自荐信标题精选(九篇)

前言：一篇好文章的诞生，需要你不断地搜集资料、整理思路，本站小编为你收集了丰富的自荐信标题主题范文，仅供参考，欢迎阅读并收藏。

第1篇：自荐信标题范文

【关键词】五个对接 电子 课程体系

教育部在关于大力发展职业教育的决定中指出，职业教育要实现五个对接：即专业与产业对接，课程内容与职业标准对接，教学过程与生产过程对接，学历证书与职业资格证书对接，职业教育与终身学习对接。为此，我们积极开展教改尝试，这里笔者将我校电子电器应用与维修专业（以下简称电子专业）在课程改革中的尝试和实际做法作简要介绍，以期起到抛砖引玉的作用。

1.以市场调研为基础 找准专业培养目标

为了更好地确立电子专业人才培养目标，构建与行业、企业人才需求和就业岗位相适应的课程体系、课程标准，我们在2011年下期组织了电子专业专业课教师开展了广泛的行业、企业调研。调研了海尔、格力、TCL 、四川凯越光电、柏狮光电以及当地多家家电维修店、四川职业学院、航空职业技术学院等16家大中型企业和单位。调查涉及电子电器制造、产业和维修、销售等领域。调查的对象有一线员工、毕业学生、班组长、车间主任、部门经理、人力资源部长、企业老总等，我们通过发放调查表、深入企业考察、与负责人和员工交谈等形式，了解企业对人才的需求状况、中职学生毕业后从事的职业岗位、企业对中职学生的知识、专业技能、职业素养等方面的要求及中职生今后的升迁途径，获得了宝贵的第一手资料。为确立本专业的人才培养目标、专业课程设置、确定学科课程标准提提供了重要依据。我们通过对调查情况详细分析，并经过分类、归纳、总结，形成了电子专业的市场调研报告，确立了本专业的人才培养目标：本专业主要面向电子电器生产、销售和维修企业，培养德、智、体、美全面发展，具有良好的职业道德、职业安全意识和踏实认真的工作态度，在产品生产、服务、经营和管理第一线工作的具有从事电子电器产品装配、检验、调试、维修能力的初、中级技能型人才，并为高一级学校输送人才。通过调研，专业培养目标更加切合中职学生实际、企业需求，更能体现人才成长的需要。

2.改革课程结构 创新育人模式

根据教育部《关于进一步深化中等职业教育教学改革的若干意见》文件精神，为更好地适应行业、企业对人才结构需求，根据本专业人才培养目标，我们构建了"232"课程体系。即：就业教育与升学教育两条腿走路即"2"；课程结构分为三类：公共基础课、专业技能课、企业实习课，并开设三个专门化方向"3"；课程内容实现与双证书对接，即"2"。

我们将本专业的课程分为三大类型：

一类为公共基础课。包括语文、数学、英语、德育、体育、计算机、礼仪等，着重培养学生基本文化素养，促进学生可持续发展。

一类为专业技能课。专业技能课采用基础平台加专业门化方向的课程结构：电子电器应用与维修专业开设电工技术基础与技能、电子技术基础与技能、单片机技术应用等基础平台课。开设三个专业门化方向，即：电子产品装配方向、家电维修方向和维修电工方向。专业技能课着重培养学生从事企业岗位的职业能力和转岗的能力。

第三类为企业实习课。我们将教育部规定的顶岗实习一年分散到各学期：第一学期军训一周、企业见习一周，着重培养学生国防意识、爱国爱党爱军队的思想品质、训练学生遵章守纪、一切行动听指挥、适应集体生活，增强对企业感性认识，了解企业、了解专业；第二学期末至第三学期初（主要利用寒暑假），学生到企业参加四个月企业实践活动，培养学生吃苦耐劳精神、体验企业文化、企业管理、体会挣钱艰辛，通过实习还可挣回近三年学费，并让学生过一个有意义的假期；第四学期和第五学期，学生分别到企业专业对口实习两周，熟悉企业、熟悉工作岗位、增强专业技能；第六学期，学生到企业顶岗实习一学期，强化技能、实现学生到技术工人身份的转换，为就业打下坚实基础。

在三年中，各专业三类课程比例大体相当，文化基础课1154学时，专业技能课1220学时，实习课累计1320学时，各约占三分之一。调整后的课程结构既实现了教育部提出的中等职业教育学制三年，其中在企业顶岗实习累计一年的要求，也更加符合中职生从学生向技术工人转换的成长特点。

3.按企业要求设置课程，实现专业与产业的对接

学校与广东大东俊通、重庆海尔集团、格力电器、富士机电、四川凯越光电等多家企业和区域多家家电维修店签定了校企合作、定单培训协议。我们成立了专业教学指导委员会，与联办企业共同制定专业培训计划，确定培训内容；企业定期接受实习学生；学校聘请工程师、技术员到校上课等。比如，去年春节以来，我校与海尔集团联合招收了四个"海尔班"共计200余人。我们按海尔集团的要求，调整了课程结构，融入了海尔文化、加强了维修电工、制冷设备原理与维修的学习等内容；学校聘请了海尔集团的工程师陈元等4人作为电子电器应用与维修专业的专业教学指导委员会委员和兼职教师；海尔集团从一年级开始每期安排企业工程师到校上课，并将根据教学进度，向学校提供海尔冰箱、空调、热水器等生产器件作为电子专业学生校内实习的实训设备设施和器材；还为联办班学生设置了奖学金。学校还多次组织召开了专业建设指导委员会会议，积极听取行业企业专家、工程师对专业建设、课程教学、校企合作、顶岗实习等方面建议和意见。去年4月份以来学校先后安排了10春、10秋电子班70余名学生到重庆海尔集团顶岗实习。在去年春节和今年暑假，学校安排了10秋、11春、11秋和三个年级的学生到大东俊通电子有限公司进行了为期四个月的短期实习，实习学生实习结束后再全部回校学习，挣回实习工资平均达8000余元。

