鸡禽白血病与鸡白痢净化检测的关系

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禽白血病(avianleukosis，AL)是由反转录病毒科的禽白血病病毒(avianleukosisvirus，ALV)引起的禽类肿瘤性疾病之一。近年来，AL在我国的地方品系的鸡群中广泛流行［1］，发病率呈逐渐上升趋势，给养鸡场带来了巨大的经济损失;鸡白痢(plorumdiseasePD)是由鸡白痢沙门菌所引起的一种常见的传染病［2］，是严重危害我国养鸡业发展的传染病［3－4］。研究表明，母鸡感染了鸡白痢沙门氏菌后，会严重影响种蛋的孵化率及雏鸡的成活率［5］，对此病的防治应引起高度重视。禽白血病和鸡白痢都具有水平传播及经蛋垂直传播的特点，迄今为止，尚无有效疫苗及药物可用于防治，只有通过种群净化，淘汰阳性鸡，才能有效地控制这两种疾病的传播。作为全国地方鸡品种资源最为丰富的省份之一，近年来广西部分养殖公司近年来已陆续开展禽白血病和鸡白痢疾病净化工作。本实验主要通过对广西两家养殖公司鸡正处在净化初始阶段的3个地方优质鸡进行“两白”(禽白血病和鸡白痢)检测结果比较，找出在这两种疾病在净化中二者的相关性。

1材料与方法

1．1材料

1．1．1主要仪器酶标仪(ThermoScientific，型号:Mti-skanFC);洗板机(Thermo，型号:ScientificWellwash);生物洁净安全柜(上海，型号:BHC－1300IIA/B3);－80℃超低温冰箱(型号:DW-HL340);CO2培养箱(Panasonic，型号:WCO－18AC);倒置显微镜(上海巴托，型号:XSP－17C)。

1．1．2主要试剂鸡白痢－鸡伤寒多价染色抗原，购自北京中海动物保健科技公司;禽白血病P27抗原检测试剂盒，购自美国IDEXX公司;胎牛血清、DMEM培养基，购自GIBCO公司;DF－1细胞由本实验室保存。

1．1．3样品本实验所需的样品，血清、蛋清和血浆，均采集自进行净化中的母鸡，血清用于鸡白痢－鸡伤寒多价凝集抗原进行的平板凝集试验，蛋清用于ALV-P27抗原d的ELISA检测，血浆则用于接种DF－1细胞进行的病毒分离以及随后的ALV-P27抗原的ELISA检测。

1．2方法

1．2．1技术线路对广西两家养殖公司地方优质鸡黄鸡、麻鸡及瑶鸡开产或留种前首先进行鸡白痢的检测，挑选出检测结果阳性的鸡集中隔离饲养，对鸡白痢阴性鸡及部分阳性鸡分别集其蛋清及采集其血浆进行ALV的分离培养及其P27抗原的检测，然后分析对比相关的检测结果。见图1。

1．2．2血清样品的鸡白痢检测地方优质鸡黄鸡开产前(24W)，麻鸡、瑶鸡留种前(40W)采血(未加抗凝剂)，无菌分离血清，其中黄鸡6068份、麻鸡2871份、瑶鸡345份，将样品血清应用鸡白痢－鸡伤寒多价染色抗原进行鸡白痢平板凝集试验，操作步骤:试验前保持操作环境在20℃～25℃室温状态;将抗原回温后摇匀，吸取25μL抗原滴于洁净玻片上，再取25μL待检血清置于抗原滴上，轻轻与抗原混匀并慢慢涂散开成直径约2cm的薄层，轻轻晃动玻片，2min内观察结果并做好记录。每次试验都要设阳性、阴性血清对照。试验结果判定:必须同时符合在阳性对照血清液体出现100%凝集以及阴性对照血清液体完全无凝集现象的前提下，判定结果为有效;2min内出现明显颗粒状或块状凝集现象，判为阳性，在2min内不出现凝集，或出现均匀一致的极微小颗粒，或在液体边缘处由于临干前显絮状等现象，均判为阴性，有别于上述反应，不易判为阴性或阳性反应的，可判为可疑反应。

1．2．3样品的禽白血病检测(1)蛋清样品P27抗原ELISA检测。将鸡白痢检测结果为阴性和阳性的鸡群隔离饲养后，分别对黄鸡、麻鸡鸡白痢阴性鸡及部分鸡白痢阳性鸡集蛋，无菌采集蛋清，反复冻融3次后，使用IDEXX公司禽白血病病毒抗原检测试剂盒(AvianLeukosisVirusAntigenTestKit)对蛋清进行P27抗原ELISA检测，操作步骤参照试剂盒说明书。结果判断:阳性对照A(650)平均值－阴性对照A(650)平均值＞0.2，阴性对照A(650)平均值≦0.15，则实验有效;样品S/P＞0.2，为阳性;样品S/P≦0.2，为阴性。(2)血浆样品病毒分离及其检测。将瑶鸡鸡白痢检测结果为阴性和阳性的鸡群隔离饲养后用一次性抗凝管(含有抗凝剂)及采集针采血，无菌分离血浆，将血浆接种到已长有70%～80%单层DF－1细胞的48孔细胞板中培养，每孔120，同时设两孔DMEM培养液对照，放37℃5%CO2细胞培养箱中浸染，2个小时后吸弃次细胞板内的血浆，更换250含1%FBS的DMEM培养基继续培养，9天后收集细胞及细胞培养液，反复冻融3次后用IDEXX公司禽白血病病毒抗原检测试剂盒进行P27抗原ELISA检测。操作方法及结果判定同(1)。

