不如看武侠或言情小说;讲艺术不如学唱流行歌曲;玩刺激过瘾不如玩电脑或网络游戏……
4、无足轻重或被边缘化形象
相对于现行高考、中考必考科目或内容来说,除了上述的“古文阅读”等作为高考内容外,其余还没有硬性要求,因而也自然不为学校、家长及学生所重视。加上传统文化教育,对于一个人知识能力的提升特别是考试成绩的提升,不会起到立竿见影的效果,对一个人品格的形成作用也是缓慢的,在上级考核评估上也存在较大难度。因而,传统文化教育在某些学校成了“说起来重要,做起来次要,忙起来不要”的可有可无的东西,从而被“边缘化”。
二、学校对中学生优秀传统文化教育存在问题的“应负之责”
当前中学生传统文化教育中存在的问题,体现在学生身上,根源却在社会、在学校、在教育者身上,特别是作为学校及教育者,应该勇于从自身找原因,承担起自己的责任。
1、教学内容设置不合理
我们见到的作为中学教学内容的传统文化部分,不够全面和系统,散见于各学科中,起着一种点缀和陪衬作用。一些教师站在本学科立场上来解读传统文化内容,甚至出现任意曲解。而学生得到的是零碎知识,甚至是歪曲的理解。
2、教育者自身传统文化知识和素养的缺陷
一位老师被学生问及“生当为人杰,死亦为鬼雄”诗句所表现的思想是不是中国优秀传统文化思想?这位老师这样回答:诗句是在宣扬一种个人英雄主义和鬼神的封建迷信思想,是我们应该批判的。呜呼!这本来是女词人李清照由于痛恨南宋当权者苟且偷安的时政而写的一首传世之作,表现出的是一种宁死不屈、舍生取义的爱国爱家精神,而我们教师却告诉学生,这是一首宣扬封建迷信的“拜鬼”之作。真是“以己昏昏,让人昭昭”。教师队伍对于中华传统文化全面系统学习和理解情况确实不容乐观。
3、教育的方式方法存在问题
如我们在中学语文的文言文学习中,采用的学习方法大都是今古对译,把大量时间用在解词释义和对句段翻译上,而大量生僻的字词和晦涩的句子很难让学生乐在其中。
4、社会的“浮躁病”对学校传统文化教育的影响和冲击
由于受高考、中考指挥棒的影响,使学校教育功利性趋强,对“应试教育”和“素质教育”两者不得不偏向于前者。再者,文化如水,润物无声。传统文化对学生各方面的影响就是这样一种“润”的过程,社会的浮躁心理也在影响着学校教育,学校不愿在这方面下功夫,甚至部分学校在上级要求时应付应付,或注重形式不看效果,使传统文化只进校园却不进学生头脑。
三、增强“四感”,为中学生开启中华文化“精神家园”之门
1、增强学生对传统文化的自豪感
一是要让学生对优秀传统文化有一个全面的认识。这是培养自豪感的基础,中学可考虑编印一套合适的传统文化教材,设置一门传统文化选修课程,以便向学生较为全面系统地介绍中国传统文化,让学生对中国传统文化有一个较为完整的总体认识。二是让学生理解传统文化的精华所在。要让学生认识到,中华民族传统文化中,既有一些应该批判的精神糟粕和过时落后的东西,但精华部分是占绝对主流地位的。如天下兴亡、匹夫有责的爱国传统;天地之间、莫贵于民的民本理念;以和为贵、和而不同的和合思想;革故鼎新、因势而变的创新精神;富贵不、威武不屈的高尚气节;扶正扬善、恪守信义的社会美德;先天下之忧而忧、后天下之乐而乐的忧国忧民思想;以及勤劳勇敢、善良守信等,这些都是中华
民族自强不息,实现民族振兴和崛起的宝贵财富和不竭动力,也是中学生应该传承的文化之“根”。三是让学生感到中华文化的灿烂辉煌。中华民族在几千年的历史长河中,创造了灿烂的中华文明,形成了优良的文化传统,不仅成为凝聚中华民族的精神纽带,而且对世界文明作出了重大贡献,是值得每一个炎黄子孙无比骄傲和自豪的,我们要以礼敬、自豪的态度善待民族优秀传统文化。
2、增强学生传承中华文化的责任感
一是向学生讲清传承中华文化的重要意义。民族文化是民族存在和发展之根,没有民族文化的传承和发扬光大,就没有中华民族的复兴,就没有中国的独立品格。二是向学生讲清自身传承中华文化的责任。要让学生理解,作为祖国的未来,肩上负有传承中华文化的重任。如果在我们这一代,离开了传统,割断传统文化的血脉和根,就会迷失自我、丧失根本,更谈不上实现民族的复兴。三是向学生讲清如何传承。我们学习传统文化,不是要回到过去,复古守旧,更不是要用传统文化来指导现代化建设,而是为了在新的历史起点上创造出符合当代精神和时代潮流的新文化。
3、增强学生对传统文化的亲近感
2008年北京奥运会开幕式向世界展示了一幅厚重而宏伟的中华民族传统文化历史画卷,令人震撼而又倍感亲切,也勾起了世界人民包括广大中学生对中华传统文化的浓厚兴趣,这就为我们进行传统文化宣传教育提供了一个很好的启示。但照本宣科,或把传统文化当作一个古董“原汁原味”地摆在学生面前,这仍然会拒学生于千里之外。当前,要想让学生亲近我们的传统文化,就必须做到:一是教育者须先受教育。要给教师们补上传统文化这一课,增强教育者自身传统文化素养。二是要在校园营造一种浓厚的传统文化环境,让学生接受传统文化的感染和熏陶。在校园文化建设及精神文明创建中,要注重把传统文化作为重要组成部分,要用好重大节假日特别是传统节日,开展形式多样、生动活泼的纪念活动,融学、演、育、乐于一体,让学生在参与中学,在娱乐中学。三是要注意扬弃。我们在传统文化教育中,要做到与时俱进,传统与现代结合,赋予其强大生命力,要注意把古代朴实的道理与现代人身边事、当前事结合,便于学生理解。
4、增强学生对传统文化的受益感
关键词:精神病专科医院;手卫生;院内感染;调查分析
手卫生是有效预防和控制疾病传播的最基本且简便易行的措施。防止医院内感染最重要的措施便是严格执行手卫生。较多的研究表明,医务工作者双手的细菌数量及种类均较其他人群多,而且在平时的诊疗工作中,直接或者间接传播疾病的危险性比空气更加严重[1]。由于精神病专科医院的特质和服务对象的特殊性,使得病房多为封闭式管理,同时空气流通可能不畅,患者多是长期住院,机体对于外界微生物的抵抗力较差,患者之间发生交叉感染的几率较大[2]。但是有学者研究发现,精神病专科医院医护人员手卫生意识较为淡薄,洗手依从性较低,可能为医院交叉感染及院内感染发生的潜在因素[3],本研究旨在调查精神病专科医院医护人员手卫生的知晓率及执行情况,制定相应的措施,提高手卫生的依从性,现报告如下:
1资料与方法
1.1一般资料 对在我院工作的医护人员共138例进行调查,其中53例医生,85例护士。
1.2研究方法
1.2.1手卫生知识知晓率调查 自制有关手卫生知识的问卷进行调查,问卷内容包含手卫生的概念、六步洗手法、正确使用消毒剂及卫生设施等。共发放调查表138分,有效回收138份。