4.构建"理实一体化"教学模式，实习教学过程与生产过程对接

以往的课程，重理论，轻实践，学科性质浓厚，理论、实践分割严重。为体现职业教育的特点，我们对传统学科课程进修了整合，将理论实践融为一体。我们将电子专业原来四门基础课课程《电工技术基础》、《电工技能》、《电子技术基础》、《电子技能》整合为两门课程《电工技术基础与技能》、《电子技术基础与技能》；将《电子测量》、《材料与元件》、《电子产品结构工艺》三门课程整合为一门课程《电子产品装配与调试》。为了进一步适应中职生学习特点，贯彻"教、学、做"合一的教学理念，我们从去年12月开始，组织教师编写"理、实一体化"教材，如《电工技术基础与技能训练》、《电子技术基础与技能训练》等，这些课程打破传统的陈述式性质的教材体系，克服重理论轻实践、重视知识的系统性轻应用性等缺点，按"做中学、做中教"的指导思想，先实践、后理论和先感性后理性的认知规律来组合教学内容，并将实践课融合到各章各节中，同时还配备了大量实物图片、教学课件、仿真软件等来加强直观性教学。目前，这些教材分别由高教社和北京理工大学出版社出版。

为了使教学过程更加贴近真实生产环境，我们以工作过程导向，组织专业教师、行业企业专家编写了技能实训项目教材如《电子产品装配与调试》、《维修电工》、《电视机原理与维修》、《电热电动器具原理与维修》等。还在全校推行项目教学法：学生每完成一个实训项目，都将制作一件可以看得见的产品或作品。这样，教学环境更加贴近真实生产环境，更有利于培养学生职业岗位意识、职业道德和职业职业素养。

5.改革课程内容，实现学历证书与职业标准的衔接

为了实现学历证书与职业标准的对接，我们积极推行"双证书"制度，并改革专业各学科课程内容。为了让学生既能获得毕业证，又能考取职业技能等级证，我们在课程上加强了与职业工种的对接：如《电工技术基础与技能》、《维修电工》对接维修电工初、中级工；《电子技术基础与技能》、《电子CAD》、《电子产品装配与调试》对接无线电装接工初、中级；《电热电动器具原理与维修》、《电视机原理与维修》、《制冷设备原理与维修》对接家用电器维修工及制冷设备维修工初、中级。这样，电子专业学生就可以考取无线电装接工、维修电工、家用电器维修工或制冷设备维修工等工种等初、中级技能等级证书。同时在课程标准的设置上参照各工种应知应会标准确定科长目标和教学内容。教师们按照初级工、中级工的应知应会标准开展教学，使教学做到有的放矢。从二年级开始，我们每期开展一次职业技能鉴定培训和职业技能鉴定考试，这样至毕业时，绝大多数学生均可考取1-2各工种的技能等级证书，专业双证制比例达97%以上。我校电子专业课程设置与职业技能鉴定工作的关系如下：

6.探索中高职衔接机制，构建人才成长立交桥

以前的中职教育，过分强调就业教育，把中职教育办成了终极教育，导致学生无希望、没追求，不利于学生的成长和终身发展，也使得职业教育越来越缺乏吸引力。为了打通人才成长的立交桥，我们一方面提出了向高一级学校输送人才的专业培养目标，把学生在校时间由原来的四学期调整为五学期，第六学期一部分学生到企业顶岗实习，一部分留下继续学习参加高职对口单招考试或对口升学考试；另一方面调整课程结构，在专业课程设置中加入了高职对口升学课程。比如，电子专业开设的《电工技术基础与技能》、《电子技术基础与技能》、《单片机及应用》是目前四川省高职对口升学必考内容。第三是积极探索中高职的衔接机制，今年我们与四川职业技术学院等高职院校建立了中高职衔接试点班：与高职教师一起研究研究了试点班课程设置和课程内容，确定了哪些知识技能在中职阶段上，哪些知识技能在高职上；还与高职学校的老师一起编写中高职衔接课程大纲和衔接教材；学生的学习成绩每期上报高职院校；按计划定期聘请高职院校教师到学校上课等。目前，电子专业学生基本形成了就业班、对口升学班、中高职衔接试点班各占三分之一的格局。

近两年的课程改革带来了丰硕成果。2012年电子近200多学生毕业，其中升学本科院校22人、职业技术学院45人，其余学生全部推荐到大、中型企业工作，一次就业率大95%以上，对口就业达70%。2013年参加全市中职生技能竞赛，学校获团体一等奖；电子专业被省教厅推荐代表四川参加全国中职生电器设备安装与维修工作技能竞赛。通过行的课程改革，教师乐教、学生乐学、教材易懂、易学，学风、教风空前浓厚，也有力推动了整个学校教育教学质量的提升。

第2篇：自荐信标题范文

关键词：DNA 计算；分子信标；NP\完全问题；Hamilton圈

中图分类号：O157.5文献标志码：A文章编号：1672-1098（2016）01-0030-04

Abstract： In order to solve the classical problems in graph theory and develop a new molecular structure by using DNA， based on the principle that different forms of fluorescent molecular-quenching molecular in the molecular beacon constitutes multi color molecular beacon， the detection model for the solution of Hamilton circle， the NP\complete problem， was given. The model has the advantages of simple encoding， low complexity， easy to detect and so on.

Key words：DNA computing； molecular beacon； NP\complete problem； Hamilton circle

1994年，文献[1]首次在实验室用DNA分子解决了一个含有7个城市的Hmilton有向路问题，自此，诞生了一个新的研究领域――DNA计算。1996年，文献[2]首次建立分子信标（molecularbeacon，MBs）探针，其作为一种新型的荧光探针在近年来得到广泛的应用和发展[3-6]。

继Adleman博士的著名实验之后，有关Hmilton路的一些其他问题的DNA计算也取得了一些进展[7-8]。除了在电子计算机和DNA计算机上的算法研究外，部分学者还在理论上对Hmilton问题进行了一定的讨论[9]。通过选择不同的荧光分子-猝灭分子对可以设计出不同荧光的分子信标（称多色分子信标），每个分子信标与其各自的靶标序列杂交后，会释放不同颜色的荧光，此时，通过荧光检测系统检测不同的颜色来解决问题，这样可以使多个靶核苷酸同时定量测定且加以区别，本文基于上述原理设计了一个Hmilton圈问题解的检测模型。

