基于数据库的仿制药生物实验研究

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1文献检索

计算机检索CNKI数据库、万方数据库和维普数据库，检索字段为“关键词:生物等效”，检索来源为“中国学术期刊网络出版总库”，发表时间为2016年3月至2018年8月。剔除宏观分析类、政策解读类、组织管理类文献和重复发表的文献，纳入统计的涉及具体品种的研究专论共53篇［4－56］。

2生物等效性试验设计方面

2.1受试者及例数

与2005年颁布的《化学药物制剂人体生物利用度和生物等效性研究技术指导原则》［57］(以下简称2005版《指导原则》)相比，2016版《指导原则》明确了BE试验需有适当比例的男女受试者，对于受试者没有例数要求，但明确指出入选受试者的例数应满足BE评价具有足够的统计学效力的要求，即根据已有的参比制剂的q、CV%值和把握度等参数来设定例数。文献中适应证为男女人群的50个BE试验中只有4个试验选取了部分健康女性受试者，其余的均只选择健康男性受试者或未写明性别。对于部分抗肿瘤药物或精神类药物，出于安全性考虑，美国FDA建议申请人招募病程稳定、并在BE研究期间接受治疗的目标患者。如甲磺酸伊马替尼片，FDA个药指导原则［58］中建议受试者为已经接受稳定剂量伊马替尼的癌症患者，但EMA个药指导原则［59］中受试者为健康人群，我国发表的文献及备案的甲磺酸伊马替尼片BE试验中，有用健康受试者也有用患者的。文献中受试者例数在16～50例，对于高变异的药物，应考虑增加试验的样本量。如伏立康唑片，个体内变异大，研究者采用48例健康受试者。只有2018年发表的3篇文献对把握度进行了验算，以说明试验选取的受试者例数符合统计学要求。

2.2餐后生物等效性

餐后BE研究不应忽视。2016版《指导原则》明确写明“对于仅能与食物同服的口服常释制剂，除了空腹服用可能有严重安全性方面风险的情况外，均建议进行空腹和餐后两种条件下的BE试验。如有资料充分说明空腹服药可能有严重安全性风险，则仅需进行餐后BE试验”。食物对生物利用度影响的研究目前在国内尚未引起足够的重视，在需要进行空腹和餐后BE试验的50篇文献中，有3篇未注明受试者空腹或餐后状态，其余只有9篇文献开展了空腹和餐后两种条件下的BE实验。

2.3参比制剂的选择

我国为指导仿制药质量与疗效一致性评价工作的开展，CFDA了《普通口服固体制剂参比制剂选择和确定指导原则》［59］，其中明确了参比制剂选择的3个原则:首选国内上市的原研药品，其次选择在国内上市国际公认的同种药物，如果上述2种药品均未在国内上市，也可选择在欧盟、美国、日本上市并被列为参比制剂的药品。截至2018年10月我国已17批参比制剂目录。所有文献中有39个品种的参比制剂选择符合原则要求，5个品种选择了国内已上市其他厂家生产的同一品种作为参比制剂;9个品种选择了同一品种的其他剂型作为参比制剂，另有2篇文献未写明所选择的参比制剂名称、厂家、批号等信息。

3生物样本测定方法

3.1生物样本测定方法

目前国内外大多采用液质联用法(LC－MS/MS)测定血药浓度。在检索到的57篇文献中，除1个品种使用肝素ATⅩa因子显色法测定人血浆中低分子量肝素的浓度外，有14个品种选用HPLC法，其余均用HPLC－MS/MS法测定血药浓度，特异性和灵敏度更高，分析速度更快，检测所需血浆样本体积小。文献多以蛋白沉淀法对血浆样本进行前处理，前处理过程简单，所得基质效应较低，更适用于临床大样本量快速分析。有11篇文献未写明测定采用的内标物质，失去作为科研论著的参考价值。

3.2生物样本测定方法学考察

2015版《中华人民共和国药典》和2016版《指导原则》对开展BE试验需要进行的方法学研究内容进行了详细的要求。为了保证分析方法可靠，必须进行充分的方法确证，一般应进行特异性、标准曲线和定量范围、定量下限、精密度与准确度、样品稳定性、提取回收率等几方面的考察，但仍有10篇文献未提及所进行的方法学研究，文献中方法学研究内容存在的问题有以下几点。样品的稳定性考察不完善由于BE试验样本从采样到检测的周期通常需要几周至几个月，在其贮存期间目标药物的稳定性需经考察验证。指南中要求应考察:样本室温放置稳定性，短期、长期贮存稳定性，冻融稳定性，制备后稳定性，对照液和内标液的稳定性等。但有些试验设计不完善，如长期稳定性的考察时间不够，未能覆盖从第1个样本采集至最后1个样本分析的时间周期;仅考察1个浓度样品的稳定性;未考察内标液的稳定性等。未进行基质效应研究用免疫法及LC－MS/MS法等测定方法时，均应对基质效应的研究情况进行说明。比如用LC－MS/MS分析，特别是电喷雾离子化(ESI)方式时基质效应通常比较明显，优化样品前处理过程、提高色谱分离效果可减少基质效应。所有文献中只有9篇对基质效应的研究。其他部分文献研究了特殊基质条件下，加入定量下限和定量上限水平的分析物进行测定，以考察方法学的选择性。部分文献考察了稀释可靠性。部分文献考察了残留效应，通过检查第2周期给药前血浆浓度，来直接确定残留的可能性。另有部分文献还进行了样品再分析(ISR)，在方法验证中使用校正标样和质控样品可能无法模拟实际试验样品，通过在不同天后，在另外一个分析批中重新分析试验样品，来评价实际样品测定的准确度。

4BE的判定标准

BE试验结果的统计分析，主要是用药代动力学参数AUC和Cmax经对数转换后以多因素方差分析(ANOVA)进行显著性检验，然后用其几何均值进行双侧和单侧t检验以及计算90%置信区间的方法来评价和判断制剂间的BE。在生物利用度试验中，采用多因素方差分析进行统计分析，以判断药物制剂间、个体间、周期间和服药顺序间的差异。所有文献中有16篇文献未进行差异分析。目前我国BE判定标准已经与FDA和EMA一致，均采用的等效性范围是受试制剂与参比制剂AUC和Cmax几何均值比的90%置信区间均应在80%～125%。有11篇文献未写明参比和受试制剂几何均值比的90%置信区间。

5其他需要关注的问题

有部分文献未提及试验过程中的药物不良反应观察结果，部分文献中参与统计计算的人数少于入组人数且未说明脱落的原因。一些促胰岛素分泌反应的降糖药，有可能在给药30min内发生低血糖等药物不良反应。有部分文献参考FDA制定的BE研究指导原则，给予研究药物时用20%葡萄糖240mL送服，并且服药后的4h内，每15min给予20%葡萄糖水60mL，给药后1，4h进行指血血糖检测，这样可以有效地避免或降低药物不良反应的发生率。

作者：刘倩 南楠 薛晶 许鸣镝 单位:中国食品药品检定研究院