1.2.2手卫生执行情况调查 对于医护人员进行随机抽查、隐蔽式现场观察等方法进行调查,评价标准按照国家卫生部颁发的《医务人员手卫生规范》进行。观察和记录医务人员操作时手卫生的执行情况。
2结果
2.1医生、护士对手卫生相关知识知晓情况比较 由表1可见,医务人员对手卫生知识认知不足,知晓率最高的为六步洗手法,最低的为手卫生设施相关知识,护理人员对于手卫生的知晓情况远远高于医生,两组人群间差异有统计学意义(P
2.2医生、护士在重要时刻手卫生执行情况比较 由表2可见,医护人员手卫生执行最差的时刻为接触患者前,医生和护士手卫生总执行情况差异无统计学意义(P>0.05),护士在接触清洁物品或无菌操作前、接触患者后及接触患者环境后等手卫生执行率显著高于医生群体,差异有统计学意义(P
3讨论
医院感染指的是患者入院前没有而入院后获得的感染,也包括出院后48 h之内发生的感染[4]。有报道显示,精神病专科医院是医院感染的高危场所,其医院感染发生率可高达10%。远远超过同一时期其他医疗机构的平均水平。手卫生作为控制医院感染最可靠和最重要的措施,其简便、可行,能够有效预防和控制病原体的传播。有学者研究发现,精神病专科的医护人员对于手卫生知识的知晓率较低,且在日常t疗诊疗活动中,手卫生的执行情况不乐观,缺乏对手卫生准则的了解。在调查中发现超过70%的医护人员认为平时接触的都是精神病患者,没有什么传染病,因此也就淡漠了平日里手卫生的重要性[5]。而实际上由于精神病患者的特殊性,使得其行为活动异常、生活自理能力及自我保护能力均有所下降,加之长期应用抗精神药物,住院周期长,使得机体对外界抵抗力降低,处于半封闭环境中,活动范围小,其医院感染的几率大大增加[6]。
本研究结果显示:①医务人员对手卫生知识认知度还有待提高,六步洗手法知晓率最高,手卫生设施相关知识知晓率最低,护理人员对于手卫生的总体知晓情况远远高于医生,两组人群间差异有统计学意义(P0.05),护士在接触清洁物品或无菌操作前、接触患者后及接触患者环境后手卫生执行率显著高于医生群体,差异有统计学意义(P
综上,精神病专科医院医护人员手卫生知晓及执行情况均有待提高,医院应该加强手卫生相关管理及考核,提高医护人员手卫生的依从性,降低医院感染发生率。
参考文献:
[1]杜菊梅.精神病专科医院手卫生执行率调查分析[J].包头医学院学报,2015,31(02):133-134.
[2]魏爱荣,武苏.精神病专科医院医护人员手卫生认知及影响因素的调查[J].贵阳中医学院学报,2012,34(04):209-211.
[3]段佳琴,张丽娟,郝金金.精神病医院护理人员手卫生影响因素及对策[J].医药前沿,2011,01(24):31-32.
[4]田素芳.医务人员手卫生的行为干预与医院感染的相关研究[J].中华医院感染学杂志,2012,22(13):2888-2889.
[5]林飞飞,金玉莲,杨晓丽.精神病患者手卫生现况调查及应对模式的建立[J].医学信息,2015(01):317-318.
二00二年四月,中消协委托国家电子计算机质量监督检验中心对包括柏安牌、超群牌
、沐泽牌电脑在内的共二十种品牌的电脑进行了一次检验。同年五月十六日,国家电子计算机质量监督检验中心分别出具了检验报告,结论为:超群牌、沐泽牌、柏安牌电脑电磁兼容性检验中的辐射骚扰一项不合格,其他所检测(试验)的各项技术指标全部合格。
中消协将检验结果刊登在其刊物《中国消费者》二00二第八期上。一些新闻媒体以此为素材,对比较试验情况相继进行了报道。
对此北京都贝尔科贸有限公司、北京瀚翔高新商贸有限公司和北京泽商科技发展有限公司以中消协侵害其名誉权为由,向北京市第一中级人民法院起诉,称中消协的评比试验不符合法定程序,不具有真实性和客观性,违法程序取得的结论不公正、不合法。请求法院判令中消协赔礼道歉、消除影响;赔偿经济损失和其他损失三百万元。
[关键词] 精神疾病;暴力行为;因素分析;行为重建;护理
[中图分类号] R749.3 [文献标识码] A [文章编号] 1674-4721(2014)01(a)-0040-03
精神疾病患者由于受到主观精神意识支配及外界环境影响,极易出现冲动行为,引起自杀、自伤、伤人及毁物等不良事件[1],此类患者的精神心理状况极为特殊,据文献报道,约60%住院精神分裂症患者存在既往暴力行为[2],不仅影响患者治疗的依从性,也对医务人员造成人身威胁。护士作为与患者接触最频繁的医务人员,有责任和义务降低其暴力冲动,约束行为,转变其观念,重建正常及健康的日常行为方式[3]。行为重建的前提条件,需要深刻剖析导致暴力行为的诱发因素,采取针对性的干预手段,才能起到立竿见影的效果。本文旨在总结行为方式重建所需的护理方法,现报道如下。
1 资料与方法
1.1 一般资料
选取本院精神科2010年8月~2012年12月收治的88例精神疾病患者,其中男性54例,女性34例;年龄为35~69岁,平均(49.2±1.8)岁;精神分裂症32例,癫痫伴精神障碍17例,情感性精神障碍39例;文盲19例,小学文化27例,初中文化34例,大学文化8例。所有患者入院当天均经2名具有副主任医师职称的医务人员联合诊断,确诊为相应病种,诊断参照《中国精神疾病分类与诊断标准第三版》(CCMD-3)。纳入标准:无其他心、肝、肾等重要脏器疾病;无原发性或继发性痴呆;无既往暴力史;对本研究知悉并签署同意书。
1.2 方法
①个体化健康教育:护士需全面评估患者的人格特征、文化层次及家庭背景,制订个体化健康教育方案;护士需采取通俗易懂的语言向患者介绍疾病发生原因、治疗方法、预后转归及注意事项,使其形成一套正确的认知体系;为了强化患者对疾病的认知,护士应鼓励患者复述有关知识,通过循序渐进的意识主流化,提高患者治疗的依从性及认识到协助治疗的重要性。②行为干预:护士需深入患者的内心世界,了解其暴力行为的源头事件,才能有针对性地实行干预;护士应采取诱导式发问的方法,鼓励患者进行情感表达,并倾诉内心不快,在此过程中,护士一方面需成为一名倾听者,仔细聆听其内心实况,给予情感支持及心理安慰,另一方面需全面总结其倾诉内容,初步评估不愉悦事件的源头,从而展开个体化行为干预;护士需指导患者养成良好的性格,如何控制自身情绪及掌握发泄愤怒手段,同时还需鼓励其转移攻击行为,通过言语表达发泄不满,并提高自身的行为负责能力,不轻易伤害自己和他人。③情绪控制:护士应指导患者进行冥想训练、腹式呼吸训练及全身肌肉放松训练以舒缓冲动情感;冥想训练指在病室中播放轻音乐,患者取平卧位,根据音乐节奏的变化调整思路,仿佛将自己置身于大自然中,感受自然界的一切生物,体会生命可贵,冥想训练还需保证环境安静,护士需根据音乐节律变化提供旁白,帮助患者更好地进入冥想空间;腹式呼吸训练指患者取坐位或卧位,左手置于腹部,右手置于胸部,指导患者用力吸气,左手体会到腹部上抬至最高处,再指导患者缓慢呼气,右手体会到胸部上抬至最高处,吸气与呼气的时间比为1∶1,呼吸频率控制为3~5次/min为宜,每次训练时间为10 min,早晚各1次;全身肌肉放松训练指患者取平卧位,从面部肌肉开始,依次从颈部、背部、胸部、腹部、双上肢、双下肢肌肉收缩舒张,每处肌肉舒缩的时间应控制在1∶1为宜,每次训练15 min,早晚各1次。④认知干预:对于发生暴力行为的患者,护士应待其情绪恢复平静后,询问其暴力后的心境感受,并鼓励其写下自己的想法;对于存在自责心理的患者,护士应帮助其走出内心谴责,并指导其转变心理行为,减少心理冲动。
