艾滋病抗体检测医学科技论文

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1.材料及方法

1.1材料

高质量的质控物：为保证质控物的良好质量，首先，质控物要求在220℃的环境下保存；其次避免反复冻融。购于卫生部临检中心。ELISA检测抗HIV试剂盒：北京万泰HIV（1+2型）ELISA抗体诊断试剂盒。96孔洗板机(芬兰丹尼公司)；MK-2型酶标仪(芬兰丹尼公司)；移液器等。

1.2方法

有关质控血清的制备，应在无菌条件下用含有10%小牛血清PBS缓冲液将阳性对照血清稀释成低值弱阳性,然后将稀释后的血清以每管0.5ml进行分装,并将其置20℃环境下保存备用。为实现对质控血清的精密性检测，在检测样品的同时，还应对抗-HIV质控血清进行检测，将同时检测到的数据进行比较，以比较其精密性。洗板：洗板所用的洗液先用蒸馏水进行适当的配置以保证其PH值正常。要求浸泡时间多余45s，洗板后残液不得超过2μl，也即人工扣板垫纸不湿。稀释方法：由于抗体检测实验所加样品仅需10μl，少加或者多加都会造成不同程度的误差，而影响到抗体检测的质量。由此，移取精准的样品的移液器在获取样品量方面十分重要。因此，应确保以下几点：一保证移液器和移液头间连接的严密性；二取样时为避免移液器粘带血清，应保证移液头恰与液面接触；三为避免对灰带区的误判，在稀释样品液时不能使用滴瓶，而采用移液器进行样品的滴加，以保证抗体检测质量的稳定。基于以上要点，在板中加入100μl稀释液再加10μl标本,同时吹吸3次混匀。显色：ELISA反应中最佳的色原底物是TMB。但在加入终止液15min后浓度过高的就会产生灰褐色絮状沉淀。因此，处理严格按照使用说明书来控制显色的温度、时间等外在因素，以避免人为因素所造成的吸光度等的升降外，还应在加入终止液的15min内及时进行比色。

2.结果

2.1稳定性试验

使用制备的质控品对艾滋病抗体每隔一个月进行检测。当S/CO波动范围未超出质控范围，也即实验的稳定性检测属真。

2.2制作质控图

在使用ELISA质量控制方法来控制艾滋病抗体检测实验室质量时，为保证在实际中获得良好的效果，首先应做好OCV及RCVK来确定失控的标准，然后利用Westgard规则判定失控，使用生化L2J图进行。由于采用ELISA方法进行实验室质量控制的目的在于检测艾滋病抗体，故而，应确保这一方法的敏感性。可采用许斌提出的临界值血清界定法，试剂所设阴阳对照为内对照,另设临界值、高值阳性和2份正常人阴性对照,作为外对照与标本同时检测,临界值S/CO>1,高值阳性S/CO>10,正常人阴性对照A值在01050～01100，当其中所存在的各项中有一项不符合标准即为失控。临界值为敏感度监控、阴性对照为特异性监控、高值为“HOOK”监控，由此可见，临界值血清界定既反映ELISA的灵敏度又兼顾特异性。

3.讨论

ELISA方法检测HIV的实验室质量控制，可用吸光度值来表示，还可以使用S/CO值来表示。当前，艾滋病抗体检测一般使用ELISA法，这一方法具有灵敏度较高的特点，非常适于当前众多血站系统对HCV、抗2HIVHBsAg等的检测。本人依据多年的指控监测工作经验认为，在使用较强阳性的质控物进行作图时，以上两种方法都会产生较好的实验效果；但是，对于一些中性、弱阳性的质控物进行作图时，S/CO值的表示方法更为科学、准确。但是在实际的实验室检测中，也存在着众多影响这一方法有效运用的不利因素，因此，加强艾滋病抗体检测的实验室质量控制具有现实性的意义。