关于Hmilton问题的部分数学描述如下：包含图G的每个顶点的路称为G的Hmilton路；包含图G的每个顶点的圈称为G的Hmilton圈；一个图包含HaInilton圈，则称这个图是Hmilton图。对于n阶图G，如果G含长度是n的圈，则称G是Hamilton图[10]。Hmilton圈问题是图论最古老的研究课题之一，是至今未解决的世界难题，在许多领域有着重要应用，同时，它也是一个典型的NP-完全问题。

1分子信标原理

分子信标是一种设计巧妙的新型荧光探针，主要由环和茎杆部分组成。环上的寡聚核苷酸序列是分子信标的基因识别区，它能与靶基因自发地进行杂交；茎部是一段5～8mer序列互补的发夹结构。在分子信标的5’端和3’端通过连接臂连接上荧光素和猝灭剂。一般用EDANS（1一氨基萘一8一羧酸）为荧光素，用DABCYL（二甲氨基偶氮苯甲酰）为猝灭剂（见图1）。当茎杆部分解链后“发夹”就会打开从而变成单链分子。在原始状态下，分子信标呈茎环结构，当荧光分子与猝灭分子靠近（约为7～10 nm），即可发生荧光共振能量转移，此时，荧光分子发出的荧光被猝灭分子吸收并以热的形式散发，检测不到荧光信号。分子信标的工作原理如图2所示，当有靶序列存在时，分子信标的环部即可与靶序列特异性结合，形成的双链比分子信标的茎环结构更稳定，荧光分子与猝灭分子分开，荧光分子发出的荧光不能被猝灭分子吸收，这时可检测到荧光，且所检测到的荧光强度与溶液中靶标的量成正比。本模型利用金属纳米簇作猝灭剂，通过调节金属簇的大小、形状和组成而得到不同种的荧光，形成多色分子信标用于同时定量标记。

2） 由步骤1得到通过图G中的所有顶点的可能路径集，由于使用的分子信标探针P0，P1，P2，P3，P4，P5的荧光不同，可通过荧光检测系统检测出带有（且仅带有）这六种荧光的链，并保留。此时，便得到了通过图G中的每个顶点（且一次）的路径，即hamilton路。

32.3步骤3

以图3a为例，根据步骤1的编码规则，若步骤2所得片段构成hamilton圈，其产物的最后必定为v0编码的前10 bp寡聚核苷酸片段。

制作以v0前10 bp寡聚核苷酸片段互补序列为环部的分子信标探针P（见图4b），与步骤3的生成产物进行反应，通过检测荧光发光点的位置，判断是否为Hamilton圈。

324步骤4

若路径满足上述条件，则说明存在Hamilton圈，对步骤4的结果采用非放射性标记DNA测序的方法，进行测序，读出结果，否则，不存在Hamilton圈。

4结束语

分子信标具有结构简单、灵敏度高及易观测等优点，此技术在特定情况下能够把核酸序列转化为荧光信息。本文基于分子信标的这些特性建立了Hamilton圈问题的分子信标检测模型。通过多色分子信标同时标记，大大减少了DNA计算的过程，具有一定的学术研究意义。此模型的复杂程度与顶点数和顶点的度有关。当然，并非由此模型生成的混合物都是问题的解，还需要通过删选、检测过程进行判断。如果一个图中不存在Hamilton圈，那么最后溶液中就不会生成可以表示Hamilton圈的分子。此外，DNA计算所应用的各种生物技术自身也存在着一定误差，尤其是PCR技术。但随着分子生物学技术的不断发展，这些问题将会得到完善与解决。

参考文献：

[1]ADLEMAN L.Molecular computation of solutions to combinatorial Problems[J].Science，1994，266（11）：

1 021-1 024.

[2]TYAGI S，KZAMER F R.Molecular beacons：Probes that fluoresce upon Hybridization[J].Nat.Biotechnol.1996，14（3）：303-308.

[3]殷志祥，张风月，许进.基于分子信标的DNA计算[J].生物数学学报，2003，18（4）：497-501.

[4]殷志祥，许进.分子信标芯片计算在0-1整数规划问题中的应用[J].生物数学学报，2007，22（3）：1-6.

[5]HUANG XIAOHUI，YIN ZHIXIANG，ZHI LINGYING，et al.Molecularbeacon based on DNA computing model for 0-1 programming problem[C]//Bio-＼inspired Computing，2009：1-5.

[6]YIN ZHIXIANG，SONG BOSHENG，HEN CHENG，et al.Molecularbeacon-＼based DNA computing model for maximum independent set problem[C]//International Computation Technologyand Automation，2010：732-735.

[7]LIU WENBIN，XU JIN.A DNA solution to weighted Hamilton path problem[J].Systems Engineering and Electronics，2002，24（6）：99-102.

[8]GAO LIN，MA RUINIAN，XU JIN.DNA algorithm to the directed shortest hamilton path problem[J].Systems Engineering and Electronics，2002，24（8）：102-105.

[9]LEOBL M，MATAMALA M.Some remarks on cycles in graphs and digraphs[J].Discrete mathematics，2001，23（3）：175-182.

[10]JA BONGDY.Graph theory with applications[M].Macmillan London Press Ltd，1976：57-65.