1.3 观察指标
①患者干预前及干预后第4周末接受简明精神病评定量表(brief psychiatric rating scale,BPRS)测评,BPRS是一个评定精神病症状严重程度的量表,共18项,按5类因子进行记分,即0~4分,总分为0~72分,总分反映疾病的严重性,总分越高,病情越重。②患者干预前及干预后第4周末接受护士用住院患者观察量表(nurses′ observation scale for inpatient evaluation,NOSIE)测评,NOSIE主要用于住院的成年精神病患者,本量表为频度量表,按照具体现象或症状的出现频度,分为0~4分:0分为无,1分为有时是或有时有,2分为较常发生,3分为经常发生,4分为几乎总是如此。③记录患者干预后暴力行为发生的情况。
1.4 统计学方法
采用SPSS 19.0统计软件对数据进行分析和处理,计量资料以x±s表示,采用t检验,计数资料采用χ2检验,以P
2 结果
2.1 干预前后BPRS相关指标的比较
患者干预后BPRS相关指标评分均低于干预前,差异有统计学意义(P
2.2 干预前后NOISE相关指标的比较
患者干预后NOISE相关指标激惹、精神表现、迟缓及抑郁评分均低于干预前,差异有统计学意义(P
2.3 干预前后暴力行为发生率的比较
患者干预前发生暴力行为63例,暴力行为发生率为71.6%(63/88);干预后发生暴力行为14例,暴力行为发生率为15.9%(14/88),差异有统计学意义(P
3 讨论
精神疾病患者发生暴力行为的概率极高,不仅危害其自身的健康状况,也对周围的医患人群造成伤害[4]。暴力行为是精神科引起医患纠纷的主要因素之一,因此,研究此类特殊人群出现暴力行为的危险因素及相应护理策略,在临床上具有重要的指导意义。暴力行为虽然具有突发性、冲动性,但通过系统化调研,能整合出暴力行为的共性特点,为护理干预提供预见性导向[5]。
暴力行为的诱发因素如下。①环境突变:精神病患者自制能力极差,一旦入院面对陌生环境,原来的生活习惯被打乱,接受强制治疗,会使其产生紧张、恐惧及被害心理,因此,患者出于自卫考虑,会在医务人员毫无防备下展开暴力行为;②自由活动受限:患者入院后,常会被限制自由,由于突然失去与家属的联系,会使其出现绝望感与无助感,从而出现因内心不安导致暴力行为的发生;③异常精神活动支配:多数精神病患者存在幻听、幻视及兴奋性精神活动[6],这些意识活动会诱发人格障碍,使其控制能力下降,产生突发性暴力行为。
临床上应采取如下应对方法:①尽可能地根据患者日常生活习惯摆放物品,提高其心理舒适度及满足感;②在医务人员监管下,适当地给予患者活动空间,合理安排家属探视时间,提高其安全感;③护士应提高自身的专业素养,掌握异常精神活动出现的前兆,及时汇报医生给予干预。
本文通过行为重建的护理方法在一定程度上减少了患者暴力行为的发生率,研究结果表明,干预后患者的BPRS、NOISE评分及暴力行为发生率均低于干预前。个体化健康教育可使患者整体把握自身疾病,形成系统的认知体系,明白配合治疗的重要性,树立护患信任,并为以后护理干预打下坚实的基础。行为干预主要通过心理交流方式了解患者的心理状况,明确其负性情绪及暴力行为的溯源事件,并制订个体化行为干预。护士应规正患者的行为特征,指导其控制情绪,转移暴力行为,可通过言语发泄内心愤恨,以提高患者的行为责任感[7]。另外,由于精神病患者的情绪通常较为暴躁,如何控制并调整好情绪显得极为重要。腹式呼吸训练可提高患者的气体交换效率,减轻其肌肉张力,从而达到身心放松的效果。冥想可指导患者回归内心深处,以提高心理舒适度。全身肌肉放松训练可促进人体儿茶酚胺的合成及释放,从而出现愉悦感或欣,以缓解冲动行为[8]。
综上所述,对于精神病患者,在了解暴力因素的基础上,实施行为方式重建,可减轻其暴力行为,有效保证医患安全,值得临床推广。
[参考文献]
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[关键词] BP网络; 旅行社; 人力资源危机; 预警模型; 危机识别
doi : 10 . 3969 / j . issn . 1673 - 0194 . 2014 . 03. 034
[中图分类号] F272.92 [文献标识码] A [文章编号] 1673 - 0194(2014)03- 0074- 05
人力资源危机在旅行社行业吸引人才、培养人才、留住人才的各个环节都有体现,影响旅行社行业人力资源管理的效果,影响旅行社行业的稳定与发展。因此,如何对旅行社行业人力资源危机状况进行评判,进而采取应对措施,是当前旅行社行业人力资源管理的一个迫切任务。本文引入人工神经网络中的BP网络,构建河南省旅行社人力资源危机预警模型,以期提早应对危机。
1 BP网络简介
BP网络由一个输入层、若干隐含层和一个输出层构成,是一种具有3层或者3层以上结构的多层神经元网络,网络中的神经元分层排列,它的左、右各层之间各个神经元实现全连接,即左层的每一个神经元与右层的每个神经元都有连接,而上下层各神经元之间无连接。每一层内神经元的输出均传送到下一层,这种传送由连接权来达到增强、减弱或抑制的作用,除了输入层的神经元以外,隐含层和输出层神经元的净输入是前一层神经元输出的加权和。每个神经元均由它的输入、活化函数和阈值来决定它的活化程度。在人工神经网络的实际应用中,80%~90%的模型是采用BP网络或它的变化形式。BP网络可以有多层,但前向三层BP网络最具代表性,应用也最为广泛。
2 基于BP网络的河南省旅行社人力资源危机预警模型的构建
2.1 构建旅行社人力资源危机预警指标体系
