乳疾灵片内淫羊藿苷含量检测

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本文作者：明延波1 孟祥军2 吕洁1 作者单位：1.辽宁卫生职业技术学院 2.沈阳医学院

乳疾灵片淫羊藿、赤芍、丹参、青皮、牡蛎、海藻等12味中药材，经加工制成的片剂，乳疾灵颗粒收载于中国药典一部及部颁标准，我们在此基础上，改变剂型制备成片剂，乳疾灵片具有舒肝解郁，散结消痈之功效，临床上用于肝郁气滞、痰淤互结所致的乳癖。为了保证产品质量，选择测定淫羊藿苷作为质量控制的一个指标。淫羊藿苷为淫羊藿中的主要活性成分［1］，有关淫羊藿苷的测定方法，文献报道有薄层扫描法［2－3］、高效液相色谱法［4－5］等，本文采用分离效果好、专属性强的HPLC法，通过研究提取工艺和优化色谱条件测定了其中淫羊藿苷的含量，结果满意，重现性好，可用于本制剂的质量控制。

1仪器与试药

1.1仪器

高效液相色谱仪(UV200Ⅱ大连依利特科学仪器有限公司);SrAdv Express色谱工作站;UV200Ⅱ检测器。电子天平(AL2O4梅特勒－托利多上海称重设备公司)。

1.2试药

淫羊藿苷对照品购自中国药品生物制品检定所(批号:110659－200315，供含量测定用);乙腈(色谱纯，山东禹王实业总公司化工厂);其它试剂均为分析纯。

2方法与结果

2.1色谱条件与系统适用性试验

十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱HypersilC18(250mm×4.6mm，5μm)，柱温为室温;以0.075mol/L磷酸溶液(用三乙胺调节pH至4.5)－乙腈(73∶27)为流动相，流速1.0mL/min;检测波长为270nm;进样量为20μL，理论塔板数按淫羊藿苷峰计算应不低于4000。

2.2对照品溶液的制备

取105℃干燥至恒重的淫羊藿苷对照品10mg，精密称定，置100mL容量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取17mL，置50mL量瓶中，加流动相至刻度，摇匀，即得(每1mL中含淫羊藿苷34μg)。

2.3供试品溶液的制备

取重量差异项下的本品10片，除去包衣，研细，取1.84g(约4片重)，精密称定，置100mL具塞锥形瓶中，精密加入70%乙醇50mL，密塞，称定重量，放置过夜，超声处理(功率250W，频率33kHz)20min，放冷，再称定重量，用70%乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

2.4检测波长的确定

精密称取淫羊藿苷对照品适量，加流动相制成每1mL中约含10μg的溶液，摇匀，照紫外分光光度法，在190～500nm处扫描，溶液在230nm波长处有最大吸收，确定检测波长为270nm。

2.5系统适用性试验

取供试品(040710批)与淫羊藿阴性对照制剂各约10g，照暂定的供试品溶液制备方法，制备供试品溶液与阴性对照溶液。取淫羊藿苷对照品溶液(34μg/mL)、供试品溶液与阴性对照溶液各20μL，测定。对照品色谱中，主峰理论板数为5507.09，供试品溶液色谱中，主峰与对照品溶液色谱峰保留时间对应一致，淫羊藿苷峰理论板数为5645.81，与其他组分分离度为2.21。阴性对照液色谱中，未出现对应峰，表明其他成分不干扰淫羊藿苷的测定。

2.6线性关系考察

精密量取对照品溶液(0.1mg/mL)14.0，15.5，17.0，18.5，20.0mL分别置50mL量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，各精密吸取20μL，分别注入液相色谱仪中，测定色谱峰面积，以峰面积积分值为纵坐标，淫羊藿苷对照品浓度为横坐标，绘制标准曲线，得回归方程为Y=28.774X－142.73，相关系数r=0.9994。结果表明，在28.0～40.0μg/mL浓度范围内，淫羊藿苷浓度与峰面积呈良好的线性关系。

2.7精密度试验

照含量测定项下，制备供试品溶液，精密量取20μL，按上述色谱条件连续进样6次，平均值为88.38，RSD为1.50%。本法的精密度良好。

2.8重现性试验

照含量测定项下，分别制备6份供试品溶液，按上述色谱条件进样测定，平均值为887.93，RSD为1.28%。表明本法的重现性良好。

2.9稳定性试验

精密吸取供试品(040710批)溶液20μL，在上述色谱条件下，按0、2、4、6、8h时间间隔测定，平均值为879.56，RSD为1.49%。结果表明供试品溶液在8h内稳定。

2.10回收率试验考察

取105℃干燥至恒重的淫羊藿苷对照品10mg，精密称定，置100mL量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取17mL，置50mL量瓶中，加流动相至刻度，摇匀，即得(每1mL中含淫羊藿苷34μg)。作为对照品溶液。取重量差异项下的本品50片，除去包衣，研细，取1.84g(约4片重)，精密称定，置100mL具塞锥形瓶中，精密加入70%乙醇50mL，密塞，称定重量，放置过夜，超声处理(功率250W，频率33kHz)20min，放冷，再称定重量，用70%乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。作为供试品溶液。精密量取供试品溶液与对照品溶液各20μL，分别注入液相色谱仪，测定，测得供试品中淫羊藿苷的含量为939.87μg/g。取105℃干燥至恒重的淫羊藿苷对照品25mg，精密称定，置250mL量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取170mL，置500mL量瓶中，加流动相至刻度，摇匀，即得(每1mL中含淫羊藿苷34μg)。作为加样用对照品溶液。取上述已经测定含量的供试品药粉，分别精密称定约1.2g、2.0g、2.7g各3份，置100mL具塞锥形瓶中，精密加入70%乙醇50mL，密塞，称定重量，放置过夜，超声处理(功率250W，频率33kHz)20min，放冷，再称定重量，用70%乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。作为加样用溶液。精密量取上述各溶液20μL，注入液相色谱仪，记录色谱图，测定含量，计算加样回收率，平均回收率为100.13%，RSD为2.22%(n=9)。结果见表1。

2.11阴性溶液的制备

取缺淫羊藿苷的阴性样品，按供试品制备方法制备成阴性供试液，在上述色谱条件下进样测定。结果表明，对照品溶液和供试品溶液均有相应的峰出现，在淫羊藿苷相应的保留时间处阴性液无吸收峰，处方中的其它成分不影响淫羊藿苷的含量测定。

2.12样品测定

为制定含量限度，制备供试品三批，并与市售颗粒剂(批号4030048)比较。按上述测定方法，测定其中淫羊藿苷的含量，结果见表2。根据上述测定结果，并参照中国药典有关品种的含量规定，暂定本品每片含淫羊藿苷(C33H40O15)计，不得少于0.22mg。

3讨论

(1)提取溶剂的考察:在制备供试品溶液时，分别采用甲醇超声、乙醇超声、水超声、0.1mol/L氨水超声、甲醇回流、乙醇回流的方法考察样品提取方法，结果以乙醇超声提取效果最佳。(2)选择适宜的流动相是含量测定的关键所在，实验中曾选用甲醇、水、冰醋酸为流动相，改变不同比例均不能达到理想的保留时间和分离效果;，选用乙腈、水、冰醋酸为流动相，调整比例后可以使保留时间适宜，使分离度和理论塔板数均符合要求。