第3篇：自荐信标题范文

关键词：战略性新兴产业类企业 融资能力 评价指标体系

一、引言

近年来，战略性新兴产业成为国家经济发展重点扶持对象，该产业属于技术依赖型产业，具有资源能耗低、带动系数大、就业机会多、综合效益好、市场前景广等特征。不过，就目前国内该产业发展情况来看，该类产业还处于初级发展阶段，从外部市场到内部管理都没有达到一定水平，资金实力较弱，发展规模偏小，目标市场还未成熟，拥有专利技术较少，研发人才短缺且流动性较大，产业化水平较低，这些问题都严重制约了该类产业的发展。在众多问题中，最根本问题在于该类产业普遍资金实力较弱，因此，解决该类产业资金问题是重中之重。

大部分战略性新兴产业中的企业属于中小企业，因此，该类企业具有大多数国内中小企业的发展特点，所面临的困难也有一定相似性，最大的相似点在于融资困难，各类金融机构对于新兴产业类型的企业重视度不够，贷款程序复杂，条件较高，这些都导致该类企业融资困难，严重限制了该类企业的发展。因此，为准确衡量和评价战略性新兴产业类企业自身的融资实力，有效规避银行放贷风险，提高贷款资金的盈利能力，推动该类产业产业化进程，提升整体产业水平，应从该类企业本身研究衡量其融资能力的指标，并构建一套完整、科学、系统的指标体系。

二、战略性新兴产业类企业融资能力评价指标选取原则及来源

为准确、客观、系统地评价战略性新兴产业的融资能力，保证指标选取的有效性和有用性，依据原则有：量化原则、数据可得性原则、指标代表性原则、相对量指标原则、动态与可持续性原则。

指标选取来源主要结合该类企业在发展过程中面临的各项风险来选择确定，这些风险包括：

第一，技术风险。由于该类产业属于技术依赖型，而现阶段国内相关技术都还在起步阶段，在技术研发过程中可能会存在如技术研发周期较长、技术研发失败、研发机构的合作关系中断、先进技术的应用性较小、科技转化率低等问题，这些问题都严重制约了该类企业的发展。

第二，市场风险。由于战略性新兴产业在我国还属于新兴产业，市场需求还没有足够开发，或者说市场需求不够旺盛，盲目放贷给该类企业可能会导致供需失衡、产能过剩等后果。因此，该类企业的市场风险往往也比较大。

第三，财务风险。受市场环境影响，该类企业初期经营绩效往往不会太好，这会严重影响到企业经营收益情况，如果企业不能持续盈利，现金流断裂会使企业未来发展陷入僵局。

第四，宏观政策风险。这些政策风险主要来自于国家的财税政策、技术政策、行业扶持政策。一旦国家发挥“看得见的手”的作用，对该类产业扶持力度加大，那么就会引起该类产业水平整体提升，盈利能力增强，市场逐步扩大，而如果国家放弃扶持，那么其发展速度会受到严重制约。因此，国家的相关政策在该类产业发展过程中发挥着主导作用。

三、战略性新兴产业类企业融资能力评价指标体系内容

通过分析研究该类企业存在风险，结合实际发展情况，本文构建技术指标、财务指标和宏观环境指标三个一级指标，并分设二级、三级指标来全面衡量评价该类企业的融资能力。

1.技术指标

（1）研发实力指标

①企业研发人员数量比值=研发人员总数/企业员工总数；

②企业研发人员结构比值=研发人员中各类学历人数/企业研发人员总数；

③企业研发经费投入比重=当年研发经费总额/企业当年各项经费总额；

④企业引进人才投入比重=（研发人才引入成本+研发人才培养成本）/ 人力资源总成本；

⑤企业研发合作投入比重=企业与外单位合作研发经费投入额/企业科研经费投入总额。

（2）技术实力指标

①自有技术项目数量比值=企业自主研发专利技术数量/企业技术总数；

②引进技术项目数量比值=企业引进技术项目数量/企业技术总数；

③企业专利产出比率=企业在某技术领域的专利申请量 / 该技术领域所有专利申请量的比例；

④企业科技论文产出比率=企业当年科技数量/行业当年科技总数；

⑤企业技术市场成交率=企业在技术市场中成交合同金额/企业当年科研经费总额；

⑥企业配套技术数量比值=企业配套技术数量/企业技术总数。

2.财务指标

（1）盈利能力指标

①主营业务利润率=利润/主营业务收入净额；

②资产净利率=净利润/平均资产总额；

③净资产收益率=净利润/平均净资产；

④成本费用利用率=利润总额/成本费用总额。

（2）营运能力指标

①应收账款周转率是指应收账款周转次数，即赊销净额/应收账款平均余额；和应收账款周转天数，即日历天数/应收账款周转次数；

②存货周转率包括存货周转次数，即销货成本/存货平均余额；存货周转天数，即日历天数/存货周转次数；

③流动资产周转率，即流动资产周转次数=流动资产周转额/流动资产平均占用额；

④总资产周转率，包括总资产周转次数，即产品销售收入/资产平均总额；总资产周转天数，即日历天数/总资产周转次数。

（3）发展能力

①营业收入增长率=（当年营收额-上年营收额）/上年营收额；

②资本保值增值率=扣除客观因素后的本年末所有者权益总额/年初所有者权益总额；

③总资产增长率=当年总资产增长额/年初资产总额；

④营业利润增长率=当年营业利润增长额/上年营业利润总额；

⑤市场份额增长率=（当年市场份额-上年市场份额）/ 上年市场份额。

（4）财务抗风险能力

该类企业的财务风险主要从企业自身的偿债能力来评价。

①流动比率=流动资产/流动负债；

②速动比率=速动资产/流动负债；

③资产负债率=负债总额/资产总额

④资本负债率=负债总额/所有者权益总额

⑤无形资产负债率=负债总额/无形资产

⑥税费占营运资金比率=企业缴纳税费总额/（流动资产-流动负债）

⑦利息保障倍数=EBIT/利息费用

3.宏观环境指标

（1）政策法律环境指标

①科技资金占财政总支出比例=当地政府财政科技拨款/当地政府财政总支出；

②政府支撑政策条款数量是指政府在相关政策条例中所规定的对该类产业的支撑条款数量；

③企业科技研发经费中政府资金占比=政府科技投入资金/企业总研发经费；

④税收减免幅度=（某项新实施税率-旧实施税率）/旧实施税率；

⑤政府为该类企业提供担保数量是指当地政府为该类企业提供担保的企业总数；

⑥知识产权保护条款数量是指国家法律法规条款中保护该类产业知识产权的条款数量。

（2）市场环境指标

①目标市场人均收入水平主要反映目标市场是否有足够能力支持该类企业的产品或服务；

②目标市场恩格尔系数=目标市场食品支出总额/个人消费支出总额

③该类产业对GDP贡献率=行业产值/GDP总量

④市场潜在需求量主要反映该类产业是否有足够市场需求，该指标涉及到该类产业是否能长足发展；

⑤该行业销售额增长率=（当年行业总销售额-上年行业总销售额）/上年行业总销售额。

（3）技术环境指标

①行业研发经费投入比值=行业研发经费投入额/行业总投入额

②行业技术成果转化率=已产业化的技术成果数量/行业技术成果总量

③行业技术引进消化吸收率=消化吸收的技术数量/引进技术总量

④行业技术市场成交率=技术市场成交合同金额/研发经费支出

⑤技术人才流动率=年技术人才流动量/总人才数量

⑥万人发明专利拥有量=年末发明专利拥有量/年末总人口，指每万人拥有经国内外知识产权行政部门授权且在有效期内的发明专利件数。是衡量一个国家或地区科研产出质量和市场应用水平的综合指标。