人力资源危机预警指标体系由一系列能敏感反映人力资源管理活动状态和结果表现的指标构成。笔者通过分析河南省旅行社人力资源危机现状,遵循灵敏性、科学性、可测度性、相对独立性、预见性和可比性等原则,筛选出独立性较强、代表性较强和贡献性高的最小评价指标体系,本文借助了专家打分的方法,各指标的具体值域范围见表1。
2.2 建立基于BP网络的旅行社人力资源危机预警模型
2.2.1 用主成分分析法对模拟数据进行预处理
根据表1,本文共模拟了8组数据(见表2),以建立基于BP网络的河南省旅行社人力资源危机预警模型。
对表2中的极小值指标(如员工隐性流失率等)先取倒数,再利用SPSS统计分析软件进行主成分分析,所得结果见表3。
本文共提取出6个公共因子,其特征值的方差贡献率累积达到了96.044%(通常情况下,累积贡献率达到85%即可)。本文选择参数0.65作为划分主要、次要指标的载荷系数临界值,以满足下一步研究的要求。最后得到由10项指标构成的新的人力资源投资风险预警评价指标体系,如表4所示。
2.2.2 BP网络模型输入节点的选择
根据 Kolmogorov定理(即映射网络存在定理),一个三层BP网络即可在任意希望的精度上实现任意的连续函数 。因此,本研究中采用三层BP网络模型。影响旅行社人力资源危机度的评价因子主要有人才引进率、招聘引进员工胜任度等10个,因此,可确定BP网络的输入层节点数为10。
本文选择上述简化后的10项指标作为BP模型的输入节点。由于BP神经网络的隐层一般采用Sigmoid转换函数,为提高训练速度和灵敏性以及有效避开Sigmoid函数的饱和区,一般要求输入数据的值在0~1之间。因此,需要对输入数据进行预处理。
进行输入节点的输入时,需要先对原始的模拟数据进行归一化处理,将它们转化为闭区间[0,1]上的无量纲性指标值。本着尽可能体现被评价对象之间的差异化原则,即使其离差平方和最大的原则,本文采用了极值处理法进行归一运算:
若Mj = max{xij},mj = min{xij} 则x′ij = ■
式中,xij为原始数据,x′ij∈[0,1]为归一化后的无量纲性指标,其归一化结果见表5。
2.2.3 BP网络模型隐层节点的选择
对于隐层节点的选择是一个非常复杂的问题,因为神经网络巨量并行分布的结构和非线性的动态特性决定了从理论上得到一个简单通用的简洁解析表达式或隐层单元确定公式是十分困难的,甚至是不可能的。隐层节点数的选择与问题的要求和输入输出单元的多少都有直接关系:如果隐节点数过少,网络不强壮,就不能识别以前没有看到的样本,容错性就差,或由于网络太小可能训练不出来;但隐节点太多又会使学习时间过长,误差也不一定最佳。因此,必定存在一个最佳的隐节点数,可用公式q = ■ + a作为参考。其中,q为隐含节点数,m为输入神经元数,n为输出神经元数,a为1 ~ 10之间的常数。
为使隐节点数更合适,本文将根据网络的实际输出与期望输出矢量的均方误差大小及训练步数的多少来综合确定,最终隐含节点选为9,其模型训练精度最佳,训练步数也最少。
2.2.4 BP网络模型输出节点的选择
从表5中选出对应于新预警评价指标体系的数据再次进行主成分分析,步骤同前,所得结果如表6所示。
本文共提取出4个公共因子,其特征值的方差贡献率累积达到92.232%。它们共同决定旅行社人力资源危机的状况。
公因子1上载荷值大于0.65的指标有:招聘引进员工胜任度、培训与员工需求吻合度、员工对评价制度和使用制度的满意度,涉及旅行社人力资源危机的多个部分,可称之为“综合因子”;公因子2上的载荷值大于0.65的指标有:人力资本投资收益率、病假发生率,可称之为“员工发展与保健因子”;公因子3上的载荷值大于0.65的指标有:员工对激励机制的满意度、缺勤率,可称之为员工“价值取向因子”;公因子4上的载荷值大于0.65的指标主要有:员工离职增长率,主要是对员工流失指标的反映,可称之为“员工流失因子”。
第一,计算各公因子的得分。由于在查找旅行社人力资源危机风险因素提出对策时,通常只研究各公共因子上的主要载荷指标,而不考虑其他冗余指标。因此,为使警情分析输出更精确,从而能更准确地分析旅行社人力资源危机风险的内容,更有针对性地提出人力资源危机预警对策,本文忽略各公因子内部的冗余指标(载荷系数小于0.65的指标),只根据主要指标(载荷系数大于等于0.65的指标)的载荷系数,通过下列算式来计算各公共因子得分:
FP1 = ■
FP2 = ■
FP3 = ■
FP4 = ■ = t34
式中,tij是表中指标Xij均值为0、标准差为1的标准化变量;p为数组序号,p = 1,2,…,8。?摇
第二,以各公共因子的方差贡献率占4个因子总方差贡献率的比重作为权重进行加权汇总,得出各数组的最终因子综合得分Fp:
Fp = ■
通过综合因子Fp(见表7)来反映旅行社人力资源危机程度,据此制定相应的防范策略。BP网络最后一层的传输函数Purelin使得网络输出可以是任意值,因此,本文将旅行社人力资源危机预警层次设置为4个级别,如表8所示,BP网络的输出层节点数为4,代表不同的旅行社人力资源危机等级,即安全、基本安全、风险和较大风险,4个等级对应的标准输出分别为[1000]、[0100]、[0010]、[0001]。
依前分析输出节点选择4个,10组输出的4个端子的数值就对应于10组人力资源危机预警指标数据所反映的旅行社人力资源危机状况。
结合旅行社人力资源危机的表现形式,本文提出了以下人力资源危机等级所对应的标准(见表8)。
Ⅰ级状态:旅行社人力资源各方面管理良好,没有明显危机迹象,处于安全状态,但仍需注意各方面的情况,防止突发性危机的出现。
Ⅱ级状态:旅行社人力资源各方面正常,基本看不出什么问题,不过需要提前采取相应措施以提防潜在危机和突发性危机的发生。
Ⅲ级状态:旅行社人力资源出现危机,会带来一定的损失,但不明显,会对旅行社人力资源各方面造成一定负面影响。
Ⅳ级状态:旅行社人力资源出现严重危机,对人力资源各方面造成非常明显和严重的影响,甚至导致旅行社倒闭。
综上所述,本文建立的BP网络人力资源危机预警模型的构造为:10 × 9 × 4(即10个输入神经元,9个隐层神经元,4个输出神经元)。
3 基于BP网络的旅行社人力资源危机预警模型的训练和检测
本文采用MATLAB工程计算软件的神经网络工具箱设计、训练并检测已建立的BP神经网络预警模型。
3.1 基于BP网络的旅行社人力资源危机预警模型的训练
本文将表6归一化后的前6组指标值作为BP网络的输入,由表7确定的风险程度矩阵作为与之相对应的期望输出,导入MATLAB的图形用户界面――GUI(Graphical User Interfaces),即可创建网络进行训练。主要训练参数设置如下(未提及的参数均采用默认值)。