2实验结果

2．1样品鸡白痢的检测结果

广西地方优质鸡黄鸡，开产前(24W)采集血清进行鸡白痢检测，广西地方品种麻鸡、瑶鸡留种前(40W)采集血清进行鸡白痢检测。检测结果见表1，黄鸡、麻鸡、瑶鸡鸡白痢阳性率分别为48.17%、18.88%、37.10%，鸡白痢感染较严重。

2．2鸡白痢阴性鸡与阳性鸡的禽白血病检测结果

将鸡白痢检测结果为阴性和阳性的鸡群隔离饲养后进行禽白血病检测，检测结果见表2。黄鸡鸡白痢阴性鸡3150只，检出禽白血病阳性562份，阳性率17.84%，鸡白痢阳性鸡100羽，检出禽白血病阳性26只，阳性率26.00%;麻鸡鸡白痢阴性鸡2256只，检出禽白血病阳性17只，阳性率0.38%，鸡白痢阳性鸡100只，检出禽白血病阳性1份，阳性率1.00%;瑶鸡鸡白痢阴性鸡217只，检出禽白血病阳性19只，阳性率8.76%，鸡白痢阳性鸡128只，检出禽白血病阳性15只，阳性率11.72%。如图2，黄鸡、麻鸡、瑶鸡鸡白痢阳性鸡的禽白血病阳性率均高于鸡白痢阴性的鸡。

3小结与讨论

禽白血病和鸡白痢在我国地方品种鸡中感染已相当普遍［6－8］，必须引起高度的重视。我国农业部已将禽白血病和鸡白痢阳性感染率作为一项硬性指标正式列入种鸡健康标准中。有研究表明，种鸡场开展禽白血病和鸡白痢的净化可显著提高鸡群的产蛋率、降低死淘率和料蛋比，从而提高养鸡经济效益，对促进养鸡业的健康和发展，做好地方品种鸡的保种和选育工作具有一定的实际意义［9－10］。本研究发现，广西两家养殖公司地方优质鸡黄鸡、麻鸡、瑶鸡净化鸡群开产前或留种前鸡白痢阳性率分别为48.17%、18.88%、37.10%，可见，鸡白痢感染都比较严重，这3个地方优质鸡正处于鸡白痢净化初始阶段，坚信通过严格的实验检测，及坚持做好生物安全措施，经过几个世代的净化后一定能降低阳性率。将鸡白痢检测结果为阴性和阳性的鸡群隔离饲养后进行禽白血病检测，黄鸡、麻鸡、瑶鸡鸡白痢阴性鸡禽白血病阳性率分别为17.84%、0.38%、8.76%，鸡白痢阳性鸡禽白血病阳性率分别为26.00%、1.00%、11.72%。显而易见，3个地方优质鸡鸡白痢阳性鸡群中禽白血病阳性率都高于鸡白痢阴性鸡，说明鸡白痢阳性的鸡感染禽白血病病毒要比鸡白痢阴性的鸡要高，其中特别是黄鸡的差异最明显。目前平板凝集试验作为检测鸡白痢最常用的方法，具有操作简单，反应速度快，阳性检出率高，也不影响种鸡的按时开产等优点［11］。种鸡进行鸡白痢检测首次普检时间一般为17W～20W，此段时间种鸡处在性成熟阶段，而且也是禽白血病排毒高峰期。从检测结果数据看，在检测禽白血病前进行鸡白痢检测，在淘汰鸡白痢阳性鸡的同时也将一部分的禽白血病阳性鸡淘汰了。因为禽白血病的检测成本远远大于鸡白痢检测成本，这将在一定程度上来说也降低了检测成本，即开产及留种前，在禽白血病检测前先进行鸡白痢检测淘汰阳性鸡的方法是非常有价值的。

参考文献

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［3］张璞，任芳．鸡白痢的流行特点及防治措施［J］．畜牧与饲料科学，2011，32(11):120．

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［6］常维山，郭慧君，孙淑红．近年来我国禽白血病流行现状及发展趋势分析［J］．中国家禽，2010，32(1):8－10．

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［9］张桂枝，靳双星，黄炎坤．禽白血病和鸡白痢净化与非净化鸡群生产性能的差异性比较［J］．中国兽医杂志，2017，53(7):49－51．

［10］张丹俊，沈学怀，赵瑞宏，等．禽白血病和鸡白痢净化与非净化鸡群生产性能差异性研究［J］．安徽农业大学学报，2013，40(5):695－700．

［11］徐家芳．三种鸡白痢－鸡伤寒多价染色抗原的比较和鸡场沙门氏菌的分离与鉴定［D］．广西大学，2013．

作者：陆乔娥 高延利 石梦雅 李敏 李秋红 邓乔木 韦平 单位：广西大学养禽与禽病学研究所