四、结论与不足

通过对战略性新兴产业类企业融资能力评价指标体系的构建，为金融机构特别是银行明确了放贷标准，为有效评价其贷款安全性和盈利性打下坚实基础，初步保证银行贷款安全、可靠，同时，对于该类企业，可以使其结合自身实际经营发展情况从以上这些指标着手逐步培养自身的融资能力，提高未来获得银行资金支持的可能性。不过，战略性新兴产业类企业虽然有共同之处，但是由于涉及行业有七项，而以上提出的指标只是针对共性提出的，对于行业特殊性方面，并未能完全体现，因此，还应在实际考察某项具体行业企业时，结合行业特点补充或者减少具体评价指标的项目。

参考文献：

[1]王佩，李芸. 企业融资能力与融资行为分析[J]. 经济师，2001（9）

[2]孙威武. 企业技术创新项目风险评价[J]. 中南财经政法大学学报，2004（1）

[3]潘奇才，刘铁兵. 高技术企业综合水平的评价方法研究[J]. 科研管理，1996（1）

第4篇：自荐信标题范文

[关键词] 新疆紫草;过表达载体;RNAi载体;GATEWAY技术

[收稿日期] 2014-06-18

[基金项目] 国家自然科学基金项目（81130070，81072989）;国家科技支撑计划项目（2012BAI29B02，2012BAI28B002）

[通信作者] *郭兰萍，Tel：（010）64011944，E-mail：

[作者简介] 谢腾，硕士，Tel：18310830559，E-mail：

新疆紫草Arnebia euchroma （Royle） Johnst是药用紫草的主要来源[1]，其重要成分紫草素类化合物具有止血、抗癌、抗HIV等多种药理活性[2-4]，同时也是天然的化工染料和食品添加剂[5-6]。

紫草素类化合物通常认为是在限速酶苯丙氨酸解氨酶（PAL）、甲戊二羟酸单酰辅酶A还原酶（HMGR）和对羟基苯甲酸香叶基转移酶（PGT）催化下，通过苯丙氨酸（phenylpropan-oid，PP）-甲羟戊酸（mevalonate，MVA）复合途径合成。PAL是PP途径中的起始代谢酶，催化L-苯丙氨酸生成反式肉桂酸，进而开启对羟基苯甲酸（PHB）的合成。MVA途径上的HMGR将甲戊二羟酸单酰辅酶A还原为甲戊二羟酸，进而生成PP和MVA途径的中间产物焦磷酸香叶酯（GPP）。最后PHB，GPP在PGT的催化下合成紫草素类化合物前体香叶基-对羟基苯甲酸（GHB）[7-8]。

次生代谢通路上关键酶基因表达的变化会影响次生代谢物的生物合成，可以通过改变某特定基因的表达来调节下游次生代谢，即基因的过表达（或超表达）和RNA干扰（RNA interference， RNAi）技术，控制目标代谢产物的合成。为此，本研究拟构建新疆紫草次生代谢途径中关键酶基因PAL，HMGR，PGT过表达和RNA干扰载体，为培育新疆紫草次生代谢物高产株系和次生代谢相关基因的功能验证奠定基础。

1 材料

新疆紫草愈伤细胞取自中国科学院植物研究所叶和春研究员处。

基因过表达载体pH7WG2D和RNA干扰载体pK7GWIWG2D均由中国中医科学院中药资源中心提供。

2 方法

2.1 目的基因序列的获取和引物设计

在NCBI（http：//ncbi.nlm.nih.gov/）下载目的基因序列：PAL（gi|90994675），HMGR（gi|91208650），PGT（gi|158957516）。

过表达载体的片段为目标基因的全长，引物位于ORF外，RNA干扰的片段引物位于ORF内。使用Primer Premier 5分别设计含CACC接头和不加CACC接头的合适引物。

2.2 新疆紫草cDNA的获得

采用Trizol法新疆紫草愈伤组织细胞总RNA提取，并做RNA质量检测。使用TaKaRa PrimeScript 1st strand cDNA Synthesis Kit试剂盒，将新疆紫草新鲜RNA反转录为单链cDNA，并至于-20 ℃保存。

2.3 PCR扩增

2.3.1 通用PCR扩增 使用TaKaRa Ex Taq酶做普通PCR扩增，所用引物不加CACC接头。1%琼脂糖凝胶电泳检测并测序。

2.3.2 菌液PCR扩增 使用TaKaRa Taq酶做菌液PCR扩增，所用引物不加CACC接头。1%琼脂糖凝胶电泳检测并测序。

2.3.3 高保真PCR扩增 使用Phusion High-Fidelity DNA Polymerase PCR酶做高保真PCR扩增，以T载体克隆所得质粒为DNA模版，所用引物含CACC接头。1%琼脂糖凝胶电泳检测并测序。

2.4 PCR产物的回收与纯化

PCR扩增产物回收与纯化使用生工SanPrep柱式DNA胶回收试剂盒。将所得到的DNA保存于-20 ℃。

2.5 PCR产物的T载体克隆

PCR产物的T载体克隆使用Promega的pGEM-T EasyVector Systems，4 ℃水浴过夜，转入DH5α，LB平板（氨苄霉素，Amp抗性）培养过夜，筛选菌落并菌液PCR验证。1%琼脂糖凝胶电泳检测并测序。