(1) 训练函数:TRAINLM函数,它适用于中、小规模网络的函数拟合问题,收敛快,收敛误差小。
(2) 权值调节规则:LEARNGDM函数,采用动量梯度下降方法对权值和阈值进行调整。
(3) 网络层数:3层。
(4) 性能函数:MSE函数,表示输出矢量与目标矢量之间的均方误差。
(5) 期望误差:ε = 0.001。
由图1可知,当网络训练至第三步时,网络性能达标。BP网络模型的训练输出见表9,至此,BP网络模型训练完毕。
3.2 基于BP网络的旅行社人力资源危机预警模型的检测
同理,用第7、第8组归一化后的指标数据及对应的风险程度矩阵作为模型检测的输入和期望输出,检测结果见表10。检测结果表明,实际输出与期望输出十分接近,误差满足要求。
由此可以得出结论,基于BP网络建立的旅行社人力资源危机预警模型是有效的,可以用这个经过训练、检测完毕的BP网络危机预警模型对旅行社人力资源危机进行预警实证研究,以防范人力资源风险,保证旅行社企业良性运行,同时对整顿治理旅游市场秩序起到监督和促进作用。
主要参考文献
[1] 许谨良. 风险管理[M]. 第2版. 北京:中国金融出版社,2003:53-55.
作者:张惠文,袁小兵,张拥军,顾学范
【关键词】 苯丙酮尿症
【Abstract】 AIM: To gain more insight into the mechanism of neuronal injury in phenylketonuria patients and to investigate the effect of phenylalanine on intracellular free calcium concentration ([Ca]i) of embryonic rat cortical neurons. METHODS: Calcium imaging was used to observe the influence of Lphenylalanine and its derivatives on [Ca]i. RESULTS: High concentration of Lphenylalanine (Phe, 10 mmol/L) and DLβphenyllactic acid (PL,10 mmol/L)decreased [Ca]i, while phenylacetic acid (PAA, 10 mmol/L) decreased, then increased, and again decreased [Ca]i. With the normal extracellular balance solution replaced by calciumfree and natriumfree balance solution, PL did not change its effect on intracellular free calcium. With Thapsigargin (100 nmol/L) added to the normal extracellular solution to inhibit the sarcoplasmic/endoplasmic reticulum Ca2+ATPase(SERCA), PAA decreased [Ca]i, and no subsequent increase of [Ca]i was observed. With the same concentration, PL and PAA had more significant effects on immature neurons. CONCLUSION: Combining the result of gene chips, Lphenylalanine and its derivatives can activate plasma membrane Ca2+ATPase and accelerate the extrusion of intracellular free calcium from neurons, thus resulting in the decrease of [Ca]i.
【Keywords】 phenylketonuria; calcium imaging; phenylalanine
【摘要】 目的: 探讨苯丙酮尿症患者脑损伤的病理生理机制,分析苯丙氨酸和胞质游离钙有无关系. 方法: 用钙成像技术检测氨基酸及其衍生物对胚鼠皮层未成熟神经元胞质游离钙浓度的影响. 结果: 高浓度苯丙氨酸降低胞质游离钙,苯乙酸使胞质内钙浓度降低后升高最后又降低,苯乳酸使胞质内钙降低更明显. 使用无钙离子无钠离子的细胞外液,苯乳酸降低胞质内钙的作用无明显影响;使用Thapsigargin阻断内质网上钙泵,苯乙酸虽仍能降低胞质内钙,但没有降低后又升高的现象. 当苯丙氨酸、苯乙酸和苯乳酸相同浓度时,苯乙酸、苯乳酸较苯丙氨酸的作用更强. 结论: 结合我们以前的观察结果,苯丙氨酸可能激活plasma membrane Ca2+ATPase,促进神经元胞质内钙外排,进而导致神经元胞质内钙浓度降低.
【关键词】 苯丙酮尿症;钙成像;苯丙氨酸
0引言
苯丙酮尿症是遗传代谢性疾病,由于苯丙氨酸羟化酶基因突变导致的酶活性缺失或者降低,苯丙氨酸不能转化为酪氨酸,体内苯丙氨酸及其衍生物苯乙酸、苯丙酮酸、苯乳酸等贮积. 苯丙酮尿症的研究历史较长,生化研究显示高浓度的苯丙氨酸抑制Na+, K+ATP酶、肌酐激酶活性,电生理研究显示高浓度的苯丙氨酸抑制海马神经元N型钙通道开放,抑制NMDA受体激活,抑制突触前膜谷氨酸释放,抑制突触后谷氨酸能兴奋性电位[1,2]. 我科用基因芯片的方法研究了高浓度苯丙氨酸作用下胚鼠皮层未成熟的原代培养神经元基因表达谱的变化,着重观察了基因芯片中钙离子相关蛋白,发现高浓度苯丙氨酸能增加calmodulinⅠ, Ca2+/calmodulindependent protein kinase, brain typeⅡ, L型Ca2+ channel的基因表达,降低calmodulinⅡ, calcineurin, plasma membrane Ca2+ATPase 2b和2a的基因表达[3]. 因此,本实验拟用钙成像技术检测氨基酸及其衍生物对神经元胞质游离钙浓度的影响.
1材料和方法
1.1胚鼠大脑皮层神经元原代培养孕14 d SD大鼠,取出胚鼠,分离大脑皮层,剥除皮层外软脑膜,1.25 g/L胰蛋白酶37℃消化10 min后,滴入胎牛血清终止消化,加入含B27的神经细胞培养基(Neurobasal, Gibcol). 用细口径吸管反复轻吹打,得到细胞悬液,以中等密度接种于0.5 g/L右旋多聚赖氨酸包被的盖玻片上,盖玻片预置于35 mm的培养皿中,37℃, 50 mL/L CO2培养箱中培养2~7 d备用.
1.2溶液配制标准细胞外液,无钠细胞外液,无钙细胞外液配方见Tab 1. L苯丙氨酸(Lphenylalanine, Phe, Sigma),苯乙酸(phenylacetic acid, PAA, Sigma),苯乳酸(DLβphenyllactic acid, PL, Sigma)用标准细胞外液配成40 mmol/L. Thapsigargin (Sigma)用标准细胞外液配成100 mmol/L贮存液,保存于-20℃.表1各种细胞外液配方(略)
1.3钙显影方法观察苯丙氨酸及其衍生物对神经元胞质游离钙的影响Fluo4, AM 和FuraredTM, AM(Molecular Probe Inc.) 配成2 mmol/L的二甲亚砜(Sigma, 纯度999 mL/L)溶液,分装后-20℃避光保存备用. 这两种染料有相近的激发光波长(约488 nm)和不同的发射光波长[Fluo4, (530±15) nm; Furared (640±15) nm]. Fluo4的发射光强度随着胞内游离钙离子浓度升高而增加,而Furared的发射光强度随着胞内游离钙离子浓度升高而降低. 平铺于盖玻片上的细胞在细胞外液中洗一次后,与钙指示剂Fluo4(终浓度5 μmol/L)和Furared(终浓度5 μmol/L)室温下孵育30 min,在细胞外液中洗3次后,将细胞置于标本槽中,30 min后共聚焦显微镜(LSM 510, Zeiss公司,德国)载物台上观察. 上述操作避光进行. 标本槽为自制的方形有机玻璃皿,底部用石蜡与一薄玻片封接. 药品以不同细胞外液配成2倍终浓度保存,1 wk内使用. 标本槽中有0.5 mL细胞外液, 给药前均记录5 min对照,然后将0.5 mL的药物沿槽的边缘加入.
1.4荧光图像的记录和[Ca2+]i的计算荧光图像由Zeiss激光扫描共聚焦显微成像系统记录. 仪器和软件设置: 40×/1.3倍油镜,激发光波长为488 nm,CH3和CH4分别是针对485和635 nm波长荧光信号的检测通道. 激光每隔10 s扫描一次细胞,扫描时间1 s,每种药记录13 min.
通过Region of Interest测得细胞区域CH3, CH4通道的荧光强度,计算Fluo3的发射光强度与Furared的发射光强度的比值可以反映胞内游离钙的相对浓度,同时可以消除细胞几何形状对胞内钙浓度测量的影响.
1.5数据处理将每1 min的6张图像的比值取平均值作为该时间段胞质游离钙浓度(ci),将给药前5 min记录的30张图像荧光强度的均值作为胞质游离钙的基础值(c0),利用以下公式计算每分钟胞质游离钙随时间的变化曲线.
2结果
2.1苯丙氨酸对神经元胞质游离钙的影响由于神经元在静息状态下胞质游离钙有自发性的波动,当胞质内钙在基础值上下10%变化时我们不认为是药物的作用. 以此作为标准,用Fluo4和Furared联合作为钙指示剂时,10~20 mmol/L苯丙氨酸降低神经元胞质游离钙浓度;而当浓度降至5 mmol/L时,观察不到明显的胞质游离钙变化. 5~20 mmol/L的酪氨酸对胞质游离钙无明显影响(结果未显示)(Fig 1).
2.2苯乳酸对神经元胞质游离钙的影响从Fig 2可以看到高浓度苯乳酸降低胞质游离钙,当苯乳酸浓度在5 mmol/L时,胞质游离钙先降低后逐渐升高,而当浓度为1 mmol/L时,胞质游离钙有升高的趋势.
2.3苯乙酸对神经元胞质游离钙浓度的影响10 mmol/L苯乙酸使胞质游离钙降低后升高,最后又降低. 加入Thapsigargin (终浓度100 nmol/L)到细胞外液中,胞质内钙轻度升高. 加入Thapsigagin 3 min后,再加入10 mmol/L苯乙酸,胞质内钙持续降低,此后没有升高现象(Fig 3). 说明10 mmol/L苯乙酸使胞质游离钙降低后升高,是因为内质网钙库释放钙离子到胞质.
2.4低pH值盐酸对神经元胞质游离钙浓度的影响由于苯乙酸、苯乳酸为酸性物质,10 mmol/L苯丙氨酸、苯乙酸、苯乳酸的pH值分别为7.30, 4.12, 3.66, 为了分析苯丙氨酸、苯乙酸、苯乳酸降低神经元胞质游离钙的作用是否由于这些物质的化学特性酸性引起,我们将pH值为3.66 HCl溶液作用于神经元,发现胞质游离钙浓度升高(Fig 4).
2.5不同细胞外液条件下苯乳酸对神经元胞质游离钙浓度的影响使用无钠溶液细胞外液替换标准细胞外液,阻断神经元胞膜Na+/Ca2+交换; 使用无Ca2+的细胞外液,以阻断胞外钙流入细胞内,再加入10 mmol/L苯乳酸,均能使胞质游离钙降低. 在无钠溶液细胞外液中,10 mmol/L苯乳酸使胞质钙有短暂轻度升高(Fig 5).
3讨论
钙离子是真核细胞内最普遍的第二信使[4,5]. 胞质游离钙浓度由进入胞质的钙和离开胞质的钙两方面的因素决定. 细胞外钙通过钙通道进入胞质或者内质网或者肌质网释放钙进入胞质,都可使胞质游离钙升高. 胞质内钙可通过细胞膜Ca2+ATPase (Plasma Membrane Ca2+ATPase, PMCA)和Na+/Ca2+交换子离开胞质,也可通过内质网或者肌质网上的Ca2+ATPase (sarcoplasmic/endoplasmic reticulum Ca2+ATPase, SERCA)回到内质网或者肌质网. 线立体能螯和部分钙离子然后缓慢释放到胞质[6]. 使胞质游离钙增多的疾病很常见,如老化、阿尔茨默氏病、缺血缺氧性脑病. 使胞质静息游离钙降低的疾病少见,我们仅检索到酸性磷脂酸和铅中毒时铅降低胞内游离钙浓度的相关文献[7,8].