2.6 转化大肠杆菌

选择Trans5α感受态细胞，吸取200 μL已转化的感受态细胞加到含相应抗生素LB琼脂培养基上，均匀涂开细胞，至液体被吸收，倒置平板，37 ℃过夜培养。筛选菌落并菌液PCR验证，1%琼脂糖凝胶电泳检测并测序。

2.7 质粒提取

质粒DNA提取使用QIAprep Spin Miniprep Kit试剂盒。

2.8 GATEWAY方法构建载体

GATEWAY技术是基于λ噬菌点特异性的成熟重组体系，由BP，LR 2个反应就构成，可同时转化多个基因，较其他载体构建方法快捷高效[9]。BP反应将目的基因从PCR产物重组到供体载体，从而形成入门载体（donor vector），LR反应则将入门克隆重组入目的载体（destination vector）[10-11]。

2.8.1 BP连接反应 使用Invitrogen公司pENTRTM SD/D-TOPO Vector做入门载体连接高保真PCR产物。在微量离心管中配制BP反应混合液（3 μL体系）：1.5 μL ddH2O，0.5 μL 高保真PCR产物，0.5 μL salt solution，0.5 μL 入门载体。22 ℃水浴3 h，转入DH5α，LB平板（卡那霉素，Kana抗性）培养过夜，筛选菌落并菌液PCR验证。1%琼脂糖凝胶电泳检测并测序。

2.8.2 LR连接反应 选择BP反应测序成功的质粒，进行LR反应。使用Invitrogen公司LR Clonase Ⅱ enzyme mix介导目的基因从入门载体的连接到入门载体。过表达载体为pH7WG2D，RNA干扰载体为pK7GWIWG2D，在微量离心管中配制LR反应混合液（4 μL体系）：1 μL 入门克隆（50～150 ng），1 μL 目的载体 （150 mg・L-1），1 μL LR Clonase Ⅱ enzyme mix，1 μL ddH2O。25 ℃水浴12 h，加入1 μL proteinase K solution，37 ℃水浴5 min，终止LR反应。将LR连接产物转入DH5α，LB平板（壮观霉素，Spe抗性）培养过夜，筛选菌落并菌液PCR验证。1%琼脂糖凝胶电泳检测并测序。

载体构建的流程见图1。

图1 载体构建流程图

Fig.1 Flow chart of vector construction

3 结果

3.1 引物合成

依据NCBI提供的新疆紫草PAL，HMGR，PGT的cDNA序列，设计并合成目的基因过表达载体和RNA干扰载体构建所需cDNA扩增特异性引物，见表1。

3.2 T载体克隆

将已纯化的过表达和RNAi基因PCR产物与pGEM-T Easy Vector连接，并将产物转入DH5α进行菌液培养，菌液PCR获得目的基因的T载体质粒，见图2。

表1 PAL，HMGR，PGT扩增特异性引物

Table 1 Primers of PAL， HMGR， PGT for overexpression （upper） and RNAi （lower）

引物名称 序列（5′-3′）碱基数片段长度/bp

过表达载体PAL-FTGCTAATACTTCCACACG182 386

PAL-RGAGAACAAAAAGAAATAG18

HMGR-FTGAAACAATCATCACTTAC192 013

HMGR-RTTTATCAATGAGGTGGAC18

PGT-FTAAACATCCCAAACTAAAG191 203

PGT-RAACAAATTTTGATAATGC18

PAL-F-CACCCACCTGCTAATACTTCCACACG222 386

PAL-R-CACCCACCGAGAACAAAAAGAAATAG22

HMGR-F-CACCCACCTGAAACAATCATCACTTAC232 013

HMGR-R-CACCCACCTTTATCAATGAGGTGGAC22

PGT-F-CACCCACCTAAACATCCCAAACTAAAG231 203

PGT-R-CACCCACCAACAAATTTTGATAATGC22

RNA干扰载体PAL-FTGAGTCAATGAAGGGTAGC19490

PAL-RGAGGGGTAGGAATGGAGTAA20

HMGR-FCTCGGTTCCTATGGCTAC18525

HMGR-RCAGGAGCACATCGTCTTG18

PGT-FATTTGGATGGTGGGCAGTT19328

PGT-RTAAAGCGGGTAGGCGATA18

PAL-F-CACCCACCTGAGTCAATGAAGGGTAGC23490

PAL-R-CACCCACCGAGGGGTAGGAATGGAGTAA24

HMGR-F-CACCCACCCTCGGTTCCTATGGCTAC22525

HMGR-R-CACCCACCCAGGAGCACATCGTCTTG22

PGT-F-CACCCACCATTTGGATGGTGGGCAGTT23328

PGT-R-CACCCACCTAAAGCGGGTAGGCGATA22

1.PAL质粒DNA;2.空载质粒DNA;M.2 kb DNA Ladder（图3～5同）。

图2 过表达（上）和RNAi（下）基因的T载体克隆PCR凝胶电泳

Fig.2 T vectors cloned PCR gel electrophoresis of overexpression（upper） and RNAi（lower） gene

3.3 过表达和RNA干扰载体的构建

3.3.1 高保真PCR 以构建好的pGEM-T质粒为模板，使用加有CACC的特异性引物，用高保真酶Phusion High-fidelity进行PCR扩增，获得过表达基因全长和RNA干扰基因片段，PCR产物进行纯化后，进行下一步的BP反应，见图3。

图3 过表达（上）和RNAi（下）基因高保真PCR凝胶电泳

Fig.3 High-fidelity PCR gel electrophoresis of overexpression（upper） and RNAi（lower） gene

3.3.2 BP连接反应 获得目的片段后进行BP反应，产物转化DH5α，在Kan抗性的LB培养皿37 ℃培养过夜，挑取单克隆，做菌液PCR鉴定，见图4。提取测序正确样品的质粒进行的LR反应。

图4 过表达（上）和RNAi（下）基因BP反应凝胶电泳

Fig.4 BP reactions PCR gel electrophoresis of overexpression（upper） and RNAi（lower） gene