临床资料提示氨基酸和钙有一定关系. 饮食中富含高氨基酸会引起高钙尿症. 苯丙酮尿症患儿有骨质疏松、高钙血症、高钙尿症等症状[9]. Kostyuk等[10] 用电压钳记录PC12细胞的高压激活钙通道,胞内注射20 μmol/L苯丙氨酸使该通道电流降低(38±15)%,Dzhura等[11]提取PKU模型大鼠脑的mRNA,注入到非洲爪蟾的卵母细胞内,通过双电极膜片钳记录到高压激活的钙通道电流,其电流明显低于注入正常鼠脑mRNA的卵母细胞. 胃肠道细胞、甲状旁腺细胞、少突胶质细胞的胞膜存在一种钙受体(calcium sensing receptor, CaR),其生理性配体主要是细胞外钙. 已经证实L型氨基酸,特别是芳香簇氨基酸,苯丙氨酸,色氨酸能激活膜上的钙受体[12]. CaR在大脑主要表达于少突胶质细胞和下丘脑神经元,本实验所用标本是大脑皮层的神经元,所以我们没有观察到如Conigrave等[12]报道的现象. 本实验所用的苯丙氨酸及其衍生物浓度较高,当使用低浓度时,观察不到神经元明显的反应,这可能也与我们所用的检测方法相关,钙成像没有电生理方法敏感. 我们用基因芯片方法研究苯丙氨酸对未成熟原代神经元基因表达谱的影响时所用的浓度是0.9 mmol/L,基因芯片的结果即显示与钙相关的蛋白表达水平发生改变.
本实验观察到,虽然苯丙氨酸及其衍生物最后都是降低神经元胞质游离钙浓度,但它们的影响模式不一致. 不同浓度的苯丙氨酸一直降低神经元胞内游离钙,酪氨酸对神经元胞内游离钙无明显影响,而苯乙酸及苯乳酸对神经元胞内钙的影响比较复杂,可能与苯乙酸及苯乳酸的酸性特别强有一定关系. 用与10 mL苯乳酸相同pH值的稀盐酸加到细胞外液中,结果神经元胞质游离钙升高,这也和以前报道一致[13]: 酸中毒时氢离子可以激活神经元内质网钙库,使胞质钙升高. 单独使用苯乙酸时,神经元胞质内钙降低后有一升高现象;先用Thapsigargin抑制内质网上的SERCA,再加入苯乙酸,则只有降低而无升高现象. 推测苯乙酸使神经元内钙升高是由于苯乙酸的酸性引起的. 近年来发现苯乙酸和苯乳酸有特殊的药理学作用. 如苯乙酸可以单独或者联合维甲酸诱导多种肿瘤细胞分化[14],在面粉内加苯乳酸有抗真菌作用[15].
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胞质游离钙降低可能是因为胞外钙内流减少,内质网释放钙减少,或者是因为胞内钙外排增加. 我们用不含Ca2+的细胞外液代替标准细胞外液,10 mmol/L苯乳酸仍能降低神经元胞质内游离钙;用Thapsigargin抑制SERCA, 10 mmol/L苯乙酸仍能降低神经元胞质内游离钙. 我们推测苯丙氨酸及其衍生物可能主要通过促进胞内钙外排而降低胞质内游离钙. 用不含Na+的细胞外液代替含Na+的细胞外液以阻断细胞膜上Na+/Ca2+泵,结果10 mmol/L苯乳酸仍能降低神经元胞质内游离钙. 我们推测苯丙氨酸及其衍生物至少能能通过激活PMCA,使胞质内钙外排,导致胞质静息游离钙浓度降低. 我们以前基因芯片的结果也提示在高浓度苯丙氨酸作用下,神经元PMCA2b,2a基因表达水平下降. PMCA有4种异构体,每种异构体又产生多个剪切片段,与Ca2+的亲和性很高,维持着细胞质静息[Ca2+] 在50~150 nmol/L水平[16]. PMCA2主要存在于神经元,它与钙调蛋白(calmodulin)的亲和力是其他异构体的3~4倍[17]. PMCA的活性受多种因素调节[18,19].
氨基酸不仅可以作为蛋白质合成的底物,它可在基因转录、蛋白翻译、蛋白降解等不同水平调节细胞的功能. 不能透过细胞膜和不能继续被细胞代谢的亮氨酸和苯丙氨酸的类似物能引起与亮氨酸和苯丙氨酸作用一致的结果,可能细胞膜上就存在着氨基酸受体或者感受器,识别不同的氨基酸,引起胞内信号转导[20]. 在酵母细胞膜上发现了能感受胞外氨基酸浓度的复合体Ssy1pPtr3pSsy5p[21]. PMCA是否是膜上苯丙氨酸的感受器,是否苯丙氨酸通过PMCA影响胞质内钙离子浓度,进而引起一系列胞质内反应还需进一步研究.
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【关键词】 原始生殖细胞;细胞分化;Western 免疫印迹;神经干细胞;小鼠
[ABSTRACT] Objective: To explore the inducing effect of microencapsulation on differentiation of PGCs(primordial germ cells) into neuronal cells. Methods: Took cerebra from the 13days old mouse embryos,encapsulated neuronal stem cells(NSCs) collected from the cerebra into microencapsulation. EBs(embryoid bodies) were formed from the PGCs collected from13 days mouse embryos by suspension culture. The microencapsulation were put in the culture plates after the EBs were plated on gelatincoated culture plates. Furthermore, the same amount of EBs were plated on gelatincoated culture plates without microencapsulation for spontaneous differentiation. The neuronal cells were detected with NESTIN, NSE and GFAP immunohistochemical staining. Results: The rate of differentiation by microencapsulation was distinctly higher than the rate of spontaneous differentiation. Conclusion: The nutritional components secreted from the microencapsulation enter the culture medium and can induce the differentiation of EBs into neuronal cells effectively.