3.3.3 LR连接反应 BP反应的产物经过LR反应，分别将目的基因克隆到过表达载体pH7WG2D和干扰载体pK7GWIWG2D上，转化DH5α，在Spe抗性的LB培养皿37 ℃培养过夜，挑取单克隆，做菌液PCR鉴定，见图5。测序结果显示与目的基因的序列一致，说明新疆紫草次生代谢关键基因PAL，HMGR，PGT的过表达和RNAi载体构建成功。

图5 过表达（上）和RNAi（下）基因LR反应凝胶电泳

Fig.5 LR reactions PCR gel electrophoresis of overexpression （upper） and RNAi （lower） gene

本研究从NCBI获得新疆紫草PAL，HMGR，PGT基因，使用Primer Premier 5分别设计了过表达和RNA干扰引物，和对应含CACC接头的引物，并以新疆紫草cDNA为模版PCR克隆得到过表达载体构建所需的全长基因（长度依次为2 086，2 013，1 023 bp）和RNA干扰所需的基因片段（长度依次为490，525，328 bp）。PCR产物经过纯化后连接在pGEM-T EasyVector后使用高保真酶Phusion High-fidelity做PCR，并将产物转入了GATEWAY载体构建技术的BP反应入门载体pENTRTM SD/D-TOPO Vector，在卡那霉素抗性筛选后将新疆紫草PAL，HMGR，PGT基因的全长转入过表达载体pH7WG2D，并将目的基因的编码区片段转入RNA干扰载体pK7GWIWG2D，经测序验证基因无变异。

4 结论

本研究采用本实验室研究较为成熟的pH7WG2D，pK7GWIWG2D载体，使用GATEWAY载体构建技术分别成功构建了新疆紫草PAL，HMGR，PGT基因过表达和RNA干扰载体，对于新疆紫草基因功能验证和遗传转化的平台建立起到了关键作用。

植物的代谢无时无刻不受到基因的调控，次生代谢物发生变化，意味着指导其生物合成的代谢通路有所异动，这种异动往往是由于代谢通路上某一个或一类关键酶基因的表达发生了变化，所以可以人为改变某特定基因的表达来调节下游次生代谢，进而控制目标代谢产物的合成。而这种基因表达的改变，莫过于上调或下调其表达量，基因的过表达技术对应着前者，RNA干扰则与后者对应。

目的基因与一个强启动子连接后，在载体的介导下转入植物体，使得目的基因在整个生命过程中都有表达，即实现过表达，这对于基因功能的研究有重要意义[12-19]。例如，将新疆雪莲查尔酮异构酶基因在烟草中的过表达，会使得烟草大量积累黄酮类化合物，总黄酮量能达到对照组的6倍[20]。基因的过表达在对次生代谢进行调控的同时会改变植物的抗性，对于新品种的选育和开发有重要意义[21-22]。例如，崔道雷等的研究表明，过表达转录因子对烟草中过表达云南红梨的PybHLH基因，会显著提高烟草的耐盐性[23]。

RNAi形成的机制在于双链RNA被降解为21～25 bp的siRNA（small interference RNA）并与特异蛋白结合为siRNA诱导干扰复合体，该复合体通过碱基互补配对识别并降解与之高度保守的同源mRNA，从而达到基因缺失的目的[24-25]，反过来就是通过研究RNAi干扰后植物所呈现的功能或表型的改变可以判断扰基因的功能。例如，在宋婕的研究中，SmPAL1基因干扰的株系中咖啡酸的含量明显低于对照组，丹酚酸B的含量却有所提高，同时研究还发现RNAi植株中木质素的含量也会有所降低，由此可以认为SmPAL1基因会促进咖啡酸和木质素的合成[26]。RNA干扰除了可以调控植物次生代谢和验证基因功能外[27-33]，同样可以用于抗性植物的培育[34]。

由于新疆紫草分布区域狭窄，新疆紫草野生种群处于濒危状态，属于国家国家重点保护野生植物[35]。生物工程培养新疆紫草获取次生代谢产物[36]是目前满足日益庞大的紫草素类化合物的工业和社会需求的主要手段[37]，也是新疆紫草目前研究的热点[7-8]。过表达和RNAi载体的构建，是进一步构建过表达株系或RNA干扰株系的先决条件。搭建基于过表达和RNA干扰的遗传研究平台是新疆紫草次生代谢物生物合成研究的不可或缺的部分。

本研究通过GATEWAY技术成功构建了新疆紫草次生代谢关键基因PAL，HMGR，PGT的过表达载体和RNAi载体，同时提供了一套系统的载体构建方法，对于搭建新疆紫草功能基因挖掘和验证的遗传研究平台，和PAL，HMGR，PGT过表达株系和RNAi株系的构建奠定了基础，也填补了新疆紫草在该领域研究的空白，并为中药次生代谢机制的研究提供了丰富的理论支持。

[参考文献]

[1] 中国药典.一部[S]. 2010： 320.

[2] Kashiwada Y， Bastow K F， Lee K. Novel lignan derivatives as selective inhibitors of DNA topoisomerase Ⅱ[J]. Bioorg Med Chem Lett，1995， 5（4）： 905.

[3] Hu Y， Jiang Z， Leung K S， et al. Simultaneous determination of naphthoquinone derivatives in Boraginaceous herbs by high-performance liquid chromatography[J]. Anal Chim Acta，2006， 577（1）： 26.

[4] Cheng Y W， Chang C Y， Lin K L. Shikonin derivatives inhibited LPS-induced NOS in RAW264.7 cells via down regulation of MAPK/NF-B signaling[J]. J Ethnopharmacol，2008， 120（2）： 264.

[5] 李晓瑾，谭秀芳，马媛，等.药用植物紫草的研究进展[J]. 新疆师范大学学报， 2005，24（4）： 69.

[6] 任贻军，张宏琳.新疆紫草的药理作用[J]. 中国民族民间医药，2009（1）： 13.

[7] 王升，谢腾，郭兰萍，等.新疆紫草2种悬浮培养生长及紫草素类化合物积累的动力学研究[J].中国中药杂志，2013，28（7）：1138.

[8] 王升.新疆紫草悬浮细胞中紫草素类化合物生物合成研究[D].北京：中国中医科学院， 2013.

[9] Karimi M， Inzé D， Depicker A. GATEWAYTM vectors for Agrobacterium-mediated plant transformation [J]. Trends Plant Sci， 2002， 7（5）： 193.