[KEY WORDS] Primordial germ cell; Cell differentiation; Western blot; Neuronal stem cells; Mouse
原始生殖细胞(primordial germ cells, PGCs)是一种胚胎源性干细胞,具有体外分化为各种组织的能力[1],我们已探讨了其体外自发分化的能力,发现其分化为神经样细胞的百分比最大。为了进一步提高神经样细胞的分化率,本文将重点探讨PGCs向神经样细胞定向分化的新方法,即微囊诱导法。
1 材料与方法
1.1 材料
ICR小鼠。
1.2 方法
1.2.1 PGCs的分离、提取和体外培养 实验使用自配13 d胎鼠,取两侧生殖嵴,用PBS洗3次后添加0.25%胰蛋白酶消化,吹打,然后过60目细胞筛,将PGCs按2.5×106/mL的密度接种于35 mm的培养瓶中进行体外培养。
1.2.2 悬浮培养 (1)类胚体(embryoid bodies, EBs)的形成:取分离提取的PGCs,置于培养瓶中进行悬浮培养,培养期间每隔1~2 h摇晃1次培养瓶防止PGCs贴壁。换液方法:将含细胞的培养液放入离心管里1 000 r/min离心10 min,弃上层液体,补足培养液。(2)EBs的鉴定: 使用免疫组织化学法,对EBs进行甲胎蛋白(alpha fetoprotein, AFP)标记,将悬浮培养4 d的EBs经4%多聚甲醛固定15 min,然后用甲醇在-20℃固定5 min,5%BSA覆盖EBs,处理45 min以封闭非特异性染色。然后滴加一抗(兔抗人AFP多克隆抗体工作液购自中杉公司,ZA0008),在4 ℃孵育过夜,继之滴加生物素化山羊抗兔IgG,最后滴加DAB显色。
1.2.3 微囊制作 (1)神经干细胞的提取及鉴定:①将孕13 d 胎鼠的大脑半球取出,在解剖镜下剥去软脑膜,然后将其置于预冷的含有谷氨酰胺的高糖DMEM培养液中,最后用PBS冲洗3遍,再加入0.25%胰蛋白酶于37 ℃水浴消化10 min,每3 min摇匀1次。消化完毕后将消化液吸出,然后加入培养液终止消化,吹打成单细胞悬液后放入37 ℃,5%CO2培养箱中培养。所用培养液为高糖DMEM,内添加10% FBS(Hyclone)和200 mM L谷氨酰胺(Lglutamine, LGlu)(Hyclone)和1∶1的青链霉素。②将形成的神经球放入预先用0.05%PL多聚赖氨酸(Sigma)包被的含有盖玻片的小皿中培养24 h后,使用免疫组化的方法对神经干细胞巢进行Nestin标记。(2)微囊制作:首先将含原代NSCs的培养液1 000 r/min,离心5 min, 加入上述培养液调整NSCs的浓度为1.8×106/mL,将该细胞悬液与1.5%海藻酸钠(Sigma)1∶1混合,避免气泡的产生。然后用装有4号针头的1 mL注射器将液滴均匀并快速的滴入含1.1%CaCl2的小皿中,形成凝胶珠,吸掉CaCl2后加入0.05%PL多聚赖氨酸(Sigma)作用6 min, 然后再用1% CaCl2(北京红星化工厂)清洗2遍,再与0.15%海藻酸钠作用5 min,用1% CaCl2和0.9%NaCl分别清洗,最后再与0.05 mol/L柠檬酸钠(北京化工厂)作用6 min,用0.9%NaCl清洗,然后放入培养液培养。
1.2.4 EBs的体外分化 (1)微囊的定向诱导分化:悬浮培养第4天后,收集含有EBs的培养液,800 r/min离心5 min,弃上层液体,下层留有0.2~0.3 mL液体轻轻吹打,然后将液体放入0.1%明胶包被的24孔板中,实验分两组,一组是待EBs贴壁后将微囊放入孔板中,每孔放入10个微囊,另一组则不加微囊让其自发分化,每组分别重复做6次。(2)分化细胞的鉴定:使用免疫组织化学法,对分化的神经样细胞进行NESTIN、NSE和GFAP标记。将分化的细胞用4%多聚甲醛固定15 min,然后用甲醇在-20 ℃固定5 min,再用5%BSA覆盖细胞处理45 min以封闭非特异性染色。然后分别滴加一抗(兔抗Nestin多克隆抗体;鼠抗人NSE单克隆抗体购自北京中杉金桥生物技术有限公司,ZM0203;兔抗人GFAP多克隆抗体购自北京中杉金桥生物技术有限公司,ZA0117),然后在4 ℃孵育过夜,继之滴加生物素化山羊抗兔IgG,最后滴加DAB显色。
2 结果
2.1 EBs的形成与鉴定
PGCs经4 d悬浮培养后,便可逐渐形成简单类胚体(simple embryoid body, SEB),自第5天起SEB内部出现腔隙,随后逐渐扩大直到第2周形成囊状EBs(cystic embryoid body, CEB)。EBs的形成率见表1。EBs外周可见内胚层细胞,经免疫组织化学法进行AFP标记,可见EBs外围的细胞呈阳性反应。
2.2 神经干细胞微囊的形态学观察及鉴定
2.2.1 神经干细胞微囊的形态学观察 细胞微囊大小较均一,呈球行,边界清楚,直径400~700 μm,微囊分散良好且之间无粘连,囊内细胞密集,单个细胞呈圆形且折光性强,每个微囊含有9 000~10 000个神经干细胞。表1 EBs形成率与分化率
2.2.2 神经干细胞的鉴定 当培养24 h后可见NSCs聚集形成神经球,折光性强,立体感强并且悬浮生长,神经球形成后有相互聚集的倾向,自身不断增殖且数目不断增多。将贴于盖玻片上的神经球进行神经干细胞标记巢蛋白(nestin)染色,结果显示Nestin免疫染色呈阳性,阳性部位呈黄褐色,证明神经球确为神经干细胞。
2.3 分化细胞的鉴定以及分化率
分别做NESTIN、NSE和GFAP的免疫组化染色,结果都为阳性,说明分化细胞中包括神经前体样细胞、神经元和神经胶质细胞。自发分化有60%分化为神经样细胞,上皮样细胞和成纤维样细胞各占总数的20%和18%,而微囊诱导则有100%分化为神经样细胞。实验组与对照组比较差异有统计学意义(P
3 讨论
在PGCs的定向诱导分化方面,一般采用添加诱导因子法[2],我们则尝试着采用一种新方法即微囊诱导法。目前所用制作微囊的材料和结构多为海藻酸钠多聚赖氨酸海藻酸钠(AlginatePolylysine Alginate, APA),这种结构的膜具有较好的生物相容性,可减少邻近细胞的过度生长[3]。微囊的优点在于,微囊是一种半透膜,细胞分泌的小分子营养物质可自由透过,而且这种半透膜也不影响氧、葡萄糖和生长因子等低分子物质的通过。另一方面可以将诱导物与贴壁的EBs分开,避免了两者的相互作用从而更清晰的看到分泌物是否对生殖干细胞的分化有一定的诱导作用。经微囊诱导分化出来的细胞免疫组化鉴定100%为神经样细胞;而自发分化的细胞60%为神经样细胞。说明微囊诱导可明显提高细胞的分化率。NSCs是一种未分化的神经前体细胞,能分泌多种细胞因子,其在体外模拟的神经细胞发育的早期微环境较神经元模拟的微环境更为原始和类似于体内[4]。总之,胚胎源性干细胞的分化研究在整个干细胞研究中占据着重要的位置,因为它将会在临床应用中发挥着非常重要的作用。它最令人瞩目之处在于它可以作为移植疗法的"种子"细胞,治疗各种难治性疾病,包括帕金森病、糖尿病、脊髓外伤、慢性心脏疾病、肝脏衰竭和肿瘤等。这种方法不仅可以弥补当今器官移植所面临的供体匮乏问题,而且还可避免移植过程中引起的免疫排斥问题,因为可借助于基因工程技术对干细胞表面的MHC分子进行修饰。可见胚胎源性干细胞在基础研究和临床应用方面有着广阔的前景。但目前为止人们还没掌握其定向分化的一般规律,需要我们进一步的探讨。
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