[10] Nakagawa T， Nakamura S， Tanaka K， et al. Development of R4 gateway binary vectors （R4pGWB） enabling high-throughput promoter swapping for plant research[J]. Biosci Biotech Bioch， 2008， 72：624.

[11] Zhang Y， Ma K， Sadana P， et al. Estrogen related receptors stimulate pyruvate dehydrogenase kinase isoform 4 （PDK4） gene expression[J]. J Biol Chem， 2006： 281： 39897.

[12] Jackson R G， Kowalczyk M， Li Y， et al. Over-expression of an Arabidopsis gene encoding a glucosyltransferase of indole-3-acetic acid： phenotypic characterisation of transgenic lines[J]. Plant J， 2002， 32（4）：573.

[13] Coutinho P M， Deleury E， Davies G J， et al. An evolving hierarchical family classification for glycosyltransferases[J]. J Mol Biol， 2003， 328 （2）：307.

[14] 王卓.一个新的烟草糖基转移酶的过表达及相关研究[D].武汉：中南民族大学，2008.

[15] 成妮妮.α-法尼烯合酶过表达对转基因烟草生长发育的影响及其基因启动子的克隆与功能分析[D].泰安：山东农业大学，2013.

[16] 晁跃辉.紫花苜蓿锌指蛋白基因的克隆及初步鉴定[D].重庆：重庆大学，2009.

[17] 苏杰.利用过表达对拟南芥液泡H+-ATPase c亚基功能的初步研究[D].呼和浩特：内蒙古农业大学，2009.

[18] 葛锦峰.IDO基因过表达诱导小鼠肺移植慢性排异免疫耐受的实验研究[D].苏州：苏州大学，2012.

[19] 王国坤.过表达小麦泛素基因Ta-Ub2加快烟草发育进程机制的研究[D].泰安：山东农业大学，2012.

[20] 李凤霞.查尔酮异构酶基因过表达对新疆雪莲类黄酮生物合成的调控[D].北京：中国科学院植物研究所，2006.

[21] 张西斌.LeVDE基因过表达番茄的光合启动和对盐胁迫的响应[D].泰安：山东农业大学，2012.

[22] 曹凌雪.AtNTL5过表达高羊茅耐盐性分析及大豆耐盐相关基因GmDERBID及GmRF功能的初步分析[D].济南：山东大学，2012.

[23] 崔道雷，张晓东，徐慧妮，等.红梨PybHLH基因过表达提高烟草NaCl抗性的研究[J].生命科学研究， 2013， 17（1）：24.

[24] Fire A， Xu S， Montgomery M K， et a1.Potent and specific genetic interference by double stranded RNA in Caenorhabditis elegans[J]. Nature， 1998， 391（6699）：806.

[25] 张艳.植物抗病防卫相关基因的克隆及其转化烟草的研究[D].福州：福建农林大学，2011.

[26] 宋婕.丹参苯丙氨酸解氨酶基因（SmPAL1）的克隆及其功能初探[D].西安：陕西师范大学，2007.

[27] 张广辉.茶树遗传转化及UV-B对香气相关基因表达影响的研究[D].杭州：浙江大学，2007.

[28] 李凤岚.红豆杉紫杉烷13α-，14β-羟基化酶基因调控及茉莉酸甲酯诱导下的蛋白表达[D]. 北京：北京协和医学院，2009.

[29] 蒋科技.药用植物茉莉酸合成途径关键酶基因的克隆与研究[D].上海：复旦大学，2007.

[30] 陈新.鸭梨α-法尼烯合成酶基因的克隆及其植物表达载体构建[D].泰安：山东农业大学， 2007.

[31] 刘艳玲.高寒藏药材麻花艽及其体细胞杂种齐墩果酸合成关键酶――β-amyrin合成酶基因克隆及其功能鉴定[D].济南：山东大学，2009.

[32] 李书涛.调控紫杉醇合成转录因子TcMYC和TcWRKY1的克隆及功能研究[D].武汉：华中科技大学，2012.

[33] 郭荣起.利用RNAi技术对拟南芥液泡H+-ATPase c亚基功能的初步研究[D]. 呼和浩特：内蒙古农业大学，2008.

[34] 岳荣.柠条锦鸡儿CBF/DREB1基因的克隆及其过表达对提高拟南芥抗旱、抗冻能力的影响[D].呼和浩特：内蒙古农业大学，2011.

[35] 冯建菊， 谭敦炎. 紫草类药材的生物学特性及人工繁殖研究现状[C].石河子：第二届中国甘草学术研讨会暨第二届新疆植物资源开发、利用与保护学术研讨会，2004.

[36] Tabata M， Mizukami H， Hiraoka N. Pigment formation in callus cultures of Lithmpemtum erythrorhison[J]. Phytochemistry，1974， 13： 927.

[37] 李国凤， 伍正容， 叶和春， 等. 离体培养的新疆紫草萘醌色素的诱导形成[J]. 植物学通报，1988， 5（2）： 84.

Overexpression and RNAi vectors built for key secondary metabolic

pathway genes PAL， HMGR， PGT of Arnebia euchroma

XIE Teng1，2， LIU Yu-zhong2， WANG Sheng2， LIU Tan2， KANG Li-ping2， GUO Lan-ping2*

（1. School of Life Science and Engineering， Southwest Jiaotong University， Chengdu 610031， China;

2. State Key Laboratory of Dao-di Herbs， National Resource Center of Chinese Materia Medica，

China Academy of Chinese Medical Sciences， Beijing 100700， China）

[Abstract] Arnebia euchroma is the main source for medicinal herb Zicao. and its most important component shikonin compounds have high medicinal and industrial value. This research is aimed to build overexpression vectors and RNAi vectors for key secondary metabolism genes of A. euchroma， and bulid platform for constructions of related transgenic lines using GATEWAY technology. To build genetic material based genetic research platform is to provide a great convenience for digging and functional verification of the genes on secondary metabolic pathway， and also to fill the gaps in transgenic research of A. euchroma. This study is also important for the cultivation of shikonin high-yielding strains of A. euchroma.